Informe Micro
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Introducción
El dominio Bacteria alberga a numerosos microorganismos que son capaces de subsistir en gran variedad de hábitats y bajo diversas condiciones ambientales, haciendo posible su existencia en casi cualquier lugar imaginable.Las bacterias presentan una amplia gama de morfologías y características metabólicas que permiten su diferenciación y clasificación mediante análisis de laboratorio. Para ello, es necesario cultivar las cepas en medios propicios para su crecimiento y proliferación, sean estos líquidos (Ej.: caldo nutriente), semisólidos (Ej.: agar TSI) o sólidos (Ej: agar corriente). La identificación bacteriana se basa principalmente en la observación macroscópica y microscópica de los cultivos y los resultados de distintas pruebas realizadas a ellos.
El análisis macroscópico consiste en observar a simple vista cambios cualitativos en las muestras, como variación en el color u opacidad del medio de cultivo, textura de la superficie, agrupación macroscópica, bordes de la colonia, elevación de esta, y tipo de hemólisis, en el caso de los cultivos en agar sangre, y movilidad, en el caso del agar MIO.La observación microscópica busca esclarecer características que no es posible visualizar sin el instrumental adecuado. Para ello, se utiliza el microscopio y ciertas tinciones (Ej.: tinción de Gram) para obtener apreciaciones más certeras de la colonia, como forma de la bacteria, agrupación (racimos, cadenas, etc), y gram positividad/negatividad.
También existen pruebas bioquímicas como la Fisiotaxonomía bacteriana, que de acuerdo a variables selectivas y diferenciales como utilización de fuentes de carbono, presencia de enzimas, sensibilidad a compuestos químicos y formación de productos metabólicos, permite un reconocimiento más preciso de los organismos en cuestión. Del mismo modo, la prueba API 10s conduce a una identificación rápida de enterobacterias y bacilos gram-negativos mediante la comparación de los resultados obtenidos con otros preexistentes. Este test consiste en 11 pruebas bioquímicas estandarizadas que utilizan sustratos deshidratados.
Los análisis anteriormente descritos son útiles para la identificación de bacterias con las que convivimos en nuestro cotidiano, así como también de potenciales patógenos que ponen en riesgo la salud humana.
Este trabajo práctico tiene los siguientes objetivos:
Identificar material empleado en la práctica bacteriológica Adquirir destreza para manipular materiales y cultivos,
cuidando la esterilidad Conocer los diferentes medios de cultivo Conocer la utilidad de los medios de cultivo más usados Conocer el concepto de siembra y aislamiento de bacterias Practicar diferentes tipos de siembra y aislamiento bacteriano Comparar colonias bacterianas desarrolladas en placas de agar Describir colonias de acuerdo a criterios macroscópicos Practicar tinciones diferenciales de frotis bacterianos: tinción
de Gram, tinción de cápsula y esporas. Dada una serie de preparaciones microscópicas, identificar
diferentes formas y agrupaciones de microorganismos teñidos con la tinción de Gram
Reconocer géneros y especies bacterianas de acuerdo a sus características macro y microscópicas.
Practicar algunas pruebas bioquímicas rápidas para la identificación de cocáceas Gram+
Reconocer alteraciones producidas en los medios de cultivo, por la presencia de productos intermediarios, debido a la acción bacteriana
Identificar macroscópica y microscópicamente bacterias de nuestra flora normal en las placas sembradas en la sesión anterior.
Identificar bacterias que están presentes en el ambiente Identificar una cepa bacteriana Gram(-) a través de su
comportamiento en diferentes medios de cultivo y analizar macroscópica y microscópicamente.
Materiales y Métodos
Los materiales utilizados en los pasos prácticos son los siguientes:
Mechero Asas de siembra Pipetas Pasteur Suero fisiológico Placas de agar Corriente Placas de agar McConkey Placas de agar Sangre Tubos de agar Corriente Tubos de agar semitendido Cultivos Bacterianos en medio sólido
Cultivos Bacterianos en medio tendido Batería de tubos con diversos medios de cultivo Batería de tubos de pruebas fisiotaxonómicas Batería API S10 Batería de preparaciones fijadas Microscopio Portaobjetos Reactivos para tinción de Gram
Resultados
Parte I:
El análisis macroscópico de los cultivos de las bacterias Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Bacillus cereus arrojó las siguientes características para cada colonia, respectivamente:
Staphylococcus aureusTipo de Agar Corriente Sangre McConckey
Medio de cultivo
L S L S L S
Crecimiento Bajo Moderado No crece
Cara
cte
ríst
icas
morf
oló
gic
as
Colonia Puntiforme Puntiforme -Borde Ondulado Ondulado -
Superficie
Rugosa Rugosa -
Elevación
Plana Elevada -
C. Físicas
CéreaBrillante
Color amarillo
CéreaBrillante
Color amarillo
-
Hemolisis
- β -
Tabla 1: Características morfológicas para la colonia de Staphylococcus aureus
Escherichia coliTipo de Agar Corriente Sangre McConckey
Medio de cultivo
S S S S L S
Crecimiento Moderado Alto Alto
Cara
cte
ríst
icas
morf
oló
gic
as
Colonia Puntiforme Irregular PuntiformeBorde Liso Liso Liso
Superficie
Lisa Lisa Lisa
Elevación
Elevada Elevada Convexa
C. Físicas
TransparenteBrillanteSin color
CéreaBrillante
Color blanco
CéreaBrillante
Color fucsiaHemoli
sis- β -
Tabla 2: Características morfológicas para la colonia de Escherichia coli.
Bacillus cereusTipo de Agar Corrien
teCorriente Sangre McConcke
yMedio de cultivo
L S S S S S L S
Crecimiento Bajo Moderado Alto Alto
Cara
cte
ríst
icas
morf
oló
gic
as Colonia Puntifor
meRizoide Irregula
rPuntiforme
Borde Liso Lobulado Ondulado
Liso
Superficie
Lisa Rugosa Rugosa Lisa
Elevación
Elevada Elevada Elevada Elevada
C. Físicas
Transparente
Brillante
Sin color
CéreaOpacaColor
Amarillo
CéreaOpacaColor gris
CéreaBrillante
Color rosado
Hemolisis
- α -
Tabla 3: Características morfológicas para la colonia de Bacillus cereus
El análisis microscópico realizado posterior al uso de la tinción de Gram, mostró los resultados siguientes:
Análisis MicroscópicoBacteria Staphyloco
ccus aureusEscherichia coli
Bacillus cereus
Bacillus cereus
Muestra Colonia
Agar Sangre Agar MacConckey
Agar Sangre
Agar MacConkey
Afinidad tintórea
Gram + Gram - Gram + Gram -
Forma Cocacea Bacilo Bacilo BaciloAgrupación
Racimo Racimo Cadena Racimo
Tabla 4: Morfología microscópica de las cepas bacterianas sembradas y sometidas a la tinción de Gram.
La observación microscópica de la batería de muestras fijadas indicó los resultados expuestos en la Tabla 5.
Tinción
Nº Muestra Afinidad T.
Forma Agrupación
Gram
101 Gram + Gram + Bacilo Cadena102 Gram - Gram - Bacilo Cadena
y racimo103 Mezcla
Gram + y Gram -
Gram + Cocacea DiploGram - Bacilo Diplo
105 Estafilococos
Gram + Cocacea Racimo
106 Levadura Gram + Cocacea Racimo107 Estreptococ
osGram + Cocacea Racimo
Verde de
Malaquita
109 Esporas - Bacilo Cadena
Tinta China
110 Capsula - Cocacea Diplo
Tabla 5: Morfología de colonias fijadas.
Parte II
Las muestras nasofaríngeas recolectadas en el laboratorio (Fig. ) fueron analizadas macroscópica, microscópica y bioquímicamente, entregando los resultados expuestos en las tablas.
Muestra N°1 Muestra N° 2 Muestra N°3
Fig. * : Muestras nasofaríngeas en agar sangre, pertenecientes a tres estudiantes distintos
Muestras nasofaríngeaNº muestra 01 02 03
Tipo de Agar Sangre Sangre SangreCrecimiento Alto
(1)Moderado
(2)Moderado Bajo Moderado Bajo
Cara
cter
ísti
cas
mor
foló
gica
s
Colonia Puntiforme Rizoide Puntiforme Irregular Puntiforme PuntiformeBorde Liso Lobulado Liso Liso Liso Liso
Superficie Liso Rugosa Lisa Lisa Lisa LisaElevación Convexa Elevada Convexa Elevada Convexa ConvexaC. Físicas Transparente
BrillanteSin color
CéreaBrillante
Color Amarillo
Transparente
BrillanteSin color
CéreaBrillante
Color Amarillo
TransparenteBrillanteSin color
CéreaOpaca Color
AmarilloHemolisis α α α α β β
Tabla 6
Tinción de Gram Nº Muestra 01 02 03
Muestra Colonia
Agar Sangre Agar Sangre Agar Sangre
Afinidad tintórea
Gram + Gram - Gram + Gram - Gram + Gram -
Forma Cocaceas Cocaceas Cocaceas Cocaceas Cocaceas CocaceasAgrupación Racimos Cadena Racimos Racimos Racimos Cadena
Tabla 7: Análisis microscópico de las muestras, posterior a la tinción de Gram.
Posteriormente, se realizaron las pruebas de coagulasa y catalasa a dos cepas bacterianas encontradas en la muestra N° 1, lo que se grafica en la Tabla 8.
Prueba bioquímica para cocacea Gram +Bacteria Nº1 Nº2Catalasa (-) (+)
Coagulasa No se realizo Control negativo
Control positivo
(-) (+)Tabla 8: Pruebas bioquímicas para las bacterias halladas en la muestra N°1.
Las muestras extraídas del ambiente (Fig. *) fueron sometidas a análisis macroscópico, obteniendo los resultados observados en la Tabla 9.
a. b. c.
d. e.Fig. * : Muestras ambientales y corporales correspondientes a: a. cara, b. muñeca, c. cuero cabelludo, d. suelo del laboratorio, e. oreja.
Muestras ambientales y del cuerpoMuestra Cara Muñeca Cuero
cabelludoSuelo
LaboratorioOreja
Tipo de Agar Corriente Corriente McConckey McConckey CorrienteCrecimiento Bajo Moderado - - Bajo
Cara
cter
ísti
cas
mor
foló
gica
s
Colonia Puntiforme Circular - - CircularBorde Liso Liso - - Liso
Superficie Lisa Lisa - - LisaElevación Pulvinada Umbonada - - UmbonadaC. Físicas Cérea
OpacaColor blanco
TransparenteBrillante
Color Amarillo
- - CéreaOpacaColor
Amarillo
Tabla 9: Análisis macroscópico de las colonias halladas en muestras ambientales y corporales.
Las pruebas de la batería bioquímica para la bacteria asignada indicaron lo expuesto en la Tabla 10.
Batería BioquímicaAgar o Caldo
Forma Color al Inicio Color después de agregar la bacteria
Resultado
Corriente Tendido Amarillo claro Blanco Pigmentación (+)Manitol Tendido Rojo
transparenteRosado Alcalinidad (-)
Citrato Tendido Verde musgo fuerte
Azul Utilización de citrato (-)Medio alcalino
Producción de amoniacoTSI Semitendido Naranjo
transparenteSuperficie negraProfundidad roja
No hay fermentación (K/K)Presencia de enzimas proteolíticas
Presencia de H2SLIA Semitendido Lila Morado intenso No desamina la Descarboxila la
lisina lisinaMIO - Café oscuro Morado No hay motilidad
Corriente Líquido Amarillo fuerte
Amarillo opaco Ausencia de indol (-)
Urea Líquido Lila claro Lila claro No posee ureasa (-)Sorbitol Líquido Rojo fuerte Rojo anaranjado +- Variable (V)
Glucosado Líquido Amarillo transparente
Amarillo transparente sin presencia de gas
Acidez (A)
Voges-Proskauer
Líquido Amarillo - marrón
Rosado oscuro
Rojo Presencia de Acetilmetilcabinol
(+)
pH 4,5 o más bajo(+)
Tabla 10: Resultados de las pruebas bioquímicas fisiotaxonómicas para la cepa asignada.
Posteriormente, el análisis API 10S para la bacteria (Fig. *) mostró lo indicado en las Tabla 11 y Tabla 12.
a.
b.
c.
Fig. *: a. API 10S con la bacteria sembrada, b. API 10S luego de 3 semanas, c. API 10S luego de 3 semanas más algunos reactivos.
Pruebas en contraBacteria ONPG URE ARA TDA LDC OX
Salmonella choleraesuis ssp
arizonae
- 0% - 0% - 0%
Proteus mirabilis
1% - 1% - 1% -