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La aplicación de carbohidratos en arbolado urbano ISA annual international conference - [email protected] 1 La aplicación de carbohidratos como una opción para mejorar la vitalidad y crecimiento del arbolado urbano Tomás Martínez-Trinidad Profesor Investigador Adjunto Arboricultura y Dasonomía Urbana Postgrado en Ciencias Forestales [email protected] Annual ISA International Conference Fotosíntesis: fuente de energía (carbohidratos) 6CO 2 + 6H 2 0 C 6 H 12 0 6 +6O 2 INTRODUCCIÓN

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  • La aplicación de carbohidratos en arbolado urbano

    ISA annual international conference [email protected] 1

    La aplicación de carbohidratos como una opción para mejorar la vitalidad y crecimiento del arbolado urbano

    Tomás Martínez-Trinidad

    Profesor Investigador AdjuntoArboricultura y Dasonomía UrbanaPostgrado en Ciencias Forestales

    [email protected]

    Annual ISA International Conference

    Fotosíntesis: fuente de energía (carbohidratos)

    6CO2 + 6H20 C6H1206 +6O2

    INTRODUCCIÓN

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    RELACIÓN FUENTE-DEMANDA

    • Fuente- Producción

    (hojas), o liberación(raíz, tallo)

    • Demanda- Almacén,

    o Uso

    http://online.moraine.cc.il.us /WebSupported/BIO112/sourcetos ink.jpg

    Introducción

    DISTRIBUCIÓN DE RECURSOS

    • Defensa

    • Mantenimiento

    • Crecimiento

    • Reproducción

    Introducción

    • Exudados raíz

    • Almacenamiento

    Shigo, A. L. 1991. Modern Arboriculture

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    Arbolado urbano experimenta diferentes condiciones de estrés

    Reservas deEnergía

    CrecimientoDefensa

    ReproducciónAlmacenamiento

    Declinación

    Introducción

    Introducción

    * Apariencia visual- Crecimiento- Tamaño de hoja, color- Densidad de follaje

    * Contenido de carbohidratos- Laboratorio (glucosa y almidón)- Tinción de tejidos - almidón- Medidores de glucosa

    • Espectrómetro de fluorescencia (Fv/Fm)

    * Ohmímetro (Resistencia eléctrica)

    MÉTODOS PARA DETERMINAR VITALIDAD

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    � ¿Se pueden aplicar carbohidratos de manera exógena para mejorar el crecimiento y vitalidad de los árboles?

    Pregunta Principal

    EXPERIMENTO 1• Estudiar la distribución espacial y estacional de glucosa y

    almidón en árboles de Quercus virginiana.

    (Larcher, 1980)

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    MATERIALES AND MÉTODOS

    - Árboles (10 cm diam.)Quercus virginiana

    - 5 m - espaciamiento

    Muestras: N,S,E,O

    * Raíces (soporte)* Tronco (1 m altura) * Hojas (media de copa) * Ramillas (1 año)

    NS

    E

    � Hielo, secado, molido, y almacenado (viales)

    Determinación de glucosa y almidónSigma GAGO-20

    � Extracción glucosa� Determinación (650 nm)� Almidón –muestra remanente –

    enzima amiloglucosidasa� Colorimétricamente: a 540 nm

    � Muestreo: cada estación

    Materiales y Métodos

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    Materiales y Métodos

    � Análisis de datos

    - Punto cardinal, tipo tejido, época de año

    N-S, E-O (entre árboles y filas)

    - Procedimiento GLM

    - SPSS v.13

    R E S U L T A D O S

    � El contenido de carbohidratos no fue afectado porpunto cardinal.

    0

    20

    40

    60

    80

    100

    March July September January

    Time

    Glu

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    con

    cent

    ratio

    n

    mg

    g-1

    DW

    Root

    Trunk

    Twigs

    Leaves

    Contenido de glucosa en Quercus virginiana en cuatro fechas diferentes.

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    60

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    March July September January

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    rch

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    n

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    gluc

    ose

    g-1

    DW

    Root

    Trunk

    Twigs

    Leaves

    Resultados

    Contenido de almidón en Quercus virginiana en cuatro fechas diferentes.

    � La raíz y tronco presentaron altos contenidos dealmidón durante el periodo de dormancia.

    � El contenido de glucosa: hojas > ramillas > tronco yraíz, mientras que el almidón tuvo un patrón inverso.

    EXPERIMENTO 2

    � Suelo bajo condiciones controladas y en campo

    MATERIALES Y MÉTODOS

    • Evaluar los efectos de aplicaciones de carbohidratos en elsuelo sobre la actividad microbiana bajo condiciones delaboratorio y en campo.

    Carbohidrato Concentración (g L-1)Testigo 0Glucosa 40, 80, 120Almidón 40, 80, 120Mezcla (50% cu) 40, 80, 120

    � 3 rep/ tratamiento

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    * Laboratorio

    - ContenedoresIncubados a 27oC

    * Campo- Soluciones

    radio 0.5 m

    - Ambos casos:Distribución

    aleatoria

    - Muestreo semanal

    Materiales y Métodos

    �Método de disoluciones-Bacteria - (N.A)-Actinomicetes - (A)-Hongo - (PDA+RB)

    Materiales y Métodos

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    �Respiración: Titulación�30 g of suelo (frasco)�3 mL NaOH (vaso)� Incubó 48 hrs.

    �2,3 gotas fenolftaleína+1 mL BaCl2* HCl

    Materiales y Métodos

    (Dr. Zuberer)

    � Análisis de datos

    - Completamente al azar

    - Procedimiento GLM

    - SPSS v.13

    - Prueba de Dunnett

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    Microbio CampoUFC g-1 suelo

    LaboratorioUFC g-1 suelo

    Hongo 9.8 x 103 (�4.0)† 13 x 103 (�3.1)Actinomicetes 10.7 x 104 (�5.3) 8 x 104 (�3.5)Bacteria 8.5 x 106 (�3.7) 15 x 106 (�4.8)

    Medias de UFC para hongo, actinomicetes, bacteriasen suelo tratado con carbohidratos a diferentes

    concentraciones.

    RESULTADOS

    † Desviación estandar

    � La técnica de disoluciones no funcionó para encontrar diferencias en la enumeración de poblaciones microbianas del suelo.

    Respiración en muestras de suelo tratadas con glucosa, almidón o mezclas 50:50 enconcentraciones diferentes (0, 40, 80, and 120 gL-1) baj o condiciones de laboratorio.*Significativamente diferente con P�0.05 usando la prueba de Dunnett.

    Resultados

    0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

    Weeks

    Control

    Starch 120

    Starch 80

    Starch 40

    ** * *

    0

    200

    400

    600

    800

    1000

    0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

    Weeks

    CO

    2 Ev

    olv

    ed (µ

    g.g

    -1 s

    oil)

    Control

    Glucose 120Glucose 80

    Glucose 40

    *

    *

    *

    ***

    *

    * *

    0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

    We eks

    Control

    Mi x 120

    Mi x 80

    Mi x 40*

    *

    *

    *

    *

    *

    ** *

    � La respiración en el suelo no fue afectada hasta después de varias semanas de la aplicación de altas concentraciones de almidón.

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    0

    100

    200

    300

    400

    500

    600

    700

    0 1 2 3 4 5 6

    W eeks

    CO 2

    Evo

    lved

    (µg.

    g-1 s

    oil)

    C ontrol

    Glucos e 120

    Glucos e 80

    Glucos e 40*

    *

    ** **

    *

    0 1 2 3 4 5 6

    Weeks

    Control

    S tarch 120

    S tarch 80

    S tarch 40

    *

    *

    *

    **

    0 1 2 3 4 5 6

    Weeks

    Cont rol

    Mix 120

    Mix 80

    Mix 40

    *

    *

    **

    *

    Respiración en muestras de suelo tratadas con glucosa, almi dón o mezclas 50:50 en diferentesconcentraciones (0, 40, 80, and 120 gL-1) baj o condiciones de campo.* Significativamente diferente con P�0.05 usando la prueba de Dunnett.

    Resultados

    � La respiración en el suelo se incrementó significativamente con la aplicación de carbohidratos bajo condiciones de campo y laboratorio.

    Evaluar los efectos de aplicaciones de carbohidratos en elsuelo en el crecimiento y vitalidad de Quercus virginiana.

    EXPERIMENTO 3

    • Absorción xraíz(azúcares)

    • Disponibilidad Nutriente- microorganismos - suelo

    • Secuestro de Nutrientes- temporal

    http://www.organicare.com/howyardworks .html

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    * Tratamiento: soluciones al

    suelo

    � Árboles -10 cm

    MATERIALES Y MÉTODOS

    Aplicaciones:Cada 4 meses

    (1.5 años)

    •10 L por árbol – alrededor – radio de 0.5 m

    � Completamente azar

    Carbohidrato Concentración (g L-1)

    Glucosa 0, 40, 80, 120Almidón 0, 40, 80, 120

    Mezcla (50% cu) 0, 40, 80, 120

    Materiales y Métodos

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    • Crecimiento de raíz: * 4 muestras

    (6 cm x 15 cm)* a 0.5 m del tronco* Longitud y diámetro

    Programa WinRhizo* Peso seco

    Materiales y Métodos

    � Crecimiento: - Diámetro, - Área de copa vertical,

    Programa ImageJ - Índice de crecimiento

    1

    12

    medición

    mediciónmediciónIC

    −=

    � Análisis de carbohidratos en ramillas

    - Muestras raíz (final)

    � Fotosíntesis: - LiCor 6200 - 3 hojas

    Materiales y Métodos

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    • Fluorescencia clorofila10 hojas de 1/3 bajo de

    la copa

    �Composición isotópica de carbono- ramillas y raíces – 18 meses

    * Laboratorio de Isótopos Estables en UC Davis* �13C (estándar PDB).

    Materiales y Métodos

    • Valores de �13C- Isótopos estables 12C, 13C

    azúcar

    Planta C3

    Pee Dee Belemnite

    * Plantas C3: -20 a -34‰

    * Plantas C4: -9 a -16.8‰

    OPCION POTENCIAL PARA DETERMINAR LA ABSORCIÓN DE AZÚCARES

    Azúcares de C4

    � � ���

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    �Respiración en suelo- 25 mm diam. x 150 mm largo

    muestras de suelo (4 meses)- 0.5 m del tronco

    * Muestras bolsas de plástico* Hielo Azul

    �Análisis de nutrientes (año)- Suelo- Hojas

    Materiales y Métodos

    � Análisis de datos

    - Completamente al azar

    - Estructura factorial (concentraciones y carbohidratos)4x3 aumentada por el control

    - Procedimiento GLM

    - SPSS v.13

    * Datos de composición isotópica de carbono

    * Prueba de Dunnett

    Materiales y Métodos

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    0.650.67

    0.690.710.730.75

    0.770.790.81

    0.830.85

    Aug '04 Dec '04 Apr '05 Aug '05 Dec '05 Jun '06

    Time

    Ch

    loro

    ph

    yll

    flu

    ore

    scen

    ce

    (Fm

    /Fv) Glucose Starch Mixture

    Efecto general de la aplicación de glucosa, almidón y mezclas 50:50 enfluorescencia de clorofila (Fv /Fm) de Quercus virginiana en diferentes fechas.

    A

    RESULTADOS

    � La aplicación de soluciones en el suelo no tuvieronun impacto significativo en el crecimiento.

    0.650.670.69

    0.710.730.750.770.790.810.83

    0.85

    Aug '04 Dec '04 Apr '05 Aug '05 Dec '05 Jun '06

    Time

    Chlo

    roph

    yll

    fluore

    scenc

    e (F

    m/F

    v)

    0 40 80 120

    Resultados

    Efecto general de la aplicación de diferentes c oncentraciones de carbohidratos (0,40, 80 and 120 g L-1) en la fluorescencia de clorofila (Fv /Fm) de Quercus virginianaen diferentes fechas.

    0

    � El uso de la composición de isótopos de carbono nofuncionó para determinar si los azúcares fueronabsorbidos por las raíces de los árboles.

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    Efecto general de diferentes concentraciones de carbohi dratos en el conteni do deglucosa en ramillas de Quercus virginiana.

    25

    28

    31

    34

    0 40 80 120

    Concentration (g L-1)

    Glu

    cose

    (mg

    g-1 D

    W)

    Resultados

    � La aplicación de altas concentraciones decarbohidratos causó un alto contenido de glucosa enramillas y variación en la fluorescencia de clorofila,aunque las diferencias fueron pequeñas.

    0

    20

    40

    60

    80

    100

    120

    140

    0 40 80 1 20

    Conce ntration (g L -1)

    CO

    2 E

    volv

    ed (

    µg g

    -1 s

    oil)

    Glucose Starch Mixture

    Efecto general de carbohidratos (glucosa, almi dón y mezcla 50:50) en diferentesconcentraciones sobre la respiración en suelo (µg CO2 g-1 s uelo) cuatro mesesdespués de la aplicación de tratamientos.

    Resultados

    � Altas concentraciones de almidón tuvieron unimpacto en la actividad microbiana cuatro mesesdespués del tratamiento, aunque no produjeron unefecto significativo en vitalidad y crecimiento.

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    MATERIALES Y MÉTODOS

    • Determinar el efecto de inyecciones con carbohidratos en elcrecimiento y vitalidad de Quercus virginiana.

    EXPERIMENTO 4

    � Árboles (20 cm ) cerca de College Station

    � Tratamiento: Inyecciones al tronco

    - macroinfusión

    * Micro o macro

    * Baja o alta presión

    INYECCIONES EN LOS ÁRBOLES

    • Solución - al sistemavascular (Xilema)

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    Carbohidrato Concentración (g L-1)Glucosa 0, 40, 80, 120Sacarosa 0, 40, 80, 120Mezcla (50% cu) 0, 40, 80, 120

    Materiales y Métodos

    � 10 L por árbolbase de la raíz

    � Aplicaciones: enero año1, año2

    � Diámetro� Crecimiento de raíz *� Contenido de carbohidratos� Fotosíntesis� Fluorescencia de clorofila� Composición isotópica de C *

    Materiales y Métodos

    * Medido a un año de la aplicación

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    � Análisis de datos

    - Completamente al azar

    -Estructura factorial (concentraciones y carbohidratos)4x3 aumentada por el control

    - Procedimiento GLM

    - SPSS v.13

    * Datos de composición isotópica de carbono

    * Prueba de Dunnett

    Materiales y Métodos

    RESULTADOS

    0

    0.1

    0.2

    0.3

    0.4

    0.5

    0.6

    control glucose mixture 50:50 sucrose

    Type of sugar

    Diam

    eter

    Gro

    wth

    Inde

    x(c

    m.c

    m-1)

    Índices de crecimiento en diámetro (cm cm-1) deQuercus virginiana inyectado con 3 tipos deazúcares (glucosa, sacarosa,y mezcla 50:50).

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    0

    0.20.4

    0.60.8

    11.21.4

    1.61.8

    2

    0 40 80 120

    Carbohydrate Concentration (g L-1)

    Tru

    nk in

    crem

    ent

    (cm

    )

    Media general del incremento en diámetro (cm) de Quercusvirginiana inyectado c on diferentes concentraciones decarbohidratos (0, 40, 80 y 120 gL-1).

    Resultados

    � La mezcla 50:50 (glucosa y sacarosa) causó unmayor incremento de los índices de crecimiento endiámetro.

    0

    5

    1 0

    1 5

    2 0

    2 5

    3 0

    3 5

    4 0

    0 40 80 12 0

    Ca rbohydra te Conce nt ra tion (g.L -1)

    Glu

    cose

    co

    nten

    t(m

    g.g

    -1 D

    W)

    0

    1 0

    2 0

    3 0

    4 0

    5 0

    6 0

    0 40 80 12 0

    Ca rbohydra te Conce nt ra tion (g.L -1)

    Sta

    rch

    con

    tent

    (mg

    glu

    cose

    .g-1

    DW

    )

    Efecto general de inyecciones con diferentes concentraciones de carbohidratos en elcontenido de glucosa para ramillas y almidón en raíces de Quercus virginiana.

    Resultados

    Ramillas Raíces

    � El contenido de glucosa en ramillas y de almidón enraíces mostraron un incremento en árboles tratadoscon las altas concentraciones de carbohidratos.

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    0.6

    0.65

    0.7

    0.75

    0.8

    0 40 80 120

    Carbohydrate Concentration (g.L-1)

    Chl

    orop

    hyll

    fluor

    esce

    nce

    (Fv/

    Fm)

    Efecto general de aplicación de carbohidratos por inyecciones altronco en cuatro concentraciones (0, 40, 80, y 120 g L-1) sobre lafluorescencia de clorofila (Fv /Fm) en Quercus virginiana.

    Resultados

    0

    � La fluorescencia de clorofila Fv/Fm se incrementósignificativamente en árboles tratados con altasconcentraciones de carbohidratos.

    Tratamiento Raíces RamillasTestigo -26.823 -30.530Glucosa 40 -26.437 -30.430Glucosa 120 -26.823 -30.037Sacarosa 40 -26.697 -29.973Sacarosa 120 -26.697 -29.157*

    Composición isotópica de carbono (�13C) en ramillas y raíces de Quercusvirginiana tratados con glucosa y sacarosa a 40 y 120 g L-1.

    Resultados

    * Significativamente diferentes P�0.05 usando la prueba de Dunnett.

    � La composición isotópica de carbono (�13C) nomostró una tendencia clara para corroborar ladistribución de fuentes exógenas de carbohidratos.

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    CONCLUSIONES GENERALES

    � Las diferencias en la concentración de carbohidratosentre los tejidos durante el año remarcan la necesidadde los órganos del árbol entre los periodos decrecimiento ydormancia.

    � Aunque el método de disoluciones no funcionó paradeterminar el efecto de carbohidratos en la actividadmicrobiana del suelo, los resultados con la técnica detitulación sugieren que la aplicación de carbohidratospuede funcionar como un método efectivo y prácticopara incrementar la actividad microbiana en el suelo.

    � La inyección con carbohidratos puede mejorar elcrecimiento y vitalidad de Quercus virginiana.Desafortunadamente, los valores de �13C nodemostraron una tendencia que corroborara laabsorción y distribución de fuentes exógenas decarbohidratos.

    CONCLUSIONES GENERALES

    � La aplicación de carbohidratos al suelo no produjo unefecto notable en el crecimiento de los árboles.Aunque la aplicación de altas concentraciones mostrócambios en el contenido de glucosa en ramillas y lafluorescencia de clorofila en hojas, dichas diferenciasfueron pequeñas yno mostraron una tendencia clara.

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    AGRADECIMIENTOS

    � Dr. W. Todd Watson (Consejero)� Dr. Michael Arnold � Dr. Leonardo Lombardini� Dr. David Appel

    Dudley Bernard, Russell Book, Corey Stover, Tim Rogers, Alejandro Alarcon, Lisbet Islas-Rodríguez

    � Environmental Design Inc.� Texas Forest Service� USDA Forest Service� Colegio de Postgraduados� Conacyt� SEP

    ¿Preguntas?����

    [email protected]