Manual de prácticas bacteriología II FMVZ UAT - 2 _Gabriel Aguirre_

Manual de prcticas de bacteriologa II

Universidad Autnoma de Tamaulipas Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Dr. Norberto Trevio Zapata

Bacteriologa II

Manual de prcticas versin 1.0

Autor: Hugo Barrios, MVZ.

Ciudad, Victoria, Tamaulipas. Enero de 2009.1/55

Dr. Hugo Barrios


Directorio

Universidad Autnoma de Tamaulipas

Rector Ing. Jos Ma. Leal Gutirrez Secretario General Dra. Olga Hernndez Limn Sub secretario Acadmico Ing. Jos A. Surez Fernndez Secretario Administrativo Ing. Marco Antonio Delgado Barrio

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Director MVZ. Jorge Luis Zertuche Rodrguez Secretario Acadmico MVZ. Frncisco Manuel Guzmn Sanz Secretario General MVZ. Ernesto Carlos Lerma Doria

2/55

Dr. Hugo Barrios


ndice: 1 Introduccin 1.1 Presentacin 1.2 Competencias profesionales 1.3 Nivel de desempeo 1.4 Nmero de profesionales en formacin 2 Programa del sistema de prcticas 3 Prctica 1. Aspectos generales de seguridad 3.1 Reglas del laboratorio 3.2 Procedimiento del laboratorio 3.3 Materiales indispensables para cada sesin de laboratorio Prctica 2, Toma y envo de muestras Prctica 3, Aislamiento de bacterias Prctica 4, Cocos y bacilos Gram positivos aerobios Prctica 5, Enterobacterias Prctica 6, Bacilos Gram negativos no fermentadores Prctica 7, Bacilos Gram positivos esporulados Prctica 8, Evaluacin de agentes antimicrobianos Apndice Formato 1, Toma y envo de muestras Formato 2, Caractersticas de colonia Formato 3, Hoja de trabajo Imagen 1, Descripcin de colonia Imagen 2, Mtodo de siembra Imagen 3, Pruebas primarias Diagrama 1, Cocos Gram positivos Diagrama 2, Bacilos Gram positivos Lista de cotejo3/55

Pgina 5 5 6 7 7 8 9 9 10 10 11 17 22 27 32 36 40 47 48 49 50 51 52 53 54 55

Dr. Hugo Barrios


1. Introduccin 1.1 Presentacin: La microbiologa es una ciencia relativamente reciente comparado con otras ciencias; El estudio de los microorganismos se inicio a partir de que Antonie van Leeuwenhoek en 1670 invent el microscopio y que partir de estudios de Luis Pasteur en 1876, se logr el desarrollo y reconocimiento de los microorganismos como actores de una gran variedad de procesos. Durante mucho tiempo, estos organismos causaron graves problemas de enfermedades en plantas, animales y humanos; sin embargo tambin se han utilizado en diferentes procesos industriales desde la antigedad como en la produccin de quesos, vino, pan y cerveza. Actualmente se reconoce su importancia en diversas reas de la investigacin bsica, en la industria de alimentos, ambiental y farmacutica. La materia de bacteriologa II se encuentra ubicada en el 4 semestre de la carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia, ubicada dentro de las materias intermedias o mdicas. De acuerdo a las competencias profesionales se encuentra en el nivel 2 de desempeo. Esta asignatura es consecuente a la de bacteriologa I, donde se abordan las partes generales de rea de estudio. En esta segunda parte nos enfocamos a recoleccin, conservacin y envo de muestra al laboratorio para su procesamiento para identificar el agente causal de la enfermedad y determinas la drogo resistencia de este microorganismo para dar un tratamiento adecuado (ver mapa curricular). Este manual est dirigido a fortalecer el conocimiento que adquieras durante la formacin terica como estudiante de Medicina Veterinaria en el rea de bacteriologa. El propsito de este manual es proporcionar una gua general para el trabajo de laboratorio mediante una serie de prcticas que contemplan la forma adecuada de tomar y enviar muestras al laboratorio de bacteriologa que favorezcan al xito de su diagnstico clnico, hasta las tcnicas bsicas y principios generales de diagnstico. Este Manual contiene 6 prcticas, diseadas para que el te familiarices gradualmente con los procedimientos de cultivo y observacin de bacterias. El orden de presentacin, corresponde al programa del curso terico semestral de Bacteriologa II que forma parte

4/55

Dr. Hugo Barrios


del plan de estudios de la carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia de esta Universidad. En cada prctica se presenta el propsito de la realizacin del ejercicio y una breve introduccin para facilitar la compresin de los mismos, despus se indican los materiales necesarios y procedimientos a realizarse.

5/55

Dr. Hugo Barrios

Manual de prcticas de bacteriologa II R-RS-01-25-02

NOMBRE DEL PROGRAMA ACADEMICO: MEDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA SECUENCIA CURRICULAR

6/55

Dr. Hugo Barrios


1.2 Competencias profesionales: Al trmino del curso sers competente para: Colectar y conservar muestras de problemas clnicos de animales utilizando los diferentes mtodos de toma de muestra en forma adecuada, a partir de los diferentes procesos patolgicos para enviar al laboratorio de bacteriologa. Aprender que la coordinacin de una adecuada toma y envo de muestra repercute en la integracin del diagnstico clnico. Procesar las muestras recibidas en el laboratorio de diagnstico de bacteriologa para determinar la presencia de bacterias a partir de casos clnicos de diferentes sistemas del animal, adems de determinar cuales podran ser de flora normal y cuales de un proceso patolgico. Identificar los gneros y especies a partir de evaluacin del metabolismo bacteriano por el uso de pruebas bioqumicas. Integrar el diagnstico clnico en base al resultado obtenido en el estudio bacteriolgico. Seleccionar el tratamiento adecuado por el uso de antibiticos cuando hayas evaluado diferentes drogas contra el agente etiolgico causante de la enfermedad. Prevenir la drogo resistencia cuando seleccione adecuadamente la droga que usaras para el tratamiento de los animales enfermos. Apoyar con calidad, en forma tica y responsable la promocin en salud, la prevencin de la enfermedad, diagnstico y vigilancia epidemiolgica, contribuyendo as a la solucin de la problemtica de salud a nivel local, regional y nacional.

7/55

Dr. Hugo Barrios


1.3 Nivel de desempeo: El desempeo ser evaluado con el llenado de una lista de cotejo (anexo) por el propio profesionista en formacin; tambin por el inters que presentes al realizar la preparacin de la prctica; se har una evaluacin escrita antes de iniciar la sesin para corroborar que hayas ledo el procedimiento, se te har un cuestionario para dar evidencia de tus conocimientos previos. Se tomar en cuenta que tengas a la mano el material que se te solicit. Tendrs que llenar los formatos incluido en el anexo de este manual de prcticas. Debers de desarrollar un reporte que incluya los resultados observados y tus conclusiones.

1.4 Nmero de profesionales en formacin: Para todas las prcticas es recomendable trabajar con grupos de educandos de tres con la finalidad que todos participen activamente en el proceso.

8/55

Dr. Hugo Barrios


2. Programa del sistema de prcticas

N 1 2 3

Nombre Toma y envo de muestras Aislamiento de bacterias Cocos y bacilos Gram positivos aerobios

Horas por sesin por semana 2 2 2 1 1 1

4 5

Enterobacterias Bacilos Gram negativos no fermentadores

2 2

1 1

6 7

Bacilos Gram positivos esporulados Evaluacin de agentes antimicrobianos

2 2

1 1

9/55

Dr. Hugo Barrios


3. Prcticas generales de seguridad

3.1 Reglas del laboratorio:

1. Durante las sesiones, siempre debers usar una bata de laboratorio bien abotonada, que debers quitarte antes de abandonar el laboratorio. 2. No debers sacar del laboratorio ningn equipo, medios o cultivos microbianos. 3. Evitaras acumulacin sobre la mesa de trabajo de objetos no relacionados con la prctica del laboratorio. 4. Colocars todos los objetos personales (libros, mochilas, etc.) en la zona especificada por el profesor. 5. No debers ingerir y/o almacenar cualquier tipo de alimento o bebida dentro del laboratorio. 6. Se prohbe fumar, tocarse la cara con las manos o algn otro objeto. 7. Debers lavar meticulosamente las manos con jabn y agua antes de salir del laboratorio, aun sea por breves periodos. 8. No se permitirn visitar personales que distraigan la atencin y pongan en riesgo la seguridad en el trabajo que se realiza.

10/55

Dr. Hugo Barrios


3.2 Procedimiento del laboratorio: 1. Antes y despus de cada sesin prctica, debers limpiar las mesas de trabajo con el desinfectante que se te proporcionar para este fin. 2. Cuando utilices mechero, este deber colocarse alejado del microscopio y otros equipos as como de tus cuadernos o prendar de vestir. 3. Al concluir cada sesin debers asegurarte de que los materiales de desecho u objetos contaminados los hayas colocado en los recipientes especficos para ello. 4. Debers dejar perfectamente limpios todos los equipos utilizados. 5. En caso de producirse un incidente, debers notificar al profesor de inmediato. 6. En el caso de derrame de algn cultivo o rotura de recipientes, debers conservar la calma, notificar al profesor y realizar el siguiente procedimiento: a) Colocar toallas de papel sobre el material derramado para evitar dispersin; b) Poner abundante solucin de desinfeccin sobre el rea contaminada y c) Dejar transcurrir al menos 15 minutos, retirar las toallas y tirarlas en el receptculos destinado para la eliminacin de material contaminado.

3.3 Materiales indispensables para cada sesin de laboratorio: 1. Bata de laboratorio limpia y con botones. 2. El protocolo de la prctica. 3. Un pedazo de tela absorbente sin pelusa, cerillos, tijeras, cinta de enmarcar, marcador indeleble o etiquetas pequeas.

11/55

Dr. Hugo Barrios


PRACTICA No. 1

Reglamento del laboratorio

Institucin: Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Dr. Norberto Trevio ZapataUniversidad Autnoma de Tamaulipas

Responsables del desempeo de esta prctica:

Personal tcnico y maestro designado por la institucin para impartir esta materia al grupo que esta desarrollando la practica correspondiente.

Nmero de profesionales en formacin por unidad de prctica:

Los alumnos que estn desarrollando esta practica sern distribuidos en equipos sern distribuidos en equipos de 4 6 alumno por equipo. Con un mximo de 8 equipos por prctica.

12/55

Dr. Hugo Barrios


IntroduccinLas personas que trabajamos en los laboratorios de bacteriologa preparamos muestras, realizamos pruebas, reacciones, y llevamos anlisis para la deteccin de enfermedades y patgenos. Todos trabajamos con sustancias qumicas, material de vidrio, fuego y equipos de laboratorio tanto manuales y automticos. La seguridad en estas reas es de suma importancia y no su prctica de debe ser un secreto para nadie. Todas las personas que trabajamos con materiales que contengan agentes infecciosos debemos estar conscientes de los peligros potenciales asociados a estos agentes, adems debemos estar entrenados en las prcticas y tcnicas requeridas para manejar estos materiales de una manera segura. Lograr que un ambiente sea seguro es obligacin y responsabilidad de todos (alumnos, tcnicos, maestros, institucin). Todos debemos hacer nuestro mximo esfuerzo para protegernos de los peligros existentes en el laboratorio, tomar conciencia de que los accidentes tienen sus causas y que estos problemas pueden ser evitados. Es por ello que es de suma importancia para todos nosotros que la primera actividad prctica vinculada a las sesiones del laboratorio de bacteriologa I sean las de conocer cules son las normas de seguridad que debemos seguir en el laboratorio. De esta forma realizaremos el trabajo sin riesgo o con problemas mnimos de exposicin, tanto para las personas que estas vinculadas al laboratorio como para el medio ambiente. Los principales accidentes que se han observado en los laboratorios son:

Quemaduras por fuego y agentes qumicos. Lesiones en la piel y los ojos por contacto con productos qumicos agresivos. Cortaduras con vidrios u otros objetos con bordes afilados. Intoxicacin por inhalacin, ingestin o absorcin de sustancias txicas. Incendios, explosiones y reacciones violentas.Los accidentes que podemos llegar a generar en un laboratorio son debidos en gran medida a que no seguimos las ms elementales normas de seguridad, falta de sentido comn o por actitudes distradas o indiferentes en el trabajo del laboratorio. Es primordial que todos obtengamos buenos hbitos de trabajo en el laboratorio a fin de evitar los riesgos de seguridad que pueden darse en el laboratorio. Si un compaero est cometiendo un error al trabajar en el laboratorio, comntale puedes estarlo salvando de un accidente potencialmente grave para l. La bioseguridad es el manejo tcnico adecuado en un laboratorio, cuya eficiencia en gran parte refleja el entrenamiento del personal, adems de significar la proteccin individual. La observancia de sus lineamientos repercute en la calidad del trabajo del laboratorio, evitando contaminaciones cruzadas que producen resultados falsos. Ningn equipo de seguridad o procedimiento por si mismo garantiza la seguridad, el personal que labora en un laboratorio est sujeto a diversos riesgos ocupacionales segn el tipo de trabajo especfico que desarrolle. El trabajo que se realiza en los laboratorios microbiolgicos siempre implica riesgos especiales de contagio de enfermedades infecciosas para el personal que labora en ellos. Es por ello que cada laboratorio debe implementar medidas de bioseguridad correspondientes a la peligrosidad de los agentes que maneja y tener un control estricto para que estas medidas se lleven a cabo 13/55

Dr. Hugo Barrios


Medidas generales de precaucin1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) 10) 11) 12) 13) Todo material de desecho y/o contaminado debe ser esterilizado para ser desechado o lavado Al finalizar la sesin de trabajo el material contaminado y/o de desecho se debe Coloca en un carro dispuesto para ese propsito. Coloca el material en el rea dispuesta para esto, quita las etiquetas y verifica que el material que pueda derramarse se coloque en botes. Para manipular el material sucio se deben usar guantes. Las pipetas contaminadas se deben colocar en una solucin de hipoclorito de sodio (200 ppm de cloro libre) durante 30 min. Coloca por separado pipetas, portaobjetos y cubreobjetos contaminados. Descontaminar o limpiar las mesas con fenol, benzal o cloro, el equipo, los materiales y las centrifugas que hayan estado en contacto con material infectado. En caso de contaminacin, derrames o roturas, avisar de inmediato al encargado para que se tomen las medidas conducentes. Usar siempre bata larga, cerrada al frente, como medida de proteccin. Nunca comas, bebas, fumes o te maquilles dentro del rea del laboratorio. Nunca pipetear con la boca. Prevenir los accidentes. Avisar de inmediato si algo se descompone, o se ha roto. Seguir cuidadosamente las reglas establecidas de control de calidad del trabajo que se realiza.

14) Todos los instrumentos y /o equipos de medicin deben estar calibrados adecuadamenteNormas bsicas para prevenir infecciones en el laboratorio.

a) Nunca pipetear con la boca. b) No se debe comer, beber, fumar, almacenar alimentos, aplicarse cosmticos, etc., en el rea de trabajo del laboratorio. c) Se debe mantener el laboratorio libre de materiales ajenos al trabajo. d) La superficie de trabajo individual debe ser descontaminada con un papel absorbente, esponja o gasa humedecida con un desinfectante al iniciar y finalizar cada sesin de trabajo. e) El personal debe de lavarse las manos despus de manipular agentes infecciosos, material contaminado, animales y cuando abandone el laboratorio. g) Todo residuo contaminado ser sometido a un proceso de descontaminacin por esterilizacin (autoclave) o incineracin, antes de ser desechado. h) Debe utilizarse guantes durante aquellos procedimientos que impliquen contacto directo con material infeccioso. i) En caso de emergencia se debe recurrir al responsable del rea.

f) Todos los procedimientos se deben efectuar con cuidado para reducir la formacin de aerosoles, de preferencia dentro de una campana de flujo laminar.

14/55

Dr. Hugo Barrios


15/55

Dr. Hugo Barrios


Propsito Especfico de cada Prctica.- Determinar cules son los riesgos ysoluciones existentes por el uso del laboratorio de bacteriologa I, logando as obtener un ambiente adecuado de trabajo prctico (Nivel de Competencia: 1).Criterios de desempeos Sers competente cuando puedas determinar los riesgos existentes en el laboratorio y la forma de control de los mismos durante el tiempo definido para la prctica.

Resultados esperados Haber ledo la prctica previa a la asistencia a la misma (se realizaran preguntas al azar al inicio de la misma). Asistir puntualmente al laboratorio y comportarse en el como corresponde. La falta de esto imposibilita el continuar con las actividades. Traer la bata a la prctica. Entrega puntualmente el reporte de la prctica y la solucin de las preguntas del cuestionario (24 h posteriores al desarrollo de la misma).

Normas de seguridad especficas de la prcticaa) Utiliza bata de laboratorio y sigue las reglas de laboratorio sealadas anteriormente. b) La Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia cuenta con un documento vinculado a la seguridad (http://fmvz.uat.edu.mx/documentos/manuales.htm) en donde se determina las Normas oficiales mexicanas relacionadas a la misma. c) Durante la presente practica no trabajaras con residuos peligrosos

Desarrollo de la PrcticaLa prctica se llevar a cabo con los siguientes tiempos o puntos: 1. Verificar que se traiga todo el material de trabajo y la bata. 2. Verificar que se ley el material antes de iniciar la practica (preguntas al azar entre los alumno). 3. Discutir con tus compaeros los diferentes puntos de las normas de seguridad para y demostraras que conocen este reglamento y las implicaciones que tiene en el laboratorio. 4. Solicita al tcnico del laboratorio la explique el reglamento se seguridad que existe en el laboratorio de bacteriologa I. 5. De existir alguna norma que no entiendas, favor de decirle al tcnico para que la explique mejor y si existe alguna que consideras debe ser incluida favor de comentarlo.

Materiales Lpiz y pluma

Sistema de evaluacin16/55

Dr. Hugo Barrios

Manual de prcticas de bacteriologa II Se realizar una observacin directa para constatar que asistes puntualmente a la prctica, que traes la bata y que te comportas adecuadamente en las instalaciones y con tus compaeros de clase. Al inicio de cada actividad, realizaremos preguntas al azar para que las contestes verbalmente y se constate que leste la practica y los pormenores de ella (evaluacin intermedia no calificatoria). Llenar el cuadro de resumen de la practica en donde se constante que llevaste a cabo las actividades de la practica y da solucin de las preguntas del cuestionario. El personal tcnico realizar un anlisis de los puntos sealados previamente y del producto terminado para la entrega de calificaciones correspondientes. Cada una de ellas ser firmada por el personal tcnico. Entregar al final del semestre el manual de prcticas con sus respectivas calificaciones. Este manual ser devuelto al estudiante posteriormente. La asignacin de las calificaciones de cada practica ser de la siguiente forma: 10%.- Asistencia puntual a la prctica- La falta de asistencia imposibilitara el desarrollo de las actividades prcticas. 45%.- Desarrollo y entrega del resumen de la actividad prctica especifica realizada. 45%.- Desarrollo y entrega del cuestionario especifico de cada prctica.

Resumen de la prcticaNota: Discute con tus compaeros los diferentes puntos de las normas de seguridad para el laboratorio y la facultad.

17/55

Dr. Hugo Barrios

Manual de prcticas de bacteriologa II Cuestionario de evaluacin 1.- Determina el significado de los siguientes signos

18/55

Dr. Hugo Barrios


Prctica # 2

Toma y envo de muestras

19/55

Dr. Hugo Barrios


Introduccin: La bacteriologa y micologa diagnstica es el estudio de las muestras tomadas a partir de pacientes de los cuales se sospecha de una infeccin que involucre a estos agentes. El laboratorio puede apoyar al clnico de la siguiente manera: Confirmando el diagnstico presuntivo, sugiriendo la quimioterapia de la enfermedad y colaborando en el conocimiento epidemiolgico de la enfermedad. Los resultados y rapidez del anlisis bacteriolgico, no solo dependen de los mtodos del laboratorio; en gran medida dependen de la forma de coleccin, conservacin y envo de la muestra. Los resultados pueden ser influenciados por la presencia de microorganismos que son parte de la flora normal, por la migracin bacteriana pos-mortem o por la aplicacin de antimicrobianos antes del envo de la muestra. El MVZ clnico, debe de considerar estos factores para interpretar los resultados emitidos por el laboratorio.

Diferentes mtodos de toma de muestra; a) sangre, b) heces y c) exudado

Los problemas ms frecuentes para la identificacin bacteriana y micolgica son: 1. Falta de una historia clnica completa y de un diagnstico presuntivo. 2. Envo de muestras no representativas de la lesin. 3. Toma de muestra en condiciones no aspticas. 4. Muestras inadecuadas como sangre hemolizada, suero turbio contaminado, orina de mas de 4 horas de haber sido tomada, hisopos son medio de transporte, muestras no refrigeradas, etc.

20/55

Dr. Hugo Barrios


Propsito especfico de la prctica: Con el desarrollo de esta prctica obtendrs la capacidad para colectar, conservar y enviar muestras clnicas al laboratorio para el aislamiento e identificacin de bacterias y hongos.

Desarrollo de la prctica: 1. Recopilars los datos mas importantes para realizar la historia clnica. 2. Tomars muestras de exudado, leche sangre, heces, orina, rganos y pelo de animales que presenten problemas clnicos. 3. Rotulars la muestra tomada con marcador indeleble. 4. Conservars y llevars las muestras al laboratorio de bacteriolgico para su anlisis. Para el desarrollo de la prctica es necesario que siempre uses material y equipo para salvaguardar tu seguridad sanitaria, por lo que no debes de olvidad usar overol, botas y guantes cada vez que trabajes con animales. Para tener una adecuada forma de tomar la muestra se debe apegas a ciertas normas como: 1. Tomar la muestra del sitio anatmico ms representativo del problema, de preferencia en la etapa aguada de la enfermedad. 2. Las muestras obtenidas a partir de animales muertos debern de tomarse dentro de las primeras tres horas de ocurrida la muerte o el sacrificio. 3. Las muestras deben colectarse bajo estrictas condiciones de antisepsia, como limpiar la piel con alcohol al 70% y aplicar yodo al 1% por 1 minuto. 4. El material de coleccin y el recipiente donde se trasportar la muestra debe ser estril. 5. Las muestras colectadas no deben de estar en contacto con desinfectantes.21/55

Dr. Hugo Barrios


6. Las muestras deben estar identificadas con los siguientes datos: especie, raza, edad, sexo, arete o nombre del animal; direccin, telfono y nombre del propietario del animal. 7. Una vez colectadas la muestras deben de enviarse dentro de las siguientes 4 24 horas al laboratorio en condiciones de refrigeracin (4 C); esto se logra usando hielo o refrigerantes en cajas de poliuretano. 8. En el caso de uso de hisopos para la toma demuestras de exudados, debern de enviarse en medio de transporte como el Stuart, Carry-Blair, etc. Que contienen componentes como pptidos, azcares, aminocidos, etc. Que permiten perseverar las bacterias pero evitando su multiplicacin. 9. Debe de anexarse una historia clnica pertinente que incluya el nmero de animales afectados, si la muestra proviene de un animal tratado con antimicrobianos, cuales y durante cuanto tiempo y un diagnstico presuntivo con base a signos clnicos y epidemiolgicos. 10. Es importante hacer notar que el manejo de las muestras clnicas deben de realizarse con precaucin debido a que algunos agentes involucrados en las enfermedades infecciosas de animales constituyen un riesgo de zoonosis para la salud del clnico y del bacterilogo. NOTA: Si no se toman en consideracin estas normas, el laboratorio podr rechazar la muestra para el anlisis bacteriolgico y micolgico. Si continuas con estas recomendaciones, al trmino de la sesin de prcticas sers competente para tomar muestras de procesos patolgicos de casos clnicos de diferentes sistemas del animal, adems de conocer el manejo adecuado al remitir la muestra al laboratorio. Con las habilidades adquiridas en esta sesin, estars capacitado para tener un apoyo en tu diagnstico de campo. Aprenders que la coordinacin de una adecuada toma de muestra repercute en la integracin de tu diagnstico clnico.

22/55

Dr. Hugo Barrios


Recursos: Material necesario Torundas del algodn al 70% Torundas de Yodo al 2% Un tubo de medio de transporte por equipo Un hisopo estril por equipo Dos frascos estriles por equipo *Overol y botas *Un guante de palpacin por persona * Guante quirrgico * Tres tubos de vacutainer (tapn morado) por persona *Tres bolsas de plstico pequeas por equipo *Un sobre de papel nuevo y pinzas por equipo. *Un lazo de media pulgada y 5 m por equipo. * Una hielera con refrigerantes por equipo.

NOTA: * Este material debe ser trado por el alumno.

La prctica se realizar en la posta zootcnica de la FMVZ UAT y/o ranchos y comunidades circundantes al municipio de Victoria Tamaulipas.

23/55

Dr. Hugo Barrios


Sistema de evaluacin: a. Evidencia de desempeo: Es importante el inters que tengas al realizar la preparacin de la prctica; se har una evaluacin antes de iniciar la sesin para corroborar que hayas ledo el procedimiento, se te har un cuestionario para dar evidencia de tus conocimientos previos. Se tomar en cuenta que tengas a la mano el material que se te solicit. b. Evidencias intermedias: Se monitorear el desarrollo del procedimiento, el orden con el que lo lleves y el inters por obtener las habilidades que para este fin se imparte la prctica. c. Mtodos de asignacin de calificaciones: Se tomar en cuenta la puntualidad y asistencia a la prctica, el inters por resolver el problema planteado, la entrega de un reporte final que indique la actividad que desarrollaste, lo aprendido y como aplicaras el conocimiento en tu quehacer profesional. d. Formato para portafolio de evidencias: Tendrs que llenar el formato N 1 incluido en el anexo de este manual de prcticas. Debers de desarrollar un reporte que incluya el tipo de trabajo realizado, los resultados observados y tus conclusiones.

Bibliografa: Balows, A. et al., Manual of Clinical Microbiology. 1991. 5 th, ed ASM Washington D.C. Carter, G.R., Diagnostic procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology. 1978. 4 th, ed Charles C. Thomas Publishers. USA Scanlan Ch. M. Introduccin a la bacteriologa veterinaria. 1991. Ed Ediciones Acribia, S.A. Espaa. Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. 1987. Microbiologa Mdica. Ed. Manual Moderno. Mxico DF.

24/55

Dr. Hugo Barrios


Prctica # 3

Aislamiento de bacterias

25/55

Dr. Hugo Barrios


Introduccin: Las tcnicas de aislamiento permiten la obtencin de microorganismos a partir de muestras complejas en las que hay una gran diversidad microbiana. Las bacterias deben de ser cultivadas en medios de cultivo de laboratorio (manual de prcticas Bacteriologa I) para caracterizar su crecimiento. Para tener cultivos bacterianos representativos de la zona de estudio, se debe de tener en cuenta que puede ser contaminado con bacterias del medioambiente, por lo que se debe trabajar en zona asptica (cerca del mechero), condicin que limita la presencia de microorganismos indeseables o contaminantes.

Cultivos bacterianos; a) muestra directica en agar McConkey; b) cultivo puro en agar sangre.

Los cultivos puros estn formados por un solo grupo de microorganismos y son indispensables para conocer las caractersticas morfolgicas, propiedades de tincin, actividad bioqumica, patogenicidad, sensibilidad a antibiticos e identificacin de las especies microbianas.

Propsito especfico de la prctica: Comprobaras la presencia de microorganismos aislados a partir de un caso clnico presente como flora normal y en un proceso patgeno en una animal.

26/55

Dr. Hugo Barrios


Desarrollo de la prctica: 1. Realizaras la siembra de la muestra que tomaste de un caso clnico en un medio general, uno selectivo y uno enriquecido (imagen 2). 2. Incubaras la caja sembrada por 24 horas a 37 C 3. Observars el crecimiento y anotaras los tipos de colonias que crecieron. 4. Hars una tincin de Gram (Ver manual de prcticas Bacteriologa I) 5. Seleccionaras una colonia representativa de la muestra para resembrar y tener tu cultivo puro.

Si eres perseverante en el proceso, al trmino de esta sesin, sers competente para determinar la presencia de bacterias a partir de muestras tomadas de procesos patolgicos de casos clnicos de diferentes sistemas del animal, adems de determinar cuales podran ser de flora normal y cuales de un proceso patolgico. Con las habilidades adquiridas en esta sesin, estars capacitado para tener un apoyo en tu diagnstico de un caso clnico. Aprenders a integrar el conocimiento terico de la existencia de microorganismos prcticamente. con lo observado en el crecimiento in-vitro evidencindolo

Recursos: Material necesario 1. Muestra trada por el estudiante 2. Agar sangre 3. Agar Mac Conkey 4. Agar de Tripticasa Soya 5. Asa microbiolgica 6. Reactivos para tincin de Gram 7. Porta objetos 8. Mechero27/55

Dr. Hugo Barrios


La prctica se realizar en el laboratorio de bacteriologa indicado para docencia del edificio MVZ Carlos H. Villareal Galvn. El desarrollo de la prctica ser impartido por personal capacitado en el rea.

Sistema de evaluacin: a. Evidencia de desempeo: Es importante el inters que tengas al realizar la preparacin de la prctica; se har una evaluacin antes de iniciar la sesin para corroborar que hayas ledo el procedimiento, se te har un cuestionario para dar evidencia de tus conocimientos previos. Se tomar en cuenta que tengas a la mano el material que se te solicit. b. Evidencias intermedias: Se monitorear el desarrollo del procedimiento, el orden con el que lo lleves, y el inters por obtener las habilidades que para este fin se imparte la prctica. c. Mtodos de asignacin de calificaciones: Se tomar en cuenta la puntualidad y asistencia a la prctica, el inters por resolver el problema planteado, la entrega de un reporte final que indique la actividad que desarrollaste, lo aprendido y como aplicaras el conocimiento en tu quehacer profesional. d. Formato para portafolio de evidencias: Tendrs que llenar el formato N 2 incluido en el anexo de este manual de prcticas. Debers de desarrollar un reporte que incluya los resultados observados y tus conclusiones.

Bibliografa: Balows, A. et al., Manual of Clinical Microbiology . 1991. 5 th, ed ASM Washington D.C. Carter, G.R., Diagnostic procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology. 1978. 4 th, ed Charles C. Thomas Publishers. USA. Scanlan Ch. M. Introduccin a la bacteriologa veterinaria. 1991. Ed Ediciones Acribia, S.A. Espaa.28/55

Dr. Hugo Barrios


Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. 1987. Microbiologa Mdica. Ed. Manual Moderno. Mxico DF. Koneman EW, Allen SD, Dowell VR, Janda MW, Sommers HM, Winn JT. 1992. Diagnstico Microbiolgico. Ed. Panamericana. Argentina. Baron E, Fineguid S. 1990. Diagnostic Microbiology. Ed. Mosby Company. St Louis MO.

29/55

Dr. Hugo Barrios


Prctica # 4

Cocos y bacilos Gram positivos aerobios

30/55

Dr. Hugo Barrios


Introduccin: En la microbiologa el examen microscpico es generalmente el primer paso que se da para la identificacin de un organismo desconocido; pero el tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resulta difcil ver con el microscopio ptico, principalmente por la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea, por lo que se procede a hacer tinciones especiales para su observacin como la de Gram. Muchos de los gneros de cocos y bacilos Gram positivos estn involucrados en diferentes procesos pigenos en animales y el hombre. Dentro de los cocos Gram positivos que de inters veterinario estn los Staphylococcus y Streptococcus. El gnero Staphylococcus comprende microorganismos que estn presentes en la mucosa y en la piel de los animales. Los especies que se asocian con ms frecuencia a las enfermedades son Staphylococcus aureus, S.epidermidis, S. saprophticus, S. capitis y S. haemolyticus. Los estafilococos crecen fcilmente sobre casi todos los medios bacteriolgicos, en condiciones aerbicas se da el mejor crecimiento. Su mayor velocidad de crecimiento es a 5 - 25 C. Adems, producen catalasa, lo que los diferencia de los estreptococos. El gnero Streptococcus pertenece a este grupo de los cocos Gram positivos; Estas bacterias crecen en cadenas o pares, donde cada divisin celular ocurre a lo largo de un eje. Los Streptococci son oxidasa y catalasa negativo. Las especies de estreptococus que producen enfermedades en animales son: Streptococcus pyogenes, S. agalactiae, S. pneumoniae, S. zooepidemicus, S. equisimilis, S. equi, S. faecalis, S. dysgalactiae, S. uberis. Dentro de los bacilos pigenos podemos mencionar al gnero Corynebacterium; es inmvil, anaerobio facultativos, catalasa positiva. Las corinebacterias estn ampliamente distribuidas en la naturaleza encontrndose en el suelo, el agua, productos alimenticios y tambin en la mucosa y piel de animales y del hombre. Entre las especies de importancia veterinaria podemos citar a C. pyogenes, C. renale, C. pseudotuberculosis, C. pillosum, C. suis, C. equi.

31/55

Dr. Hugo Barrios


Propsito especfico de la prctica: Conocers las caractersticas morfolgicas de cultivo y bioqumicas mas relevantes de los gneros Staphylococcus spp, Streptococcus spp y Corynebacterium spp, asociados a los diferentes procesos patolgicos en los animales domsticos. Comprenders que las pruebas bioqumicas dan evidencias de la actividad metablica que puedes monitorear en forma indirecta.

Desarrollo de la prctica: 1. Describe la morfologa de las colonias de Staphylococcus spp., Streptococcus spp. y Corynebacterium spp. 2. Observa la produccin de hemolisinas en agar sangre de las bacterias mencionadas. 3. Realice la tincin de Gram con las 3 especies bacterianas (Manual de prcticas Bacteriologa I). 4. Compruebe la morfologa, afinidad tintorial y agrupacin bacteriana. 5. Realice la prueba de catalasa con los medios de cultivo proporcionados y anote el resultado. 6. Realice pruebas bioqumicas sembrando medios de urea, citrato, SIM, lactosa, maltosa, manitol, glucosa, MR-VP e incube 24 horas a 37 C. 7. Concluya la identificacin en base a tablas de identificacin.

Si asistes a las sesiones, al terminar sers competente para determinar la presencia de bacterias a partir de muestras tomadas de procesos pigenos, neumnicos y de mastitis de casos clnicos de diferentes especies animales. Tendrs la capacidad de identificar los gneros y especies a partir de evaluacin del metabolismo bacteriano por el uso de pruebas bioqumicas. Aprenders a integrar el diagnstico clnico en base a una remisin de muestra al laboratorio diagnstico.32/55

Dr. Hugo Barrios


Tincin de Gram: a) cocos Gram positivos, b) bacilos Gram positivos

Recursos: Material necesario 1. Cultivo en agar sangre con Staphylococcus spp., Streptococcus spp. y Corynebacterium spp. 2. Reactivos para tincin de Gram 3. Mechero 4. Cubreobjetos 5. Dos juegos de pruebas bioqumicas de urea, citrato, SIM, lactosa, maltosa, manitol, glucosa, MR-VP


33/55

Dr. Hugo Barrios


Sistema de evaluacin: a. Evidencia de desempeo: Es importante el inters que tengas al realizar la preparacin de la prctica; se har una evaluacin antes de iniciar la sesin para corroborar que hayas ledo el procedimiento, se te har un cuestionario para dar evidencia de tus conocimientos previos. Se tomar en cuenta que tengas a la mano el material que se te solicit. b. Evidencias intermedias: Se monitorear el desarrollo del procedimiento, el orden con el que lo lleves, y el inters por obtener las habilidades que para este fin se imparte la prctica. c. Mtodos de asignacin de calificaciones: Se tomar en cuenta la puntualidad y asistencia a la prctica, el inters por resolver el problema planteado, la entrega de un reporte final que indique la actividad que desarrollaste, lo aprendido y como aplicaras el conocimiento en tu quehacer profesional. d. Formato para portafolio de evidencias: Tendrs que llenar los formatos N y N 2 1 incluido en el anexo de este manual de prcticas. Apyate en la imagen N 1 y diagrama uno para la identificacin. Debers de desarrollar un reporte que incluya los resultados observados y tus conclusiones.

Bibliografa: Balows, A. et al., Manual of Clinical Microbiology . 1991. 5 th, ed ASM Washington D.C. Carter, G.R., Diagnostic procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology. 1978. 4 th, ed Charles C. Thomas Publishers. USA. Scanlan Ch. M. Introduccin a la bacteriologa veterinaria. 1991. Ed Ediciones Acribia, S.A. Espaa. Koneman EW, Allen SD, Dowell VR, Janda MW, Sommers HM, Winn JT. 1992. Diagnstico Microbiolgico. Ed. Panamericana. Argentina. Baron E, Fineguid S. 1990. Diagnostic Microbiology. Ed. Mosby Company. St Louis MO.34/55

Dr. Hugo Barrios


Prctica # 5

Enterobacterias

35/55

Dr. Hugo Barrios


Introduccin: Enterobacteriaceae es una familia de bacterias Gram negativas que contiene ms de 30 gneros y ms de 100 especies que pueden tener morfologa de bacilos. Los miembros de esta familia forman parte de la microbiota del intestino (llamados coliformes) y de otros rganos de otras especies animales. Algunas especies pueden vivir en tierra, en plantas o en animales acuticos. Sucumben con relativa facilidad a desinfectantes comunes, incluido el cloro. No son exigentes, son de fcil cultivo, son oxidasa negativo, es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa. Son capaces de reducir nitrato en nitrito. Son anaerbicos facultativos. Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaerbicas con o sin la produccin de gas (en especial glucosa y lactosa) y oxidadores de una amplia gama de substratos en condiciones aerbicas. Muchos gneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque algunos gneros no son mviles. Entre las especies de importancia veterinaria podemos mencionar a Escherichia spp., Klebsiella spp., Citrobacter spp., Serratia spp., Salmonella spp., Proteus spp.

Propsito especfico de la prctica: Conocers las caractersticas morfolgicas de cultivo y bioqumicas ms relevantes de las enterobacterias de mayor importancia en Medicina Veterinaria.

Desarrollo de la prctica: 1. Observa las placas de agar Mac Conkey, describe la morfologa de colonias y determina si son fermentadoras o no de la lactosa. 2. Realiza frotis fijos con los cultivos de Proteus y E. coli y telos con Gram. 3. Observa la morfologa, afinidad tintorial y agrupacin.36/55

Dr. Hugo Barrios


4. Realice la prueba de oxidada para cada uno de los cultivos. 5. Siembre las pruebas bioqumicas de TSI, urea, citrato, SIM con el cultivo que te indique tu instructor. 6. Incube a 37 durante 24 horas. C 7. Haga la lectura de las pruebas bioqumicas. 8. Concluya la identificacin en base a las tablas que te proporcionara el instructor.

Agar Mac conkey, bacterias lactosa positiva

Reacciones de TSI

Al terminar la sesin sers competente para identificar la presencia de bacterias a partir de muestras tomadas de procesos diarreicos de casos clnicos de diferentes especies animales. Tendrs la capacidad de identificar los gneros y especies a partir de evaluacin del metabolismo bacteriano por el uso de pruebas bioqumicas. Aprenders a integrar el diagnstico clnico en base a una remisin de muestra al laboratorio diagnstico.

Recuros: Material necesario 1. Caja de agar Mac Conkey con cultivo de Proteus y E. coli 2. Porta objetos 3. Mechero37/55

Dr. Hugo Barrios


4. Reactivos para tincin de Gram 5. Dos juegos de pruebas bioqumicas que incluya TSI, urea, citrato, SIM con el cultivo que te indique tu instructor. 6. Reactivo para prueba de oxidasa.


Sistema de evaluacin: a. Evidencia de desempeo: Es importante el inters que tengas al realizar la preparacin de la prctica; se har una evaluacin antes de iniciar la sesin para corroborar que hayas ledo el procedimiento, se te har un cuestionario para dar evidencia de tus conocimientos previos. Se tomar en cuenta que tengas a la mano el material que se te solicit. b. Evidencias intermedias: Se monitorear el desarrollo del procedimiento, el orden con el que lo lleves, y el inters por obtener las habilidades que para este fin se imparte la prctica. c. Mtodos de asignacin de calificaciones: Se tomar en cuenta la puntualidad y asistencia a la prctica, el inters por resolver el problema planteado, la entrega de un reporte final que indique la actividad que desarrollaste, lo aprendido y como aplicaras el conocimiento en tu quehacer profesional. d. Formato para portafolio de evidencias: Tendrs que llenar los formatos N 1 y 2 incluido en el anexo de este manual de prcticas. Debers de desarrollar un reporte que incluya los resultados observados y tus conclusiones.

38/55

Dr. Hugo Barrios


Bibliografa: Balows, A. et al., Manual of Clinical Microbiology . 1991. 5 th, ed ASM Washington D.C. Carter, G.R., Diagnostic procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology. 1978. 4 th, ed Charles C. Thomas Publishers. USA. Scanlan Ch. M. Introduccin a la bacteriologa veterinaria. 1991. Ed Ediciones Acribia, S.A. Espaa. Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. 1987. Microbiologa Mdica. Ed. Manual Moderno. Mxico DF. Koneman EW, Allen SD, Dowell VR, Janda MW, Sommers HM, Winn JT. 1992. Diagnstico Microbiolgico. Ed. Panamericana. Argentina. Baron E, Fineguid S. 1990. Diagnostic Microbiology. Ed. Mosby Company. St Louis MO.

39/55

Dr. Hugo Barrios


Prctica # 6

Bacilos Gram negativos no fermentadores

40/55

Dr. Hugo Barrios


Introduccin: Las bacterias no fermentadores estn asociados principalmente a procesos respiratorios. Este grupo de bacterias son principalmente Gram negativas, oxidasa positiva, aerobios o anaerobios facultativos. Dentro de las bacterias de este grupo estn los gneros Pasteurella spp, Manhemia spp, Haemophilus spp, Actinobacillus spp y Bordetella spp. Este grupo penden estar como comensales de infecciones en animales. Para su crecimiento requieren de medios enriquecidos con sangre, suero; el caso especfico de Haemophilus spp, requiere el factor X (hemina) o factor V (nicotinamida adenin dinucletido NAD) o ambos para su crecimiento. Las colonias se hacen visibles entre las 24 y 48 horas, crecidas a 37 C.

Propsito especfico de la prctica: Conocers las caractersticas morfolgicas de cultivo y bioqumicas ms relevantes de los gneros Pasteurella spp, Manhemia spp, Haemophilus spp, Actinobacillus spp y Bordetella spp. Con este conocimiento asociars el hbitat con el metabolismo bioqumico de las bacterias y su relacin en la patogenia de la enfermedad.

Desarrollo de la prctica: 1. Con los cultivos de Pasterurella que se te proporcionarn, realiza un frotis y telo con Gram. 2. Observa la morfologa y afinidad tintorial. 3. Realice la prueba de oxidasa con los cultivos. 4. Observa la hemolisis de Pasteurella en las cajas de petri de agar sangre. 5. Inocule los medios TSI y SIM con las colonias bacterianas. 6. Incube la prueba bioqumica por 24 horas a 37 C.41/55

Dr. Hugo Barrios


7. Concluya la identificacin del microorganismo utilizando las tablas de pruebas bioqumicas.

Ave infectada con Pasteurella multocida

Cultivo y colonias de P. multocida

Al trmino de la sesin sers capaz de identificar la presencia de bacterias a partir de muestras tomadas de infecciones del sistema respiratorio de casos clnicos de diferentes especies animales. Tendrs la capacidad de identificar los gneros y especies a partir de evaluacin del metabolismo bacteriano por el uso de pruebas bioqumicas. Aprenders a integrar el diagnstico clnico en base a una remisin de muestra al laboratorio diagnstico.

Recursos: Material necesario 1. Cultivo de Pasterurella spp en agar sangre 2. Reactivos para tincin de Gram 3. Juego de pruebas bioqumicas para inocular: TSI y SIM La prctica se realizar en el laboratorio de bacteriologa indicado para docencia del edificio MVZ Carlos H. Villareal Galvn. El desarrollo de la prctica ser impartido por personal capacitado en el rea.42/55

Dr. Hugo Barrios


Sistema de evaluacin: a. Evidencia de desempeo: Es importante el inters que tengas al realizar la preparacin de la prctica; se har una evaluacin antes de iniciar la sesin para corroborar que hayas ledo el procedimiento, se te har un cuestionario para dar evidencia de tus conocimientos previos. Se tomar en cuenta que tengas a la mano el material que se te solicit. b. Evidencias intermedias: Se monitorear el desarrollo del procedimiento, el orden con el que lo lleves, y el inters por obtener las habilidades que para este fin se imparte la prctica. c. Mtodos de asignacin de calificaciones: Se tomar en cuenta la puntualidad y asistencia a la prctica, el inters por resolver el problema planteado, la entrega de un reporte final que indique la actividad que desarrollaste, lo aprendido y como aplicaras el conocimiento en tu quehacer profesional. d. Formato para portafolio de evidencias: Tendrs que llenar los formatos N y 2 1 incluido en el anexo de este manual de prcticas. Debers de desarrollar un reporte que incluya los resultados observados y tus conclusiones.

Bibliografa: Balows, A. et al., Manual of Clinical Microbiology . 1991. 5 th, ed ASM Washington D.C. Carter, G.R., Diagnostic procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology. 1978. 4 th, ed Charles C. Thomas Publishers. USA. Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. 1987. Microbiologa Mdica. Ed. Manual Moderno. Mxico DF. Koneman EW, Allen SD, Dowell VR, Janda MW, Sommers HM, Winn JT. 1992. Diagnstico Microbiolgico. Ed. Panamericana. Argentina. Baron E, Fineguid S. 1990. Diagnostic Microbiology. Ed. Mosby Company. St Louis MO.

43/55

Dr. Hugo Barrios


Prctica # 7

Bacilos Gram positivos esporulados

44/55

Dr. Hugo Barrios


Introduccin: Dentro de los miles de gneros bacterianos, solo existen dos capaces de inducir la formacin de esporas; el Clortridium y el Bacillus. Las esporas son estructuras densas en las que se transforman las bacterias para resistir el calor o la desecacin, y son muy resistentes a la accin de desinfectantes. Cuando las condiciones vuelven a ser favorables, las esporas germinan y dan lugar de nuevo a la bacteria en forma vegetativa. El descubrimiento de que existen esporas bacterianas, fue de gran importancia para la microbiologa. El saber que existen tales formas notablemente termo resistente fue esencial para el desarrollo de mtodos adecuados de esterilizacin. Una espora es capaz de permanecer en latencia por muchos aos, pero puede convertirse de nuevo en una clula vegetativa en cuestin de minutos. Clostridium es un gnero de bacterias anaerobias, bacilos Gram positivas, parsitas y saprfitas algunas de ellas; son mviles, en general por intermedio de flagelos pertricos. En animales pueden estar involucradas en procesos nerviosos como el ttanos y el botulismo y el sistema musculo esqueltico como las miositis clostidianas. El gnero Bacillus, son aerobios estrictos o anaerobios facultativos y estn involucrados en procesos de intoxicacin alimentaria, sin embargo hay algunas de graninteres veterinario como la inductora del ntrax.

Propsito especfico de la prctica: Conocers las caractersticas morfolgicas de cultivo y bioqumicas ms relevantes de los gneros Bacillus spp y Clostridium spp. Conocers las formas que adquieren las esporas en estos gneros bacterianos. Asociars la produccin de esporas con la patogenia de las enfermedades inducidas por estos gneros bacterianos

45/55

Dr. Hugo Barrios


Desarrollo de la prctica: 1. Observe el desarrollo de las colonias en agar sangre del Bacillus spp. 2. Realice dos frotis; tia uno con Gram y el otro con Scheaffer y Fulton (Ver manual de prcticas Bacteriologa I) 3. Observe la formacin de esporas 4. Resiembra la colonia en agar sangre e incbalo en aerobiosis. 5. Incube a 37 por 24 horas C 6. Siembre una prueba bioqumica para determinar la especie de la bacteria (Diagrama 2).

Bacilos Gram positivos con formacin de esporas.

Al trmino de la prctica sers competente para identificar los gneros de bacterias que son capaces de formar esporas; tendrs la capacidad de identificar esas esporas cuando adquieras la habilidad de observar esa estructura en el microscopio diferente de una clula bacteriana. Tendrs la capacidad de identificar los gneros y especies cuando hagas evaluaciones del metabolismo bacteriano por el uso de pruebas bioqumicas. Aprenders a integrar el diagnstico clnico en base a una remisin de muestra al laboratorio diagnstico.

46/55

Dr. Hugo Barrios


Recursos: Material necesario 1. Agar sangre 2. Reactivos de Gram 3. Reativos de Scheaffer y Fulton 4. Cultivo de Bacillus spp. 5. Asa microbiolgica 6. Porta objetos


Sistema de evaluacin: a. Evidencia de desempeo: Es importante el inters que tengas al realizar la preparacin de la prctica; se har una evaluacin antes de iniciar la sesin para corroborar que hayas ledo el procedimiento, se te har un cuestionario para dar evidencia de tus conocimientos previos. Se tomar en cuenta que tengas a la mano el material que se te solicit. b. Evidencias intermedias: Se monitorear el desarrollo del procedimiento, el orden con el que lo lleves, y el inters por obtener las habilidades que para este fin se imparte la prctica. c. Mtodos de asignacin de calificaciones: Se tomar en cuenta la puntualidad y asistencia a la prctica, el inters por resolver el problema planteado, la entrega de un reporte final que indique la actividad que desarrollaste, lo aprendido y como aplicaras el conocimiento en tu quehacer profesional.47/55

Dr. Hugo Barrios


d. Formato para portafolio de evidencias: Tendrs que llenar los formatos N y 2 1 incluido en el anexo de este manual de prcticas. Debers de desarrollar un reporte que incluya los resultados observados y tus conclusiones.

Bibliografa: Balows, A. et al., Manual of Clinical Microbiology . 1991. 5 th, ed ASM Washington D.C. Carter, G.R., Diagnostic procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology. 1978. 4 th, ed Charles C. Thomas Publishers. USA. Scanlan Ch. M. Introduccin a la bacteriologa veterinaria. 1991. Ed Ediciones Acribia, S.A. Espaa. Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. 1987. Microbiologa Mdica. Ed. Manual Moderno. Mxico DF. Koneman EW, Allen SD, Dowell VR, Janda MW, Sommers HM, Winn JT. 1992. Diagnstico Microbiolgico. Ed. Panamericana. Argentina. Baron E, Fineguid S. 1990. Diagnostic Microbiology. Ed. Mosby Company. St Louis MO.

48/55

Dr. Hugo Barrios


Prctica # 8

Evaluacin de agentes antimicrobianos

49/55

Dr. Hugo Barrios


Introduccin: Se piensa que los quimioterapeticos actan de forma similar en las infecciones; sin embargo, existe diversidad tanto en los grupos de antibiticos y sus mecanismos de accin, como los microorganismos causantes de infeccin y su susceptibilidad a aquellos, as como tambin debe considerarse al individuo afectado y su estado inmunitario, el sitio de infeccin, la cronicidad y la sensibilidad a la droga. El uso indiscriminado de los antimicrobianos a originado la seleccin de cepas bacterianas multiresistentes, por lo que es difcil predecir la susceptibilidad con base en la sola experiencia clnica. La susceptibilidad de microorganismos in vitro a los antimicrobianos puede medirse en el laboratorio. Las pruebas de susceptibilidad bacteriana por el mtodo de difusin en agar son pruebas cualitativas en las que se utilizan discos de papel filtro impregnados con concentraciones conocidas de los diferentes quimioterapeticos. Estos discos se colocan sobre la superficie de cajas de agar previamente inoculados con la cepa problema. Despus de la incubacin se observan halos de inhibicin del desarrollo bacteriano alrededor de los discos con quimioterapeticos a los cuales el microorganismo es susceptible. Por el contrario, si la bacteria es resistente hay crecimiento alrededor del disco. En Medicina Veterinaria no existen mtodos similares estandarizados para cada una de las especies animales por lo que la aplicacin de los estndares establecidos por Bauer et al., debe interpretarse con cautela.

Propsito especfico de la prctica: Conocers la susceptibilidad de las bacterias a quimioteraputicos segn el mtodo de Bauer y cols. Comprenders por que es necesario auxiliarse con mtodos de laboratorio para dar un tratamiento con antibiticos para evitar la induccin de cepas drogoresistentes, adems de tener un tratamiento ms certero en infecciones inducidas por bacterias.

50/55

Dr. Hugo Barrios


Desarrollo de la prctica: 1. Usars el mtodo de Bauer y et al. Desarrllalo siguiendo los siguientes pasos 2. Estandarice el inoculo agregando unas gotas del cultivo de 1 ml de E. coli al tubo de SSF, hasta alcanzar una turbidez igual a la del tubo de 0.5 de Mc Farland. 3. Compara la turbidez de ambos tubos auxilindose con la tarjeta que te fue proporcionada para este fin. Esta turbidez corresponde aproximadamente a 5x107 a 5x109 unidad formadoras de colonias (UFC) por ml en el caso de E. coli, o en su caso que se tenga una absorbancia de 0.1. 4. Inocula la caja de agar MH con la suspensin estandarizada de E. coli antes de 15 min. para evitar cambios en las cuentas bacterianas. 5. Para la siembra introduce el hisopo en el inoculo, exprima el exceso de lquido en las paredes del tubo y simbralo con estra cerrada sobre toda la superficie del agar. 6. Seca la superficie del agar dejando la caja semitapada junto al mechero durante 3 o 5 min. 7. Flamea las pinzas con el alcohol y con ellas coloque los sensidiscos sobre la superficie del agar, asegurndose que queden perfectamente adheridos. Los sensidiscos no deben quedar a menos de 15 mm. De la orilla del agar y deben estar suficientemente separados entre si para evitar que las zonas de inhibicin se mezclen, interpretando mal su lectura. 8. Incuba las cajas a 37 por 24 hrs. c 9. Determina el patrn de sensibilidad y resistencia de la cepa de E. coli midiendo los halos de inhibicin alrededor de los sensidiscos y comparando los mm con los que aparecen en las tablas de referencia proporcionados. 10. Los antimicrobianos a pobrar son: ampicilina (10 microg), cloranfenicol (30 microg), gentamicina (10 microg), penicilina (10 U), tetraciclina (30 microg), kanamicina (30 microg).

51/55

Dr. Hugo Barrios


Agar Meller Hinton; prueba de susceptibilidad a agentes quimioteraputicos

Al finalizar la sesin sers competente para seleccionar el tratamiento adecuado por el uso de antibiticos cuando hayas evaluado diferentes drogas contra el agente etiolgico causante de la enfermedad. Tendrs la capacidad de prevenir la drogo resistencia cuando selecciones adecuadamente la droga que usaras para el tratamiento de los animales enfermos.

Recursos: Material necesario 1. Un cultivo de E. Coli en caldo nutritivo 2ml. 2. Estndar de turbidez 0.5 de Mc Farland. 3. Tarjeta para comparacin de turbidez 4. Discos de papel filtro impregnados con quimioteraputicos (sensidiscos) 5. Pinzas 6. Tablas de referencia para leer resultados de susceptibilidad a quimioteraputicos. 7. Agar Meller Hinton (MH) 8. Cuatro hisopos estriles. 9. Un tubo con 2.5 ml de solucin salina fisiolgica (SSF)52/55

Dr. Hugo Barrios


10. una caja de agar Muller Hinton (MH) 11. una pipeta Pasteur.


Sistema de evaluacin: a. Evidencia de desempeo: Es importante el inters que tengas al realizar la preparacin de la prctica; se har una evaluacin antes de iniciar la sesin para corroborar que hayas ledo el procedimiento, se te har un cuestionario para dar evidencia de tus conocimientos previos. Se tomar en cuenta que tengas a la mano el material que se te solicit. b. Evidencias intermedias: Se monitorear el desarrollo del procedimiento, el orden con el que lo lleves, y el inters por obtener las habilidades que para este fin se imparte la prctica. c. Mtodos de asignacin de calificaciones: Se tomar en cuenta la puntualidad y asistencia a la prctica, el inters por resolver el problema planteado, la entrega de un reporte final que indique la actividad que desarrollaste, lo aprendido y como aplicaras el conocimiento en tu quehacer profesional. d. Formato para portafolio de evidencias: Tendrs que llenar el formato N 2 incluido en el anexo de este manual de prcticas. Debers de desarrollar un reporte que incluya los resultados observados y tus conclusiones.

53/55

Dr. Hugo Barrios


Bibliografa: Balows, A. et al., Manual of Clinical Microbiology. 1991. 5 th, ed ASM Washington D.C. Carter, G.R., Diagnostic procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology. 1978. 4 th, ed Charles C. Thomas Publishers. USA. Scanlan Ch. M. Introduccin a la bacteriologa veterinaria. 1991. Ed Ediciones Acribia, S.A. Espaa. Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. 1987. Microbiologa Mdica. Ed. Manual Moderno. Mxico DF. Koneman EW, Allen SD, Dowell VR, Janda MW, Sommers HM, Winn JT. 1992. Diagnstico Microbiolgico. Ed. Panamericana. Argentina. Baron E, Fineguid S. 1990. Diagnostic Microbiology. Ed. Mosby Company. St Louis MO.

54/55

Dr. Hugo Barrios


Apndice:

Formato N 1: Toma y envo de muestra: Especie animal: Raza: Sexo: Procedencia: Identificacin: Propietario: Tipo de muestra: Tipo de medio de transporte: Forma de conservacin de la muestra: Fecha de toma de muestra: Fecha de envo de muestra: Historia clnica: Diagnstico presuntivo: Estudio solicitado: El animal ha sido tratado, especifique:

55/55

Dr. Hugo Barrios


Formato N 2:

No. Caso Caractersticas de colonia: Bacterilogo:___________________________

Colonia. Medio Forma Elevacin Mrgen Transparencia Brillo Superficie Color Consistencia

A

B

56/55

Dr. Hugo Barrios


Formato N 3: Hoja de trabajo Anotar las fechas al iniciar las pruebas. Bacterilogo:__________________________ ESPECIMEN Medio / Muestra Colonia. Tamao Primo / Res Reincubado Atmsfera Hemlisis Tincin de Gram Tincin de esporas Catalasa Oxidasa Motilidad en gota Crec. a ____ C OF Glucosa / gas TSI SIM UREA MR / VP Citrato Red. Nitratos / Gas Lactosa Maltosa Manitol Rafinosa A B

57/55

Dr. Hugo Barrios


Imagen 1. Descripcin de tipo de colonia:

Imagen 2: Mtodo de siembra

58/55

Dr. Hugo Barrios


Imagen 3:

Diagrama 1: Cocos Grampositivos

59/55

Dr. Hugo Barrios


Diagrama 2: Bacilos Grampositivos

60/55

Dr. Hugo Barrios


Lista de cotejo:Actividad Llegaste puntual al laboratorio (mximo 5 minutos de tolerancia). Ingresaste al laboratorio con la bata puesta? Ingresaste en orden al laboratorio? Guardaste orden durante tu prctica? Pusiste atencin durante la prctica? Conoces el reglamento del laboratorio? Aprendiste a tomar muestras clnicas? Aprendiste a conservar, enviar adecuadamente los tipos de muestra al laboratorio? Puedes describir los riesgos en el manejo de reactivos y sustancias? Puedes describir los riesgos en el manejo de muestras clnicas? Puedes describir los riesgos en el manejo de cultivos bacterianos? Puedes sealar la ruta de evacuacin? Limpiaste el equipo y material una vez finalizada la prctica? Dispusiste de los desechos como lo indica el Manual de Bioseguridad de la facultad. Saliste en orden del laboratorio? Evaluacin profesional en formacin Evaluacin tcnico acreditado Final Observaciones

61/55

Dr. Hugo Barrios

Manual de prácticas bacteriología II FMVZ UAT - 2 _Gabriel Aguirre_

Documents

Transcript of Manual de prácticas bacteriología II FMVZ UAT - 2 _Gabriel Aguirre_