INFORMÁTICA DE SISTEMAS DIRECCION

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Sensibilidad antibacteriana de cultivos de Listeria sp. provenientes de carnes y verduras de mercados del distrito de Trujillo y La Esperanza TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO AUTOR: Br. CYNTHIA CHRIS CASTILLO OLÓRTEGUI ASESOR: Dr. PEDRO MERCADO MARTÍNEZ TRUJILLO PERÚ 2014 Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis. DIRECCION DE SISTEMAS DE INFORMÁTICA Y COMUNICACIÓN

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

Sensibilidad antibacteriana de cultivos de Listeria sp. provenientes de carnes y verduras de mercados del distrito

de Trujillo y La Esperanza

TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL

DE BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO

AUTOR: Br. CYNTHIA CHRIS CASTILLO OLÓRTEGUI

ASESOR: Dr. PEDRO MERCADO MARTÍNEZ

TRUJILLO – PERÚ

2014

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DIRECTIVOS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Dr. Orlando Velásquez Benites

RECTOR

Dra. Vilma Méndez Gil

VICERRECTORA ACADÉMICA

Dr. José Mostacero León

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

Dr. William Zelada Estraver

PROFESOR SECRETARIO DE LA FACULTAD DE

CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dra. Bertha Soriano Bernilla

DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO

PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

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MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR

Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en

concordancia con las normas de la Escuela Académica Profesional de Microbiología y

Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.

_________________________

Ms.C. Pedro Alvarado Salinas

PRESIDENTE

________________________

Dr. Pedro Mercado Martínez

SECRETARIO

____________________________

Ms.C. María Nelly Vásquez Valles

VOCAL

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APROBACIÓN

Los profesores que suscriben, Miembros del Jurado Dictaminador, declaran que la

presente tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo aprobada

por UNANIMIDAD.

_________________________

Ms.C. Pedro Alvarado Salinas

PRESIDENTE

___________________________

Dr. Pedro Mercado Martínez

SECRETARIO

___________________________

Ms. C. María Nelly Vásquez Valles

VOCAL

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CERTIFICACIÓN DEL ASESOR

El que suscribe, Pedro Mercado Martínez, asesor de la tesis: “Sensibilidad

antibacteriana de cultivos de Listeria sp. provenientes de carnes y verduras de

mercados del distrito de Trujillo y La Esperanza”.

CERTIFICA:

Que la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su

correspondiente proyecto y que el informe ha sido redactado acogiendo las

observaciones y sugerencias alcanzadas. Por ello autorizo a la Br. Cynthia Chris

Castillo Olórtegui , continuar con los procedimientos correspondientes según sus

fines.

________________________________

Dr. Pedro Mercado Martínez

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DEDICATORIA

A Dios, por dejarme vivir todas aquellas experiencias que hacen grande, por estar a mi

lado día a día guiando mis pasos, sacándome de apuros y por ser una verdadera fuente

de amor y sabiduría,

A mi papi, Luis por estar siempre dispuesto a apoyarme en todo lo que decida, porque

gracias a él sé que la responsabilidad se la debe vivir como un compromiso de

dedicación y esfuerzo.

A mi mami Alicia, cuyo vivir me ha mostrado que en el camino hacia la meta se

necesita de fortaleza para aceptar las derrotas y del sutil coraje para derribar miedos.

A mis hermanos July y Oliver, por enseñarme que tener un hermano es lo mejor del

mundo, por su gran cariño mostrado y por el incondicional abrazo en los momentos

difíciles que me motiva y recuerda que detrás de cada detalle existe el suficiente.

A mis abuelos Otilia, Santiago y Herminia, que a pesar de que hoy ya no están conmigo

siempre estuvieron ahí soñando con este momento y motivándome a ser mejor día a

día.

A Erik, esa personita que se cruzó en mi camino y sin pensarlo se volvió parte

importante de mi vida por su cariño y amistad y por enseñarme que hasta lo menos

importate también es importante.

A mis grandes amigos, familiares y a todas aquellas personas que ´participaron

directa o indirectamente en mi desarrollo tanto personal como profesional, gracias por

todas aquellas experiencias brindadas día a día.

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AGRADECIMIENTOS

Al Laboratorio de Fisiología y Genética de la Universidad Nacional de Trujillo, por el

ambiente, todas las facilidades que permitieron la realización de la presente

investigación.

A mi asesor, el Dr. Pedro Mercado Martínez, por haberme brindado su valiosa

orientación con mucho profesionalismo, e invalorable apoyo; por su amistad y consejos

brindados durante la realización de esta tesis.

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PRESENTACIÓN

Señores Docentes, miembros del jurado.

Dando cumplimiento a las disposiciones vigentes emanadas del Reglamento de Grados

y Títulos de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo,

sometemos a vuestra consideración y elevado criterio, el presente informe de Tesis:

“Sensibilidad antibacteriana de cultivos de Listeria sp. provenientes de carnes y

verduras de mercados del distrito de Trujillo y La Esperanza”

Esperando que el jurado se sirva calificar este trabajo según su criterio establecido, a

pesar de la existencia de alguna deficiencia encontrada durante el desarrollo de la

presente investigación.

Trujillo, Abril 2014

_______________________________

Br. Cynthia Chris Castillo Olórtegui

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CONTENIDO

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ii

MIEMBROS DEL JURADO iii

APROBACIÓN iv

DEL ASESOR v

DEDICATORIA vi

AGRADECIMIENTO vii

PRESENTACIÓN viii

CONTENIDO ix

RESÚMEN xi

ABSTRACT xii

INTRODUCCIÓN 1

OBJETIVOS 11

MATERIAL Y MÉTODO 12

RESULTADOS 15

DISCUSIÓN 20

CONCLUSIONES 25

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 26

ANEXOS 33

ANEXO 01. Rango del nivel de sensibilidad de Listeria sp. frente a

Antibacterianos 34

ANEXO 02. Diámetros de halos obtenidos en Listeria monocytogenes

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proveniente de carnes 35

ANEXO 03. Diámetros de halos obtenidos en Listeria sp. proveniente de

Carnes 38

ANEXO 04. Diámetros de halos obtenidos de Listeria monocytogenes

proveniente de verduras 41

ANEXO 05. Frecuencia de la sensibilidad de los cultivos de Listeria sp.

Carnes y Listeria sp. Verduras aislados de mercados provenientes de la

ciudad de Trujillo frente a los antibacterianos seleccionados 48

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RESUMEN

La Listeriosis está causando gran alarma a nivel mundial a productores de alimentos,

consumidores y autoridades sanitarias. Hasta hace unos años, se consideraba que los

aislados de L. monocytogenes así como las de otras Listeria sp, mostraban una

susceptibilidad a un amplio rango de antibacterianos activos contra bacterias Gram

positivas.

El objetivo de la presente investigación fue determinar la sensibilidad

antibacteriana de los cultivos de Listeria sp. provenientes de carnes y verduras frente a

diferentes antibacterianos, para lo cual se realizó antibiogramas de los cultivos utilizando

el método de Kirby Bauer. A estos cultivos se les reactivó en agar tripticasa de soya,

luego se realizó una suspensión bacteriana de cada cultivo con un patrón de turbidez de

McFarland 0,5; el equivalente a 1.5x108. La suspensión se estrió en placas con Agar

MuellerHinton, se colocaron discos de sensibilidad, se incubó y a las 48 h se leyeron los

resultados. Los antibacterianos usados fueron: Penicilina (10μg); Cefotaxima (30μg);

cefuroxima (30μg); imipenem (10μg); nitrofurantoina (300μg); Rifamicina (5μg),

Tetraciclina (30μg); Cloranfenicol (30μg); clindamicina (2μg); oxaciclina (1μg). En los

cultivos proveniente de carnes de Listeria sp se observa resistencia para todos los

antibacterianos pero en baja frecuencia, L. monocytoges presenta resistencia en algunos

antibacterianos como oxaciclina en 70% y clindamycina 60%, En los cultivos

proveniente de verduras se observa mayor resistencia como L. monocytogenes con

oxaciclina y rifampicina en un 100%. En conclusión todas los cultivos de Listeria sp.

presentan porcentajes de resistencia frente a los antibióticos utilizados, a diferencia L.

monocytogenes, quien no presenta resistencia frente a imipenen, cloranfenicol y tetraciclina.

Palabras clave: Antibacteriano, resistente a antibióticos, sensibilidad

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ABSTRACT

Listeriosis is causing great alarm global food producers , consumers and health

authorities. Until recently , it was considered that isolates of L. monocytogenes and the

other Listeria sp. , showed a susceptibility to a wide range of antibacterial activity

against Gram positive bacteria. The target of this investigation was to determine the

antibacterial sensitivity of crops Listeria sp. from meat and vegetables when various

antibacterial agents for which susceptibility of crops is performed using the Kirby Bauer

method . To these cultures were reactivated in trypticase soy agar , then a bacterial

suspension of each culture was performed using a standard 0.5 McFarland turbidity ;

equivalent to 1.5x108 . The suspension was streaked on agar plates MuellerHinton ,

sensitivity discs were placed , were incubated 48 h and the results were read .

Antibacterial agents used were : Penicillin (10μg); Cefotaxime (30μg); cefuroxime

(30μg) ; imipenem (10μg) ; nitrofurantoin (300μg); Rifamycin (5μg) , Tetracycline

(30μg); Chloramphenicol (30μg) ; Clindamycin (2μg); oxaciclina (1ug) . In cultures of

Listeria sp. from meat sp for all antibacterial resistance is observed but at low

frequencies , L. monocytoges presents some antibacterial resistance as oxaciclina

clindamycina 70% and 60 % , in vegetable crops from higher resistance is noted as L.

monocytogenes with oxaciclina and rifampicin 100% . In conclusion all crops Listeria

sp. have percentages of resistance to the antibiotics used , unlike L. monocytogenes ,

who no resistance to imipenem , chloramphenicol and tetracycline.

Keywords: Antibacterial, resistant to antibiotics, sensitivity

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INTRODUCCIÓN

La Listeriosis es una enfermedad transmitida por alimentos (ETA), aunque es

considerada una zoonosis que puede ser transmitida por contacto directo con

animales infectados (exposición ocupacional). La mayoría de las infecciones

humanas se adquieren por ingestión de alimentos contaminados y de madre a

hijo intrauterino o durante el parto.1 A pesar de presentarse con una baja

frecuencia, en la actualidad es una de las ETAs más letales conocidas, causando

gran alarma a nivel mundial a productores de alimentos, consumidores y

autoridades sanitarias.2

Las bacterias del género Listeria son bacilos anaerobios facultativos, Gram

positivos, se caracterizan por ser microorganismos ubicuos que se encuentran

ampliamente distribuidos: suelos, aguas residuales, comida animal y vegetal,

productos lácteos sin pasteurizar, desechos de mataderos, así como en el tracto

digestivo de humanos y animales asintomáticos.3

La contaminación humana con cepas patógenas de Listeria sp. puede ocurrir a

través de alimentos como leche fluida cruda y pasteurizada, quesos (particular

las variedades blandas), helado, verduras crudas, chorizos fermentados de carne

cruda, carne cruda y cocida de ave de corral, carnes crudas de todo tipo, y

pescado crudo y ahumado.4

Estos microorganismos se pueden encontrar en un

inicio en ínfimas cantidades pero debido al tiempo, al almacenamiento así sea en

frigorífico, y a su posibilidad de crecer en ambientes con altas concentraciones

de CO2. Van incrementándose hasta sobrepasar los 100ufc/g que es la dosis

mínima permisible en algunos países.5

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El género Listeria comprende seis especies: L. monocytogenes, L. ivanovii, L.

seeligeri, L. innocua, L. welshimeri y L. grayi. L. monocytogenes es responsable

en gran parte de la listeriosis que afecta al hombre; se considera un patógeno

oportunista con tasas de mortalidad del 20-30%, todas las cepas de L.

monocytogenes se consideran patógenas, aunque su virulencia es variable.6

Actualmente se han publicado algunos casos raros de infección a humanos

debidos a L. ivanovii y L. seeligeri. En animales, L. monocytogenes también es

responsable de la mayoría de las infecciones, pero también se han registrado

infecciones por L. ivanovii y L. innocua. L. ivanovii ha sido relacionada con

abortos y se la ha considerado como causa de la meningoencefalitis en ovejas.7

Listeria sp es un bacilo Gram positivo, que crece a temperaturas de 1°C a 45 °C,

con temperatura óptima de 30 a 37 °C, móvil a 25°C e inmóvil 37°C; tiene la

habilidad de soportar temperaturas de refrigeración gracias a la acumulación de

solutos crioprotectores y cambios en la composición lipídica de la membrana.8,9

Es capaz de desarrollarse a pH de 4,4 a 9,6 debido al transporte activo de

protones a través de la membrana.10

Asimismo, crece en concentraciones altas de

cloruro de sodio (15 %) y sobrevive en un 16% a 20% de NaCl.2 Es un

microorganismo ambiental que tiene la facultad de adherirse a las superficies,

formando biopelículas para protegerse de la acción de los tratamientos

antibacterianos.9

La amplia distribución de Listeria sp. se debe a la capacidad de sobrevivir

durante periodos de tiempo prolongados en diferentes medios. Por consiguiente,

los alimentos se pueden contaminar en cualquier eslabón de la cadena productiva

y en el almacenamiento en frío.11

El patógeno a pesar de no formar endosporas

es capaz de sobrevivir por largos periodos de tiempo en el medio ambiente, en

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las plantas procesadoras de alimentos y al interior de los refrigeradores

domésticos.2

Aunque L. monocytogenes se ha considerado durante muchos años un patógeno

de animales, su papel significativo como patógeno humano transmitido por

alimentos sólo se hace evidente a partir de 1980, cuando comienzan a aparecer

en la literatura informes documentados de brotes de listeriosis, detectados por

consumo de alimentos cotaminados.9

Una de las principales vías de transmisión de Listeria sp.en las industrias de las

carnes como la de otros alimentos, es la contaminación cruzada debido a: los

manipuladores asintomáticos, la falta de higiene en las superficies de las

instalaciones, tablas de corte, equipos, utensilios, el cruce entre productos

frescos y terminados, la posterior conservación en refrigeración. Debido a que se

trata de una bacteria psicrótrofa, la refrigeración va a reducir la microbiota

competitiva, creando así un ambiente idóneo para su multiplicación, a lo que se

le agrega que este problema se ve agravado dado que Listeria sp. forma

biopelículas o “biofilm” en superficies donde han quedado residuos orgánicos lo

cual dificulta la acción de los higienizantes.12,13

Las carnes crudas en el tejido muscular contiene alrededor de un 75% de agua,

lo que le hace una medio adecuado para el crecimiento de L. monocytogenes, así

como sus propiedades redox ya que la reducción del contenido de oxígeno y el

potencial redox en el musculo “post mortem” conduce a la producción y

acumulación anaeróbica del ácido láctico permitiendo el crecimiento de

microorganismos anaerobios o aerobios facultativos dentro del tejido muscular.

L. monocytogenes es capaz de crecer en carnes, dependiendo de pH, el tipo de

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tejido (macro o graso) el tipo y cantidad de microflora, y la temperatura de

almacenamiento. Normalmente el pH de la carne cruda esta entre los 5.4 a 6.1

óptimo para el crecimiento de la bacteria.14,15

Los alimentos considerados de alto riesgo para contraer listeriosis son los

alimentos listos para el consumo, en los que están considerados aquellos

alimentos que no van a tener ningún proceso de cocción antes del consumo,

estos alimentos varían de un país a otro debido a los hábitos alimentarios, la

disponibilidad de la cadena en frio y la temperatura máxima en el punto de

venta. Estos alimentos listos para consumo están divididos en dos categorías: La

primera categoría son los alimentos listos para el consumo que tienen un alto

riesgo de asociarse con la listeriosis, ya que facilitan el crecimiento de esta

bacteria, entre estos alimentos están: los derivados lácteos con altos contenidos

de grasa como los quesos, mantequillas, etc.; productos de mar crudos;

productos cárnicos y aves en los que el FSIS (Food safety and Inspection

Service); las verduras y frutas que están expuestos a estos microorganismos

debido a que L. monocytogenes sobrevive en suelos y en aguas residuales, estos

alimentos son los que en su mayoría se consumen en ensaladas sin pasar por

algún tratamiento y en muchas ocasiones sin contar con un lavado eficiente.9

Se conoce que hasta el 10-20% de productos vegetales listos para su consumo

pueden estar contaminados con L. monocytogenes incluyendo semillas

germinadas (brotes), lechugas, rábanos, tomates, cebollas, pepinos, coliflores y

setas cultivadas y que algunos brotes de listeriosis se han debido al consumo de

este tipo de productos. La contaminación de estos alimentos acaece a partir del

suelo, el agua, el estiércol animal, la vegetación en descomposición y los

efluentes de las aguas residuales de plantas de tratamiento y potabilización del

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agua, de especial preocupación son los productos ecológicos abonados con

estiércol posiblemente contaminado con L. monocytogenes de animales

enfermos.16

En la segunda categoría, encontramos los alimentos listos para el consumo que

tienen poco riesgo de asociarse con listeriosis, debido a que no facilitan el

crecimiento de L. monocytogenes, entre ellos se encuentran los alimentos

que tienen factores intrínsecos, como pH de 4,4 o menos, actividad de agua de

0,92 o menor, humedad relativa menor de 39 %.9

Las formas clínicas de la enfermedad varían de acuerdo al grupo infectado y las

manifestaciones más comunes son meningitis, meningoencefalitis, septicemia,

aborto, infección prenatal y gastroenteritis. Se cree que el 99 % de los casos de

listeriosis son de origen alimentario, el resto obedece a infección de recién

nacidos a través de la madre infectada o por contagio en las salas de neonatos.

En la transmisión de listeriosis gran variedad de alimentos han aparecido como

vehículos; entre ellos la leche, el queso, la mantequilla, el paté, la carne de res, la

carne de cerdo, las aves, los vegetales, los productos de mar y particularmente

los productos listos para consumo.17

El diagnóstico oportuno y tratamiento temprano con antibacterianos como

ampicilina y aminoglucósidos o cotrimoxazol son efectivos. Sin embargo, la

sintomatología generalmente no permite un diagnóstico temprano, ya que los

primeros signos de un brote son generalmente el aborto y/o la muerte del

individuo. La confirmación de una infección por L. monocytogenes es el

aislamiento de la bacteria del líquido cefalorraquídeo o de la sangre del

paciente.2 L. monocytogenes posee predilección por personas con inmunidad

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celular disminuida, las poblaciones de riesgo son mujeres en estados de

gravidez, ancianos, neonatos y personas inmunocomprometidas.11

Hasta hace unos años, se consideraba que los aislados de L. monocytogenes así

como las de otras Listeria sp, mostraban una susceptibilidad a un amplio rango

de antibacterianos activos contra bacterias Gram positivas.3

El espectro de acción del grupo de los B- Lactámicos como las penicilinas

(Penicilina Amoxicilina y Ampicilina) está dirigido a bacterias no productoras

de ß-lactamasas: gram positivos, algunos fastidiosos y gram negativos. Aunque

se han descrito fracasos clínicos contra la listeriosis en tratamientos con

penicilina o ampicilina, no se ha encontrado ninguna cepa resistente a estos

antibiótos.18

Los antibióticos beta-lactámicos interfieren con la síntesis de la pared celular

bacteriana, específicamente, estos medicamentos se ligan de manera covalente e

inhiben las enzimas traspeptidasas que participan en el último paso de la

formación del peptidoglicano rígido; este componente es especialmente

importante en la pared celular de las bacterias gram positivas. El anillo beta-

lactámico de las Cefalosporinas está unido a un anillo dihidrotiazida cuyo efecto

consiste en conferirle mayor resistencia a la acción de las beta-lactamasas que

las penicilinas originales. Las cefalosporinas en general exhiben una mayor

resistencia a la acción de las beta- lactamasas, una mayor afinidad con los

receptores (PBP) de la pared celular y una mayor capacidad para atravesar y

penetrar las paredes celulares bacterianas. Se las agrupa, hasta la actualidad, en

cuatro generaciones de cefalosporina.(19)

En la cefalosporina de segunda

generación tenemos a la cefuroxima que posee una actividad bactericida contra

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grampositivas y gramnegativas, pudiéndose administrar por todas las vías.21

La

cefalosporina de tercera generación como la cefotaxime posee actividad

bactericida contra Gram positivas pero muy potentes contra gramnegativos de

administración parental en la mayoría de los casos.19

El imipenem es un antibiótico beta-lactámico derivado de la tienamicina y es el

primer miembro de la familia de los antibióticos carbapenem. El imipenem

posee varias características que lo convierten en un antibiótico muy efectivo,

incluyendo: a) la penetración más eficiente a través de la pared celular

bacteriana, b) la resistencia a las enzimas bacterianas, y c) la afinidad por todas

las PBPs (Proteínas de unión a las Penicilinas) bacterianas. El imipenem tiene un

espectro más amplio de actividad que la mayor parte de otros antibióticos beta-

lactámicos, que incluye bacterias Gram-positivas y Gram-negativas aerobias y

anaerobias.20

La clindamicina es un antibiótico semisintético obtenido a partir de la

lincomicina. Es activa in vivo e in vitro, dicha acción es bacteriostática y sobre

todo bactericida, existiendo poca diferencia en la concentración que provoca uno

u otro de estos efectos. Su espectro antimicrobiano es muy reducido, se asemeja

al de la Penicilina G, abarcando sobre todo algunas bacterias grampositivas. La

clindamicina actúa sobre las bacterias inhibiendo la síntesis proteica, uniéndose

a la subunidad 50S de los ribosomas, actuando en dos formas, a)una semejante al

cloranfenicol, impidiendo la unión del complejo aminoácido-ácido ribonucleico

de transferencia al ribosoma; b)inhibiendo el mecanismo de traslocación, al igual

que los macrólidos, paso normalmente necesario para la formación de la cadena

polipeptídica al dejar libre cada vez el lugar del ribosoma donde ha de unirse el

nuevo aminoácido.21

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Las Tetraciclinas (Doxicilina) inhiben la síntesis de proteínas a nivel ribosomal,

de ciertas bacterias gram positivas y negativas. Las tetraciclinas son antibióticos

de amplio espectro antimicrobiano que bloquean la síntesis de proteínas,

impidiendo la unión del ARN de transferencia, que porta el aminoácido, con las

subunidades 30S y 50S que están montadas sobre la cadena de ARN mensajero y

que están produciendo la cadena polipeptídica.. Se ha descrito resistencias a

macrólidos y a tetraciclinas en algunos aislamientos de Listeria sp.; suelen estar

codificadas por algunos plásmidos, aunque también hay casos de resistencia a

tetraciclinas codificada cromosómicamente.3 se puede encontrar alguna cepa de

Listeria sp. resistente.18

El cloranfenicol es un compuesto de amplio espectro, bacteriostático que inhibe

el crecimiento bacteriano al bloquear la transferencia de ácido ribonucleico

soluble a los ribosomas sin embargo se puede encontrar alguna cepa de Listeria

sp. resistente.18

El cloranfenicol, inhibe la síntesis proteica, uniéndose a la

fracción ribosomal 50 S (cerca del sitio de acción de la eritromicina y

clindamicina, a las cuales inhibe competitivamente). El cloranfenicol penetra

fácilmente a las bacterias, por difusión facilitada, impidiendo que el extremo que

contiene aminoácidos del RNAt, se ligue a los sitios de unión.18

La rifampicina posee buena actividad “in vitro” pero selecciona cepas resistentes

durante el tratamiento contra listeriosis con mucha facilidad. (3)

Derivado

semisintético de la rifamicina, antibiótico macrocíclico complejo que inhibe la

síntesis del ácido ribonucleico en una amplia gama de microbios patógenos.

Inhibe la ARN-polimerasa dependiente de ADN de las cepas bacterianas

sensibles, sin afectar los sistemas enzimáticos del huésped.21

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La oxacilina sódica, es un antibiótico betalactámico, de espectro reducido del

grupo de las penicilinas, por lo que se indica en el tratamiento de infecciones

causadas por bacterias Gram positivas, al igual que otros antibióticos

betalactámicos la oxacilina actúa inhibiendo la síntesis de la pared celular

bacteriana. Evita la formación de enlaces cruzados entre las cadenas poliméricas

de peptidoglicano lineal las cuales son un componente importante de la pared

celular de las bacterias gram positivo. Actúa mediante la unión e inhibición

competitiva de la enzima transpeptidasa usada por la bacteria para generar los

enlaces cruzados (D-alanil-alanina) usados en la síntesis del peptidoglicano22

A pesar de que la data refiere una incidencia de resistencia antimicrobiana

relativamente baja en Listeria sp. es oportuno señalar que en los últimos diez

años los cambios en la susceptibilidad casi uniforme del género, representa un

tema de importancia y del cual aún falta mucho por discutir.3

El monitoreo

continuo del curso y la naturaleza de la adquisición y diseminación de resistencia

a antibacterianos por Listeria sp. se ha convertido casi en una exigencia para

todos los aislados procedentes de ambientes, infecciones clínicas y

primordialmente los provenientes de alimentos; ya que constituyen los vehículos

de transmisión primaria de la listeriosis.3

Hoy en día, el uso indiscriminado de antibióticos y la presión selectiva

ambiental realizada por antisépticos, desinfectantes y germicidas ha

generado una respuesta de supervivencia en los microorganismos, que los

capacita para evadir con eficiencia la acción bactericida de algunos agentes,

este uso generalizado de los antibióticos en la industria agrícola, acuícola,

veterinaria y en medicina, ha permitido la supervivencia de las cepas

resistentes; generando desequilibrio ecológico.16,23

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Las industrias en la producción de leche, carne y huevos se convierten en un

consumidor potencial de antibióticos con el objetivo de disminuir los periodos

de crianza y engorde. Para contener la alta incidencia de patógenos de alimentos

se hace necesario aplicar antimicrobianos en el tratamiento terapéutico de

animales infectados que cursan con diarrea, abscesos, bacteremias, mastitis entre

otros; en este procedimiento se administran antimicrobianos de amplio espectro

como cefalosporinas, tetraciclinas, aminoglucósidos, macrólidos,

trimetropim/sulfametoxasol, polimixina B y quinolonas. Estos antibióticos,

que también son empleados a nivel hospitalario, se emplean en los rebaños

como metafilácticos y profilácticos.24

Como es el caso de las granjas lecheras,

los terneros son alimentados de 6 a 8 semanas con leche natural o leche de

reemplazo y se les administra tetraciclinas, penicilinas o sulfonamidas para

prevenir la diarrea y la neumonía.23

En el Perú, en especial en la ciudad de Trujillo la presencia de Listeria sp. en

alimentos como verduras y carnes indican su distribución en la cadena

alimentaria y su contacto directo e indirecto con los antibióticos que se utilizan

comúnmente según la tesis realizadas por Calderon D. y Mercado P. en el 2014

donde se aislaron Listeria sp. a partir de superficies donde se expenden verduras,

y la tesis realizada por Parimango K, y Mercado P. en el 2013 donde se aisló

Listeria sp. a partir de superficies donde se expenden carnes, de los mercados del

distrito de Trujillo y La Esperanza.25,26

Por lo antes expuesto, es importante

realizar el presente estudio en cultivos de Listeria sp. para determinar su

sensibilidad frente a determinados antibacterianos y así conocer, en base a

análisis estadísticos, cual es el antibacteriano que tiene un mejor efecto sobre

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esta bacteria y en qué medida se diferencia esta sensibilidad de acuerdo a la

procedencia de los cultivos, sea de carnes así como de verduras.

OBJETIVOS

Objetivo General:

Determinar la sensibilidad antibacteriana de los cultivos de Listeria

sp. provenientes de carnes y verduras frente a diferentes

antibacterianos.

Objetivos Específicos:

Confrontar la resistencia de Listeria sp. Vs. Listeria monocytogenes

de los cultivos provenientes de carnes frente a 10 antibacterianos más

utilizados.

Confrontar la resistencia de Listeria sp. Vs. Listeria monocytogenes

de los cultivos provenientes de verduras frente a 10 antibacterianos

más utilizados.

Determinar mediante datos estadísticos si existe diferencia signicativa

entre la sensibilidad obtenida de cultivos de Listeria monocytogenes

provenientes de carnes respecto a cultivos de Listeria monocytogenes

provenientes de verduras.

Obtener datos estadísticos sobre la sensibilidad de la Listeria sp. y los

antibacterianos que serían los más recomendables para un posible

tratamiento de listeriosis.

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MATERIALES Y MÉTODOS

1. MATERIAL

1.1. Muestra

40 cultivos de Listeria sp. entre los cuales están 18 cultivos de Listeria

monocytogenes, los que fueron suministrados a partir de la tesis realizadas

por en el 2014 donde se aislaron Listeria sp. a partir de superficies donde se

expenden verduras, y la tesis realizada en el 2013 donde se aisló Listeria sp.

a partir de superficies donde se expenden carnes, de los mercados del

distrito de Trujillo y La Esperanza.25,26

2. MÉTODO

2.1. Reactivación de los cultivos de Listeria sp.

Los cultivos fueron recuperados en placas con agar tripticasa de soya con

0,6 % de extracto de levadura, a 30 ºC por 48 horas

Posteriormente fueron aislados en placas con agar Oxford a 30ºC por 24

horas y luego traspasadas a frascos conteniendo agar nutritivo a 30ºC por

24-48 horas.

2.2. Obtención de la suspensión de Listeria sp. y L. monocytogenes.

Luego de reactivar los cultivos estas fueron transferidas a solución

fisiológica 0,85 %, para la obtención de una suspensión bacteriana con un

patrón de turbidez McFarland 0,5; el equivalente a 1.5x108 UFC/ml.

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2.3. Siembra en placa de la suspensión: Método de Kirby Bauer.

Se prepararon placas Petri con agar Müller Hinton (12 – 15 ml por placa)

a 45º C aproximadamente, estas se dejaron secar por unos minutos en

estufa para eliminar el exceso de humedad.

En un lapso de tiempo óptimo de 15 minutos después de ajustar la

turbidez, se procedió a sembrar la suspensión con ayuda de un hisopo

estéril sobre la superficie de las placas Petri en todas las direcciones.

Sobre la superficie de la placa ya sembrada con la suspensión bacteriana

(inóculo) se colocó con ayuda de una pinza estéril los discos de

antibióticos y se incubó a 37ºC por 24 horas, tras lo cual se procedió a la

lectura e interpretación.

Se aplicó los lineamientos del método del método de Kirby Bauer para

determinar la sensibilidad de Listeria sp. frente a los antibacterianos

Los antibacterianos probados fueron: B-Lactámicos: Penicilinas (10 μg

Penicilina); Cefalosporina: Cefotaxima (30 μg) y cefuroxima (30μg);

Carbapenems (10 μg imipenem); nitrofurantoina (300 μg); Rifamicina (5

μg), Tetraciclinas (30 μg Tetraciclina); Fenicoles (30 μg Cloranfenicol),

clindamicina (2 μg), oxaciclina (1 μg).

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2.4. Medición del halo

Pasado el tiempo de incubación se midió el diámetro (en milímetros) de

la zona alrededor de cada disco, esto fue interpretado de acuerdo a los

lineamientos del National Comitte for Clinical Laboratory Standars

(NCCLS), y se clasificó la sensibilidad de cada cultivo frente a los

antibacterianos ubicándolos como susceptible, intermedio o resistente.

2.5. Análisis de resultados

Los resultados del grado de sensibilidad y resistencia tanto de Listeria sp.

como de específicamente Listeria monocytogenes fueron plasmados en

tablas y cuadros para su mejor visualización y comprensión. Se aplicó

análisis estadísticos (ANOVA) para determinar si existe diferencia

significativa entre los resultados obtenidos.

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RESULTADOS

En la Figura 1 en los cultivos proveniente de carnes de Listeria sp se observa resistencia

para todos los antibacterianos pero en baja frecuencia a diferencia de L. monocytoges

que solo presenta resistencia en algunos antibacterianos especialmente frente a

oxaciclina en un 70% y clindamycina en un 60%.

En la Figura 2 en los cultivos proveniente de verduras se observa que Listeria sp

presenta resistencia frente a todos los antibacterianos a diferencia de L. monocytoges

que presenta resistencia solo frente a algunos antibacterianos especialmente frente a

oxaciclina y rifampicina con un 100% de resistencia.

En la Tabla 1 se observa que el estadístico de prueba (p-valor), entre la sensibilidad de

L. monocytogenes proveniente de carnes frente a L. monocytogenes proveniente de

verduras es menor a 0,05

En la FIGURA 3 Explica que los antibacterianos que están sobre la media aritmética de

la frecuencia de sensibilidad destacan el imipenem penicilina, cloranfenicol y

tetraciclina la en Listeria sp. provenientes de carnes como en las provenientes de

verduras.

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Fig. 1. Frecuencia (%) de sensibilidade antibacteriana enfocada como resistencia, de lós

cultivos de Listeria sp. y L. monocytogenes provenientes de carnes frente a diferentes

antibacterianos.

.

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Fig. 2 Frecuencia (%) de sensibilidade antibacteriana enfocada como resistencia, de lós

cultivos de Listeria sp. y L. monocytogenes provenientes de verduras frente a diferentes

antibacterianos.

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Tabla 1. Análisis de varianza según ANOVA para determinar si existe

diferencia significativa entre la sensibilidad de L. monocytogenes proveniente de

carnes Frente a L. monocytogenes proveniente de verduras.

ANOVA

Estadistico de prueba

FV SC GL CM F P-Valor

Tratamientos 277.588921 1 277.588921 5.54756247 0.019484489

Error 19915.1233 398 50.0379982

TOTAL 20192.7122 399

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Fig. 3. Frecuencia de sensibilidad en % de Listeria sp. provenientes de carnes, &

Listeria sp. provenientes de verduras, evidenciando si el antibiótico que causa la

sensibilidad está o no por encima de la media aritmética.

Donde: IMP=Imipenen; P= Penicilina; NIT=nitrofurantoina; CTX=cefotaxime, CXM=Cefuroxima,

DCI=Clindamycina; OX=oxaciclina; C=Cloranfenicol, RA=Rifampicina; TE=Tetraciclina.

---- Representa la Media Aritmetica

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DISCUSIÓN

Según lo observado en la Figura 1 y 2 en el caso de Listeria sp., nuestros datos

van de acuerdo a Rahimi y col., en el 2012 que hicieron estudios sobre la

resistencia adquirida por Listeria sp. presentes en productos tradicionales en Irán

quienes encontraron un 42% de resistencia de Listeria sp. frente a la penicilina,

un 14,3 % frente a cloranfenicol y un 33,3 % frente a tetraciclina, los resultados

de la resistencia a los antimicrobianos encontrados en este estudio estaban

correlacionados a los antibióticos que se utilizan para tratar la infección en

animales destinados al consumo en Irán. En nuestro estudio encontramos

resistencia presente en Listeria sp. frente a la penicilina en un 10%-20%,

cloranfenicol en 20%-58%, y tetraciclina 20%-58% los resultados ponen de

manifiesto la aparición de bacterias resistentes a estos fármacos.

En el caso de Listeria monocytogenes encontramos en la figura 2 un 38% de

resistencia frente a penicilina concordando con Rahimi y col. que encontraron

resistencia frente a penicilina en un 60% y con Ieren y col. en el 2013 en el

estudio realizado sobre la resistencia de Listeria monocytogenes en ensaladas en

Nigeria que encontraron un alto número de bacterias resistentes a la penicilina

así como a la oxaciclina en un 85,5%, por lo que, el estudio muestra que L.

monocytogenes se encuentran en verduras que se venden en Zaria , Nigeria , por

lo tanto , se debe tomar precaución adecuada en la preparación de estos

vegetales , de consumo tanto para humanos y animales, concordando con nuestro

estudio donde se encontró un 100% de resistencia de L. monocytogenes frente a

la oxaciclina y un 58% de resistencia frente a esta en Listeria sp.

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En la investigación realizada por Gunes A. y col. en el 2012 donde estudio la

sensibilidad de Listeria monocytogenes aislados de variedad de alimentos en

diferentes antibióticos, encontró un 0% de resistencia frente a la tetraciclina,

cloranfenicol, rifampicina y penicila, concordando con la investigación realizada

donde en la figura 1 se puede observar que no se presenta resistencia de L.

monocytogenes frente a penicilina, cloranfenicol y tetraciclina, y en la figura 2

frente a cloranfenicol y tetraciclina, difiriendo con nosotros en el caso de la

rifampicina donde si encontramos resistencia en ambos casos(figura 1 y 2),

donde concordamos con Santos M. y col. en el 2008, que realizaron un estudio

sobre la resistencia de L. monocytogenes en carnes de bovino encontrando

resistencia frente a rifampicina en un 50% y en Listeria sp. en un 85%.

De acuerdo a lo mencionado por Palacian P. y col., en el 2011, el imipenem en el

tratamiento de Listeriosis resulta ser favorable, como lo observamos en la figura

3, La Listeria sp. posee un alto porcentaje de sensibilidad frente al imipenem a

diferencia de los demas antibióticos utilizados y según se observa en la figura 1

y 2 L. monocytogenes posee un 0% de resistencia frente a este antibiótico, este

antibiótico es efectivo contra los Gram positivos según lo indicado por

Peñaherrera E. en el 2013.

En el caso de la clindamycina Santos M. y col. en el 2008 encontraron L.

monocytogenes resistentes en un 100% y Listeria sp. en un 85%, como se

observan en la figura 1 la L. monocytogenes tiene mayor % de resistencia a este

antibiótico que Listeria sp. En el caso de la nitrofurantoina existen bacterias

resistentes a esta en porcentajes altos en el caso de la figura 1 y en % bajos en el

caso de la figura 2, por lo que diferimos con Balsalobre B. y Hernadez J. en el

2004 que indica que no se presentaron cepas resistentes a la nitrofurantoina, a

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diferencia de Marcenac L. Fernandez J. y Paolaso W. quienes encontraron cepas

resistentes a este antibiotico.

L. monocytogenes presenta resistencia natural a las cefalosporinas de tercera

generación como lo menciona Ruiz Z. y col. en el 2008, sobre resistencia

antimicrobioana y a desinfectantes de Listeria sp. donde se dejan entrever la

pérdida de opciones terapéuticas. En este sentido la CLSI (Clinical and

Laboratory Standard Institute, USA) orienta la terapia claramente al uso de

Penicilina y Amoxicilina y restringe las cefalosporinas debido a la resistencia

intrínseca del microorganismo, en nuestra tesis en el estudio de las

cefalosporinas de segunda (cefuroxima) y tercera generación (cefotaxima)

ensayadas, tenemos un mayor prcentaje de resistencia en la cefotaxime que en la

cefuroxima por lo que se ha mostrado susceptibilidad moderada. Debido a la

pobre actividad o la resistencia de las cefalosporinas de segunda y tercera

generación contra L. monocytogenes, Cormican y Jones en 1995, confirmaron

que las cefalosporinas no deben ser utilizadas clínicamente para el tratamiento

de la listeriosis como se puede observar claramente en la figura 3.

Para la obtención de resultados estadísticos, se realizó el estudio de análisis de

varianza (ANOVA) según se muestra en la tabla 1 que indica que existe

diferencia significativa entre los cultivos de Listeria monocytogenes

provenientes de carnes sobre las provenientes de verduras ya que el estadístico

de prueba (p-valor) es menor que el nivel de significancia (α), por lo que se

rechaza Ho (no hay diferencia significativa) y se acepta el H1 (hay diferencia

significativa) obteniendo que el tamaño de halos varía de acuerdo a la fuente de

obtención del cultivo.36

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Como se puede observar en la figura 1,2 y 3, el porcentaje de sensibilidad varía

de acuerdo a la fuente del que se obtienen los cultivos donde vemos que la

sensibilidad de los provenientes de carnes se diferencian de los provenientes de

verduras, y existe diferencia significativos con respecto al tamaño de halos de

cada grupo como se muestra en la tabla 1, de acuerdo con Conter M. y col. en el

2007, en su estudio realizado sobre la Sensibilidad a los antimicrobianos de

Listeria monocytogenes aisladas de alimentos donde estudia la resistencia de L.

monocytogenes aislada de carnes Vs las aisladas de pescado encontrando un p<

0,01 donde indica la diferencia signicativa, esto también es mencionado por

Aureli P. y Col., en el 2003 que indica que la sensibilidad de los cultivos

obtenidas de carnes de pollo son diferentes a la sensibilidad de las cultivos

obtenidas de carnes rojas.

Vega J. Y Mercado P. en el 2013 hicieron un estudios con respecto a la

variación de sensibilidad de las especies de Listeria y encontraron que los

antibióticos a utilizar, y su grado de sensibilidad varían dependiendo de la

especie en estudio, lo que se puede observar en la figura 1 y 2 donde se observa

variación en cuanto a la sensibilidad de las especies: Listeria monocytogenes Vs

Listeria sp.

Según lo observado en la figura 3 los antibióticos que se encuentran por encima

de la media pueden ser los más efectivos ante una posible infección de listeriosis

entre los que tenemos a imipenem, cloranfenicol, cefotaxime, penicilina y la

tetraciclina; Como podemos ver en la figura 1 y 2 algunos de estos antibióticos

no provoca resistencia en L. monocytogenes, entre los que tenemos al imipenen,

cloranfenicol, y tetraciclina por lo que son los más adecuados para el tratamiento

de L. monocytogenes según el estudio realizado por Gunes A. y col. en el 2012.

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Ninguno de estos antibióticos crean un 100% de sensibilidad por lo que Noriega

R, y col. en el 2008, recomienda combinar a 2 o más antibacterianos para un

tratamiento más efectivo, mostrando casos que fueron tratados con ampicilina y

gentamicina y luego a falta de ampicilina parenteral en Chile, se usó penicilina y

gentamicina, esta última los primeros siete a 10 días, muchos expertos

recomiendan esta asociación con gentamicina para lograr un efecto sinérgico,

dada la actividad bacteriostática de los β-lactámicos sobre L. monocytogenes.

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CONCLUSIONES

Todas los cultivos de Listeria sp. presentan porcentajes de resistencia

frente a los antibióticos utilizados, a diferencia L. monocytogenes, quien

no presenta resistencia frente a imipenen, cloranfenicol y tetraciclina.

Existe variación de sensibilidad entre especies de L. monocytoges Vs

Listeria sp.

Existe diferencia significativa con respecto a los halos obtenidos de

Listeria monocytogenes provenientes de carne con respecto a los halos

obtenidos de L. monocytogenes provenientes de verduras.

Los Cutivos de Listeria sp. presentan mayor sensibilidad por encima de

la media artmetica, al Imipenem, cloranfenicol, cefotaxime, penicilina y

la tetraciclina.

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febrero del 2013(tesis para título).Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo;

2013

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Trujillo, Departamento de La Libertad, Perú en los meses de diciembre-

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ANEXOS

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ANEXO 01

Tabla 2: Rango del nivel de sensibilidad de Listeria sp. frente a antibacterianos

Antibacteriano Sensibilidad

Sensible Intermedio Resistente

cefotaxime ≥ 18 15–17 ≤ 14

Penicilina ≥28 20-27 ≤19

nitrofurantoina ≥ 17 15–16 ≤ 14

Imipenem ≥ 16 14–15 ≤ 13

Cefuroxima ≥ 18 15–17 ≤ 14

Clindamycina ≥ 21 15-20 ≤ 14

Oxaciclina ≥ 13 11-dic ≤ 10

Cloranfenicol ≥ 21 18–20 ≤ 17

Rifampicina ≥ 19 17–18 ≤ 16

Tetraciclina ≥ 23 19–22 ≤ 18

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ANEXO 02

Tabla 3: Diámetros de halos obtenidos en Listeria monocytogenes proveniente de carnes.

Nº Cultivo Antibacteriano Diámetro del Halo Nivel de sensibilidad

1

cefotaxime 11.74 R

nitrofurantoina 14 R

imipenem 28.5 S

penicilina 28 S

cefuroxima 16 I

clindamycina 8 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 19 I

Tetraciclina 24 S

cefotaxime 13.64 R

nitrofurantoina 15 I

imipenem 23.41 S

penicilina 27 I

2 cefuroxima 8.5 R

clindamycina 9.12 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 20 I

Tetraciclina 21 I

cefotaxime 16.4 I

nitrofurantoina 13.4 R

imipenem 23.5 S

penicilina 27.8 S

3 cefuroxima 15 I

clindamycina 6.5 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 21 S

Tetraciclina 25 S

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cefotaxime 17.6 S

nitrofurantoina 12 R

imipenem 23.5 S

penicilina 29 S

4 cefuroxima 8.5 R

clindamycina 6.5 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 18 I

Tetraciclina 23.5 S

cefotaxime 18.27 S

nitrofurantoina 17 S

imipenem 24.9 S

penicilina 28.9 S

cefuroxima 7.5 R

5 clindamycina 10 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 5.5 R

cloranfenicol 21 S

Tetraciclina 22 I

cefotaxime 21 S

nitrofurantoina 21 S

imipenem 31 S

penicilina 28 S

cefuroxima 23 S

6 clindamycina 13 R

rifampicina 24 S

oxacilina 11 I

cloranfenicol 21 S

Tetraciclina 22 I

cefotaxime 16 I

nitrofurantoina 23 S

imipenem 15 I

7 penicilina 20 I

cefuroxima 14 R

clindamycina 18 I

rifampicina 26 S

oxacilina 12 I

cloranfenicol 20 I

Tetraciclina 29 S

imipenem 30 S

penicilina 25 I

8 cefuroxima 20 S

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clindamycina 16 I

rifampicina 25 S

oxacilina 10 R

cloranfenicol 24 S

Tetraciclina 22 I

cefotaxime 18 S

nitrofurantoina 21 S

imipenem 26 S

penicilina 28 S

9 cefuroxima 23 S

clindamycina 17 I

rifampicina 18 I

oxacilina 11 I

cloranfenicol 18 I

Tetraciclina 26 S

cefotaxime 18 S

nitrofurantoina 19 S

imipenem 23 S

penicilina 32 S

cefuroxima 18 S

10 clindamycina 22 S

rifampicina 19 S

oxacilina 6 R

cloranfenicol 21 S

Tetraciclina 22 I

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ANEXO 03

Tabla 4: Diámetros de halos obtenidos en Listeria sp. proveniente de carnes.

Nº Cultivo Antibacteriano Diámetro del Halo Nivel de sensibilidad

1

cefotaxime 16.8 I

nitrofurantoina 12 R

imipenem 23.5 S

penicilina 25 I

cefuroxima 8.5 R

clindamycina 6.5 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 14 R

Tetraciclina 13.5 R

2

cefotaxime 21.5 S

nitrofurantoina 19.5 S

imipenem 7.5 R

penicilina 29 S

cefuroxima 10.5 R

clindamycina 5.5 R

rifampicina 12 R

oxacilina 12.8 S

cloranfenicol 23.5 S

Tetraciclina 27.6 S

3

cefotaxime 8.5 R

nitrofurantoina 6.56 R

imipenem 9.48 R

penicilina 6.5 R

cefuroxima 13.79 R

clindamycina 13.48 R

rifampicina 21.5 S

oxacilina 15.45 S

cloranfenicol 8.5 R

Tetraciclina 19 I

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4

cefotaxime 15 I

nitrofurantoina 16 I

imipenem 19 S

penicilina 23 I

cefuroxima 34 S

clindamycina 21 S

rifampicina 21 S

oxacilina 20 S

cloranfenicol 33 S

Tetraciclina 24 S

5

cefotaxime 22 S

nitrofurantoina 23 S

imipenem 24 S

penicilina 27.5 S

cefuroxima 10 R

clindamycina 25 S

rifampicina 26 S

oxacilina 20 S

cloranfenicol 24 S

Tetraciclina 25 S

6

cefotaxime 22 S

nitrofurantoina 22 S

imipenem 25 S

penicilina 28 S

cefuroxima 30 S

clindamycina 27 S

rifampicina 19 S

oxacilina 16 S

cloranfenicol 25 S

Tetraciclina 23 S

7

cefotaxime 18 S

nitrofurantoina 21 S

imipenem 20 S

penicilina 21 I

cefuroxima 30 S

clindamycina 21 S

rifampicina 19 S

oxacilina 19 S

cloranfenicol 25 S

Tetraciclina 20 I

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8

cefotaxime 17 I

nitrofurantoina 17 S

imipenem 25 S

penicilina 29 S

cefuroxima 29 S

clindamycina 26 S

rifampicina 23 S

oxacilina 11 I

cloranfenicol 23 S

Tetraciclina 27 S

9

cefotaxime 23 S

nitrofurantoina 20 S

imipenem 19 S

penicilina 20 I

cefuroxima 25 S

clindamycina 23 S

rifampicina 18 I

oxacilina 16 S

cloranfenicol 35 S

Tetraciclina 13 R

10

cefotaxime 21 S

nitrofurantoina 19 S

imipenem 23 S

penicilina 27.9 S

cefuroxima 18 S

clindamycina 22 S

rifampicina 19 S

oxacilina 6 R

cloranfenicol 21 S

Tetraciclina 25 S

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ANEXO 04

Tabla 5: Diámetros de halos obtenidos e Listeria monocytogenes proveniente de verduras.

Nº Cultivo Antibacteriano Diámetro del Halo Nivel de sensibilidad

1

cefotaxime 13.79 R

nitrofurantoina 13.48 R

imipenem 22 S

penicilina 20 I

cefuroxima 19 S

clindamycina 6.5 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 22 S

Tetraciclina 24 S

2

cefotaxime 16.11 I

nitrofurantoina 12 R

imipenem 23.5 S

penicilina 16.92 R

cefuroxima 10.27 R

clindamycina 8.5 R

rifampicina 11.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 21 S

Tetraciclina 20 I

3

cefotaxime 17.12 S

nitrofurantoina 15 I

imipenem 22 S

penicilina 23 I

cefuroxima 8.5 R

clindamycina 6.5 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 18 I

Tetraciclina 23.9 S

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4

cefotaxime 18 S

nitrofurantoina 16.8 S

imipenem 24.27 S

penicilina 20 I

cefuroxima 9.7 R

clindamycina 6 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 20 I

Tetraciclina 19 I

5

cefotaxime 14.82 R

nitrofurantoina 12 R

imipenem 23.5 S

penicilina 16.5 R

cefuroxima 15.6 I

clindamycina 13 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 21 S

Tetraciclina 23 S

6

cefotaxime 16.14 I

nitrofurantoina 13.4 R

imipenem 22 S

penicilina 24 I

cefuroxima 8.5 R

clindamycina 6.5 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 21 S

Tetraciclina 20 I

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cefotaxime 19.11 S

nitrofurantoina 12.11 R

imipenem 23.5 S

penicilina 16.5 R

cefuroxima 8.5 R

clindamycina 21 S

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 20 I

Tetraciclina 25 S

8

cefotaxime 18.11 S

nitrofurantoina 10.12 R

imipenem 23.5 S

penicilina 21 I

cefuroxima 16 I

clindamycina 6.5 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 24 S

Tetraciclina 22 I

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Tabla 6: Diámetros de halos obtenidos en Listeria sp.proveniente de carnes.

Nº Cultivo Antibacteriano Diámetro del Halo Nivel de sensibilidad

1

cefotaxime 18.24 S

nitrofurantoina 14.12 R

imipenem 22 S

penicilina 16.5 R

cefuroxima 8.5 R

clindamycina 8.12 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 18 I

Tetraciclina 16 R

2

cefotaxime 18.21 S

nitrofurantoina 12 R

imipenem 23.5 S

penicilina 16.5 R

cefuroxima 8.5 R

clindamycina 6.5 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 21 S

Tetraciclina 22 I

3

cefotaxime 15.28 I

nitrofurantoina 13.68 R

imipenem 20.5 S

penicilina 28 S

cefuroxima 8.5 R

clindamycina 6.5 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 14 R

Tetraciclina 22.6 S

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4

cefotaxime 24.27 S

nitrofurantoina 16.92 S

imipenem 10.27 R

penicilina 26 I

cefuroxima 11.5 R

clindamycina 7.5 R

rifampicina 16.81 R

oxacilina 13 S

cloranfenicol 17.5 R

Tetraciclina 18.15 R

5

cefotaxime 7.38 R

nitrofurantoina 9.54 R

imipenem 15 I

penicilina 28 S

cefuroxima 18 S

clindamycina 15.42 I

rifampicina 28.5 S

oxacilina 16.5 S

cloranfenicol 8.5 R

Tetraciclina 23.2 S

6

cefotaxime 10.5 R

nitrofurantoina 4.5 R

imipenem 17.26 S

penicilina 27.8 S

cefuroxima 23.5 S

clindamycina 14.5 R

rifampicina 9.7 R

oxacilina 7.3 R

cloranfenicol 10.2 R

Tetraciclina 3.5 R

7

cefotaxime 16.8 I

nitrofurantoina 10.43 R

imipenem 26.4 S

penicilina 28 S

cefuroxima 8.5 R

clindamycina 6.5 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 11.2 I

cloranfenicol 14 R

Tetraciclina 12 R

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7

cefotaxime 16.8 I

nitrofurantoina 10.43 R

imipenem 26.4 S

penicilina 28 S

cefuroxima 8.5 R

clindamycina 6.5 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 11.2 I

cloranfenicol 14 R

Tetraciclina 12 R

8

cefotaxime 23.5 S

nitrofurantoina 16.5 S

imipenem 8.5 R

penicilina 28.9 S

cefuroxima 16.3 I

clindamycina 4.5 R

rifampicina 17.23 I

oxacilina 13.12 S

cloranfenicol 22 S

Tetraciclina 16.23 R

9

cefotaxime 11.5 R

nitrofurantoina 7.46 R

imipenem 14.5 I

penicilina 29 S

cefuroxima 12.4 R

clindamycina 12 R

rifampicina 23.5 S

oxacilina 17.5 S

cloranfenicol 9.23 R

Tetraciclina 6.5 R

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10

cefotaxime 10.5 R

nitrofurantoina 4.5 R

imipenem 12.84 R

penicilina 29 S

cefuroxima 23.5 S

clindamycina 16.5 I

rifampicina 8.5 R

oxacilina 6.5 R

cloranfenicol 10.5 R

Tetraciclina 4.5 R

11

cefotaxime 18.24 S

nitrofurantoina 14.12 R

imipenem 22 S

penicilina 29 S

cefuroxima 8.5 R

clindamycina 8.12 R

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 18 I

Tetraciclina 23 S

12

cefotaxime 18.21 S

nitrofurantoina 12 R

imipenem 23.5 S

penicilina 16.5 R

cefuroxima 8.5 R

clindamycina 15 I

rifampicina 10.5 R

oxacilina 4.5 R

cloranfenicol 21 S

Tetraciclina 22 I

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ANEXO 05

TABLA 07. Frecuencia de la sensibilidad de los cultivos de Listeria sp. Carnes y

Listeria sp. Verduras aislados de mercados provenientes de la ciudad de Trujillo frente a

los antibacterianos seleccionados.

Antibacteriano Frecuencia (%) de sensibilidad de:

L.sp Carnes L.sp Verduras

cefotaxime 60.00 50.00

nitrofurantoina 65.00 15.00

imipenem 85.00 75.00

penicilina 60.00 40.00

cefuroxima 50.00 20.00

clindamycina 40.00 5.00

rifampicina 55.00 10.00

oxacilina 35.00 20.00

cloranfenicol 65.00 40.00

Tetraciclina 55.00 35.00

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