Inmunohistoquímica
-
Upload
sandro-casavilca-zambrano -
Category
Health & Medicine
-
view
287 -
download
3
Transcript of Inmunohistoquímica
Dr. Carlos Barrionuevo CornejoProfesor Asociado Facultad de Medicina
UNMSMJefe del Servicio de Patología Quirúrgica
Departamento de PatologíaINEN
DEFINICION
Técnicas para la determinación “in situ” de proteínas en un tejido (o frotis)
Reacción Ag-Ac Detección por una señal de color visible
al MO
Anticuerpos monoclonales y Anticuerpos monoclonales y policlonalespoliclonales
Anticuerpos Filamentos intracelulares
Epitelio, mesénquima, musculares, gliales, etc. Marcadores celulares
Melanocitos, células germinales, endocrinos, neurogénicos, células basales, mama, etc.
Hematopatología CDs
Agentes infecciosos Virus, bacterias, parásitos
Hormonas Factores pronóstico y predictivos Genes reparadores
Procesamiento de IHQ
Fijación tisular Procesamiento tisular Recuperación antigénica Sistemas de detección de IHQ
FIJACION TISULAR
Formol neutro, pH7 (1 litro):Sodio fosfato monobásico monohidrato 3.5
grSodio fosfato dibásico anhidro 6.5 grH20 destilada 900 ccFormladehido solución al 37% 100cc
FIJACION TISULAR
Volumen: x 10 Muestras hasta 0.5 cm: 6 a 24 h Muestras de mayor tamaño: 24 a 48 h
Procesamiento tisular
4 etanoles de 960
3 etanoles de 990
Alcoho-xilol 2 xiloles 2 parafinas líquidas
Recuperación antigénica
Formol y parafina alteran estructura proteica
El pre-tratamiento con calor o enzimas recupera o “desenmascara” los Ag (epítopes)Rompe enlaces cruzadosEliminación de iones de calcio con citrato
Recuperación antigénica
BufferBuffer citrato 0.01 mol/L, pH 6Buffer Tris/EDTA, pH 9
MétodosDigestión enzimáticaHorno de microondasCalentamiento al vapor
SISTEMAS DE DETECCION EN INMUNOHISTOQUMICA
Un solo paso o directa (IF) Indirecto de dos pasos Peroxidasa-antiperoxidasa (PAP) Fosfatasa alcalina-antifosfatasa alcalina (APAAP) Complejo Avidina-Biotina (ABC) Avidina-Biotina Marcada (LAB) Estreptavidina-Biotina Marcada (LSAB) Amplificación de señal catalizada (CSA) Polímeros
Método directo e indirecto
Método PAP y APAPMétodo PAP y APAP
Método ABCMétodo ABC
Método de LSAB o LABMétodo de LSAB o LAB
Método de CSA 1: pasos 1,2,3
Método de CSA 1: pasos 4 y 5
CD23 CD2
Método de polímerosMétodo de polímeros
Método de polímerosMétodo de polímeros
Sensibilidad (de menor a mayor)
PAP ABC LAB (4 a 8 veces más que ABC) LSAB y ABC modificado (CSA) Polímeros
Coloración simultanea
CD20 y CD3
Quer, CD68 y CD20
PATRONES DE TINCIÓN
MEMBRANA GRANULAR CITOPLASMATICO NUCLEAR (NUCLEOLAR) PARANUCLEAR (GOLGI) EXTRANUCLEAR
CD20
Sinaptofisina
Citoquaratina
TdT
CD30
Rol de la IHQ
Determinación de estirpe celular (tumores malignos indiferenciados, tumores metastásicos de origen desconocido)
Benigno vs maligno Clasificación de diversas neoplasias Determinación de antígenos pronósticos y
predictivos Blancos terapéuticos Determinación de agentes infecciosos
Evaluación Patológica
Datos clínicosEdadUbicación y extensión
○ Ganglio linfático○ Órgano
Morfología Inmunhistoquímica: marcadores
selectivos
“Marcadores específicos”
PSA: próstata
TTF1: pulmón, tiroides
Tiroglobulina: tiroides
Hep-PAR1 (OCH1E5): hígado
CD45 y otros CD: hematolinfoide
Algoritmos en IHQ
Pocos marcadores “específicos”
La mayoría se encuentran en varios tumores diferentes aunque con diferente distribución
Combinados: tablas de probabilidades
Algoritmos diagnósticos
Algoritmos en IHQ
Muchos Secuencia razonable Disponibilidad de Ac No siempre resuelven un problema ¡MORFOLOGIA Y CLINICA!
Patrones morfológicos
Neoplasia epitelioide Neoplasia de células redondas Neoplasia sarcomatoide Neoplasia de patrón mixto (epitelioide-
sarcomatoide) Etc., etc.
Neoplasia epitelioide
Ker+
CK7 CK20
Neoplasia epitelioide Queratina+
CK7+CK7+ CK7-CK7-
CK20+CK20+ EstómagoEstómago
PancreasPancreas
Vías biliaresVías biliares
Vías urinariasVías urinarias
Adenoca mucinoso Adenoca mucinoso ovarioovario
ColonColon
RectoRecto
CK20-CK20- PulmónPulmón
TiroidesTiroides
Glándulas salivalesGlándulas salivales
MamaMama
EndometrioEndometrio
Ovaro (no mucinoso)Ovaro (no mucinoso)
MesoteliomaMesotelioma
HígadoHígado
RiñónRiñón
PróstataPróstata
Carcinoma escamosoCarcinoma escamoso
Neoplasia epitelioide queratina+ en adolescentes o adultos jóvenes
CD30: carcinoma embrionario
AFP : tumor del saco vitelino, carcinoma embrionario
HCG : coriocarcinoma
Neoplasia epitelioide
Ker -
S100 CD30 Vim
Neoplasia epitelioide
Ker-/pS100+
HMB45+ Melan A+ Vim+
Melanoma TVNPM
Neoplasia epitelioide
Ker-/CD30+
CD45-/+ ALK1+/- AFP-/+
LACG Ca embr
Neoplasia epitelioide
Ker-/Vim+
CD45- CD30- MelanA- HMB45-
Sarcoma
Neoplasia de células redondas
CD45+ -LNH Ker
+ -
Carcinoma pS100 -
Sinoviosarc Desmina
T desmoide + + -
Melanoma Rabdomiosar CD99
PNET T desmoide +
Sinoviosarc
T desmoide PNET
Neoplasia de células redondas
CD45+
CD20+ CD3+ CD30+
LNH B LNH T LACG
Neoplasia sarcomatoide
Ker/EMA
+ - pS100
Carcinoma
Sinoviosarc + -
S epiteliode CD34
Schwanomma
Neurofibroma + -
Melanoma Actina
TVNPM +
S Kaposi T muscular
T fibroso sol HFM
Neoplasia sarcomatoide
Ker-/pS100-/Vim+
Pan Actina+
Alfa actina Mio D1 Desmina
Leiomiosarcoma Rabdomiosarcoma
Clasificación molecular del carcinoma mamario
ClasificaciónLuminal ALuminal BTipo basalTipo CerbB2
AnticuerposReceptores de estrógenosCerbB2CK5/6
Clasificación molecular del carcinoma mamario con IHQ
Luminal ALuminal A Luminal Luminal BB
Tipo basalTipo basal CerbB2CerbB2
R/R/EstrógenosEstrógenos
PositivoPositivo PositivoPositivo NegativoNegativo NegativoNegativo
CerbB2CerbB2 NegativoNegativo NegativoNegativo NegativoNegativo PositivoPositivo
CK5/6CK5/6 NegativoNegativo NegativoNegativo PositivoPositivo NegativoNegativo
Clasificación molecular del LCGBD
Clasificación:Tipo células B centrogerminales (GCB)Tipo células B activadas (ABC)
AnticuerposGCET1, CD10, MUM1, BCL6, FOXP1
Clin Cancer Res 2009;15(17) September 1, 200
Proteínas pronósticas
Carcinoma mamario
Receptores hormonalesCerbB2 (Her2/neu)P53Ki67Ciclina D1BCL2EGFR
Proteínas pronosticas
Carcinoma colónico
Proteínas reparadoras (MLH1, MSH2, MSH6)P53EFGRTimidilato sintetasaKi67
Proteínas pronosticas Carcinoma prostático
P27Ki67
Carcinoma pulmonarEGFRKi67
Carcinoma urotelialP53Ki67Rb
En uso actual CARCINOMA MAMARIO
Receptores hormonales: TAMOXIFEN Herceptest: TRASTUZUMAB
LINFOMA DE CÉLULAS GRANDES B DIFUSO
CD20: RITUXIMAB
TUMOR DEL ESTROMA GASTROINTESTINAL
CD117 (c-Kit): IMATINIB
Otros CARCINOMA DE ESTÓMAGO
Herceptest
CARCINOMA PULMONAR
EGFR (amplificación)
CARCINOMA DE COLON
EGFR
Arrays de tejidos (TMA)
Arrays de tejidos (TMA)
Arrays de tejidos (TMA)
Arrays de tejidos (TMA)
HERRAMIENTA AUXILIAR QUE UTILIZA EL PATOLOGO PARA Diagnóstico PronósticoTratamiento
MORFOLOGIA CLINICA ¡¡UNA FIJACION ADECUADA Y UN
BUEN PROCESAMIENTO TECNICO!!
GRACIAS !!!