La inducción de la detención del ciclo celular y la apoptosis por flavonoides aislado de Corea

Citrus aurantium L. en células de cáncer de pulmón de células no pequeñas

Abstracto

Este estudio investigó el efecto antiproliferativo y apoptótica de flavonoides aislados de Corea Citrus aurantium L. utilizando células de cáncer de pulmón A549. Los flavonoides inhiben de forma potente de las células A549 en un dependiente de la dosis forma, mientras que los flavonoides tenían un efecto inhibidor débil sobre la proliferación de células WI-38. Caudal citometría y análisis de transferencia Western mostraron que los flavonoides indujeron la detención del ciclo celular en la fase G2 / M puesto de control mediante el control del nivel de proteínas de la ciclina B1 expresión, cdc2, Cdc25C y p21WAF1 / CIP1. También, flavonoides inducen la apoptosis a través de la regulación de la expresión de las caspasas, PARP troceados y Relación Bax / Bcl-XL. La actividad de la caspasa-3 en células A549 aumentó de una manera dependiente de la dosis. Estas Los resultados indican claramente que el efecto anticancerígeno de los flavonoides en las células A549 sigue múltiple celular vías a través de G2 / M detención y la inducción de apoptosis.

Introduction

A nivel mundial, el cáncer de pulmón es uno de los cánceres más comunes y las principales causas de la mortalidad relacionada con el cáncer. No microcítico de pulmón de células cáncer (NSCLC) representa más del 80% de todos los cánceres de pulmón. Los la mayoría de las terapias utilizadas ampliamente para CPNM son la quimioterapia, la radiación y la cirugía. A pesar de los avances en terapias, aproximadamente el 85% de pacientes con adenocarcinoma mueren dentro de los 5 años del diagnóstico y una tercio de los pacientes con enfermedad en estadio IV tienen una tasa de supervivencia a los 2 años <20% (Douillard, Eckardt, y Scagliotti, 2002; Erridge, Moller, Precio, y Brewster, 2007). En 2007 había 17.846 cáncer de pulmóncasos en Corea, que representan el 11% de todos los casos de cáncer en Corea. Aunque la tasa de supervivencia para el cáncer de pulmón ha aumentado gradualmente, Se necesitan nuevos agentes terapéuticos para mejorar esta tasa.

Los flavonoides comprenden una familia de polifenoles de origen natural compuestos de plantas. Tienen una benzoc- común pirona (phenylchromone) estructura química.

Las principales fuentes que contienen flavonoides son té, verduras y frutas como cítricos spp. (familia Rutaceae) (Nogata et al., 2006). En particular, Citrus spp. contiene abundantes flavonoides, incluyendo hesperidina, naringina y nobiletina (Benavente-García y Castillo, 2008). Los flavonoides son una medicina tradicional utilizada en varios países asiáticos debido a su antioxidante, antiviral, antiinflamatorio y anticancerígeno propiedades (Havsteen, 1983). La

ingesta de flavonoides reduce el riesgo de esófago de células escamosas y colorrectal cáncer (Rossi et al, 2007;.. Theodoratou et al, 2007)

Materials & methods

Reagents and antibodies

RPMI 1640 se adquirió de Hyclone (Logan, UT). Bovino fetal suero (FBS) y antibióticos (estreptomicina / penicilina) eran adquirido de Gibco (BRL Life Technologies, Grand Island, NY). 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio (MTT), sulfóxido de dimetilo (DMSO), yoduro de propidio (PI) y RNasa A se obtuvieron de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Hoechst 33342 se adquirió de Invitrogen Molecular Sondas (Eugene, OR). Los anticuerpos contra la ciclina B1, Cdc25C, cdc 2, p21WAF1 / CIP1, PARP escindida y b-actina se obtuvieron de Millipore (Billerica, MA). Anti-BAX, anti-Bcl-XL y anti-caspasa-3, -6, -8 Y -9 se adquirieron de Cell Signalling Tecnología (Danvers, MA). De rábano picante de cabra acoplado a peroxidasa anti-ratón IgG IgG y anti-conejo se adquirieron de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). Isotiocianato de fluoresceína (FITC) Annexin- Kit de detección de apoptosis V 1 fue adquirido de BD Biosciences (San Diego, CA). Materiales y productos químicos utilizados para la electroforesis se obtuvieron de Bio-Rad Laboratories (Hercules, CA). El kit de quimioluminiscencia se adquirió de Amersham Life Sciences (Amersham, Reino Unido). Todos los demás productos químicos eran de la calificación más pura disponible.

Isolation of flavonoids from Korean C. aurantium L.

Corea C. aurantium L. frutas se obtuvieron de la Citrus Genetic

Recursos del Banco, de la Universidad Nacional de Jeju. Los frutos fueron

se lavó con agua y se almacenó a? 70? C hasta la extracción. El fruto

la cáscara se molió finamente después de la liofilización en un aparato PVTED50A (Ilsin Biobase, Yangju, Corea). El polvo de la cáscara de la fruta (1,500 g) se extrajo utilizando un aparato de 2100 PT-MR (Kinematica, Lucerna, Suiza) en 3 l de metanol acuoso al 70% durante 24 h (n = 3). Los extractos se combinaron y se filtró usando un Buchner embudo. El filtrado se concentró hasta 140 ml usando un Eyela NVC-2100 rotavapor (Tokio RIKAKIKAI, Tokio, Japón). Veinte y cinco mililitros de agua y 3 g de NaOH se añadieron a el concentrado, que se extrajo con 200 ml de acetato de etilo.

Results

Characterisation and quantification of flavonoids

Las estructuras de 14 flavonoides diferentes se caracterizaron por tiempos de retención, masas de iones moleculares, y la comparación con la literatura datos. Ecromatograma de HPLC se representa en la Fig. 1A. La masa los datos espectrales y cuantificación se compilan en la Tabla 1. El 14 flavonoides se cuantificaron a partir de las áreas de los picos del cromatograma HPLC

registrado a 280 nm. La cuantificación de los flavonoides, respectivamente. Las curvas de calibración se construyeron trazando la concentración de la norma contra el área del pico. flavonoides de la planta para los que no se disponía de normas han sido rutinariamente cuantificado usando la curva de calibración de estructuralmente relacionada compuestos.

La inhibición del crecimiento de los flavonoides

Para evaluar los efectos de la inhibición del crecimiento y la supervivencia en A549 y las células WI-38, las células fueron tratadas con varias concentraciones (De 0-250 lg / ml) de los flavonoides. En comparación con el control (DMSO solamente), después de 24 h de tratamiento con los flavonoides, como se muestra en la Fig. 1B, flavonoides tenían un fuerte efecto inhibidor sobre la proliferación celular de A549 de una manera dependiente de la dosis. Especialmente, los flavonoides en 200 y 250 lg / ml disminuyó el crecimiento celular en aproximadamente un 52% y 46%, respectivamente. La IC50 (concentración inhibitoria 50%) deflavonoides fue de aproximadamente 230 lg / ml. Además, los resultados mostró que los flavonoides tienen un efecto antiproliferativo débil de lo normal línea celular, fibroblastos de embriones humanos, la línea de células de pulmón derivado WI-38.

Discussion

Hierbas medicinales derivados de plantas se han utilizado como una tradicional la medicina en los países asiáticos, como Corea y China. Mas que media de los fármacos contra el cáncer conocidos se originó a partir de plantas de hierbas. Productos de hierbas naturales, como los flavonoides están ganando atención como agentes terapéuticos para el cáncer. Los flavonoides dietéticos comunes en alimentos vegetales tienen actividad anti-cáncer contra el cáncer humano de células líneas (Middleton, Kandaswami, y Theoharides, 2000). En particular, naringina, nobiletina y exhibición hesperetina un efecto anti-cáncer la detención del ciclo celular y vía de la apoptosis en líneas celulares humanas (Kim et al., 2008; Luo, Guan, y Zhou, 2008).