Inoculación de fitopatógenos

Curso: Diagnóstico de enfermedades

vegetales.Ing. Agr. Vivienne Gepp, MSc.

6 de mayo de 2011

Objetivos

• Conocer las principales técnicas que se usan para inocular hongos, bacterias, virus y nematodos fitopatógenos.

Esquema de la clase

PARTE TEÓRICA• Inóculo, calidad y cuantificación.• Métodos de inoculación de hongos,

bacterias, virus y nematodos en hojas, raíces, tallo, frutos.

PARTE PRÁCTICA• Inoculación

LUEGO DE LA CLASE• Observación, análisis e informe de

resultados

Inóculo

• Hongos:

• Bacterias:

• Virus:

• Nematodos:

– trozos de micelio – esporas – esclerotos

– unidades formadoras de colonias (UFC)

– partículas en macerado, buffer, etc.

– larvas, huevos, quistes

Calidad del inóculo

• Viable – en activo crecimiento (micelio, bacterias), esporas capaces de germinar

• Homogéneo: – siembra de hongo en centro de placa vs.

suspensión de esporas

• “Acostumbramiento a crecer en medio de cultivo” – pérdida de patogenicidad (Ralstonia) o de producción de esporas (Septoria, Cercospora)

Cuantificación del inóculo

• Hematocitómetro

• Turbidez

• Unidades formadoras de colonias

Cuantificación del inóculo en hematocitómetro

Rayado Neubauer: • 2 porciones c/u con 9 cuadrados principales de 0,1 mm3

• divididos en 16 cuadrados menores de 0,05 mm3

Cuantificación de inóculo

• Turbidez - bacterias– Escala de McFarland: BaCl2 + H2SO4

– Densidad óptica: colorímetro o espectrofotómetro a 450 – 650 mµ

Cuantificación de inóculo

• Recuento de colonias unidades formadoras de colonias (UFC)

Inoculación al follaje

• Penetración por estomas o epidermis - mayoría penetra en 24 hs. en condiciones adecuadas de humedad y 20-24ºC

• Métodos:1. pulverización:

• 0,5% Tween o 0,1% jabón• cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen

mejor• 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar – adhiere esporas y mantiene

humedad• aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden

infectividad.

Métodos de inoculación al follaje

1. pulverización: • 0,5% Tween o 0,1% jabón

• cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen mejor

• 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar – adhiere esporas y mantiene humedad

• aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden infectividad.

Métodos de inoculación al follaje

2. espolvoreo con talco

• royas: humedecer hojas 1º

(aspersión)

• oidios – seco

3. rozar o colocar hojas esporuladas

sobre sanas (previamente

rociadas)

4. inmersión en suspensión de

inóculo

Métodos de inoculación al follaje

4. infiltración

5. colocar trozo de micelio

Métodos de inoculación al follaje

Inoculación de virus

Plantas indicadoras

• Tabaco, pepino, Chenopodium quinoa, etc.– Sin síntomas– Lesiones locales – Síntomas sistémicos

Plantas indicadoras

Transmisión mecánica

1. Macerado de planta enferma

2. Abrasivo (carborundum)

3. Planta sana

= Transmisión = Transmisión “por jugos”“por jugos”

Transmisión por pulgones

Transmisión por propagación vegetativa

• tubérculos, bulbos, estacas, etc.

• injerto

An overview of the paintings of Christina Brodiehttp://www.microscopy-uk.org.uk/mag/indexmag.html?http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/indexmag.html?http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/artnov05/http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/artnov05/cbpaint.htmlcbpaint.html

Inoculación al suelo o raíces

• efecto del suelo: microflora conducente o supresivo reducir variación sin suelo

• humedad muy alta para Pitáceas, • + síntomas a > temp. hasta 28ºC en gral.• Métodos:

– infestación de suelo– hidroponia– “cut and dip”– inoculación sin herir raíces (tubos en suelo)

Inoculación al tallo o rama

• Generalmente con heridas

• Corte longitudinal – inocular inmediatamente – cubrir para evitar deshidratación. (gel, algodón mojado)

• Patógenos vasculares

Inoculación al tallo o rama

• Patógenos vasculares: – axila - pinchar a través de

gota o con aguja o escarbadiente contaminado.

– inyección al tallo – evita stress de transplante

Inoculación en órganos carnosos

• Pinchazo

• Sacabocado

• Corte

Condiciones ambientales

Antes de inocular:

• Patógenos que penetran por estomas

• Patógenos que penetran por heridas

• Virus

Condiciones ambientales

Post-inoculación:

• Humedad para bacterias y hongos – factor más importante

• Virus

BIBLIOGRAFÍA• DHINGRA, O.D.; SINCLAIR, J.B. 1985. Basic plant

pathology methods.

• FRENCH, E.R. y HERBERT, T. 1980. Métodos de investigación fitopatológica.

• KIRÁLY, Z. 1970. Methods in plants pathology with special reference to breeding for disease resistance.

• LELLIOTT, R.A.; STEAD, D.E. 1987. Methods for the diagnosis of bacterial diseases of plants.

• THE COMMONWEALTH MYCOLOGICAL INSTITUTE. 1968. Plant pathologist's pocketbook.