Laboratorio de Caseina BIO1

7/25/2019 Laboratorio de Caseina BIO1

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Aislamiento de la protena de la leche

Integrantes:

Arteaga Orosco, Jos Luis Ricardo

Crdenas Torres, Percy Omar

Bustios Venancino, Joseph

Motta Muisaca Jean Caros!

Laboratorio debioqumica y

microbiologa

2016


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- La"oratorio de "io#u$mica y micro"ioog$a

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ndiceContenido1. OBJETIVO................................................................................................................... 3

1.1. eneral................................................................................................................3

1.2. E!"ec#co............................................................................................................ 3

2. I$T%O&'((I)$..........................................................................................................3

2.1. *undamento te+rico.............................................................................................3

2.1.1. La (a!ena en la lec,e.................................................................................. 3

2.1.2. -unto i!oelctrico........................................................................................../

3. 0ETO&OLO E-E%I0E$TL................................................................................../

3.1. IL0IE$TO &E L (EI$................................................................................/

3.2. -%E-%(I)$ &E L OL'(I)$ &E (E$....................................................../

3.3. &ETE%0I$(I)$ &EL -'$TO IOEL4(T%I(O &E L (E$.............................5

/. %E'LT&O 6 &I('I)$........................................................................................ 7

/.1. IL0IE$TO &E L (E$..............................................................................7

/.2. -%E-%(I)$ &E L OL'(I)$ &E L (E$.................................................7/.3. &ETE%0I$(I)$ &EL -'$TO IOEL4(T%I(O &E L (E$.............................7

5. (O$(L'IO$E..........................................................................................................8

7. BIBLIO%*............................................................................................................8

8. $EO....................................................................................................................... 8

Ttulo 2.......................................................................................................................... 8

Ttulo 3.......................................................................................................................8

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1. OBJETIVO

1.1. GeneralConocer el mtodo de extraccin y determinar algunas propiedades de la casena.

1.2. EspecfcoDeterminar el punto isoelctrico de la casena.

2. INTRO!CCI"N

2.1. #$nda%ento te&rico

2.1.1.'a Casena en la lec(eLa leche contiene vitaminas, principalmente tiamina, riboflamina, cido pantotico,

vitamina , D y !, minerales, calcio, potasio, sodio, fosforo y metales en pe"ue#ascantidades, protenas incluyendo todos los amino cidos esenciales, carbohidratos,lactosa y lpidos. $n la leche hay tres clases de protenas% casena, lacto alb&mina y lactoglobulinas, todas globulares.

La casena es una protena con'ugada de la leche del tipo fosfoprotena. Los gruposfosfatos de las protenas "ue la constituyen% alpha(s)*, alpha(s+*casena, -casena, yappacasena estn unidos entre s por los grupos hidroxilo de los aminocidos serina ytreonina formando una micela. /i la alfa ni la beta casena son solubles en la leche, solaso combinadas. 0i se a#ade la appa casena a las dos anteriores o a cada una de ellas por

separado se forma un comple'o de casena (micela* "ue s es soluble.

La casena en la leche se encuentra en forma de sal clcica (caseinato clcico*. La casenarepresenta cerca del 11 al 2+3 de las protenas presentes en la leche y el +.13 encomposicin global de la leche l"uida.

4na propiedad caracterstica de la casena es su ba'a solubilidad a p5 6.7. $l p5 de laleche es 7.7 aprox. (ligeramente cida* en estas condiciones la casena est cargadanegativamente y solubili8ada como sal clcica (caseinato de calcio*.

0i se a#ade cido a la leche, la carga negativa de la superficie de la micela se neutrali8a(los fosfatos se protonan* y la protena neutra precipita.

2.1.2.)$nto isoel*ctrico

9odas las macromolculas de la naturale8a ad"uieren una carga cuando se dispersan enagua. 4na caracterstica de las protenas y otros biopolmeros es "ue la carga total "uead"uieren depende del p5 del medio. s, todas las protenas tienen una carga netadependiendo del p5 del medio en el "ue se encuentren y de los aminocidos "ue lacomponen, as como de las cargas de cual"uier ligando "ue se encuentre unido a la

protena de forma covalente (irreversible*. Debido a la composicin en aminocidos de la

protena, los radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del p5 del medio%catinicos, neutros y aninicos.

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Cual"uier protena tendra una carga neta positiva si se encuentra en un medio losuficientemente cido debido a "ue los grupos COOHde los aminocidos asprtico yglutmico estaran en su forma neutra pero los grupos amino de rginina y lysina estaran

protonados (/5: ;*.

De igual forma si la protena se encuentra en un medio con un p5 muy alto estaracargada negativamente ya "ue en este caso los grupos carboxilo estaran desprotonados(COO -* y los grupos amino estaran en su forma neutra (/5+*.

De lo anterior se deduce "ue las protenas tienen un p5 caracterstico al cual su carga netaes cero. este p5 se le denomina punto isoelctrico (p?ml de leche y luego con agitacin magntica ir a#adiendo cidoactico )/, hasta "ue se forme precipitado (indicara el p5 de la casena*

+. Aesar el papel filtro y colocar de manera apropiada en el embudo buchner y el matra8itasato.

:. Lavar el precipitado en el mismo filtro con >?ml de agua destilada y +? ml de etanol.6. Colocar el papel filtro con el precipitado en una luna de relo'

+.2. )RE)RCI"N E ' 0O'!CI"N E C0EN). Aesar aproximadamente ?.+> gramos de casena en un vaso de >?ml.+. gregar +? ml de agua destilada y >ml de /aB5 )/, y me8clar hasta formar una solucin

homognea.:. La solucin anterior trasvasar a un matra8 aforado de >?ml, y a#adir >ml de cido actico)/ y completar hasta los >?ml. La solucin resultante es casena en acetato sdico al?.)/ ?.>3.

+.+. ETER,INCI"N E' )!NTO I0OE'CTRICO E 'C0EN

). Areparar tubos limpios, secos y rotular los tubos a#adir los vol&menes de los reactivosseg&n la tabla ), siendo primero el agua destilada, luego el cido actico y al final lasolucin de la casena ya antes preparada.( me8clar suavemente el contenido de cadatubo*

9abla ). AE$AEC


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/G

Casena (?.>3* en

C5:CBB/a ?.) /

(ml*

gua

destilada

(ml*

C5:CBB5

?.?)/ (ml*C5:CBB5?.) / (ml*

C5:CBB5

) / (ml*

) ) 2.6 ?.7

+ ) 1.2 ).+

: ) 2.2 ?.+

6 ) 2.> ?.>

> ) 2 )

7 ) 1 +

1 ) > 6

2 ) ).? 2.? ) 1.6 ).7

+. Hedir experimentalmente el p5 a todos los tubos, "ue debe estar seme'ante al rangoterico (entre : y 7.?*.

:. Bbservar el grado de turbide8 o de precipitacin "ue se produce en cada tuboinmediatamente despus de prepararlo y transcurridos ?, >, )> y :? minutos,notando en la 9abla + con cruces la intensidad del precipitado o turbide8 como%

/o precipitado (*

Aoco precipitado (;*

Hoderado precipitado (;;*

Hximo precipitado (;;;*

6. Calcular el p5 terico de cada tubo usando la ecuacin de 5enderson 5asselbalch yanotarlo en la 9abla + e indicar el punto isoelctrico aproximado de la casena.

. RE0!'TO0 3 I0C!0I"N.1. I0',IENTO E ' C0EN

Observaciones:

Cuando se mide el p5, la solucin debe estar a una temperatura mxima de 6?GC, este p5debe llegar alrededor de 6.7 "ue sera el p5 de la casena. (la solucin es de un color

blan"uecino*.

ntes de hacer uso del papel filtro este se debe pesar, esto nos servir para determinar lamasa de casena producida.

segurar el papel filtro en el embudo buchner para "ue sea efectiva la succin al vaco.

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Discusin:

$l agua destilada adicionada al precipitado en el papel filtro se us para ba'ar la acide8, y elalcohol para eliminar los posibles restos de grasas. 0in embargo, no se utili8 el ter etlico

para obtener un mayor porcenta'e y calidad de casena.

.2. )RE)RCI"N E ' 0O'!CI"N E ' C0EN

Observaciones:

l me8clar los ?.+> gramos de casena, se debe observar una solucin homognea, es decirla casena debe estar completamente disuelta.

l aforar el matra8 de >?ml con agua destilada le ba'amos la acide8 a la solucin.

La solucin preparada al final debe ser clara y limpia, en caso contrario filtrar la solucinantes de poder usarlo.

Discusin:

La solucin obtenida de la casena, no se puede decir "ue sea una solucin adecuada, debidoa "ue no se llev acabo un paso en el tem :.), por lo "ue esto afecta a la solucin de lacasena.

.+. ETER,INCI"N E' )!NTO I0OE'CTRICO E 'C0EN

Observaciones:

TubosPrecipitad

o 0 min

Precipitad

o 5 min

Precipitad

o 15 min

Precipitado 30

min

pH

medido

pH

terico

1 --- --- --- --- )).+

2 --- --- --- --- )).:

3 --- --- --- --- )).+

4 --- --- --- --- .2

5 --- --- --- --- >.+

6 --- !aumenta un

poco"

!aumenta un

poco"6.2

# --- !aumenta un

poco"

!aumenta un

poco"6.+1

$ --- !aumenta un

poco"

!aumenta un

poco":.1

% --- --- --- --- :.7>

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Discusin:

4. CONC'!0IONE0

4.1. I0',IENTO E ' C0ENo 0i bien se ba'a la acide8 y las grasas presentes con el agua destilada y etanol

respectivamente, esto no asegura obtener un precipitado de casena puro.

4.2. )RE)RCI"N E ' 0O'!CI"N E ' C0ENo La solucin obtenida no es clara debido a "ue la casena empleada para la preparacin

de la solucin tenia consigo impure8as tales como grasas, etc.

4.+. ETER,INCI"N E' )!NTO I0OE'CTRICO E 'C0EN

5. BIB'IOGR#

ngel, I. B. (+??7*. Introduccin a la Quimica Industrial.Jarcelona, $spa#a% Eevert.Eecuperado el ++ de ?> de +?)7.

Dergal, 0. J. (+??7*. Qumica de los alimentos (Cuarta ed.*. Hexico, Hexico% AearsonEecuperado el ++ de ?> de +?)7.

6. NE/O&'()*'+ D' ,)'(TO+.&O

). .p/icacin a/imentaria e ndustria/ de /a casenaa* La casena fosfoclcica se utili8a para preparar materias plsticas, donde el producto es

termoplstico, como para peines, bisutera, bolas de billar, 'uguetes, etc.b* La casena acida con cidos generalmente con 5Cl, sulf&rico o lctico, cuando se me8cla

con una disolucin alcalina se usa para impregnar papel y materias textiles, los cuales"uedan impermeabili8ados despus de tratar con formol, se puede usar en acabados decueros, produccin de pomadas y cosmticos, clarificadores del vino, etc.

c* La casena precipitada con cido lctico "ue es el re"uesn, tiene gran importancia dentro de

la industria alimentaria para obtencin de distintos tipos de "uesos.

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2 Puntos isoe/ctricos de /as casenas a/a beta appa

uente: Kumica de los alimentos,JD4< D$EL.

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