UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE OCEANOGRAFIA, PESQUERIA, CIENCIAS

ALIMENTARIAS Y ACUICULTURA

TITULO :

FACTORES FISICOS Y QUIMICOS QUE INFLUENCIAN EN EL CRECIMIENTO

MICROBIANO

N° DE PRÁCTICA: 6

PARTICIPANTE:

GAMARRA RAMOS, CARLOS ALBERTO

DOCENTE

DOC. MARIA TERESA FLORES CORDOVA

SECCION

FECHA

MIRAFLORES, 10 de junio, 2013

OBJETIVO GENERAL

Determinar mediante el análisis práctico, realizado el laboratorio de

microbiología, la reacción de los microorganismos frente a agentes físicos,

químicos y biológicos.

Determinar y reconocer estos agentes que favorecen la velocidad de

crecimiento de los microorganismos, dependiendo del medio al cual es

sometido el cual puede ser favorable o no, para su desarrollo o caso contrario

utilizar el medio como un indicador para su control.

OBJETIVO ESPECIFICO

Conocer como los agentes físicos, químicos y biológicos que encontramos en

nuestro medio, permiten el desarrollo de un microorganismo o su posible

control, el cual podremos utilizarlo para evitar la proliferación de estos en

ciertos alimentos o materiales que están al contacto con ello. para una buena

higienización en la industria de los alimentos.

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FUNDAMENTO

Las razones principales para controlar los microorganismos son: prevenir la

transmisión de enfermedades, evitar el deterioro de los alimentos y evitar la

contaminación tanto en procesos industriales que requieran cultivos puros, como en

laboratorios de diagnóstico o investigación.

Condiciones que influyen en la acción microbiana

Hay ciertos factores que tienen que ser considerados a la hora de aplicar agentes

químicos o físicos para el control de microorganismos.

Concentración del agente químico 

Mientras más concentrado esté el agente químico, más rápido se destruirán los

organismos.

Intensidad del agente físico 

Cuanto más intenso es el agente físico (calor o radiación más rápidamente mata a los

microorganismos.

Tiempo de exposición 

A mayor tiempo de exposición, mayor es el número de organismos destruidos.

Temperatura 

A mayor temperatura se acelera la destrucción de los organismos.

Número de organismos 

 Mientras mayor sea el número de microorganismos, más tiempo se requiere para

destruirlos.

Clase de organismo 

 Las células vegetativas (las que están metabólicamente activas) son más susceptibles

que las esporas bacteriales.

Estado fisiológico de las células 

 Mientras más viejas sean las células, más rápido se destruyen.

Naturaleza del medio ambiente 

 Algunos ambientes desfavorecen la destrucción  rápida de los microorganismos,

como por ejemplo los medios viscosos

MARCO TEORICO

                                                   FACTORES FÍSICOS EN EL CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

                                                                              TemperaturaLa temperatura es de suma importancia para el crecimiento de los organismos. A

medida que aumenta está por encima de la temperatura óptima de crecimiento, mayor

es la velocidad  de muerte de los microorganismos. Es por ello que altas temperaturas

se usan en el control microbiológico.  Las temperaturas altas pueden aplicarse de dos

formas: calor húmedo (con agua) o calor seco.

El calor húmedo es mucho más eficiente que el calor seco, ya que este actúa

mediante la coagulación de las proteínas celulares, por otro lado el calor seco destruye

la célula por la oxidación de agentes químicos de la célula.

 

Presión osmótica

La pared celular de las bacterias las protege de cambios en la presión osmótica del

medio, pero si la presión osmótica externa es mucha, el organismo puede morir; esto

sucede si las concentraciones de solutos en el medio en que crece el organismo son

extremos. Altas concentraciones de sal interrumpen los procesos de transporte a

través de la membrana y desnaturalizan las proteínas.

  

pH y crecimiento microbiano

Cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual es posible el crecimiento y

normalmente posee un pH óptimo bien definido. La mayoría crece en un margen de

pH de 2- 3 unidades. La mayoría de los amientes naturales tiene un valor de pH entre

5 y 9 y los microorganismos con pH optimo de estén orden son los más comunes.

Los organismos que crecen mejor a bajo pH constituyen un tipo de extremofilos

llamados acilo filos. El grupo de los hongos son más anisofilos que las bacterias,

muchos hongos crecen en forma óptima a pH 5 o inferior e incluso algunos crecen

bien a pH 2.

 

FACTORES QUÍMICOS PARA EL CONTROL DE MICROORGANISMOS

El fenol y sus derivados

El fenol se adhiere a superficies inertes y proporciona lo que se llama una desinfección

residual. Su acción se prolonga por varias horas. Los compuestos de fenol pueden

actuar como microbicidas o microbiostáticos dependiendo de la concentración que se

utilice. Los fenoles poseen efecto germicida pues dañan la membrana y desnaturalizan

las proteínas bacteriales. Uno de los derivados del fenol se llama cresol; éstos tienen

un efecto germicida superior al fenol. Los cresoles se usan en jabones líquidos (ej.

lysol es un jabón más un cresol). Otro derivado del fenol es el hexaclorofeno, el cual

se usa en jabones  para las manos (en cirugía y hospitales). Un ejemplo de este último

es el Phisohex.  El fenol y sus derivados por lo general no matan esporas.

 

Los alcoholes

Los alcoholes dañan la membrana, desnaturalizan las proteínas, disuelven lípidos y

deshidratan la célula. La concentración más efectiva de alcohol es el 70% y los más

utilizados son el alcohol etílico e isopropílico.

 

Halógenos

Los halógenos actúan sobre los microorganismos oxidando las proteínass y enzimas

esenciales. No matan las esporas. Los halógenos más comunmente usados son el

cloro y el iodo.

1. El cloro  Es uno de los desinfectantes más usados y es microbicida contra la

mayoría de los microorganismos. Se usa para limpiar las aguas contaminadas y se

aplica en agua potable.

2. El iodo  Se utiliza comúnmente como un antiséptico y es uno de los mejores que

hay para la piel. Se aplica principalmente como tintura de iodo. Es microbicida para la

mayoría de los organismos. El iodo también se emplea como iodóforo (compuesto de

iodo con otros agentes). Los iodóforos no manchan ni irritan, un ejemplo es el

betadine.

 

 

Jabones y detergentes

Un jabón es una sal de sodio o de potasio de un ácido graso. Los agentes que

reducen la tensión superficial del agua (surfactantes) y que se emplean principalmente

para la limpieza de superficies se llaman detergentes (el jabón es un ejemplo de un

detergente). Los detergentes se clasifican en catiónicos, aniónicos y no-iónicos. Los

detergentes catiónicos son mejores desinfectantes que los demás. Otro nombre con

que se conocen a los detergentes catiónicos son cuaternarios de amonio. Estos son

bacteriostáticos a bajas concentraciones y bactericidas a concentraciones mayores.

Ácidos

Hay una serie de ácidos orgánicos que se usan como conservantes en muchos

alimentos como el ácido acético, ácido benzoico, ácido láctico, ácido propiónico y

ácido sórbico. El ácido baja el pH y esto desnaturaliza las proteínas. No matan las

esporas

PROCESO EXPERIMENTAL (practica de laboratorio)

5. INFLUENCIA DE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE SOLUTO:

Las altas concentraciones de solutos hacen que el agua disponible de los medios de

cultivo sea menos asequible a los microorganismos. La mayoría de los

microorganismos de la naturaleza prefieren los ambientes de alta humedad (alto aw).

Existen microorganismos que prefieren los ambientes con alta concentración de

solutos y crecen mejor en ambientes fuertemente osmóticos.

Aunque existen muchos factores que influyen para probar las necesidades de aw de los

microorganismos, uno de los factores más importantes es el tipo de soluto la influencia

de cloruro de sodio, o sal común, para determinar el halofilismo; y por otro lado se

puede determinar la influencia de la glucosa, u otro azúcar, para probar la osmofilia de

loa microorganismos.

a) Determinación del halofilismo :

Siembra un microorganismo en placas con medio de cultivo favorable, prepara

do con deferentes concentraciones de cloruro de sodio: 5%, 10% ,15%, de

CLNa.

Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37°c por

3, 5, 8,15, días.

Leer el crecimiento microbiano en las estrías de siembra

b) Determinación de osmofilia :

Siembra un microorganismo en placas con medio de cultivo favorable, prepara

do con deferentes concentraciones de glucosa: 10%, 20% ,30%,

Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37°c por

5, 10,15, días.

Leer el crecimiento en la superficie del agar.

PROCESO DE LABOARTORIO

a) Determinación del halofilismo :

Siembra un microorganismo (Staphylococcus aureus) en placas con medio

de cultivo favorable, prepara do con deferentes concentraciones de cloruro de

sodio: 5%, 10% ,15%, de CLNa.

Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37°c por

3, 5, 8,15, días.

Leer el crecimiento microbiano en las estrías de siembra

PROCESO DE LABOARTORIO

a) Determinación de osmofilia :

Siembra un microorganismo (Staphylococcus aureus) en placas con medio

de cultivo favorable, prepara do con deferentes concentraciones de glucosa:

10%, 20% ,30%,

Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37°c por

5, 10,15, días.

Leer el crecimiento microbiano en las estrías de siembra

6. DETERMINACIÓN DE LA ACCIÓN GERMICIDA DE ALGUNOS AGENTES

QUÍMICOS:

La acción germicida de algunos compuestos químicos se determina poniéndole en

contacto el microorganismo son una solución del agente químico y después de un

periodo de tiempo se controla la viabilidad del microorganismo, sembrándolo en un

medio de cultivo adecuado.

Los factores influyentes, que se deben controlar en esta prueba, son la concentración

del compuesto químico, la temperatura y el tiempo de contacto.

Determinación de la acción desinfectante del fenol al 0.5%:

Colocar 0.5 ml de inoculo de cultivo fresco en 5ml de solución de fenol al 0.5%

Agitar y dejar actuar durante 1 minuto

Tomar una asada de la mezcla y sembrara a un tubo de caldo nutritivo,

marcado convenientemente.

A los 2.5 minutos de realizar la mezcla, repicar nuevamente a otro tubo con

caldo nutritivo, marcado convenientemente.

A los 5 minutos procedes igual que el paso anterior

A los 10 minutos realizar una última siembra semejante

Incubar todos los tubos a la temperatura optimó de crecimiento , de 37°C ,de 24

a 48 horas

Leer la turbidez que aparecen en los tubos , y considerar como resistentes a los

desinfectantes si presenta crecimiento en el tubo

PROCESO DE LABOARTORIO

Colocar 0.5 ml de inoculo de cultivo fresco en 5ml de solución de fenol al 0.5%

Agitar y dejar actuar durante 1 minuto

Tomar una asada de la mezcla y sembrara a un tubo de caldo nutritivo,

marcado convenientemente.

A los 2.5 minutos de realizar la mezcla, repicar nuevamente a otro tubo con

caldo nutritivo, marcado convenientemente.

A los 5 minutos procedes igual que el paso anterior

A los 10 minutos realizar una última siembra semejante

Incubar todos los tubos a la temperatura optimó de crecimiento , de 37°C ,de 24

a 48 horas

7. DETERMINACIÓN DE LA ACCIÓN DE LOS ANTIBIOTICOS.

El antibiograma o prueba de sensibilidad de una microorganismo, frente a varios

antibióticos .colocar varios discos de papel con antibióticos diferentes e incubar a la

temperatura más favorable para el crecimiento microbiano, la falta de crecimiento en

zona alrededor del disco significa que el antibiótico tiene un efecto letal o inhibidor

hacia el microorganismo.

Metodología:

Siembra por extensión en superficie 0.1 m. de inoculo de una cepa joven,

distribuyéndolo uniformemente.

Aplicar inmediatamente los discos con antibióticos a una distancia superior a

1.5 cm. entre uno y otro.

Incubar las placas a la temperatura optima de crecimiento , a 35°c por 24 horas

Leer la zona de inhibición que rodea al disco, midiendo en milímetros el

diámetro del halo de inhibición.

PROCESO DE LABOARTORIO

RESULTADOS

Medida de la zona alrededor del disco = 13 mm

RESULTADOS Y CONCLUSIONES

CUADRO N°1

INFLUENCIA DE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE SOLUTO

Determinación del halofilismo

CONCENTRACIONES DE ( ClNa)/con Staphylococcus aureus

5% 10% 15%

INCUBACIÓN A 37°C

A una concentración del 5% podemos determinar no hubo presencia de m.o.

A una concentración del 10% podemos determinar poco crecimiento

A una concentración del 15% podemos determinar no hubo presencia de m.o.

En conclusión el Staphylococcus aureus en dichas concentraciones es

inhibido su crecimiento

CUADRO N°2

INFLUENCIA DE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE SOLUTO

Determinación de osmofilia

CONCENTRACIONES DE GLUCOSA/con Staphylococcus aureus

10% 20% 30%

INCUBACIÓN A 37°C

A una concentración del 10% podemos determinar hubo presencia de m.o.

A una concentración del 20% podemos determinar hubo presencia de m.o.

A una concentración del 30% podemos determinar hubo presencia de m.o.

En conclusión el Staphylococcus aureus en dichas concentraciones favorece

en su velocidad de crecimiento.

CUADRO N°3

DETERMINACIÓN DE LA ACCIÓN GERMICIDA DE ALGUNOS AGENTES QUÍMICOS

Determinación de la acción desinfectante del fenol al 0.5%:

TIEMPOS 2.5 MINUTOS 5 MINUTOS 10 MINUTOS

INCUBACIÓN A 37°C/24 HORAS

A un tiempo del 2.5 minutos podemos determinar hubo poca presencia de

turbidez y no presenta crecimiento de m.o.

A un tiempo del 5 minutos podemos determinar hubo presencia de turbidez u

y no presenta crecimiento de m.o.

A un tiempo del 10 minutos podemos determinar hubo presencia de turbidez y

presenta crecimiento de m.o.

En conclusión el Staphylococcus aureus en dichas tiempos favorece en su

velocidad de crecimiento.

CUADRO N°4

DETERMINACIÓN DE LA ACCIÓN DE LOS ANTIBIOTICOS

Reacción a los antibióticos

INCUBACIÓN A 37°C/24 horas Radio alrededor del disco = 13 mm

La reacción a los antibióticos podemos determinar que existe una zona de

inhibición alrededor del disco y esta media de diámetro en milímetros =13 mm

En conclusión el Staphylococcus aureus existe una mayor resistencia al m.o.

BIBLIOGRAFIA

DOMÍNGUEZ M.; GARCÍA C.; ARIAS MICROBIOLOGÍA EN LOS

ALIMENTOS, PAGI.214.

FREEMAN, BOB A; MICROBIOLOGÍA DE BURROWS 22A EDICIÓN,

EDITORIAL INTERAMERICANA, ESPAÑA 1986. PAGS. 57-62.