Se caracteriza por la inflamación del hígado y del bazo, acompañada por distensión abdominal severa, pérdida de condición corporal, desnutrición y anemia.

La leishmaniasis visceral es causada por Leishmania donovani y L. infantum, protozoarios flagelados del género

leishmania.

Se transmite a través de la picadura de mosquitos hembras, de los géneros phlebotomus y lutzomia. Se lo conoce como arenillas

Por el calentamiento global, estas enfermedades vectoriales se incrementarían en el futuro.

El mantenimiento en las tasas de infección humana es debido a que el vector se adapta a las nuevas condiciones ecológicas

La leishmaniasis visceral puede ser mortal, por lo que el diagnóstico temprano y el tratamiento oportuno son indispensables.

Prueba de Inmunofluorescencia Indirecta ( IFI)

Enzimoinmunoensayo con péptido recombinante rK39 (ELISA rK39)

Prueba de Aglutinación Directa (DAT) Prueba inmunocromatográfica rápida rK39 Prueba de la hirpersensibilidad retardada Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

1. Se inactivan los sueros 30 minutos a 56°C.2. Se hacen diluciones de los sueros de ensayo 1/80 y 1/160 3. 30μl de muestra de suero diluido y se incuba durante 30 min a

37°C.4. lavado vigoroso con PBS durante 10 min. Se deja secar.5. 30 μl de solución diluida de anti-Ig conjugada a isotiocianato de

fluoresceína (FITC) y se incuba 30 min a 37°C. 6. repetir paso 4 y se monta con un cubre en unas cuantas gotas de

PBS (solución salina tamponada con fosfato)/glicerol (50% [v/v]).7. Se observan los portas en un microscopio de fluorescencia. El título

de los anticuerpos es la mayor dilución que muestra promastigotes fluorescentes. El título umbral varía de 1/80 a 1/160.

En pocillos de placas de microtitulación se preparan diluciones dobles seriadas de suero en PBS (solución salina tamponada con fosfato); se añaden 50 μl de preparación de antígeno (promastigotes de L.donovani), se agita la placa y se deja 18 horas a temperatura ambiente.

Las reacciones positivas indican un botón azul de bordes limpios.

La reacción de color se revela con peróxido de hidrógeno y orto-fenilendiamina. Las densidades ópticas se determinan a 415 nm en un lector de placas de microtitulación. Se establece como punto de corte el máximo valor de densidad óptica obtenido en las muestras de los individuos controles: 0,060.

Positivo: densidad óptica igual o superior al punto de corte. Negativo: menor de 0,060Escala de resultados cualitativa: muy débil (0,060 a 0,100), débil (0,100 a 0,400), moderado

(0,400 a 0,700), fuerte (mayor de 0,700).

Sensibilizar placas para micro-titulación con 1,6 µg/ml de péptido recombinante rK39Se utilizó el antisuero polivalente conjugado a peroxidasa, en una dilución 1/5.000.

incubar con las muestras de suero diluidas 1/100.

Para un análisis a gran escala, la prueba ELISA es la mejor elección.

En situaciones en las que se requiera un diagnóstico urgente, la prueba inmunocromatográfica rK39 es la más indicada; de lo contrario, las pruebas de aglutinación directa y ELISA son las mejores alternativas.

La mejor técnica para la detección de leishmaniasis es el método de ELISA rK39 porque hay poca reacción cruzada con otras enfermedades y por su sensibilidad y especificidad del 97%.

El antígeno recombinante de una proteína clonada de L. infantum, llamada rK39, es muy reactiva con los sueros de leishmaniasis visceral humana.

En pacientes positivos para el HIV, el ELISA-K39 mostró una mayor sensibilidad (82%) que la prueba IFI (54%).