Lambda. Cuestións de aplicación. Lección 1. Enzimas de restricción. Un par de cuestións traballando cos datos das bases de datos moleculares.

Accede á páxina do NCBI coa secuencia completa do fago lambda: (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/215104) e contesta ás seguintes preguntas:

1. Localiza as secuencias palíndromicas de corte das enzimas EcoRI (GAATTC/CTTAAG), HindIII (AAGCTT/TTCGAA) e PstI (CTGCAG/GACGTC). Cantos fragmentos se espera que produzan os ataques sobre o xenoma completo do fago lambda con cada un deses enzimas?

2. Cantos pares de bases ten cada un deses fragmentos? Se non es quen de resolver esta pregunta na páxina do NCBI, podes usar o geneboy (http://www.dnai.org/geneboy/) para resolver esta cuestión.

Unhas cuestións sobre o realizado no laboratorio.

1. Describe o aspecto macroscópico do ADN en disolución. É visible o ADN? (Podes tomar como referencia para comparar o que viches na práctica “xenética a domicilio”). Se pensas que hai algunha diferencia entre as dúas observacións, a que se pode deber?

2. Enche a táboa seguinte cos volumes usados na práctica.

Tubo Lambda Tampón PstI EcoRI HindIII

P 4μL

E

H

L

3. En que tubo pensas que non vai a haber cambios, que non se van a producir fragmentos de restricción do ADN?

4. Compara o tubo P e o tubo L, qué pensas que pasará no tubo P comparado co tubo L? Xustifica a resposta.

5. Se o ADN aparecese fragmentado ó final da reacció no tubo L, que teríamos que teríamos que concluir?

Lección 2. Electroforese en xel de agarosa

1. Indica cal será o ordenamento relativo dos fragmentos de ADN segundo o seu tamaño,

dentro do xel de agarosa. Indica cal é a causa de ese ordenamento.2. Supoñendo que tiveramos 500 pequenos anacos de cada un dos catro fragmentos

logo dun tratamento con enzimas de restricción, cantas bandas aparecerían no xel de agarosa?

3. Enche a seguinte táboa cos datos obtidos na práctica:

M M L L PstI PstI EcoRI EcoRI HindIII HindIII

mm pb mm pb mm pb mm pb mm pb

Banda 1

Banda 2

Banda 3

Banda 4

Banda 5

Banda 6

mm= distancia en mm; pb= número de pares de bases do fragmento Lección 3. Cómo se fai para converter en visible o ADN migrado nun xel de agarosa.

1. Indica a utilidade do tampón de carga e da tinción Fast Blast.