Inmunofluorescencia
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fluorecencia Inmuno LICENCIATURA EN BIOLOGIA ó ó ó
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La Inmunofluorescencia es una técnica de inmunomarcaje que se vale del uso de anticuerpos marcados con moléculas fluorescentes para demostrar la presencia de una determinada molécula de interés en un tejido. órgano, o solución de estudio.
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fluorecenciaInmunoLICENCIATURA EN
BIOLOGIA
ó
ó ó
INMUNOFLUORESCENCIATÉCNICA INMUNOMARCAJE
Desarrollada en 1950 por
Coons y Kaplan
INMUNOFLUORESCENCIA
Reacción
antígeno-anticuerpo
TÉCNICA INMUNOMARCAJE
Anticuerpos unidos a una
sustancia fluorescente
Para demostrar la presencia
de una determinada
molécula de interés Antígenos
Aprovecha la interacción
antígeno anticuerpo
El marcaje está dado
por una molécula
fluorescenteUnión covalente al anticuerpo
Fluorocromo
INMUNOFLUORESCENCIA
Aprovecha la interacción
antígeno anticuerpo
El marcaje está dado
por una molécula
fluorescenteUnión covalente al anticuerpo
Fluorocromo
La muestra puede ser observada
Microscopia fluorescente
Fotometría
INMUNOFLUORESCENCIA
Preparado
biológico
FLUORESCENCIAPropiedad de una sustancia de emitir luz
cuando es expuesta a radiaciones de baja
longitud de onda y alta energía
FLUORESCENCIAPropiedad de una sustancia de emitir luz
cuando es expuesta a radiaciones de baja
longitud de onda y alta energía
Luz UV
Longitud de onda más larga
Rojo
Amarillo
Verde
FITC
Cianina (Cy5)
Rodamina
Alexa fluor
En:
APLICACIONES
Cortes de tejidos
Líneas celulares cultivadas
Células individuales
Secreciones que contengan
células en suspensión
Presencia y distribución deProteínas
Glúcidos
Moléculas pequeñas
Tinción
IFDPrimaria
Un único anticuerpo
Ag-Ac-Fc
Rápida y poco sensible a interferencias
IFISecundaria
Dos anticuerpos
Ag-Ac-Ac-Fc
Permite amplificar la señal
No es necesario modificar cada uno de los anticuerpos
primarios para acarrear el fluoróforo
Aplicación en investigación
Más lenta y compleja. Sensible a interferencias
IFISecundaria
Dos anticuerpos
Ag-Ac-Ac-Fc
Aplicación clínicaEn porta objetos se fijan
antígenos como sustrato conocido 1Dos etapas
Se coloca el suero
del paciente
IFISecundaria
Dos anticuerpos
Ag-Ac-Ac-Fc
Aplicación clínica
Se agrega la Ig secundaria marcada2Dos etapas
INMUNOFLUORESCENCIAVentajas Desventajas
Rapidez
Método relativamente
sencilloAlta especificidad y
sensibilidadNo es necesaria la
esterilidad
Costo de equipo y
reactivosPersonal capacitado
Fotoblanqueo
Generalmente no
son posibles los
análisis in vivo
APLICACIONESTécnicas analíticas
(cualitativas y cuantitativas)
en Química y Bioquímica.
Métodos inmunológicos de
diagnóstico médico.
Análisis poblacional de células
(citofluorimetría de flujo).
APLICACIONESProcedimientos microscópicos en:
Microbiología
Genética
Histología
Histoquímica
Biología Celular
Biología Molecular
Neurobiología
Biología del Desarrollo
Patología
Gracias
