UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS(Universidad del Per, Decana de amrica)

FACULTAD DE QUIMICA E INGENIERIA QUMICA E INGENIERA AGROINDUSTRIALLABORATORIO DE MICROBIOLOGIAACCION DE AGENTES FISICOS Y QUIMICOS SOBRE LOS MICROORGANISMOSY PRUEBA DE DIFERENCIACION BIOQUIMICAProfesor: Jos Manuel Bustamante AgredaIntegrantes: Castro Huamn, Luz Katherinecdigo: 14070191Cruz Ramos, Lander Diosdado cdigo: 14070194De La Cruz Parco Leandro Ramoscdigo: 14070058Soto Vargas, Janet Magalycdigo: 14070205Zegarra Chvez, Juan Andrscdigo: 14070223Grupo: lunes 9 a 1 pmLima Per2015 ll

INTRODUCCIONPodemos concluir que las actividades de los microorganismos se ven muy afectadas por las condiciones qumicas y fsicas del medio. El conocimiento de los efectos ambientales nos permite explicar la distribucin de los microorganismos en la naturaleza y hace posible disear mtodos que controlen o potencien las actividades microbianas.Los mecanismos de accin de los agentes fsicos y qumicos:Inhiben la sntesis de la pared celular, o aceleran su degradacin, alteran la permeabilidad selectiva de la membrana citoplsmica, desnaturalizan las protenas, y alteran su estructura secundaria y terciaria y inhiben la actividad enzimtica mediante el bloque de los radicales sulfhidrilo (SH)Los agentes fsicos; que actan en los microorganismos causando cambios, evaluados en esta prctica fueron: temperatura, se determin a que medida de esta se da la muerte trmica de cepas de Escherichia Coli y Staphylococcus aureus; y la accin de la presin osmtica, determinando a que concentracin de NaCl se ve afecta el crecimiento de la cepa de E. Coli. Los agentes qumicos, que actan en los microorganismos causando cambios, evaluados fueron: la concentracin de iones hidrogeno, se determin el efecto del pH en el crecimiento y desarrollo microbiano en cultivos de E. Coli con 24 horas de esas; y la accin de los desinfectantes y antispticos como inhibidores del desarrollo microbiano en cepas de S. aureus.Cmo actan los agentes fsicos sobre los microorganimos?Todos los microorganismos son afectados por diferentes factores fsicos, entre ellos el ms importante es la temperatura, pero tambin la presin y otros elementos del medio. La temperatura, es uno de los parmetros ambientales ms importantes que condicionan el crecimiento y la supervivencia de los microorganismos. La temperatura afecta a la velocidad de crecimiento (y, por lo tanto al tiempo de generacin,g). Cada bacteria (y suponiendo que el resto de condiciones ambientales se mantienen constantes) muestra unacurva caractersticade tasa de crecimiento en funcin de la temperatura, donde podemos distinguir tres puntos caractersticos llamados temperaturas cardinales: Temperatura mnima: por debajo de ella no hay crecimiento. Temperatura mxima: por encima de ella tampoco existe crecimiento. Temperatura ptima: permite la mxima tasa de crecimiento (o sea,gmnimo).Latemperatura mnimase puede explicar en funcin de un descenso de la fluidez de la membrana, de modo que sedetienen los procesos de transportede nutrientes yel gradiente de protones.Por encima de la temperatura mnima la tasa de crecimiento va aumentando proporcionalmente hasta alcanzar latemperatura ptima, debido a que las reacciones metablicas catalizadas por enzimas se van aproximando a su ptimo. En dicha temperatura ptima las enzimas y reacciones se dan a su mxima tasa posible.A partir de la temperatura ptima, si seguimos subiendo la temperatura se produce un descenso acusado de la tasa de crecimiento hasta alcanzar latemperatura mxima. Dicha temperatura reflejadesnaturalizacin e inactivacin de protenasenzimticas esenciales,colapsamiento de la membranacitoplsmica y a veces lisis trmica de la bacteria.La presin osmtica; exceptuando los micoplasmas, que carecen de pared celular, las bacterias pueden vivir en medios tanto hipotnicos como hipertnicos, debido a la proteccin de una pared celular rgida y a la membrana citoplsmica semipermeable.Normalmente el citoplasma de las bacterias poseen una osmolaridad ligeramente superior a la del entorno, lo que garantiza el paso de agua al interior. La presin de turgor es relativamente constante porque la membrana citoplsmica se topa con la rigidez de la pared celular. Esta presin de turgor permite que la bacteria aguante cambios bruscos de concentracin de solutos en su entorno (dentro de ciertos lmites). Pero esto plantea una pregunta (que intentaremos responder a continuacin): cmo logra la bacteria ajustar su osmolaridad interna a esos cambios exteriores?A) En medios hipotnicos(con una aw>awdel citoplasma) es la pared celular la que ejerce todo el papel: su rigidez se opone a la entrada de agua, y por lo tanto, evita que la membrana citoplsmica tienda a sufrir una presin de turgor excesiva.B) En medios hipertnicos(cuando la awdel exterior es menor que la del citoplasma). Las bacterias poseen mecanismos compensatorios por los que tienden a aumentar la osmolaridad interior por encima de la del medio (para garantizar la entrada de agua del ambiente y mantener su metabolismo). Ello se logra esencialmente aumentando la concentracin de un soluto muy soluble en agua en el interior celular, soluto llamado genricamentesoluto compatible, lo cual se puede lograr por varios posibles mecanismos: Bombeando iones al interior. Sintetizando una molcula orgnica osmticamente activa. Bombeando sustancias osmoprotectoras.Cmo actan los agentes qumicos sobre los microorganismos?Existen ciertas sustancias qumicas que influyen negativamente sobre las bacterias, pudiendo ejercer dos tipos diferentes de efectos: Bacteriostticos: cuando impiden el crecimiento microbiano. Bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.En general, si nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de microorganismos, hablamos respectivamente de agente microostaticos y microbicidas. Ahora bien, para una misma sustancia qumica, la lnea de demarcacin entre un efecto microbiostatico y otro microbicida depende muchas veces de la concentracin de dicha sustancia y del tiempo durante el que acta.El PH, La mayora de las bacterias pueden crecer dentro de un margen de pH de su medio, manteniendo al mismo tiempo su pH interno ptimo prcticamente constante.Por ejemplo,Escherichia colipuede crecer bien entre pH 6 y pH 8, pero su pH interno es siempre 7.6 o muy cercano a ese valor.Respecto del margen normal de pH a los que crecen las bacterias, stas se pueden clasificar en: Neutrfilos, si crecen de modo ptimo en torno a la neutralidad (entre pH 5.5 y 8). Acidfilas, si crecen normalmente entre pH 0 y pH 5. Alcalofilas, si crecen entre pH 8.5 y pH 11.5.La mayor parte de las bacterias son neutrfilas. Muchas bacterias neutrfilas modifican el pH del medio, y resisten entornos relativamente cidos o alcalinos. Por ejemplo, algunas bacterias fermentativas excretan cidos, mientras otras alcalinizan el medio, p. ej., produciendo amonio a partir de diseminacin de aminocidos. Por otro lado, la mayor parte de los hongos y levaduras requieren pHs ligeramente cidos (en torno a 4-5). Aunque los microorganismos pueden crecer en un margen ms o menos amplio de pH (alrededor de un ptimo), los cambios bruscos pueden ser lesivos (afectando a la membrana y al transporte de solutos, e inhibiendo enzimas). Si el pH citoplsmico cae rpidamente hasta 5 o menos, la bacteria puede morir.Desinfectantes y antispticos: Se suelen clasificar de acuerdo con su mecanismo de accin:A) AGENTES QUE DAAN LA MEMBRANA1)Detergentes.2)Compuestos fenlicos: fenoles, cresoles, aceites esenciales de plantas, difenilos halogenados, alquilesteres del para-hidroxibenzoico.3)Alcoholes: etanol, isopropanol.B) AGENTES DESNATURALIZANTES DE PROTEINAS1)cidos y bases fuertes2)cidos orgnicos no disociablesC) AGENTES MODIFICADORES DE GRUPOS FUNCIONALES1)Metales pesados2)Agentes oxidantes: halgenos, agua oxigenada, permanganato de potasio, cido peracetico.3)Colorantes: derivados de la anilina y acridina (flavinas)4)Agentes alquilantes: formaldehido, glutaraldehido, xido de etileno, -propionil-lactona.

MATERIALES EFECTO DE LA TEMEPRATURA

Cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus (ambas 24 horas de edad).

EFECTO DE LA PRESION OSMOTICA Cepa de Escherichia coli de 24 horas de edad crecida en caldo de cultivo. 4 Placas Petri (concentraciones de NaCl al 5%,10%,20%,40% en medio base Agar Nutritivo) 1 Placa con Agar Nutritivo. Asa de siembra Encendedor EFECTO DE LA CONCENTRACION DE IONES HIFROGENO (ph ) EN LOS MICROORGANISMOS Cultivos de 24 horas de edad de Escherichia coli. Tubos con caldo nutritivo estril previamente ajustados con HCl 1 N y NaOH 1Na valores de pH de 3 , 5 , 7 , 9 , 11 (1 de cada una).

ACCION DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS

Cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus

Medio de cultivo: Agar nutritivo.

Desinfectantes: Leja 10% Cresol 5% Pinesol

Antispticos: Alcohol 70% Agua oxigenada Merthiolate Pinesol Jabn medicado(Protex) Disco de papel filtro, pinzas. Plumn indeleble.

DIAGRAMA DE FLUJO: I) ACCION DE AGENTES FISICOS SOBRE MICROORGANISMOS Sthaphylococcus aureus Escherichia coli EFECTO DE LA TEMPERATURA

CULTIVO

SOMETEMOS40C y 65C

CADAINCUBAR A 28C por 48 HORAS EN POSICION INVERTIDAROTULAMOS LAS PLACAS DE MANERA ADECUADA SEMBRAMOS 0,1 ML DE CULTIVO POR DIFUSIN EN MEDIO DE AGAR NUTRITIVOHACEMOS DILUCIONES SERIADAS (1ML) DE CADA CULTIVO (10-3)

0, 40y 80

ACCION DE PRESION OSMOTICA

SEMBRAMOS E.coli POR ESTRIADO SIMPLE EN PLACAS

BASE DE AGAR CONNaCl

CONCENTRACION 40%20%10%5%

COMPARAMOS RESULTADOS DE CRECIMIENTO MICROBIANOINCUBAR POR 48 HORAS A 28CROTULAMOS LAS PLACAS DE MANERA ADECUADA

II) ACCION DE AGENTES QUIMICOS SOBRE LOS MICROORGANISMOSEFECTO DE LA CONCENTRACION DE PH EN LOS MICROORGANISMOS

INOCULAMOS E.coli CON AGUJA DE NICROM CIRCULAR

SOBRETUBOS EN CONCOTENIDO DE CALDO NUTRITIVO

CONPH 9PH 3PH 7PH 5

ANOTAMOS OBSERVACIONESINCUBAMOS A 28C por 48 HORAS

4 DIVISIONES3 DIVISIONES AGENTES ANTISEPTICOSDIVISION DE PLACAS CON MARCADOR AGENTES DESINFECTANTES ACCION DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS

1 ml de cultivo + Agar nutritivo

SEMBRAMOS S. aureus POR DIFUSION1 ml de cultivo + Agar nutritivo

INCUBAMOS A 28CPOR 48 HORAS.ALCOHOL AL 70% .AGUA OXIGENADA.MERTHIOLATE.JABON

.LEJIA AL 10% .CRESOL. PINESOLCON UN PINZA ESTERIL COLOCAMOS UN DISCO DE PAPEL FILTRO PREVIAMENTE EMBEBIDO EN SOLUCION SOBRE LA PLACA

III) PRUEBA DE DIFERENCIACION BIOQUIMICA

Staphylococcus aureus Escherichia coliINOCULAMOS 1 ML DE CADA CEPA

EN CALDO DE ROJO FENOL

CONINCUBAR LOS TUBOS A 28C POR 48 HORASSACAROSALACTOSAGLUCOSA

PROCEDIMIENTO:

ACCION DE AGENTES FISICOS SOBRE LOS MICROORGANISMOSA) EFECTO DE LA TEMPERATURA 1. Sometemos a 40C y 65C los cultivos de Escherichia coli y Sthaphylococcus aureus. A los 0, 40 y 80 realizaremos diluciones seriadas.

2. Sembramos por el mtodo de difusin 0,1 ml de la ltima solucin (10-3) en medio de Agra Nutritivo. Rotulamos de manera correctas las placas.

3. Incubamos a 28C por 48 horas .Realizamos el recuento de microorganismos para cada tratamiento. B) ACCION DE LA PRESION OSMOTICA 1.- En las placas con diferentes concentraciones de NaCl , sembrar la cepa de E coli. Por el mtodo de estriado.

2.- Rotular de manera correcta las placas .Llevar a incubacin por 48 horas a 28C.

3.- Comparar el crecimiento microbiano entre las lacas que contienen las diferentes concentraciones de NaCl con Agar Nutritivo.

ACCION DE AGENTES QUIMICOS SOBRE LOS MICROORGANISMOSA) EFECTO DE LA CONCENTRACION DE IONES HIDROGENO EN LOS MICROORGANISMOS 1.- Inocule con una azada el cultivo de E coli en cada uno de los tubos de caldo nutritivo con distintos valores de pH. Incubamos a 28C por 48 horas y anotamos resultados.

B) ACCION DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOSAGENTES DESINFECTANTES1.- Dividir la placa Petri en 3 mitades con el rotulador. Sembramos Staphylococcus aureus mediante el mtodo de difusin, inoculando 1 ml de cultivo puro.

2.- Utilizando una pinza estril colocar un disco de papel filtro de 1,5 cm de dimetro embebido en la solucin del desinfectante .Incubar las placas a 28C por 48 horas en posicin invertida.

AGENTES ANTISEPTICOS1.- Dividir a placa de Agar Nutritivo en 4 mitades con el plumn indeleble.2.- Realizar el mismo procedimiento que con los agentes desinfectantes con la cepa de Staphylococcus aureus . Incubamos a 28C por 48 horas y anotamos las observaciones con los datos de la escala acoplada en la gua de trabajo y as mismo anotamos los resultados.

RESULTADOS:

Efecto de la temperatura

TemperaturaTiempo (min)Crecimiento microbiano( UFC/ml)

Escherichia coliStaphylococcus aureus

40C02,4x1032,20x103

403,20x1034,80x103

807,20x1036,40x103

65C01,8x1031,75x103

402,65x1034,20x103

804,00x1035,30x103

Staphylococcus aureus: Escherichia Coli:

Interpretacin de resultadosPara determinar el efecto de la temperatura sobre el microorganismo, comparamos 2 cepas Escherichia coli y Staphylococcus aureus a diferentes temperatura de 40 y 65C.Comparamos el efecto para una misma cepa y obtuvimos que el crecimiento bacteriano fue mayor para la temperatura de 40 para ambos microorganismos y que la cantidad de colonias aumentaban de manera notoria a esta temperatura, tambin pudimos ver que el nmero de colonias aumentaban en mayor cantidad para el Escherichia coli a comparacin de Staphylococcus aureus para las dos temperaturas de acuerdo a nuestro resultados.Observamos que la temperatura de mayor crecimiento de las dos cepas fue el de 40, y que, y que el E. Coli es ms sensible a la temperatura de 65C ya que su aumento de colonias fue mayor en comparacin del Staphylococcus aureus.

Discusin de resultadosDe acuerdo a nuestras graficas pudimos ver en todas, una curva de crecimiento, a pesar de que las temperaturas no fueron las ptimas para el crecimiento de las cepas.El desarrollo para el crecimiento ptimos para el Escherichia coli y Staphylococcus, es de temperatura de 40 ya que ah pudimos observar un mayor nmero de colonias formadas.

Pero tambin observamos crecimiento la temperatura de 65C y esto se debe a las endotoxinas de la pared celular. Para el caso de Escherichia coli, esta en una bacteria gran negativa el cual contiene toxinas, estas son parte integral de las paredes celulares de bacterias gran negativas, esta toxina es termoestable, esta es un pequeo pptido que induce la secrecin actuando sobre la guanilato ciclasa del enterocito. Una de ellas es la toxina shiga termoestable.La pared celular de esta cepa, estas contienen petidiglucano y est compuesta por dos derivados de azucares, N-acetilglucosamina y acido N-acetilmuramico, y un pequeo grupo de aminocidos que incluyen L-alanina, D-glutmico, estos aminocidos tienen un enlace covalente muy fuerte que es el puente disulfuro estos enlaces los hacen ms estables que ante un cambio de temperatura pueden seguir sin romperse, por lo tanto la bacteria va a seguir creciendo y no va haber muerte.

En el caso del microorganismos Staphylococcus aureus estas tambin resisten temperaturas altas debido a las enterotoxinas estafiloccicas son termo resistentes, algunas pueden mantenerse estables incluso al calentarlos ms de 100C.Una de ellas es Toxina-1 del sndrome de shock txic esta es una toxina de 22kDa termoestable y resistente a protelisis.Por ello el staphylococcus puede tener aumento de colonias a pesar que la temperatura a la cual fue sometida no es la ptima, pero por la caracterstica ya mencionada puede resistir a temperaturas altas y as desarrollarse.

ACCION DE LA PRESION OSMOTICA

AGAR NUTRITIVO

SOL. SALINA (5%)SOL.SALINA (10%)SOL.SALINA (20%)SOL. SALINA (40%)

Representacin fotogrfica final

Presencia de coloniasSINONOImperceptible

Numero de colonias1520000--

Los microorganismos requieren agua para su crecimiento, adems para obtener nutrientes de sta. Una presin osmtica alta causa prdida de agua y plasmlisis de la clula, por lo que se utiliza este fenmeno para conservar los alimentos ya sea aadiendo sal o azcar, lo que previene el crecimiento bacterial. Sin embargo algunas bacterias se han adaptado a altas concentraciones de sal, a stas se les conoce como halfilos extremos. Por otro lado, los halfilos facultativos no requieren una alta concentracin de sal, pero pueden crecer hasta una concentracin de 2%. Otras bacterias pueden tolerar hasta un 15% de sal.

INTERPRETACION: El crecimiento bacteriano puede ser afectado grandemente por las cantidades de agua que entran o salen de la clula. Cuando el medio que rodea a un organismo es hipotnico (presencia de pocos solutos) resulta una presin osmtica mayor dentro de la clula. La pared de la mayora de las bacterias es tan fuerte y rgida, que un hinchamiento celular ligero generalmente es inaparente. Sin embargo cuando las bacterias son colocadas en una solucin hipertnica) presencia de gran cantidad de solutos) su crecimiento puede ser inhibido considerablemente. Esta inhibicin depender del tipo de soluto y de la naturaleza del organismo; el citoplasma se deshidrata y el agua sale de la clula, causando plasmlisis. En algunos casos la clula es inhibida en ausencia de agua celular suficiente. En casos extremos hay una activacin enzimtica permanente y las clulas no se recuperan en solucin isotnica.

Las bacterias pueden crecer en medios con distintos valores de concentracin de sales, o en algunos casos necesitan de estas condiciones para su desarrollo metablico adecuado. Estos se clasifican en Halfilos, los cuales a su vez puede ser tolerantes (viven en 3.5% de NaCl, y que ven inhibido su crecimiento a concentraciones mayores o menores de sales) y extremos (que viven en y requieren concentraciones saturantes de sales) ; Halotolerantes que pueden desarrollarse en moderadas concentraciones pero que presentan mayor crecimiento a bajas concentraciones y finalmente los microorganismos no Halfilos.

DISCUSIN: En funcin de los necesarios conceptos previos podemos concluir que los resultados obtenidos son fidedignos y correspondientes a lo esperado para cada caso. Profundizaremos estos con el siguiente grafica de curvas en funcin del crecimiento y la concentracin salina.

La cepa empleada en la experiencia fue E.coli una bacteria no halfila por lo cual solo presento crecimiento en cultivo con solucin salina en concentracin de 2%, debido a ello en las placas con5% y 10% no hubo formacin de colonias puesto que no permiten el medio adecuado para su desarrollo, as mismo en la placa con concentracin al 40% apreciamos un medio difuso para deteccin de colonias debido a una sobresaturacin por la precipitacin de las sales. Sin embargo si hubiramos inoculado la otra cepa (Staphylococcus aureus) podramos haber obtenidos colonias hasta una concentracin del 20% debido a que estos microorganismos son halotolerantes. Por los resultados obtenidos determinamos que la cepa en estudio solo mostrara un crecimiento en concentraciones bajas puesto que si estas aumentan afectaran el crecimiento bacteriano.

CONCENTRACION DE IONES DE HIDROGENO

+ Poco crecimiento++ Regular crecimiento+++ Crecimiento moderado pH 3.0 pH 5.0 pH 7.0pH 9.0pH 11.0

Escherichia coli+++++++++++

++++ Abundante crecimiento

Interpretacin de resultados: Para el estudio del pH de la bacteria Escherichia coli preparamos diferentes soluciones de concentraciones variadas de pH como lo muestras nuestro cuadro, en cual podemos observar por turbidimetria la cantidad de bacterias en cada tubo y notamos que en el tubo de concentracin pH de 7.0 hay una mayor turbidez a diferencia de los dems tubos, por lo que el E. coli su pH optimo es neutro esta entre 6.0 7.0, a diferencia del tubo con pH acido hay poco crecimiento de la bacteria para pH 3.0, para el pH bsico 11.0 se observ menor crecimiento.De acuerdo a nuestra investigaciones encontramos que el pH ptimo es de 7.0, por lo cual nuestra prueba fue realizada en buenas condiciones, y el resultado de ella nos llev a encontrar el pH adecuado experimentalmente.

Agentes antispticos+ Poco crecimiento++ Regular crecimiento+++ Crecimiento moderado++++ Abundante crecimientoANTISEPTICOE.coliS. aureus

ALCOHOL AL 70%+++

H2O2++

MERTHIOLATE+

JABON PROTEX+

Tamao de los halos de crecimiento:EFECTO DE LOS ANTISEPTICOS FRENTE AL STAPHYLOCOCCUS AUREUSANTISEPTICOHalo de inhibicin en mm frente al S. aureus

ALCOHOL AL 70% 5 mm

H2O24 mm

MERTHIOLATE 1mm

JABON PROTEX1mm

DETALLES DE LAS SUSTANCIAS EN ESTUDIO:

Alcohol al 70%: El mecanismo de accin de los alcoholes es la desnaturalizacin de las protenas de los microorganismos. La desnaturalizacin proteica slo es posible en presencia de agua; por este motivo el alcohol absoluto presenta un poder bactericida mucho menor que las mezclas de alcoholes con agua. Podra tener cierta accin bacteriosttica al inhibir la produccin de metabolitos esenciales para la divisin celular rpida. Tiene accin bactericida pero poco efecto residual. Presenta un inicio de accin retardado; por este motivo se debera dejar actuar dos minutos antes de cualquier procedimiento. Bactericida de potencia intermedia. Es activo frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas, incluyendo patgenos multirresistentes (Staphylococcus aureus). El etanol posee suficiente actividad frente a virus lipdicos y no lipdicos para ser considerado virucida de amplio espectro. La combinacin de alcohol etlico al 80% y cido peractico del 0.2% es muy efectiva para inactivar a virus lipdicos y no lipdicos. Es inactivo frente a las esporas (stas pueden contaminar las soluciones); por esta razn no es considerado un desinfectante de tan alto nivel.

Perxido de hidrogeno: Posee propiedades antispticas y es el ms utilizado en el mercado en formulaciones del 5% al 20%. Se ha utilizado como desinfectante y esterilizante qumico por inmersin. El perxido de hidrgeno tiene efectos oxidantes por producir OH y radicales libres, los cuales atacan a los componentes esenciales de los microorganismos como lpidos, protenas y ADN. Se degrada rpidamente en oxgeno y agua, por lo que precisa estabilizadores para su conservacin. Es un agente oxidante de efecto fugaz por ser descompuesto por las catalasas de los tejidos.Es activo frente a bacterias y virus, segn la concentracin y condiciones de utilizacin. Estudios in vitro de soluciones de perxido de hidrgeno al 3% han mostrado amplio espectro de eficacia, con mayor actividad frente a bacterias gram positivas como el S.aureus. La conclusin de los estudios realizados con el perxido de hidrgeno es que este agente no influye negativamente sobre la curacin de heridas, pero es inefectivo en reducir la cantidad de bacterias, sin embargo este compuesto puede ser til como agente qumico debridante.

Merthiolate: Es un bacteriosttico (no produce la muerte de microorganismos, impide su reproduccin), necesitando grandes concentraciones para alcanzar efectos bactericidas. Inhiben la actividad enzimtica por unin del mercurio con los grupos sulfhifdrilo de las mismas. En grandes concentraciones, inhibe la reproduccin de bacterias grampositivas, como Staphylococcus aureus. Estas sustancias estn fuera de uso debido a: Aumento por parte de los microorganismos de la resistencia al mercurio Poseen efectos txicos sobre tejidos y corrosivos sobre metales Son poco activos al pH de los lquidos corporales Se inactivan drsticamente con la presencia de materia orgnica

Jabn Protex: Desde que se hicieron populares los jabones antibacteriales en la dcada de los 90, muchos consumidores empezaron a usarlos en reemplazo de los jabones tradicionales. Sin embargo, recientemente la Administracin de Alimentos y Frmacos de los Estados Unidos(FDA) ha sealado queno existe evidencia que respalde que el jabn antibacterical previene la proliferacin de grmenes. La mayora de jabones antibacteriales tieneentre sus principales componentes qumicos al triclosn, un agente antimicrobiano que se encuentra en jabones comunes del hogar, champs y cremas dentales, puede adherirse en el interior de la nariz humanay comenzar una colonizacin de las bacteriasStaphylococcus aureus, y podra predisponer a algunas personas a lainfeccin. Hasta elmomento no se ha podido probar que el jabn antibacterial sea ms beneficioso para la salud que el jabn tradicional. En esta prueba, pudimos comprobar la poca eficiencia del jabn antibacterial PROTEX, frente a la proliferacin de Staphylococcus aureus, tan solo fijndonos el pequeo halo, casi imperceptible que posee en la placa. Puede que con ello, nos hagamos la pregunta: Entonces Qu de diferente tienen lo llamados jabones antibacteriales respecto a los jabones tradicionales?

Interpretacin de resultados:Con lo descrito previamente, notamos que despus de todo, el jabn antibacterial Protex no deba ser tan efectivo como quiz suponamos. Asimismo el Methriolato es un compuesto, que necesita una alta concentracin para poder inhibir la proliferacin de microorganismos, mas no la muerte de estos. Por lo tanto esto dara razn, al poco tamao del halo de inhibicin que poseen en el experimento de las placas. Por otro lado, el alcohol al 70% posee gran efectividad frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas , lo que hace que en el experimento, haya podido tener un halo de mayor tamao que la de los dems antispticos. Por ltimo el perxido de hidrogeno es un agente oxidante de efecto fugaz, pues se descompone frente a las catalasas de los tejidos. Asimismo los radicales antioxidantes que posee ataca a los componentes esenciales de los microorganismos como lpidos, protenas y ADN, lo que lo hace efectivo para detener la proliferacin de bacterias Gram positivas, en especial del Staphylococcus aureus.Prueba de diferenciacin bioqumica

Determinar si hay crecimiento y cambios de color del indicador.

Criterios de evaluacin: produccin de cido. Prueba positiva (+): color amarillo Prueba negativa (-): color rojo

GLUCOSA: E. Coli: Naranja amarillento (+)S. Aureus: naranja (+)

SACAROSA: E. Coli: anaranjado rojizo (+)S. Aureus: amarillo (+)

LACTOSA: E. Coli: amarillo (+)S. Aureus: naranja (+)Especificaciones:El caldo base rojo de fenol; y sacarosa, glucosa o lactosa, son utilizados para la diferenciacin de cultivos puros, en base a la capacidad de los microorganismos en estudio (E. Coli y S. Aureus) para fermentar la glucosa. Formula: Peptona de casena. Cloruro de sodio. Glucosa, sacarosa o lactosa. Rojo de fenol.

Explicacin:La capacidad de las bacterias de fermentar carbohidratos es utilizado como un criterio para su identificacin. El medio provee los requerimientos nutricionales para el crecimiento de los microorganismos y contiene Rojo de fenol como indicador de pH. Este indicador fue utilizado en este experimento obteniendo resultados altamente confiables.La peptona provee la fuente de nitrgeno para el buen desarrollo de los microorganismos, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico del medio y el Rojo de Fenol acta como indicador, virando de color rojo-naranja a amarillo en presencia del cido producido por la fermentacin del azcar.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:Tanto la E. Coli como S. Aureus son bacterias anaerobias facultativas, es decir, pueden desarrollarse bajo condiciones de presin de oxgeno bajas. Esto les permite obtener energa fermentando Hidratos de carbono, y generar cidos derivados de los mismos. Por eso disminuyen el PH de su medio.Podemos observar que en las muestras de glucosa y lactosa que contenan E. Coli se tornaron amarillo lo que garantiza la fermentacin, mientras que la sacarosa se torn rojo anaranjado lo que tambin confirmara que se dio de manera ms leve.De igual forma en la muestra que contena cepa de S. Aureus, las 3 muestras con sacarosa, lactosa y glucosa cambiaron su coloracin de rojo intenso a tonalidades de amarillo-anaranjado confirmando la fermentacin (positivo). Nuestros resultados se dieron de la manera que se esperaba, confirmando el poder de ambas bacterias como fermentadores de carbohidratos.

CUESTIONARIO:1. De los microorganismos estudiados Qu estructuras bacterianas le confieren resistencia trmica? Por qu?En el caso del Staphylococcus aureus que son Gram-positivos carentes de endosporas se debe a su capacidad de producir toxinas que son altamente estables, y resistentes al calor, congelacin e irradiacin, por lo que una vez formadas en el alimento, es extremadamente difcil eliminarlas.Las enterotoxinas estafiloccicas constituyen un grupo heterogneo de protenas solubles en agua, poseen un peso molecular relativamente bajo que oscila entre 26 000 y 30 000 daltons. Estas toxinas provienen de cepas especficas; sin embargo, una cepa deStaphyloccocus aureuspuede sintetizar mltiples serotipos toxignicos.Las enterotoxinas presentan alta termoestabilidad, requieren al menos 30 min a 100C para ser destruidas. Se conocen 7 serotipos enterotoxignicos diferentes: A, B, C1, C2C3, D, E.Las enterotoxinas A y D son las ms frecuentemente asociadas con las intoxicaciones alimentarias, y el tipo B se detecta con mayor regularidad en infecciones intrahospitalarias. A su vez la produccin de la enzima termonucleasa (enzima termoestable que degrada al cido desoxirribonucleico hasta nucletido) tambin aporta termoestabilidad al microorganismo.La produccin de esta enzima se inhibe en anaerobiosis y se estimula por la presencia de oxgeno, requiere iones calcio para su actividad enzimtica, posee un pH ptimo de 8,6 y se precipita de cultivos fluidos con sulfato de amonio. Su termoestabilidad (resiste temperatura de 130 C por 16,6 min) es la nica asociacin con el crecimiento deS. aureus. Esta relacin ha motivado el desarrollo de diferentes mtodos para detectar esta enzima en el alimento y utilizarla como pesquisaje en los alimentos susceptibles a la contaminacin deS. aureus.

FUENTE: http://virus.usal.es/web/demo_microali/enterotoxina/set.html http://www.elika.net/datos/pdfs_agrupados/Documento95/7.Staphylococcus.pdf

2. Cul es el rango de temperatura en el cual los microorganismos crecen y se multiplican rpidamente y en funcin de esto, cul sera la temperatura recomendada para la conservacin de los alimentos? Por qu? Las bacterias que causan enfermedades, y que pueden contaminar los alimentos, se clasifican de acuerdo a su rango de crecimiento. Tenemos a la bacterias mesfitas, que tienen una temperatura ptima de crecimiento entre los 30 C y 42 C. Estas bacterias detienen su crecimiento alrededor de los 8 C, temperatura que no las mata; tampoco mueren a la temperatura de congelacin de los alimentos (-18 C). Estas bacterias tienen la propiedad de volver a multiplicarse cuando regresan a temperaturas favorables. Por encima de los 60 C comienzan a alterarse; si la temperatura llega a 100 C, y se mantiene por algunos minutos, slo sobreviven las denominadas esporas. Debido a esta caracterstica de las bacterias con relacin a la temperatura, hay una zona entre los 10 C y los 60 C que se considera zona de peligro. Tenemos tambin a las termfilas, que prefieren el calor y crecen mejor entre los 55 C y 65 y finalmente a las psicrfilas, las cuales prefieren el fro y su temperatura para reproducirse est entre los 10 C y 20 C. No se deben dejar los alimentos que se van a consumir en los rangos de temperatura ya mencionados, ya que existe la probabilidad de que esas bacterias se multipliquen. Lo recomendado es cocinar los alimentos y consumirlos. Si deben conservarse, habr que hacerlo en heladera por debajo de los 10 C o en conservadoras de calor por encima de los 65 C.

Existe una franja de temperatura peligrosa, entre 5 y 65, en la que los microorganismos crecen rpidamente. Los alimentos calientes se deben cocinar a 65 C o ms. Los alimentos fros deben mantenerse entre 5 y 1 C. El fro hace ms lento o detiene el desarrollo de las bacterias, mientras que el calor destruye microorganismos que pueden alterar las propiedades de un alimento. Los alimentos cocinados que no vayan a consumirse inmediatamente, deben conservarse en fro. Un alimento pre-cocinado se debe recalentar a una temperatura de 70 C durante 15 segundos antes de ser consumido, y slo se debe recalentar la cantidad que vayamos a comer enseguida.

FUENTE:www.um.es/adyv/diversidad/salud/nutricion/conservacion.php- Universidad de Murcia: Avda. Teniente Flomesta, n 5 - 30003 - Murcia

3. Qu cuidados debemos practicar frente a la cantidad de agua extra o intracelular en posibles productos frescos a temperatura ambiente?La actividad de agua (aw) es la cantidad de agua libre en el alimento, es decir, el agua disponible para el crecimiento de microorganismos y para que se puedan llevar a cabo diferentes reacciones qumicas. Tiene un valor mximo de 1 y un valor mnimo de 0. Cuanto menor sea este valor, mejor se conservar el producto. La actividad de agua est relacionada con la textura de los alimentos: a una mayor actividad, la textura es mucho ms jugosa y tierna; sin embargo, el producto se altera de forma ms fcil y se debe tener ms cuidado. Cuanto menor es la actividad de agua de un alimento, mayor es su vida til. Es importante diferenciar entre cantidad de agua y actividad de agua. El primer trmino hace referencia a la cantidad total de agua presente en el alimento, aunque puede ser que no est libre para interaccionar. La actividad de agua, en cambio, hace referencia solo a la cantidad de agua libre en el alimento y disponible para reaccionar, es decir, la que puede facilitar la contaminacin del producto.

Las dos maneras ms importantes de reducir la actividad de agua de los alimentos pasan por el secado y la incorporacin de sal o azcar para atrapar las molculas de agua. El primer mtodo es el ms antiguo y, adems de secar, tambin ayuda a formar aromas y sabores tpicos en los alimentos procesados con este mtodo. Segn el tipo de alimentos, se utiliza uno u otro mecanismo de secado: para alimentos slidos como vegetales, frutas o pescado, se utiliza el secado con aire caliente; para lquidos como la leche, el secado por aspersin; para mezclas pastosas lquidas, el secado al vaco; y para una amplia variedad de productos, el secado por congelacin.Otro mtodo consiste en agregar sal o azcar a los alimentos. Este no requiere mquinas especializadas, pero s debe tenerse mucho cuidado durante su procedimiento. Se aade azcar en las mermeladas o concentraciones de salmuera en las carnes para disminuir la actividad de agua. El producto terminado debe evaluarse para determinar en cifras su actividad de agua.FUENTE:bnnnnwww.consumer.es/seguridad-alimentaria/ciencia-y-tecnologia/2008/03/26/175613.php

4. Qu ejemplos de aplicacin estn basados en la fisiologa de la presin osmtica?ESTABILIZACION DE VINOS: Tiene por objeto eliminar un precipitado de tartrato potsico que disminuye generalmente su valor comercial y puede hacerse precipitando los tartratos de forma controlada, tras concentrar el vino por smosis inversa.Hacer pasar el vino a travs de una smosis inversa, obteniendo, por un lado, un permeado que representa aproximadamente el 60% del volumen inicial, y por otro, un concentrado que supone el 40% restante en el que los distintos productos que no pueden atravesar las membranas.CONCENTRADO DE ZUMOSDE FRUTAS: La concentracin elimina el agua, y mantiene el aroma y resto de molculas. La produccin de zumos concentrados mediante smosis inversa tiene las siguientes ventajas: No destruye las vitaminas ni se pierden los aromas, al hacerse a temperatura ambiente.PRE CONCENTRADO DE SUERO LCTEO: Cuando el suero no se procesa en la misma planta donde se obtiene, es preciso transportarlo para su tratamiento. Con la pre concentracin elimina gran parte del agua existente reduciendo considerablemente los gastos de transporte.

REDUCIR EL CONSUMO ENERGTICO DE LA EVAPORACIN. Si el suero lcteo se procesa en la misma planta su pre concentracin mediante smosis inversa permite reducir los consumos energticos globales de la fabricacin y aumentar la capacidad de produccin de los evaporadores existentes.FUENTE: http://www.lenntech.es/biblioteca/osmosis-inversa/que-es-osmosis-inversa.htm

5. Cul es la razn de usar el alcohol de 70%?El mecanismo de accin de los alcoholes es la desnaturalizacin de las protenas de los microorganismos. La desnaturalizacin proteica slo es posible en presencia de agua; por este motivo el alcohol absoluto presenta un poder bactericida mucho menor que las mezclas de alcoholes con agua. Podra tener cierta accin bacteriosttica al inhibir la produccin de metabolitos esenciales para la divisin celular rpida. Tiene accin bactericida pero poco efecto residual. Presenta un inicio de accin retardado; por este motivo se debera dejar actuar dos minutos antes de cualquier procedimiento. Bactericida de potencia intermedia. Es activo frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas, incluyendo patgenos multirresistentes (Staphylococcus aureus). Como elemento de desinfeccin el alcohol diluido con agua en una proporcin de 70 y 30 es ms efectivo que puro.El alcohol diluido desinfecta mejor. Si entran en contacto con alcohol puro, las estructuras externas de los microorganismos se deshidratan y en ocasiones, forman una capa gruesa que impide el ingreso del alcohol y protege al microbio. En cambio, el alcohol diluido al 70% no tiene la capacidad de deshidratar esas capas externas, por eso penetra en el interior de las bacterias y resulta efectivo para destruirlas.FUENTE:http://www.funlarguia.org.ar/Herramientas/Guia-de-Prevencion-de-Infecciones-Intra-Hospitalarias/Uso-de-Antisepticos-y-Desinfectantes6. En un proceso productivo de derivados de frutas. Cul sera el agente contaminante principal? Cul sera su agente qumico de control? Qu funcin cumplira este agente? Proponga un ejemplo.En un proceso de derivados de frutas nuestros agentes contaminantes serian bacterias, mohos, y levaduras principalmente. Por esta razn utilizaramos el Hipoclorito de sdio a 5,25% diluido por 1L de agua. Este agente cumple la funcin de oponerse a la sepsis o putrefaccin de materiales vivos. Se trata de desinfectantes con baja actividad txica hacia los tejidos vivos donde se aplican.FUENTE: http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/14agquimicos.htm

7. Explique el efecto de los desinfectantes y antispticos en el desarrollo microbiano.Efecto de los desinfectantes:Existen varios tipos de desinfectantes con efectos variados en el crecimiento bacteriano, de acuerdo con el Museo Nacional de la Salud. El desinfectante tpico detiene el crecimiento de las bacterias matndolas. Un segundo tipo de desinfectante, el inhibidor, previene que las bacterias crezcan en el lugar donde se aplica el qumico. Finalmente, un desinfectante conocido como "agente bacteriosttico" no mata las bacterias, sino que detiene temporalmente el crecimiento bacteriano. La proliferacin del uso de desinfectantes puede causar eventualmente que estos se vuelvan menos efectivos, de acuerdo con Michigan Company (distribuidora de desinfectantes). Un desinfectante no puede matar cada microbio bacteriano. Algunas bacterias sufren una mutacin aleatoria que las previene de intoxicarse con el desinfectante. Estas bacterias sobreviven y producen nuevas poblaciones resistentes a ese desinfectante especfico.Efecto de los antispticos:Los antispticos sonsustancias antimicrobianasque se aplican a untejidovivo o sobre lapielpara reducir la posibilidad deinfeccin, sepsisoputrefaccin. Algunos antispticos son autnticosgermicidas, capaces de destruir microbios (bactericidas), mientras que otros sonbacteriostticosy solamente previenen o inhiben su crecimiento.Los agentes qumicos afectan a los microorganismos mediante 5 mecanismos de accin: 1. Desnaturalizacindeprotenas2. Rotura demembrana celular3. Eliminacin de grupossulfhidrilos4. Antagonista qumico5. OxidacinEn general, el mecanismo de accin de los antispticos y desinfectantes depende de tres mecanismos bsicos: Capacidad de coagular y precipitar protenas, alterar las caractersticas de permeabilidad celular y toxicidad o envenenamiento de los sistemas enzimticos de las bacterias, que a su vez dependen del grupo qumico. stos pueden producir la muerte o inhibicin celular de las bacterias por oxidacin, hidrlisis o inactivacin de enzimas, con prdida de los constituyentes celulares. Son ms selectivos.FUENTE:http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermatologia/v15_n2/pdf/a02.pdf

8. De acuerdo a la capacidad fermentativa de los carbohidratos por las bacterias estudiadas. Indique los alimentos que pueden ser potencialmente deteriorados por esta actividad metablica. Por qu? En la fermentacin alcohlica, tiene como finalidad biolgica proporcionar energa anaerbica a los microorganismosunicelulares(levaduras) en ausencia deoxgenoa partir de la glucosa.El etanol resultante se emplea en la elaboracin de algunasbebidas alcohlicas, tales como elvino, lacerveza, lasidra, elcava, etc.

En la fermentacin actica, es lafermentacinbacterianaporAcetobacter, ungnerode bacteriasaerobicas, que transforma elalcohol etlicoencido actico, la sustancia caracterstica del vinagre. La fermentacin actica delvinoproporciona elvinagredebido a un exceso deoxgenoy es uno de losfallos del vino, un proceso que degrada sus cualidades. La fermentacin actica es un rea de estudio dentro de lacimologa.

En la fermentacin butrica es la conversin de losglcidosencido butricopor accin de bacterias de la especieClostridium butyricumen ausencia deoxgeno.

En la fermentacin lctica, Un ejemplo de este tipo de fermentacin es la acidificacin de laleche. Ciertas bacterias (Lactobacillus,Streptococcus), al desarrollarse en la leche utilizan lalactosa(azcar de leche) como fuente de energa. La lactosa, al fermentar, produce energa que es aprovechada por las bacterias y el cido lctico es eliminado.FUENTE:http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/20-bacterias%20lacticas.htmDefina: -Antisptico: Un antisptico es un tipo de desinfectante que, cuando se aplica sobre superficies del cuerpo o en tejidos expuestos, destruye o inhibe el crecimiento de microorganismos en tejidos vivos, sin causar efectos lesivos. Algunos antispticos se aplican sobre piel intacta o membranas mucosas, quemaduras y heridas abiertas para prevenir la sepsis al desbridar o excluir los microbios de estas reas.-Desinfectante: Un desinfectante es un producto que permite eliminar lasbacterias, los virus o los microorganismos. La utilizacin de un desinfectante permite limitar o, incluso, hacer desaparecer completamente, los riesgos de contaminacin de una enfermedad. En medicina un desinfectante sirve para limpiar o darasepsiaa todo lo que est en contacto con un paciente como el material mdico, las camas, los suelos, las camillas o los pomos de las puertas. Entre los desinfectantes ms utilizados encontramos la cal viva, eletanol, el yodo y el cloruro de sodio.-Bactericida: Un efecto bactericidaes aquel que produce la muerte a una bacteria. Un efecto bactericida est producido por sustancias bactericidas. Estas sustancias son secretadas por los organismos como medios defensivos contra las bacterias. antimicrobianos de efecto lsico o ltico (Lisis) en las bacterias, provocan una reduccin en la poblacin bacteriana en el husped o en el uso de sensibilidad microbiana. Los bactericidas pueden serdesinfectantes, antispticosoantibiticos.-Bacteriosttico: Sustancia que dificulta la reproduccin bacteriana. Una sustancia bacteriosttica no produce la muerte de las bacterias, pero al dificultar o impedir su reproduccin la cepa bacteriana envejece y desaparece.-Plasmlisis: En los vegetales, la semipermeabilidad de la membrana citoplasmtica y la permeabilidad de la pared celular originan, entre otros, el fenmeno de plasmlisis. Se produce ya que las condiciones del medio extracelular son hipertnicas; debido a esto, el agua que hay dentro de la vacuola sale al medio hipertnico (osmosis) y la clula se deshidrata ya que pierde el agua que la llenaba. Finalmente se puede observar cmo la membrana celular se separa de la pared (la clula se plasmoliza). Si es que este fenomeno ocurre, la planta corre el riesgo de una muerte segura. Al menos hasta que consiga agua que llene la vacuola, volvindose la clula turgente nuevamente y que se recupere.

Bibliografa:

BROOKS,Geo.JanetS.Butel.MicrobiologamdicadeJawetz,Editorial:Mxico.ElManualModerno,2005.Pag.48-51

Isabel Arias B1 , Jos Carlos Huguet, Rev Peru Med Exp Salud Publica 2002; 19 (4)

ROJASCAMPOS,Norman.ElLipopolisacaridobacteriano:unapotenteendotoxinaconmltiplesactividadesbiolgicas.acultaddeMicrobiologa,UniversidaddeCostaRica

Paginas web:

http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/13agfisicos.htm#_Toc59451618

http://omarleo168-microbiologia.blogspot.pe/2011/02/accion-de-los-agentes-quimicos-sobre.html

http://microbiologiaitt.es.tl/8-.--Efecto-de-factores-f%EDsicos-y-qu%EDmicos-sobre-el-crecimiento-microbiano.htm