InstruccIonesSuspender 37,3 g del polvo en 600 ml de agua purificada y agregar 12 ml de glicerina. Calentar agitando continuamente y hervir un minuto para disolucin total. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar a 50C aproximadamente.

usoBase utilizada para la preparacin de diferentes medios destinados al aislamiento, cultivo y diferenciacin de micobacterias, fundamen-talmente Mycobacterium tuberculosis.

FundamentoOriginalmente la frmula de Lowenstein de 1931 contena los in-dicadores rojo congo y verde de malaquita. En 1932 Jensen modi-fic el medio eliminando el rojo congo e incrementando la concen-tracin de verde de malaquita.Los nutrientes de este medio basal, ms los aportados por el agre-gado de la mezcla de huevos, constituyen un rico soporte para el crecimiento de una gran variedad de micobacterias excepto Myco-bacterium leprae. El verde de malaquita inhibe el desarrollo de la flora acompaante Gram positiva y de algunas bacterias Gram ne-gativas. Con el agregado de glicerina se estimula el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis, aunque gran parte de Mycobacterium bovis es inhibido. Si se adiciona cloruro de sodio al 5%, se pueden seleccionar micobacterias tolerantes a la sal, como es el caso de Mycobacterium smegmatis.

contenIdo y composIcInCdigo B0215605: envase x 100 g.Cdigo B0215606: envase x 500 g.

Lowenstein Jensen Medio Base

FrmuLa (en gramos por litro)FOSFatO MOnOpOtSiCO .........................................................................................2.5

SuLFatO DE MaGnESiO .............................................................................................0.24.

CitratO DE MaGnESiO .................................................................................................0.6

aSparraGina .........................................................................................................................3.6

Harina DE papa ................................................................................................................30.0

VErDE DE MaLaquita ...................................................................................................0.4.

pH FinaL: 4..8 0.2

B0215606B0215605

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Mezclar aspticamente un litro de huevo ntegro, evitando la forma-cin de burbujas de aire y agregar al medio base ya esterilizado y a una temperatura aproximada de 50 C. Mezclar el huevo y la base hasta uniformar. Distribuir en tubos estriles y tapar hermticamen-te. Colocar los mismos en posicin inclinada y coagular a 85-90C durante 4.5 minutos.

caracterstIcas deL productoMedio de cultivo deshidratado: color verde, homogneo, libre des-lizamiento.Medio de cultivo preparado: color verde plido, opaco.

aLmacenamIentoMedio de cultivo deshidratado a 10-35 C.Medio de cultivo preparado a 2-8 C, en la oscuridad.

procedImIentoIndicaciones sobre la recoleccin y el tratamiento de las muestrasrealizar un estudio seriado con tres cultivos por cada paciente para aumentar la posibilidad de aislar al germen y en caso de tratarse de una micobacteria diferente al Mycobacterium tuberculosis, el estu-dio seriado permite contar con suficientes aislamientos para consi-derar a dicha micobacteria como responsable de la enfermedad. La muestra a analizar tiene que ser representativa, de calidad y cantidad, es decir provenir de la lesin a estudiar y en cantidad suficiente.

Mediante tcnica asptica, recolectar la muestra en recipiente es-tril perfectamente rotulado y conservarla refrigerada hasta su en-vo al laboratorio.Esputo: recolectar en un frasco estril todas las expectoraciones obtenidas durante 12 horas. Hisopado larngeo: recolectar la muestra mediante el uso de hiso-pos estriles.Lavado gstrico, lavado bronquial, aspirado bronquial, lquido ce-falorraqudeo, lquido peritoneal, pericardio, lquido sinovial y pus: recolectar en frasco estril.Orina: recolectar por separado en frascos estriles la ltima orina nocturna y la primera orina de la maana. En el laboratorio mezclar

Lowenstein Jensen Medio Base

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ambas muestras. Dejar reposar en heladera durante 24. horas luego centrifugar y analizar.piezas quirrgicas, biopsias, ganglios: triturar las muestras en mor-tero con 2 ml de agua destilada estril y una pequea cantidad de arena estril para obtener una papilla que ser utilizada en la siembra.primeramente, realizar el exmen microscpico directo de la mues-tra y posterior coloracin de Ziehl-neelsen. no aconsejamos reali-zar el examen directo a las muestras de orina y de lavado gstrico. se recomienda decontaminar la muestra antes de ser ino-culada. Las tcnicas de decontaminacin dependern de la muestra en estudio y son las siguientes:

tcnica de decontaminacin:Esputo: agregar igual volumen de naOH 4.% y agitar peridica-mente durante 30 minutos a 37 C. Luego transferir a un tubo de centrfuga y centrifugar durante 30 minutos a 3000 r.p.m. Volcar el sobrenadante sobre un recipiente que contenga desinfectante fenlico y utilizar el sedimento para efectuar nuevos extendidos, neutralizacin y posterior siembra.Contenido grstico, lavado bronquial y aspirado bronquial: centrifu-gar 30 minutos a 3000 r.p.m. Descartar el sobrenadante. agregar al sedimento 3 ml de naOH 4. % y luego proceder como se describi para el esputo.Orina: sedimentar 24. horas en heladera. Descartar el sobrena-dante. Centrifugar el sedimento a 3000 r.p.m. durante 30 minutos. Descartar el sobrenadante y llevar a 3 ml con solucin fisiolgica estril. agregar 3 ml de naOH 4.% y proceder de la misma manera que para el esputo.Lquido pleural, lquido asctico y lquido cefalorraqudeo: centrifu-gar la muestra y descartar el sobrenadante. Observar microscpi-camente el sedimento, el cual si no presenta grmenes no agregar naOH 4.% y sembrar en forma directa.Biopsias: agregar 5 ml de agua destilada estril y centrifugar 1500 r.p.m. durante 10 minutos. Decantar y centrifugar el sobrenadante a 3500 r.p.m. durante 30 minutos. Sembrar el sedimento en forma directa previa homogeinizacinHisopado larngeo: En la etapa de la decontaminacin y concentra-cin, introducir el hisopo conteniendo la muestra en el tubo estril que contiene partes iguales de naOH 4.% y agua destilada estril, presionando contra las paredes del tubo para desprender el mate-rial adherido al hisopo. toda muestra decontaminada debe ser neutralizada previo a su siembra.Se recomienda utilizar H

2SO4. 5% en presencia del indicador rojo de fenol a pH neutro que da color salmn. no es aconsejado el uso de HCl por la formacin de cloruro de sodio que puede ser nocivo o txico para el bacilo de Koch.

siembra inocular aproximadamente 0,5 ml por tubo sobre la superficie del medio de cultivo. rotar los tubos para lograr una distribucin homo-gnea de la muestra.Generalmente se siembran dos tubos de Lowenstein Jensen y un tubo de Stonebrink Medio. Este ltimo contiene piruvato de sodio y favorece el desarrollo de cepas disgnicas como bacilos isoniazida resistentes y sobre todo de Mycobacterium bovis que es causal de algunos casos de enfermedades humanas.

IncubacinEn aerobiosis, a 35-37C.Observar los cultivos dos veces por semana y registrar el tiempo de aparicin de las colonias.Si no se observa desarrollo, incubar hasta 8 semanas.importante: incubar los tubos con las tapas flojas, inclinados 5 aproximadamente en bandeja adaptada con varilla de vidrio y ex-tremos ajustados con tubos de goma. Esta posicin evita que el inculo contacte con la parte superior del tubo.Controlar a las 72 horas los tubos sembrados. Si el inculo ha sido absorbido, ajustar las tapas y agrupar los tubos con igual identifica-cin. Si an estn hmedos, incubar hasta que se sequen y luego ajustar las tapas.

InterpretacIn de Los resuLtados Observar las caractersticas morfolgicas y la presencia o ausen-cia de pigmento en las colonias. tener en cuenta el tiempo que ha transcurrido desde la inoculacin hasta la observacin de cre-cimiento.Los cultivos positivos generalmente se observan entre los 13 y 28 das de incubacin, dependiendo del contenido de bacilos en las muestras sembradas, mientras que el 3% de las micobacterias sue-le crecer a los 4.0 das de incubacin.La aparicin de colonias color crema, rugosas o cremosas, amari-llentas, es indicio de cultivo positivo, el cual ser confirmado rea-lizando la coloracin de Ziehl-neelsen a un extendido del mismo, para determinar la presencia de bacilos cido-alcohol resistentes (Baar).De la misma manera se proceder para los cultivos contaminados y cultivos negativos (cuando no se observen colonias).

La intensidad de positividad se informar segn las normas latinoamericanas:Colonias confluentes: positivo (xxx) Colonias separadas: positivo (xx) De 20 a 100 colonias: positivo (x)Menos de 20 colonias: positivo. informar el recuento obtenidono se observan colonias: negativo

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CrECiMiEntO

Satisfactorio

controL de caLIdad

MiCrOOrGaniSMO

Mycobacterium tuberculosis H37ra

atCC 25177

COntrOL DE EStEriLiDaD rESuLtaDO

Medio sin inocular Sin cambios

Lowenstein Jensen Medio Base

Cultivo contaminado: desarrollo en la primera semana de incuba-cinEnviar los cultivos positivos a laboratorios de referencia para reali-zar la tipificacin y las pruebas de sensibilidad a los quimioterpicos antibacilares.

LImItacIones- El crecimiento de Mycobacterium bovis puede estar disminudo en este medio debido a la presencia de glicerina. Se recomienda no agregarla a los medios cuando se quiera aislar micobacterias bovinas. En este caso utilizar el medio Stonebrink.- Considerar y reportar los resultados negativos luego de 8 sema-nas de incubacin en aerobiosis, a 35-37 C.- El medio preparado es color verde plido y puede tener reas de partculas amarillas debido a los lpidos de la yema de huevo. no confundir esto con el crecimiento de microorganismos.- previo a la inoculacin de la muestra, mantener los tubos bien cerrados para evitar la contaminacin y desecacin del medio de cultivo. tambin porque la presencia de un ambiente hmedo es necesario para el desarrollo de las micobacterias. - Mantener el medio de cultivo al abrigo de la luz ya que el verde de malaquita es fotosensible.- todas las muestras durante su recoleccin y/o extraccin deben mantenerse al abrigo de la luz, refrigeradas, y ser remitidas lo ms pronto posible al laboratorio. En caso de deshidratacin, agregar agua purificada estril y no solucin fisiolgica.- Si los tubos presentan agua de condensacin, es necesario ex-traerla antes de efectuar la siembra.

materIaLes necesarIos no provIstosEquipos y material de laboratorio, microorganismos para control de calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales segn requeri-miento.

precaucIones- Solamente para uso diagnstico in vitro. uso profesional exclu-sivo.- no utilizar el producto si al recibirlo su envase est abierto o da-ado.- no utilizar el producto si existen signos de contaminacin o dete-rioro, as como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.- trabajar en ambiente aislado y cerrado. utilizar bandejas de acero inoxidable para su fcil desinfeccin con fenol al 5 por ciento, o alcohol y fuego directo.- utilizar guantes, barbijo, anteojos o mscara y ropa protectora cuando se manipula la muestra y el producto. Las propipetas o pi-petas tienen que estar adaptadas con pera de caucho; las pipetas sea cual fuere el dispositivo que se adapte deben tener colocado un algodn firme en el extremo superior. utilizar todos los materia-les intervinientes en la tcnica esterilizados en autoclave preferen-temente y pipetas en pipetero de metal.- Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y ma-nipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad establecidas por el laboratorio. En caso de utilizar centrfugas, de-ben tener sistemas de bioseguridad que impidan la diseminacin de aerosoles.- Las caractersticas del producto pueden alterarse si no se conser-va apropiadamente.- Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del mismo segn reglamentaciones vigentes.

reFerencIas- Lowenstein. E. 1931. Zentralbl. Bakteriol. parasitenkd. infektions-kr. Hyg. abt. i Orig.120:127.- Jensen, K.a. 1932. Zentralb. Bakteriol. parasitenkd. infektionskr. Hyg. abt. i Orig. 125:222.- nelles a. 1966. Methodes Simples de traitement preliminaire des Echantillons. Bull. int. un. tuber., 38: 72.- Cetrngolo abel. 1971. Diagnostico Bacteriolgico de la tubercu-losis. reseas de Diagnstico, publicacin Lepetit, 4.: n 8. -Manual de Bacteriologa de la tuberculosis. tcnicas y procedi-mientos Bsicos. Washington D. C. OpS. (CD/tB/St/LaB), 1973.- Borda Bossana de texidor D., texidor C., Domenech de Kwint M. C., Volpe de Molina E. y pasquinelli E. 1977. nuevo Mtodo Sen-cillo y Econmico para Facilitar el Cultivo del Bacilo tuberculoso, rev. argentina de tuberculosis y Enfermedades pulmonares, 38: 18 34..- Borda Bossana de texidor, texidor C., Smith de Marchesini L. y

LABORATORIOS BRITANIA S.A.LOS PATOS 2175 (C1283ABI)CABA - ARGENTINA TEL/FAX 54 11 4306 0041

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LMitE DE tEMpEratura

inStruCCiOnES DE uSO

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Lowenstein Jensen Medio Base

Domenech de Kwint M. C. 1979. Crecimiento precoz del Bacilo tu-berculoso con nuestro Mtodo Sencillo y Econmico incorporndo-le Enriquecedores, actas del XVii Congreso argentino de tisiologa y neumonologa. 687-691.- Borda Bossana de texidor D., texidor C., Domenech de Kwint, M. C. y Barrera. 1982. ampliacin de Experiencias con nuestro M-todo Sencillo y Econmico para Cultivar al Bacilo tuberculoso. in-corporacin de Enriquecedores que aceleran su Crecimiento, Bull. uiCt. 57: n 1. 58. - Domenech de Kwint M. C., Borda Bossana de texidor D., texidor C., Gotlieb D. a. tcnica: Miraglia de Christin S. 1985.tcnica de precipitacin previa al Cultivo del Bacilo de Koch en Orina. presen-

tacin iV Congreso argentino de Microbiologa. Lib. de res. C3.- MacFaddin. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, volume 1. Williams & Wilkins, Bal-timore, Md.- Forbes, Sahm and Weissfeld. 1998. in Bailey & Scotts diagnostic microbiology, 10th ed. Mosby.- isenberg (ed.). 1992. Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. american Society for Microbiology, Washington, D.C.

IndIcacIones aL consumIdorutilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.Conservar el producto segn las indicaciones del rtulo.