fluorecenciaInmunoLICENCIATURA EN

BIOLOGIA

ó

ó ó

INMUNOFLUORESCENCIATÉCNICA INMUNOMARCAJE

Desarrollada en 1950 por

Coons y Kaplan

INMUNOFLUORESCENCIA

Reacción

antígeno-anticuerpo

TÉCNICA INMUNOMARCAJE

Anticuerpos unidos a una

sustancia fluorescente

Para demostrar la presencia

de una determinada

molécula de interés Antígenos

Aprovecha la interacción

antígeno anticuerpo

El marcaje está dado

por una molécula

fluorescenteUnión covalente al anticuerpo

Fluorocromo

INMUNOFLUORESCENCIA

Aprovecha la interacción

antígeno anticuerpo

El marcaje está dado

por una molécula

fluorescenteUnión covalente al anticuerpo

Fluorocromo

La muestra puede ser observada

Microscopia fluorescente

Fotometría

INMUNOFLUORESCENCIA

Preparado

biológico

FLUORESCENCIAPropiedad de una sustancia de emitir luz

cuando es expuesta a radiaciones de baja

longitud de onda y alta energía

FLUORESCENCIAPropiedad de una sustancia de emitir luz

cuando es expuesta a radiaciones de baja

longitud de onda y alta energía

Luz UV

Longitud de onda más larga

Rojo

Amarillo

Verde

FITC

Cianina (Cy5)

Rodamina

Alexa fluor

En:

APLICACIONES

Cortes de tejidos

Líneas celulares cultivadas

Células individuales

Secreciones que contengan

células en suspensión

Presencia y distribución deProteínas

Glúcidos

Moléculas pequeñas

Tinción

IFDPrimaria

Un único anticuerpo

Ag-Ac-Fc

Rápida y poco sensible a interferencias

IFISecundaria

Dos anticuerpos

Ag-Ac-Ac-Fc

Permite amplificar la señal

No es necesario modificar cada uno de los anticuerpos

primarios para acarrear el fluoróforo

Aplicación en investigación

Más lenta y compleja. Sensible a interferencias

IFISecundaria

Dos anticuerpos

Ag-Ac-Ac-Fc

Aplicación clínicaEn porta objetos se fijan

antígenos como sustrato conocido 1Dos etapas

Se coloca el suero

del paciente

IFISecundaria

Dos anticuerpos

Ag-Ac-Ac-Fc

Aplicación clínica

Se agrega la Ig secundaria marcada2Dos etapas

INMUNOFLUORESCENCIAVentajas Desventajas

Rapidez

Método relativamente

sencilloAlta especificidad y

sensibilidadNo es necesaria la

esterilidad

Costo de equipo y

reactivosPersonal capacitado

Fotoblanqueo

Generalmente no

son posibles los

análisis in vivo

APLICACIONESTécnicas analíticas

(cualitativas y cuantitativas)

en Química y Bioquímica.

Métodos inmunológicos de

diagnóstico médico.

Análisis poblacional de células

(citofluorimetría de flujo).

APLICACIONESProcedimientos microscópicos en:

Microbiología

Genética

Histología

Histoquímica

Biología Celular

Biología Molecular

Neurobiología

Biología del Desarrollo

Patología

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