I.- INTRODUCCION Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado (es decir, se le añaden organismos) y a continuación incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. El crecimiento de los microorganismos es el cultivo. Un cultivo axénico o puro contiene un único tipo de microorganismos.

Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: así, algunas bacterias con enzimas hemolíticas (capaces de romper los glóbulos rojos) producen hemólisis y cambios apreciables macroscópicamente en las placas de agar-sangre. Los diferentes medios y técnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiología de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibióticos a los que son sensibles esas bacterias.

OBJETIVOS:

Determinación de la siembra y cultivo de las bacterias en el caldo. nutritivo y un medio solido.Preparación de la Tinción gran.

Preparación de siembras de bacterias y caldos para cada agar selectivo.

II.- REVISION BIBLIOGRAFICA

2.1.- Que es una Siembra de Bacterias en Caldos?

   Es sembrar o inocular, introducir artificialmente una porción de muestra (inoculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano. Luego del sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento. La siembra puede realizarse en medio líquido, sólido o semisólido, utilizando una punta, hisopo o pipeta estéril.

2.2.-Condiciones físicas necesarias para el desarrollo del microorganismo

Acidez o alcalinidad: El pH óptimo para la mayoría de las bacterias está entre 6'5 y 7'5, aunque algunas bacterias pueden desarrollarse a pH extremos, en la mayor parte de las especies los límites mínimos y máximos corresponden a cualquier punto entre pH 4 y pH 9.

Necesidad de gases: Los gases principales que afectan el desarrollo bacteriano son el oxígeno y el dióxido de carbono. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxígeno libre, y debido a ello se dividen en cuatro grupos:

Aerobias estrictas: Bacterias que se desarrollan en presencia de oxígeno libre.

Anaerobias estrictas: Bacterias que se desarrollan en ausencia de oxígeno libre.

Anaerobias facultativas: Bacterias que se desarrollan tanto en presencia como en ausencia de oxígeno libre.

Microaerófilas: Bacterias que crecen en presencia de pequeñísimas cantidades de oxígeno libre.

Suministro de luz: Los organismos fotosintéticos deberán ser expuestos a una fuente de iluminación, la cuál no debe plantear problemas de variación de temperatura, por lo que suelen usarse lámparas fluorescentes con un desprendimiento mínimo de calor.

Control de temperatura: El desarrollo de las bacterias depende de reacciones químicas y la velocidad con que se efectúan, las cuales están influidas por la temperatura, por lo cuál la temperatura puede, en parte, determinar el crecimiento de los microorganismos en estudio. Cada especie microbiana posee una temperatura óptima de crecimiento clasificándose según esto en:

Psicrófilas : capaces de desarrollarse a 0° C o menos. Su temperatura óptima es alrededor de los 15° C.

Mesófilas: crecen mejor entre 25 y 40° C.

Termófilas : crecen mejor entre 45 y 60° C.

Grado de humedad

Presión osmótica: Generalmente se trabaja en condiciones de isofonía (300 miliosmoles), aunque existen bacterias que pueden crecer en concentraciones hipotónicas e hipertónicas.

Esterilidad: Se suele realizar en el autoclave a una atmosfera a de presión (121 0C), durante 15 – 20 min. en caso de medios de cultivos que no se puedan esterilizara estas temperaturas, se reducirá a la filtración esterilizante o bien a la tindalización, una vez que el ciclo de esterilización a finalizado debe reducirse la presión suavemente dentro de del autoclave. El medio no debe permanecer dentro de éste una vez que se ha equilibrado la presión, ya que el calentamiento prolongado puede alterar alguno de sus componentes. Protección: El medio de cultivo debe estar protegido de la

contaminación microbiana ambiental.

2.3.- ¿Que es un Agar - Agar?

Es una sustancia mucilaginosa que se extrae de algunas algas rojas o Rodofíceas, frecuentes en el Océano Atlántico, Pacífico e Índico. Es una sustancia amorfa. Se emplea como medio de cultivo en bacteriología, como apresto de sedas, como sustituto de la gelatina, etc.

Químicamente, el Agar-Agar es una mezcla compleja de sales de polisacáridos, fundamentalmente, galactósidos. Las grandes moléculas que lo constituyen determinan sus cualidades sobresalientes, como coloides y espesantes, que lo han hecho hasta ahora insustituible. El Agar-Agar contiene numerosos cationes asociados, tales como sodio, potasio, calcio, magnesio, etc. A continuación, se caracterizarán los tipos de medios de cultivo según su estado y composición.

Estado:

Medios sólidos: Su proporción de Agar es siempre por encima del 15%.

Medios semisólidos: Son medios intermedios entre los medios líquidos y sólidos, su proporción de Agar suele ser suele ser inferior al 5%, pero siempre suele presentar cierta cantidad que le proporcione una consistencia semisólida.

Medios líquidos o caldos: No contiene Agar y su composición (además de agua) suele contener al menos una fuente de carbono, sales minerales, y a veces según las características de medio, factores de crecimiento, vitaminas, peptonas, aminoácidos, entre otros.

Composición:

Medios sintéticos o químicamente definidos: Llevan fuentes de carbono, nitrógeno, sales que suplan iones (P, K, Mg, Fe, Ca, etc.), otros elementos como estimuladores de crecimiento pero siempre a concentraciones conocidas.

Medios complejos o de composición indefinida: Estos medios llevan ingredientes como extracto de levadura, peptona, infusión de cerebro, extracto de carne, etc. que contienen nutrientes en abundancia pero sin saber con exactitud la composición cualitativa ni cuantitativa de estos nutrientes.

Medios de enriquecimiento: Son medios complejos, normalmente, con aditivos adicionales para favorecer el crecimiento de determinados microorganismos (particularmente heterótrofos exigentes). Tales como: adicción de sangre, suero o extractos de tejidos de animales y plantas.

Medios selectivos: Son aquellos que favorecen por su diseño el crecimiento específico de un microorganismo particular o grupo de microorganismos. Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta.

Medios diferenciales: Son aquellos destinados a facilitar la discriminación de microorganismos de una mezcla por sus propiedades diferenciales de crecimiento en dichos medios.

Medios de mantenimiento: Suelen ser distintos a los de crecimiento óptimo ya que el crecimiento rápido y prolífico suele ocasionar la muerte rápida de las células. Por ejemplo: al añadir glucosa y utilizarla los microorganismos producen ácidos, acidificándose el medio por lo que es preferible no utilizar glucosa en los medios de mantenimiento.

2.4.- Salmonella Shigella Agar.

El medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.

Fundamento:

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.

Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.

Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.

Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.

La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05).

Instrucciones:

Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar Calentar a ebullición durante 2 o 3 minutos No esterilizar en Autoclave. Enfriar a 45-50°C y distribuir unos 20 ml por placa Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa

Siembra: Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.Incubación: Durante 18 - 24 horas a 37 °C y se saca para que la bacteria no siga creciendoCaracterísticas del medio: Medio preparado; rojo naranja.Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

III. MATERIALES Y METODOS

3.1 LUGAR Y FECHA:

La presente práctica se realizó el jueves 11 de marzo del presente año, en el Laboratorio de Sanidad Animal de la facultad de zootecnia, ubicada en la Universidad Nacional Agraria de la Selva situado en el departamento de Huánuco, provincia de Leoncio Prado, distrito Rupa Rupa. Geográficamente se encuentra ubicado a 9º 17’ 5’’ de latitud Sur y 76º 1’ 17’’ de longitud Oeste con una altitud de 660 m.s.n.m. humedad relativa promedio de 84.09º temperatura media mensual de 24.4 ºC y una precipitación pluvial de 3441.

3.2 MATERIALES:

Placas petri. Asa de siembra. Tubos de ensayo con contenido de bacteria (staphylococcus) Mechero. Asa de vidrio. Guante. Mascarilla. Baño maría. Autoclave. Refrigeradora.

3.3.- Método: El método que se realizo fue práctico y teórico dado por el técnico encargado del laboratorio de Sanidad Animal de la Facultad de Zootecnia.

IV.- RESULTADOS

Salmonella – Shigella Agar

V.- CONCLUSION

Se determino la siembra y cultivo de las bacterias en el caldo nutritivo y un medio solido.Se preparo la Tinción gran.

Se realizo la preparación de siembras de bacterias y caldos para cada agar selectivo.

VI.- BIBLIOGRAFIA

HODGES RG, MACLEOD CM, BERNHARD WG. Epidemic pneumococcal pneumonia. III. Pneumococcal carrier studies. Am J Hyg 1946; 44: 207-230.G JAWETZ, ERNESTO y otros. Microbiologia médica. MICROBIOLOGIA Médica. Microorganismos. Bactérias. Micosis. Inmunologia.1987.COLLINS C.H, LYNE PATRICIA, Métodos Microbiológicos Edición Acribia, S.A, Zaragoza, España, quinta edición.Cappuccino G. James, Sherman Natalie, Microbiology A Laboratory. Manual de Microbiología y Parasitología, 2006