Manual de Prácticas de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II..

Séptimo Semestre 2012

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES “ZARAGOZA”

AUTORES María Teresa Griselda Fuentes Lara Esperanza Jiménez Castañeda Juana Rosado Pérez Estela Valencia Platas COLABORADORES Adrian Flores Barrera Sandy Isabel Hernández Ortega Guadalupe Nélida Ortega Soto Javier de Jesús Piñón Ortega

Manual de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II

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Tabla de Contenido

Página A Manera de Prologo 3 Introducción 4 Práctica No. 1: Valoración del Efecto Analgésico 5 Introducción 6 Objetivos 7 Material, Equipo y Reactivos 7 Metodología 8 Procedimiento 1 8 Procedimiento 2 9 Cuestionario 10 Referencias 10 Práctica No. 2: Bloqueadores de la Placa Neuromuscular 11 Introducción 12 Objetivos 12 Material, Equipo y Reactivos 12 Metodología 13 Cuestionario 14 Referencias 14 Práctica No. 3: Anestésicos Locales 15 Introducción 16 Objetivos 17 Material, Equipo y Reactivos 17 Metodología 17 Método 1: Uso del Simulador 17 Método 2: Uso de Lombrices de Tierra 18 Cuestionario 19 Referencias 19 Práctica No. 4: Anestésicos Generales 20 Introducción 21 Objetivos 23 Material, Equipo y Reactivos 23 Metodología 23 Cuestionario 24 Referencias 24 Práctica No. 5: Valoración del Efecto Anticonvulsivante 25 Introducción 26 Objetivos 27 Material, Equipo y Reactivos 27 Metodología 28 Cuestionario 29


Tabla de Contenido

2

Referencias 29 Práctica No. 6: Fármacos Cardiotónicos 30 Introducción 31 Objetivos 32 Material, Equipo y Reactivos 32 Metodología 33 Método 1: Uso del Simulador 33 Método 2: Uso de la Pulga de Agua 33 Cuestionario 34 Referencias 34 Práctica No. 7: Diuréticos 35 Introducción 36 Objetivos 38 Material, Equipo y Reactivos 38 Metodología 38 Cuestionario 40 Referencias 40 Práctica No. 8: Efecto de los Fármacos Hipoglucemiantes 41 Introducción 42 Objetivos 43 Material, Equipo y Reactivos 43 Metodología 44 Cuestionario 45 Referencias 45 Anexos 46 Anexo Práctica No.3: Simulador 46 Anexo Práctica No.6: Simulador 55 Anexo Práctica No.7: Valoración 63


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3

A Manera de Prólogo

Generalmente esta parte la escribe una persona reconocida en el ámbito a tratar en el texto, pero a menudo a los lectores, y sobre todo a los estudiantes, esta persona nos parece completamente lejana o ajena a nosotros y sus palabras no llegan a tener gran influencia. Es por esto que decidimos aclarar que también somos o fuimos estudiantes de la UNAM, tus compañeros de la FES Zaragoza, que cursamos la materia justo como estás a punto de hacerlo tú. El Manual de Prácticas de Laboratorio de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II que ahora tienes en tus manos contiene un acercamiento general a la información que como profesionista requerirás y es resultado de la exigencia de científicos mejor preparados pero con una conciencia más responsable con el planeta Hoy en día, los científicos tenemos que estar al día en la legislación nacional e internacional y en esta se han dado grandes avances conforme al uso y manejo adecuado de animales de experimentación en donde destaca la Regla de las 3R (Remplazar, Reducir y Refinar). Es por esto que en el presente manual encontrarás nuevas técnicas de experimentación como simuladores computacionales, manejo de organismos de órdenes menores y lotes experimentales de menor tamaño que hoy se emplean con mayor frecuencia en la vida profesional. En cada práctica encontrarás una pequeña introducción cuya única finalidad es guiarte en la búsqueda de información. Es fundamental comprender que todo el tiempo necesitarás buscar profundizar en el tema lo mayor posible con la idea de que “tu educación depende principalmente de ti y de lo que quieras lograr”. De la misma manera recomendamos que tus fuentes de información sean lo más actuales posible ya que la ciencia es un mundo en constante construcción y lo que es cierto hoy puede no serlo del todo mañana. Uno de los objetivos primordiales de este manual es que realices toda esa búsqueda de información antes de la actividad en el laboratorio para que no trabajes a ciegas, por lo cual se proponen una serie de cuestionarios que junto con la introducción te guiarán en la información básica que debes conocer del tema. Con toda la nueva filosofía de trabajo y una serie de pensamientos de personajes célebres al inicio de cada práctica se pretende que el estudiante genere una educación universal y responsable haciendo honor al lema de la UNAM de José Vasconcelos “POR MI RAZA HABLARÁ EL ESPÍRITU” recordando que los estudiantes de hoy serán los profesionistas del mañana que moldearán al país y a la sociedad. Sabemos que la carrera es pesada pero, aunque no lo creas, la humanidad depende de ti así que no te rindas. TUS COMPAÑEROS

FES Zaragoza, UNAM México 2012


Introducción

4

Introducción

En la presente edición del Manual de Prácticas de Laboratorio de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II de la carrera de QUÍMICA FARMACÉUTICO BIOLÓGICA, se ha tratado de mantener los criterios que en un inicio tuvieron los profesores del modulo, respetando su valioso trabajo, pero a su vez, se implementaron algunos cambios que, a nuestro criterio, van de acuerdo a la actualidad, sin que con ello el alumno se pierda en un mar de información. El principal objetivo de este manual, fue el crear una guía que constituyera una herramienta eficaz para el aprendizaje, para lo cual, se tuvo el cuidado de que en cada práctica se incluyeran los siguientes puntos:

Introducción: Que sustenta los principios básicos de cada práctica.

Objetivos: Proporcionan directrices a los estudiantes sobre lo que deberían saber para desarrollar adecuadamente las prácticas.

Metodología: Clara y precisa que facilita las actividades a realizar.

Figuras, Esquemas y Tablas: Que dan un diseño más didáctico y sencillo.

Cuestionario: Cuya función es indicadora del grado de conocimiento adquiridos previos a la práctica.

Referencias: Útil como guía para la búsqueda de información adicional.

Anexos: Contienen suplementos de los simuladores computacionales así como el tratamiento de los datos obtenidos.

Se ha procurado que todo el manual tenga el mismo formato para un mejor uso del mismo, por todo lo anterior, desde nuestro punto de vista, el manual cumple con su cometido, ser un texto básico para estudiantes.

LOS AUTORES FES Zaragoza, UNAM

México 2012


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Valoración del Efecto Analgésico Práctica No. 1


Valoración del E

fecto Analgésico

6

Introducción Al considerar que el término Analgesia proviene de los vocablos griegos, An que significa sin y ÁLGESIS dolor, es fácil deducir que un analgésico es cualquier fármaco que administrado de manera adecuada disminuye o calma la Sensación de Dolor. En general, los analgésicos se pueden dividir en dos grandes categorías, según su naturaleza química, los opioides y los no opioides (o no esteroideos). Los opioides son de exclusiva prescripción médica y su uso es más frecuente en el paciente hospitalizado, un ejemplo es la morfina. El único de éstos que puede ser parte del botiquín es la codeína. Dicha sustancia es muy efectiva en dolores agudos de los huesos y las articulaciones, sobre todo después de una cirugía. Los analgésicos no esteroideos comprenden una amplia lista de sustancias. Estos son los calmantes adecuados para el botiquín por su utilidad en diversos tipos de dolor y la seguridad con que pueden ser usados a las dosis recomendadas. El prototipo de éstos es la aspirina, este grupo también recibe el nombre de Analgésicos Antiinflamatorios No Esteroideos (AINES).

DERIVADOS DE: EJEMPLOS

Ácido Salicilico Ácido acetil-salicilico (aspirina). p-aminofenol Acetaminofén.

Ácido acético Indometacina, ketorolaco y diclofenaco. Ácido propionico Ibuprofeno, naproxén y oxaprozina.

Fenamatos Ácido mefenámico y ácido meclofenámico

Ácidos enólicos Piroxicam, fenilbutazona y dipirona

Alcanonas Nabumetona

La mayoría de los AINES, son fármacos que tienen otras propiedades como antiinflamatorios y/o antipiréticos (reducen la fiebre).

Los analgésicos Opioides incluyen los derivados de los alcaloides, ya sean naturales o sintéticos. El prototipo de estos es la Morfina, obtenida a partir de la amapola, también se encuentra la Metadona, Meperidina y Propoxifeno (analgésico débil).

Tabla 1.1 Ejemplos de AINES


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Definición del Dolor Para poder entender cómo es que actúan estos fármacos, es necesario tener una

idea de lo significa el Dolor, aunque es muy difícil hacerlo, pues es subjetivo. La definición más comúnmente aceptada del dolor es la proporcionada por la

Asociación Internacional para el Estudio del Dolor (Internacional Association for the Study of Pain, IASP):

"El dolor es una experiencia sensorial y emocional no placentera relacionada con daño potencial o real del tejido, o descripta en términos de tal daño. El dolor siempre es subjetivo".

La cuestión de que el dolor siempre es subjetivo es muy importante y enfatiza que el dolor es una experiencia somatopsíquica. Aristóteles se refirió a esto cuando describió al dolor como una "pasión del alma". Esto enfatiza que una variedad de factores diversos pueden causar o agravar el dolor, lo cual debe considerarse en la evaluación y tratamiento. Una definición clínica más práctica es: "El dolor es lo que el paciente dice que es. Es lo que el paciente describe y no lo que los demás piensan que debe ser. Por lo que el dolor es una respuesta del organismo ante el daño, leve o severo y se convierte así en un signo de alerta.

La sensación se desencadena cuando, se producen ciertas sustancias llamadas Prostaglandinas estas sustancias a su vez generan la acción de enzimas que actúan sobre otros componentes de las células. Una de las enzimas que favorece la producción de prostaglandinas es la llamada Ciclooxigenasa, de las cuales existe la I y la II. La primera se encuentra en todos los tejidos mientras que la segunda solo está en el riñon y en los sitios en que ocurre inflamación y dolor es a este nivel donde actúan los AINES. Acción de los Analgésicos

Los analgésicos bloquean la producción de las prostaglandinas necesarias para desencadenar la sensación del dolor, gracias a que inhiben la acción de las enzimas denominadas ciclooxigenasas Por eso mismo, los analgésicos tienen también propiedades antiinflamatorias y antipiréticas (controlan la fiebre). El Acetaminofén es el único cuya forma de acción no afecta las prostaglandinas.

El otro mecanismo de acción es mediante la fijación a los receptores opiáceos produciendo analgesia; a nivel del SNC bloqueando y modulando las señales dolorosas a los cordones espinales y cerebro, esta acción es característica del el D-Propoxifeno (dextropropoxifeno) Objetivo

Observar y valorar el efecto analgésico del Propoxifeno en ratón, administrado en dosis variadas por vía intraperitoneal (I.P.) valorando el efecto a diferentes tiempos.

Material, Equipo y Reactivos MATERIAL BIOLÓGICO

Cinco ratones adultos (20-30gramos)

MATERIAL Y EQUIPO

Una pinza de mosco con mango de hule (tipo caimán)

Dos jeringas de 1 mL (tipo insulina)

Una balanza granataria con canastilla para pesar animales.

Un reloj REACTIVOS


Valoración del E

fecto Analgésico

8

Analgésico (Propoxifeno u otro similar)

Solución salina Metodología

El método que se utilizará, se basa en producir dolor experimentalmente en los animales de laboratorio, y medir el tiempo en que tarda en aparecer una conducta o síntoma indicativo del dolor. Este procedimiento se lleva a cabo en ausencia y en presencia del analgésico.

Los mecanismos para producir dolor son físicos (se aplica una pinza sobre la cola del animal, se coloca al animal sobre una placa caliente o bien se sumerge la cola en agua a 50° C), y químicos (se inyecta un agente químico al animal). Procedimiento 1

1. Colocar la pinza de mosco (o caimán) a 1 cm de la base de la cola del ratón.

2. La respuesta positiva al dolor se caracteriza por vocalización y/o movimientos para

alcanzar o morder la pinza, en un lapso de 10 segundos. En caso contrario, deseche al anormal y tome otro.

3. Enseguida pese y numere a cada ratón.

4. Administre a cada ratón por I.P. la dosis del fármaco (asignada aleatoriamente) de acuerdo a la siguiente tabla:

Tabla 1.2 Dosis de Administración

RATÓN Dosis (mg/Kg)

1 100 (solución 10 mg/mL)



4 35 (solución 3.5 mg/mL)

5 Control 0.1 mL Solución Salina/ 10g

Preparar soluciones a partir de la solución madre de 10 mg/mL, para inyectar 0.1 mL de cada solución por 10 g de peso.

5. Una vez administrado el fármaco, mida el tiempo.

Imagen 1. Forma correcta de colocar el caimán en la base de la cola del ratón.

Imagen 2. Administración

Intraperitoneal en ratón.


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9

6. Aplique nuevamente la pinza arterial de la manera antes descrita, a los 15', 30', 60', y 90', y evalúe la respuesta de cada ratón.

7. Si muerde la pinza (positivo al dolor) no existe analgesia. 8. Si no muerde la pinza (negativo al dolor) existe analgesia. 9. Anote sus resultados en la siguiente tabla:

10. Los resultados de todos los equipos se anotarán en la tabla 1.4.

Tabla 1.4 Resultados por Grupo

DOSIS MG/KG LOG Dosis Animales (sin dolor)

Animales Probados

% RESPUESTA

15' 30' 60' 90' 15' 30' 60' 90'

100

70

50

35

11. Con los resultados obtenidos construya una curva de tiempo vs efecto para

cada dosis. 12. Si los resultados lo permiten, calcule la dosis efectiva

media (DE50) con el tiempo de efecto máxime

Procedimiento 2

Existe una variante del método 1, que consiste en lo

siguiente:

1. Calentar aproximadamente 100 mL de agua a 50° C.

2. Colocar un ratón dentro de un cono (o algo

parecido), de tal manera que la cola salga del mismo.

Tabla 1.3 Resultados por Equipo

RATÓN DOSIS MG/KG VALORACIÓN DEL EFECTO

15' 30' 60' 90'

1

2

3

4

5

Imagen 3. Ratón en cono con

cola saliendo


Valoración del E

fecto Analgésico

10

3. Introducir la mitad de la cola por 10 segundos en el agua.

4. La respuesta positiva al dolor se caracteriza por

vocalización y/o movimientos bruscos para extraer la cola

del agua o salir del cono. En caso contrario, deseche al

animal y tome otro.

5. Enseguida pese y numere a cada ratón.

6. Administre a cada ratón por vía I.P. la dosis del fármaco

(asignada aleatoriamente) de acuerdo a la tabla 1.2.

7. Una vez administrado el fármaco, mida el tiempo.

8. Repita los pasos del 1 al 3 a los 15', 30', 60', y 90',

9. Evalúe la respuesta de cada ratón.

10. Si su actitud no es agresiva, es decir, si no le afecta el agua

caliente, existe analgesia.

11. Anote sus resultados en la tabla 1.3.

12. Los resultados de todos los equipos se anotarán en al tabla 1.4.

13. Con los resultados obtenidos construya una curva de tiempo vs efecto para cada

dosis.

14. Si los resultados lo permiten, calcule la dosis efectiva media (DE50) con el tiempo

de efecto máximo.

Cuestionario

1. Describa el papel que juegan las prostaglandinas en el dolor. 2. ¿Cuál es el mecanismo de acción analgésica de la aspirina, naproxeno y

piroxicam? 3. ¿Cuál es el mecanismo de acción del Propoxifeno?

4. ¿Qué función tienen las Ciclo-oxigenasas 1 y 2, y como afectan al organismo?

5. ¿Cuáles son las teorías del dolor y que dice cada una de ellas?

6. ¿Cuál es la norma oficial mexicana que aborda el manejo y sacrificio correcto de los animales empleados en el laboratorio?

7. Realice una guía de manejo y sacrificio para ratas, ratones, conejos y ranas.

Referencias 1. Goodman L.S.& Gilman A. 1996. The Pharmacological Basis of Therapeutics. 9a.

edición. McGraw Hill. U.S.A. 2. Barastegui, AC, Esquemas y Prácticas de Farmacología. Espaxs, España 1976. 3. Bertrand G. Katzung, Farmacología Básica y Clínica, 8a ed. Manual Moderno, México

2002.

4. NOM-062-Z00-1999 Especificaciones Técnicas para la Producción, Cuidado y Uso de los Animales de Laboratorio.

Imagen 4. Ratón en agua

caliente


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Bloqueadores de la Placa Neuromuscular

Práctica No. 2


Bloqueadores de la P

laca Neurom

uscular

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Introducción Durante el siglo XVI los exploradores europeos encontraron que los nativos de la cuenca del Amazonas usaban un veneno en la punta de sus flechas que producía la muerte.

Después de muchas investigaciones se encontró que el curare es el extracto crudo activo de varias especies de plantas cuyo principio activo es la D-tubocurarina. El músculo esquelético voluntario está inervado por neuronas motoras cuyos axones son capaces de conducir potenciales de acción a altas velocidades. Al área del músculo que yace junto a la terminación axónica se le conoce como placa motora y a la sinápsis química que existe entre ambas como unión neuromuscular.

Los fármacos que actúan en la unión neuromuscular pertenecen a dos grupos:

PRESTNÁPTICOS:

Fármacos que inhiben la síntesis de acetilcolina por ejemplo hemicolinio.

Fármacos que inhiben et almacenamiento de la acetilcolina en las vesículas por ejemplo el AH5183.

Fármacos que inhiben la liberación de acetilcolina por ejemplo la estreptomicina. POSTSINÁPTICOS

Fármacos no despolarizantes. Antagonistas competitivos de los receptores nicotínicos de la acetilcolina. Ejemplo la D-tubocurarina'

Fármacos despolarizantes. Activan los receptores nicotínicos produciendo una despolarización inicial, pero bloquean la acción subsecuente de los receptores. Ejemplo la succinilcolina.

Estructura de la Succinilcolina

Objetivo

Demostrar experimentalmente el efecto de la succinilcolina en la unión neuromuscular de ratones balb/c.

Material, Equipo y Reactivos. MATERIAL BIOLÓGICO

4 ratones balb/c. MATERIAL Y EQUIPO

2 cajas para ratones.

1 rejilla para caja de ratones

4 jeringas de 1mL

Vaso de precipitados de 1L


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Mechero Bunsen con manguera

Tripie

Toalla o trapo absorbente

Balanza granataria con canastilla para pesar animales

Cronometro REACTIVOS

Solución de succinilcolina

Solución salina Metodología Prueba de escalada.

1- Por equipo tomar 4 ratones balb/c en una caja con tapa (reja).

2- Pesar cada uno de los ratones en una balanza con canastilla y registrar los valores marcando la cola de cada ratón para su posterior identificación (del 1 al 4).

3- Inclinar la tapa de la caja de los ratones para que forme un ángulo de 80° con respecto a la mesa y poner a escalar cada uno de los ratones.

Prueba de nado.

4- En una segunda caja para ratones colocar agua hasta a mitad.

5- Calentar agua con un mechero bunsen en un tripié y mezclar con el agua de la caja, midiendo la temperatura hasta obtener un valor entre 35°C y 38°C.

6- Tomar el ratón marcado con el número 1, que previamente ya escaló la reja, e introducirlo con cuidado al agua para que nade 30 segundos aproximadamente.

7- Sacar de la caja y secar al ratón perfectamente con una toalla, cuidando mantenerlo caliente para evitar que muera por hipotermia.

Administración del fármaco y pruebas.

8- Por medio del peso del ratón y la concentración de la solución de succinilcolina hacer el ajuste para administrar al ratón 1 una dosis de 0.7 mg/Kg vía intramuscular.

9- Inmediatamente después repetir la prueba de escalada y registrar el tiempo que tarda el ratón en caer por no poderse sujetar correctamente.

Imagen 1. Prueba de escalada con rejilla a 80° de inclinación.

Imagen 2. Prueba de nado en caja con agua a 35-38°C.

Imagen 3. Administración intramuscular en ratón.


Bloqueadores de la P

laca Neurom

uscular

14

10- Sucedido lo anterior repetir la prueba de nado y registrar el tiempo que tarda el ratón en no poder nadar más.

11- Repetir la prueba de escalada y de nado hasta que el efecto pasé y registrar el tiempo transcurrido.

12- Continuar de la misma forma con los ratones 2 a 4 uno tras otro (No realizar las pruebas simultáneamente) administrando dosis de 0.9 mg/Kg y 1.1 mg/Kg a los ratones 2 y 3. Al ratón 4 se le administra 0.1 mL/g de peso de solución salina (Control).

13- Reportar los resultados en la siguiente tabla:

Ratón Dosis (mg/kg)

Tiempo de latencia Tiempo de duración del efecto

Tiempo de recuperación

1

2

3

Control

Cuestionario

1. Haga un esquema de la placa neuromuscular. 2. ¿Cómo se clasifican los fármacos que actúan en la unión neuromuscular? Indique cada grupo.

3. Describa el mecanismo de acción dé la succinilcolina. 4. Menciona el perfil farmacocinético de la succinilcolina. 5. Usos clínicos y efectos adversos de la succinilcolina. 6. lnvestiga las interacciones farmacológicas de la succinilcolina. 7. ¿Qué pasa al estimular directamente el músculo?, ¿Por qué?

Referencias

1. Goodman, L.S. & Gilman A. 1996. The Pharmacological Basis of Therapeutics. 9a. edition. McGraw HiII. U.S.A. 2. Flores J. 2000. Farmacología Humana. Masson Barcelona. 3. Rang H, Dale M. y Ritter J. 2000. Farmacología. 4a. edición., Harcourt. España 4. Taylor M. y Reide P. 1999. Harcourt. España. 5. Velascó A. 2003. Farmacología. McGraw Hill. España.


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Anestésicos Locales Práctica No. 3


Anestésicos Locales

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Introducción.

Los anestésicos locales son fármacos que previenen o alivian el dolor al interrumpir la conducción nerviosa. Cuando se aplica de manera local en el tejido nervioso en concentraciones apropiadas, actúan en cualquier parte del sistema nervioso en cualquier tipo de fibra nerviosa. Este grupo de fármacos no produce inconciencia y su sitio de acción es la membrana celular de las células excitables, como la membrana nerviosa. El uso efectivo y seguro de los anestésicos locales requiere no solo que los fármacos bloqueen la conducción de algunos nervios, sino también que esta acción sea rápida y totalmente reversible y que no tenga efectos tóxico sistémicos mayores.

Mecanismo de acción: El aspecto singularmente mas importante de las acciones de los anestésicos locales es la reducción del aumento transitorio de la permeabilidad al sodio asociada con la fase de ascenso –es decir la despolarización- del potencial de acción. Esta reducción de la permeabilidad al sodio se debe a los efectos de los fármacos sobre los canales de la membrana del sodio sensibles al voltaje.

Los anestésicos locales son aminas de pKa que varia entre 8 y 9. Por lo tanto puede existir en solución como la especie cargada (catiónica) o no cargada, y el pH dependerá del medio, Fig. 3.1. La lidocaína (xilocaína) y la procaína (novocaína) se consideran agentes prototipo de los anestésicos locales. La lidocaína introducida en 1948, actualmente es uno de los anestésicos locales más ampliamente utilizados. La estructura se muestra en la Fig. 3.1. se utiliza como anestésico local en procedimientos odontológicos, en el tratamiento de disritmias ventriculares (especialmente cuando estas se presentan ene le infarto de miocardio o en cirugía cardiaca), atenuación de la respuesta vaspresora (presión arterial sistémica/presión intracraneana) en la intubación y en la atenuación de las fasciculaciones provocadas por succinilcolina.

Fig. 3.1.

Estructura química de un anestésico local

FARMACOCINETICA DE LA LIDOCAÍNA: inicio, rápido: duración, moderada (60-120 min); T1/2 1.6 h; Vd de

91 L; depuración, 91 L/min; unión a proteína del 65%. Efecto: antiarrítmico. Sedación, bloqueo nervioso;

disminuye la conducción de los canales de sodio. Su eliminación es por metabolismo hepático produciendo

metabolitos activos y tóxicos; eliminación renal (10% sin metabolizar). Toxicidad: los efectos adversos de la

lidocaína que se observan al aumentar la dosis consisten en vértigo, convulsiones, desorientación, bloqueo

cardiaco o hipotensión arterial. Concentración sérica terapéutica = 1.5 mg/L


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icos

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Objetivos

Por medio del uso de un programa de simulación que el alumno aprenda el efecto de los anestésicos locales al aplicar un estimulo nervioso.

Demostrar el bloqueo del impulso nervioso por la acción de un anestésico local, al aplicar un estímulo en una preparación ciático-gastrocnemio por medio del uso de un programa de simulación.

Que el alumno de manera practica conozca el efecto de los anestésicos locales al aplicar un estimulo nervioso (químico, físico o térmico).

Material, Equipo y Reactivos.

PARTE 1 (1° Sesión) MATERIAL BIOLÓGICO

NO MATERIAL Y EQUIPO

Computadora personal con simulador instalado

REACTIVOS

NO


Lombrices de tierra. MATERIAL Y EQUIPO

Termómetro

Mechero

Tripié

Vaso de precipitados de 600 ml

Aguja

REACTIVOS

Lidocaína 2%

Acido clorhídrico 0.1 N Metodología Método 1: Uso del Simulador


Anestésicos Locales

18

1. DETERMINACION DEL ESTIMULO UMBRAL

1.1- Seleccionar “Fisiología del impulso nervioso”.

1.2- Seleccionar en menú EXPERIMENTO: “Inhibir efecto nervioso”.

1.3- Fijar el voltaje a 1.0 V.

1.4- Pulsar ESTIMULAR.

1.5- Aumentar el voltaje en 0.5 V hasta obtener respuesta.

1.6- Guardar el valor umbral.

2. INHIBICIÓN CON LIDOCAINA

2.1- Borrar gráfica anterior.

2.2- Seleccionar gotero con lidocaína.

2.3- Aplicar lidocaína entre los electrodos.

2.4- Pulsar ESTIMULAR y guardar.

2.5- Presionar el botón LAVAR.

2.6- Presionar ESTIMULAR y guardar.

REPETIR EL MISMO PROCEDIMIENTO EN EL SIMULADOR CON EL CURARE Y EL

ETHER, REGISTRAR Y OBSERVAR LOS CAMBIOS QUE SE EFECTUAN AL

ADICIONAR CADA SOLUCION.

Método 2: Uso de lombrices de tierra.

3. EFECTO DE LA LIDOCAÍNA EN LOMBRIZ DE TIERRA.

3.1- ESTÍMULO QUIMICO.

3.1.1- Tomar tres lombrices y colocarlas en una caja Petri.

3.1.2- Colocarles tres gotas de HCL 1.0N en la cola de la lombriz (zona

más anillada), observar la reacción de la lombriz.

3.1.3- Después de haber observado la reacción de la lombriz colocarle

unas gotas de lidocaína dejar reaccionar aproximadamente 5 min.

3.1.4- Pasados los 5 min de efecto de la lidocaína adicionar nuevamente

unas gotas de HCl 0.1 N observar y registrar los resultados.

3.2- ESTÍMULO TÉRMICO.

3.2.1- Calentar agua a 40°C.

3.2.2- Colocar tres lombrices en una caja Petri.

3.2.3- Dejar caer de manera continua y con ayuda de una pipeta pasteur

agua previamente calentada a 40 °C y observar si reaccionan, de no ser

así intentarlo con otras lombrices hasta ver que reaccionen.

3.2.4- Seguir calentando el agua hasta los 50 °C.

3.2.5- Colocar unas gotas de lidocaína e la cola de las lombrices dejar 5

min a que haga el efecto anestésico.

3.2.6- Pasados los 5 min verter de manera contante un poco de agua

previamente calentada a 50 °C.

3.2.7- Observar si reaccionan o no y registrarlo.


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19

3.3- ESTÍMULO FÍSICO.

3.3.1- Colocar tres lombrices en una caja Petri.

3.3.2- Picar la cola de la lombriz (la zona más anillada y móvil) con una

aguja, observar la reacción de la lombriz.

3.3.3- Adicionar unas gotas de lidocaína y dejar hacer efecto por un

aproximado de 5 min.

3.3.4- Tras pasar los 5 min volver a picar la cola de la lombriz con la

misma aguja observar y registrar si hubo o no reacción.

Cuestionario

1. Mencione brevemente el mecanismo de acción de un anestésico local.

2. La estructura química de un anestésico local consta de:

3. En la preparación ciático-gastrocnemio, menciona el sitio de acción del anestésico

local.

4. ¿Que se observa al colocar los electrodos directamente en el músculo?

5. Usos clínicos de los anestésicos locales.

6. ¿Por qué se tiene que descerebrar y desmedular a la rana en la preparación

ciático-gastrocnemio?

7. Defina “Umbral de excitacion”

8. Al añadir un vasoconstrictor, como la adrenalina a un anestésico loca, la absorción

aumenta o disminuye.

Referencias

1. William Catterall y Kenneth Mackie. Anestésicos locales. In Goodman and Gilman,

las bases farmacológicas de la terapéutica, 9th ed. (Ardian JUL, Limbird LE,

Molinoff PB, Rudon RW Eds). Ed. McGrawn-Hill. Inc., New York 1996.

2. Cedric M. Anestésia local y anestésicos locales. In farmacología, 1ª. Ed. (Smith,

CM., Reynard, AM Eds). Buenso Aires, Argentina, 1993, pp. 219-230

3. Mary J, Myce, Sheldon B, Gertner, Maria Mena Perper. In farmacology,

Lippincott´s illustrated Reviews. (Harvey RA., Champe PC Eds) J.B. Lippincott

Company, 1992.


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Anestésicos Generales Práctica No. 4


Ane

stés

icos

Gen

eral

es

21

Introducción

La definición de anestesia general ha sufrido pocas modificaciones desde su

descubrimiento en 1845, con las experiencias de Wells con óxido nitroso y de Morton en

1846 con éter. Clásicamente, se la ha definido como una depresión descendente y

controlada de las funciones del SNC inducidas farmacológicamente. Otra forma más

práctica de definir la anestesia general es en función de los objetivos que persigue, como

un estado reversible de depresión del SNC, caracterizado por pérdida de la conciencia

(hipnosis), de la sensibilidad (analgesia), de la actividad refleja (protección

neurovegetativa) y de la motilidad (relajación muscular).

En la actualidad se habla de «estado anestésico», que se define como el resultado

de la acción combinada y dinámica de diversos efectos farmacológicos que pueden

aparecer por la activación de diversos grupos de receptores, dando lugar a hipnosis,

analgesia, bloqueo de la unión neuromuscular, amnesia y bloqueo de la respuesta

vegetativa al estrés. Dinamismo (cambio de las necesidades de efecto farmacológico) y

sinergia (potenciación de los efectos) son dos aspectos fundamentales en la combinación

necesaria para mantener este «estado anestésico».

Al obtener mayor información sobre el mecanismo de acción de los anestésicos

generales, se han diferenciando dos componentes fundamentales en la representación

gráfica del concepto de anestesia moderna. Un componente sería el cortical, que

integraría inconsciencia y amnesia, y el segundo o subcortical, que correspondería a la

antinocicepción (analgesia) y la estabilidad motora y autónoma (relajación muscular y pro-

tección neuro vegetativa).

A pesar de las investigaciones realizadas, aún no está claro el mecanismo de

acción de los anestésicos generales. Se ha considerado que los agentes

anestésicos generales eran fármacos de acción inespecífica que modificaban las

propiedades fisicoquímicas de la membrana neuronal.

Meyer y Overton postularon la teoría de un lugar de acción lipofilo y relacionaron la

potencia del anestésico con su solubilidad lipídica.

En la actualidad se piensa que los anestésicos generales ejercen su efecto en la

transmisión sináptica y no en la conducción axonal. Actuarían fundamentalmente

sobre proteínas y no sobre lípidos, de forma que los estudios que se realizan en la

actualidad se dirigen a los mecanismos moleculares de la anestesia.

Una serie de receptores, canales de iones (Ca2+, K+) dependiente de voltaje,

canales de iones dependientes de ligando (GABA, NMDA) y neurotransmisores se

han considerado lugares específicos en los que actuarían los anestésicos gene-

rales.

Coeficiente de partición sangre/gas. El agente inhalatorio pasa desde el alvéolo a la

sangre para luego llegar al cerebro. Este coeficiente informa de la solubilidad en sangre

(agua) del fármaco y es, por lo tanto, inversamente proporcional a la rapidez de su acción.

Coeficiente de partición aceite/gas. El tejido cerebral es rico en lípidos. Cuanto más

liposoluble sea el agente, más se retendrá en el SNC. Por lo tanto, es un índice

directamente proporcional a la potencia del agente anestésico.


Anestésicos G

enerales

22

Etapas de la anestesia

Período I: inducción-analgesia. Abarca desde el inicio de la anestesia hasta la

pérdida de conciencia. Se comprueba la ausencia de respuesta a las órdenes verbales,

no hay pérdida de respuesta al dolor, aunque el grado de analgesia depende del tipo de

anestésico empleado.

Período II: excitación o delirio. La respiración es irregular, hay retención de la

respiración, posibilidad de laringospasmo y secreciones. El ritmo cardíaco aumenta e

incluso puede haber arritmias. La respuesta a estímulos físicos está aumentada. Es el

periodo de mayor peligro para el paciente porque pueden aparecer complicaciones, como

obstrucción de las vías respiratorias superiores por relajación de la musculatura de la

faringe, laringospasmo, regurgitación o aspiración del contenido gástrico, acumulación

excesiva de secreciones e hipotensión secundaria a una depresión miocárdica o a

vasodilatación periférica.

Los dos primeros períodos constituyen la inducción, que se caracteriza por la

pérdida rápida de la conciencia y el paso al plano superficial de la anestesia quirúrgica.

Período III: anestesia quirúrgica propiamente dicha: En este periodo, que incluye

cuatro planos, la respuesta somática a los estímulos disminuye progresivamente hasta ser

nula en la anestesia profunda. Al principio, el ritmo cardíaco y la frecuencia respiratoria

son regulares, pero ésta va deprimiéndose hasta presentar apnea. La frecuencia cardíaca

se mantiene estable en cuanto al ritmo, pero se inicia un ligero descenso de la presión

arterial; se produce relajación muscular.

Período IV: parálisis bulbar. Se produce por depresión de los centros bulbares

hasta el paro respiratorio, coma y muerte. Esta situación puede ocurrir por un accidente

anestésico al profundizar la anestesia.

Tipos de anestesia general

Según el tipo de fármaco empleado para garantizar la hipnosis, se distinguen los

siguientes tipos de anestesia:

Monoanestesia. Se empleaba un solo fármaco. Este tipo era característico en las

anestesias con éter y cloroformo.

Anestesia general balanceada. Generalmente se utiliza un inductor hipnótico

intravenoso, se mantiene con un agente inhalatorio y se combinan con opioides y

relajantes musculares.

Anestesia intravenosa total. Se emplea propofol como inductor y en perfusión para

el mantenimiento de la hipnosis. Se prescinde por completo de los inhalatorios y

se emplean analgésicos y relajantes musculares.

Anestesia con inducción y mantenimiento inhalatorio total. Se emplea un agente

inhalatorio para la inducción anestésica (generalmente sevoflurano) y se mantiene

la hipnosis con él. No se utiliza propofol ni otros hipnóticos intravenosos. Se

combina con analgésicos centrales y relajantes musculares.

Neuroleptoanestesia. Se empleaban neurolepticos (deshidrobenzoperidol)

asociados a opiáceos. Mayor efecto antiemético, despertar más lento. En desuso.

Anestesia analgésica. Se basa en el efecto hipnótico colateral de los opioides

cuando se emplean en dosis muy altas. Muy empleada en cirugía cardíaca.


Ane

stés

icos

Gen

eral

es

23

Anestesia disociativa. Se emplea ketamina como hipnótico. No tiene efecto

depresor cardiorrespiratorio y proporciona una analgesia eficaz.

Objetivo

Demostrar la anestesia general en camarones, producida por fármacos o

sustancias con propiedades anestésicas.

Identificar las etapas de la anestesia general

Identificar el tiempo en que produce su efecto el fármaco, y el tiempo de

recuperación del camarón

Material, Equipo y Reactivos

MATERIAL BIOLÓGICO

• Cuatro camarones de tamaño mediano.

MATERIAL Y EQUIPO

• Dos Peceras

• Bomba para oxigenación

• Vaso de precipitados 500 mL

• Jeringas de 1 mL

REACTIVOS

• Halotano

Metodología

1. Colocar los camarones en una pecera

con oxigenación, para observar su

comportamiento inicial, si es necesario

inducir el movimiento con ayuda de una

varilla de vidrio, picando en los costados

del camarón.

2. En otra pecera colocar 0.25 ml de

Halotano en 500 mL de agua.

3. Colocar uno de los camarones en la

pecera con halotano y picar de la misma

forma con la varilla de vidrio. Registrar

el tiempo de latencia.

4. Seguir registrando el tiempo de

excitación (sobrerreacción al estímulo),

hipnosis (movimiento pero no reacción

al estímulo) y anestesia (se voltea

completamente de cabeza y se encorva)

5. Cambiar al camarón a la pecera con

oxigenación y registrar el tiempo de

recuperación.

Imagen 1. Camarón mediano y 3 camarones pequeños en pecera.

Imagen 2. Estimulo con varilla de vidrio.


Anestésicos G

enerales

24

6. A la pecera con halotano agregar otros 0.25 ml de este ANESTESICO y colocar al

otro camarón.

7. Realizar el mismo procedimiento que con el primer camarón.

Cuestionario

1. ¿Cuál es el mecanismo de acción de los anestésicos generales?

2. Mencione las etapas de la anestesia general.

3. ¿Qué otros fármacos además del halotano existen como anestésicos generales?

4. ¿Qué otras sustancias se administran en conjunto con los anestésicos generales y

cómo funcionan?

5. ¿A qué se refiere el CAM de un anestésico general y que representa?

6. ¿Qué es el coeficiente de partición?

Referencias

1. Goodman & Gillman's, Las bases Farmacológicas de La terapéutica, 10a ed.,

Me. Graw Hill, México 2003

2. BertrandG. Katzung, Farmacología Basica y Clínica, 8a ed., Manual Moderno,

México 2002

3. C. Barastegui Almagro. Esquemas y Prácticas de Farmacología. Editorial Espax,

1976, Barcelona, España.


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Valoración del Efecto Anticonvulsivante

Práctica No. 5


Valoración del E

fecto Anticonvulsivante

26

Introducción

El término epilepsia, es una enfermedad crónica que se refiere a un grupo de

síndromes del SNC, caracterizado por accesos de descargas neuronales sincrónicas

sostenidas, los cuales son súbitos, transitorios y recurrentes. Afectan los siguientes

sistemas: autonómico, psíquico, sensitivo y motor, creando gran variedad de signos y

síntomas. El término convulsión se utiliza como sinónimo de epilepsia. La etiología es

multifactorial (causas metabólicas, defectos cerebrales congénitos, prenatales, perinatales

(durante el parto), postnatales y convulsiones provocadas por agentes químicos).

Como ejemplos tenemos: hipoglucemia, hidrocefalia, infecciones, daño cerebral

por parto prolongado, cisticercosis y las provocadas por pentilentetrazol, etc. Son varios

los mecanismos neurofisiológicos y bioquímicos que intervienen en la enfermedad:

cambios bioquímicos locales, isquemia, pérdida de sistemas inhibitorios vulnerables,

descargas sincrónicas de otras células, etc.

Las crisis epilépticas se clasifican en:

1- Parciales (focales y locales)

a. Parciales simples

b. Parciales complejas

c. Parciales generalizadas de tipo secundario

2- Crisis Generalizadas Convulsivas o No Convulsivas

a. Crisis de ausencia

b. Crisis de ausencia atípicas

c. Mioclónicas

d. Clónicas

e. Tónicas

f. Tonico clónicas (Gran Mal) status epiléptico

g. Atónicas

Por lo tanto, para tratar la epilepsia se debe descartar si hay un solo tipo de crisis o

si se presentan varios tipos ya que de eso depende un buen tratamiento.

Los anticonvulsivos se clasifican en varios grupos para tratar los diferentes tipos

de crisis:

1- Hidantoinas: hidantoina (Canales de Na+)

2- Iminoestilbenos: carbamazepina (Canales de Na+)

3- Barbitúricos: fenobarbital (Mediadores GABA)

4- Desoxibarbitúricos: primidona

5- Succimidas: etosuccimida (Canales de Ca2+)

6- Oxazolindionas: parametadiona (Canales de Na+)

7- Benzodiacepinas: diacepam (Mediadores GABA)

8- Otros grupos: ácido valproico (Canales de Na+)


Val

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lsiv

ante

27

Los más utilizados para crisis generalizada son las hidantoinas y la carbamazepina

y para las ausencias la etosuccimida. Para el estado epiléptico el más recomendable es el

Diazepam.

Estructura del Diazepam

El mecanismo de acción de los anticonvulsivos (del tipo benzodiacepinas) es

disminuir la entrada de calcio por bloqueo de los conductos de sodio (despolarización) y

potenciar los efectos inhibitorios debido a la estimulación de vías GABAergicas por

aumento de descargas de abertura de los canales de cloro.

Para la valoración de nuevos medicamentos, se utiliza el pentilentetrazol para

crear crisis convulsivas. Esto provoca hipoxia por espasmo vascular lo que ocasiona

cambios degenerativos en la corteza cerebral debido al antagonismo fisiológico.

Objetivos

Demostrar el efecto anticonvulsivante del diazepam en las convulsiones

producidas por el pentilentetrazol,

Observar que tipo de convulsiones produce el pentilentetrazol.


MATERIAL BIOLÓGICO

Dos ratas Wistar

MATERIAL Y EQUIPO

Dos jeringas para insulina REACTIVOS

Solución de Pentilentetrazol de 65 mg/mL

Diazepam de 5 mg/mL


Valoración del E

fecto Anticonvulsivante

28

Metodología

1. Pesar cada rata y marcarlas, una se usará para probar el efecto preventivo y en la

otra el efecto curativo del diazepam.

2. En la rata marcada como 1,administrar diazepam 2mg/kg vía intraperitoneal

3. Esperar 20 minutos.

4. Aplicar una dosis de pentilentetrazol 64mg/kg vía intraperitoneal.

5. Observar si se presenta algún tipo de convulsión.

6. En caso de que ocurra se anota la latencia del pentilentetrazol y tipo de

convulsión.

7. Para observar el efecto curativo del diazepam, administrar a la rata marcada como

2, una dosis de 64mg/kg de pentilentetrazol vía intraperitoneal.

8. En cuanto aparezca la convulsión aplicar la dosis de diazepam 2mg/ kg vía

intraperitoneal.

9. Tomar el tiempo de latencia para el inicio del efecto del diazepam.

10. Realizar el sacrificio de los animales con ayuda de cloroformo.

11. Anote sus resultados en las siguientes tablas

Tabla 1: Análisis del efecto Preventivo

Equipo Tiempo de latencia del Pentilentatrazol No Convulsionó

1

2

3

4

5

6

Tabla 2: Análisis del efecto Anticonvulsivo

Equipo Tiempo de latencia del Diazepam No Convulsionó

1

2

3

4

5

6


Val

orac

ión

del E

fect

o A

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onvu

lsiv

ante

29

Cuestionario

1. Defina estado epiléptico

2. Escriba la clasificación de las crisis convulsivas

3. Escriba la clasificación de los anticonvulsivos

4. Escriba y analice el mecanismo de acción de los anticonvulsivos

5. ¿Cuáles son los efectos adversos generales de los anticonvulsivantes?

6. Describa la farmacocinética del Diazepam

7. ¿Cuáles son los efectos adversos del Diazepam?

8. ¿Cuáles son los usos clínicos del Diazapam y del Pentilentetrazol?

9. ¿Cuáles son las interacciones del Diazepam?

Referencias

1. Hardman, J. Limbird L. Molinof P. Ruddon R. and Goodman A. 1996. Goodman &

Gilman. Las Bases Farmacológicas de la Terapéutica. 9° Edición. Vol. 1. Ed.

McGraw Hill Interamericana. E.U.

2. Katzung, B. 2001. Farmacología Básica y Clínica. 8° Edición. Ed. Manual Moderno,

México.

3. Smith, C. Reynard A. 1993. Farmacología. Ed. Médica Panamericana. Argentina.


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Fármacos Cardiotónicos

Práctica No. 6


Fár

mac

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31

Introducción

Los digitálicos son los cardiotónicos más antiguos utilizados en el tratamiento de la

insuficiencia cardiaca congestiva (lCC). Son sustancias de origen natural, cuya fuente

importante de obtención es la Digitalis purpúrea o Digitalis lanata y el prototipo es la

digoxina, medicamento compuesto por un núcleo esteroidado con un anillo lactona de

cinco miembros no saturados en posición 17 y una serie de azúcares unidos al carbono 3

del núcleo, cuya relación estructura-actividad le confiere las actividades farmacocinéticas

y farmacodinámicas. Siendo el núcleo esteroide y la lactona responsables de su actividad

cardiotónica, los residuos glucosídicos influyen en la absorción, la vida media y su

biotransformación.

Digoxina

La digoxina tiene un margen de seguridad muy estrecho, lo que lleva a presentar

con facilidad efectos tóxicos. Su mecanismo de acción molecular lo ejerce inhibiendo la

Na+, K+ ATPasa lo que se manifiesta en múltiples efectos cardiovasculares tanto directos

como indirectos, asi como modificación del funcionamiento mecánico y eléctrico del

corazón lo que se traduce en aumento de la fuerza de contracción o inotropismo positivo y

una disminución del automatismo y decremento en la velocidad de conducción del

sistema de Purkinje o conotropismo negativo. Los efectos tóxicos de estas sustancias son

en gran medida consecuencia de una manifestación exagerada de su mecanismo de

acción como sería: bradicardia y paro sinusal, bigeminismo, bloqueo aurículo-ventricular

de segundo grado y otros tipos de arritmias cardiacas, hasta llegar al paro cardiaco.

Todas estas manifestaciones, tienden a ser compensadas o antagonizadas por el Sistema

Nervioso Autónomo del organismo como el sistema Simpático y Parasimpático.

Actividad Farmacocinética

Actividad Farmacológica


Fárm

acos Cardiotónicos

32

Objetivo

Se alcanzará y demostrará el efecto tóxico de un glucósido cardiaco (digoxina)

aplicado al corazón de la pulga de agua

Se demostrarán los efectos inotrópicos positivos y cronotrópico negativos de la

digoxina aplicada al corazón de la pulga de agua

Se compararan los efectos producidos de la digoxina con otras substancias

cardiotónicas administradas a la pulga de agua

Material, Equipo y Reactivos.


NO MATERIAL Y EQUIPO

Computadora personal con simulador instalado

REACTIVOS

NO

PARTE 2 (2° Sesión)

MATERIAL BIOLÓGICO

Pulgas de agua (1 bolsa por grupo)

MATERIAL Y EQUIPO

Microscopio

Cronometro

1 Caja de Petri

2 Pipetas Pasteur

6 jeringas de 1 ml

2 Portaobjetos

REACTIVOS

Digoxina

Epinefrina

Atropina

Pilocarpina

Solución de cloruro de sodio al 2% p/v

Solución de cloruro de potasio al 2% p/v

Solución de cloruro de calcio al 2% p/v


Fár

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33

Metodología

Método 1: Uso del Simulador

1.1.Estimulación eléctrica

1.1.1 Seleccionar el ejercicio de Fisiología cardiovascular de rana en el

menú principal

1.1.2 En la barra superior dar click a experimento y seleccionar

Estimulación eléctrica

1.1.3 Tomar el electrodo para la estimulación directa, y colocarlo en el

soporte

1.1.4 Observar el ritmo cardiaco basal y proceder a estimular el corazón

Ensayar para estimulos simples y múltiples.

1.1.5 Una vez visualizados los efectos proseguir con la estimulación del

nervio vago con el otro electrodo.

1.2. Modificadores de la frecuencia cardiaca

1.2.1 Seleccionar el experimento de frecuencia cardiaca en la barra

superior

1.2.1 observar la frecuencia cardiaca y guardar datos

1.2.2 Seleccionar una solución y aplicar sobre el corazón de la rana

1.2.3 Dejar actuar y guardar datos hasta que el ritmo se marque como

estable

1.2.4 Enjuagar con la solución Ringer a 23°C

1.2.5 Ensayar con las otras soluciones y con el efecto de la temperatura

Método 2: Uso del Simulador

2.1 Coloque suficiente agua que contenga a las pulgas de agua en una caja de

Petri y con una pipeta Pasteur tome una pulga de agua.

2.2 Deposite la pulga de agua sobre

un portaobjeto cuidando de no

dejar un excedente de agua.

2.3 Enfoque a la pulga de tal manera

que pueda observar claramente

los latidos del corazón.

2.4 Cuente los latidos durante quince

segundos y tómelo como una

medida basal; el conteo se

realiza entre dos personas, la

primera indicara el inicio y fin de

los 15 segundos y la segunda

persona contara los latidos.

2.5 Añada una gota de una de las

substancias a evaluar, deje que

actúe por un minuto y proceda a

Imagen 1. Pulga de agua vista a 10x en el microscopio. En la parte trasera se puede observar fácilmente el corazón.


Fárm

acos Cardiotónicos

34

contar los latidos por 15

segundos.

2.6 Evalúe cada substancia con una pulga diferente y registre el efecto

presentado en una tabla indicando si el efecto fue positivo o negativo.

Substancia Efecto Inotropismo Cronotropismo

Digoxina

Epinefrina

Atropina

Pilocarpina

Calcio

Sodio

Potasio

Cuestionario

1. ¿Qué es un cardiotónico y que un glucósido cardioactivo, anotar ejemplos?

2. ¿Cuál es la relación estructura -actividad de los glucósidos cardioactivos?

3. ¿Qué diferencias farmacocinéticas existen entre los digitálicos?

4. ¿Qué parte de la estructura del digitálico le da las propiedades farmacocinéticas?

5. ¿Cuál es el mecanismo de acción de los glucósidos cardioactivos y como se manifiesta

en la función cardiaca?

6.¿Cuáles son los efectos tóxicos de los glucósidos cardioactívos?

7.¿Cuáles serán los usos o indicaciones de los glucósidos cardioactivos?

8. Haga un esquema de la anatomía de la pulga de agua, localice el corazón e indique

cuántos latidos realiza por minuto

Referencias

1. Goodman & Gillman's, Las bases Farmacológicas de La terapéutica, 10" ed., Mc. Graw

Hill, México 2003

2. Bertrand G. Katzung, Farmacología Básica y Clínica, 8a ed., Manual Moderno, México

2002

3. Barastegui, AC, Esquemas y prácticas de Farmacología. Espaxs, España 1976.


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Diuréticos

Práctica No. 7


Diuréticos

36

Introducción

Los diuréticos (o saluréticos) son fármacos que incrementan la producción de orina

(diuresis) y la excreción de sodio (Na). Actúan principalmente sobre el riñón, inhibiendo la

reabsorción de NaCI y agua, aumentando por tanto la excreción urinaria de estas

sustancias. Se utilizan principalmente para el tratamiento del EDEMA.

Fisiología De La Nefrona

Los riñones controlan el volumen del fluido extracelular ajustando la excreción de

NaCI y H20. Diariamente los riñones filtran más de 22 moles de Na+, los cuales se

reabsorben por los túbulos renales, para mantener el equilibrio.

El cuerpo mantiene la presión sanguínea a expensas del volumen del fluido

extracelular. Cuando la ingesta de NaCI es mayor que su eliminación (p.ej. en falla

congestiva cardiaca o falla renal) se desarrolla edema.

La reabsorción de sodio se debe primeramente a la adenosin trifosfatasa (ATPasa)

localizada en la parte lateral de la membrana de las células epiteliales del nefrón. La

bomba de Na+/K+ necesita energía para intercambiar un Na+ por cada dos K+,

manteniendo una baja concentración de Na+ y alta concentración de K+ en el interior de la

célula. En el lado de la luz tubular, existen vías pasivas para el movimiento del Na+

electroquímico del lumen a la célula. Esas células son las bases fisiológicas de la acción

diurética.

Farmacología De Los Diuréticos.

EL primer acierto de los diuréticos es la reducción del edema por reducción del

volumen del fluido extracelular, y para que esto ocurra, la secreción de Na+ deberá

exceder a su ingesta.

En principio, los diuréticos previenen la entrada de Na+ a las células tubulares. Una

vez que el diurético entra al fluido tubular, el sitio de la nefrona donde actúa determina su

efecto. Es decir, el sitio de acción determina también que otros electrolitos, además del

Na+, serán afectados.

Todos los diuréticos, excepto la ESPIRONOLACTONA, ejercen sus efectos en el lado

luminal de la nefrona. Por eso deben alcanzar el fluido tubular para tener efecto. Por

ejemplo, el manitol lo hace por filtración en los glomérulos; los demás diuréticos, como

están fuertemente enlazados a las proteínas, se filtran escasamente, llegando al lumen

por secreción a través del túbulo proximal (vía secretoria de bases y ácidos orgánicos).

El bajo flujo sanguíneo renal o falla renal, disminuyen la eficacia de los diuréticos,

así como drogas que compiten por la bomba secretoria como el PROBENECID para las

drogas ácidas, o la CIMETIDINA para drogas básicas.

Diuréticos Con Acción En El Túbulo Contorneado Proximal.

El túbulo proximal determina el grado de liberación de Na+ y H20 a zonas más

lejanas de la nefrona. Una amplia variedad de transportadores acoplan el paso del Na+ al

interior de la célula, al movimiento de aminoácidos, glucosa, fosfato, y otros solutos,

MANITOL: ES un diurético osmótico no metabolizable y es filtrado hacía el espacio

tubular incrementando la osmolalidad del fluido tubular. Esto trae como consecuencia


Diu

rétic

os

37

reabsorción aumentada de fluido resultando en excreción aumentada de agua

acompañada de un poco de Na+.

Inhibidores De La Anhidrasa Carbónica (Acetazolamida)

El bicarbonato se reabsorbe en el túbulo proximal. El ión H+ es secretado al lumen

en donde se une con bicarbonato filtrado (HC03+) para formar H2C03 el cual es convertido

en H20 y C02 por acción de la anhidrasa carbónica. EL C02 difunde al túbulo proximal en

donde se combina con H20 para formar H2C03, el cual a su vez forma H+ y HC03+. Este

último sale del túbulo hacia la sangre, mientras H+ es secretado nuevamente a la luz

tubular, resultando en reabsorción de HC03+. Si la actividad de la anhidrasa carbónica se

reduce, la reabsorción de HC03+ también disminuye y la sale al túbulo proximal en

cantidades mucho más grandes. Aunque el Na+ es el principal catión que acompaña la

salida del HC03+ del túbulo proximal, se reabsorbe ampliamente en el túbulo distal el

intercambiado por K+. Por lo tanto, la ACETOLAMIDA causa principalmente un incremento

de HC03+\ K+ y H20 urinario.

Diuréticos De Asa

Actúan principalmente bloqueando el co-transportador de Na+/K+/Cr en la

membrana apical de la rama ascendente del asa de Henle. Como en este sitio se

concentra y diluye la orina, los diuréticos de asa disminuyen al máximo la concentración

y dilución urinaria. En esta parte ascendente del asa se reabsorbe Ca++ y Mg++, proceso

dependiente de la reabsorción normal de Na+ y CI-. Por lo tanto los diuréticos de asa

incrementan la excreción urinaria de agua, Na+, K+, Ca++ y Mg++.

EJEMPLOS: Furosemida, bumetanida y ácido etacrinico.

Diuréticos De Túbulo Contorneado Distal.

Tiazidas y drogas análogas inhiben el transporte de Na+ y CI- a nivel de túbulo

distal. A comparación de los diuréticos de asa, poseen acción diurética suave o

moderada debido a que en esta parte del glomérulo se reabsorbe menos Na+. Además,

si los rangos de filtración glomerular declinan, menos fluido llegará al túbulo distal y las

tiazidas tendrán un impacto mínimo sobre la excreción de agua y Na+.

EL uso de la tiazidas incrementa la reabsorción de fluidos y solutos en el túbulo

proximal. Se manifiesta un incremento de la absorción de Ca++ y ácido úrico en el túbulo

proximal.

Diuréticos de Túbulos Colectores.

ESPIRONOLACTONA: ES un antagonista competitivo de la aldosterona. Bloquea la

reabsorción de Na estimulada por aldosterona y la excreción de K+ y H+ en túbulos distal


Diuréticos

38

y colector. También reduce la amoniogénesis estimulada por aldosterona a lo largo del

nefrón.

AMILORIDE Y TRIAMTERENE: Inhiben el canal de Na+ en la membranas apicales de

los túbulos distal y colector. Debido a que en esta zona de la neurona la secreción de K+

y H+ se explican principalmente por los gradientes electroquímicos generados por la

reabsorción de Na+, se reduce el transporte de K+ e H+ hacía la orina.

El estudio de estos fármacos generalmente se basa en la determinación de la

diuresis y en los electrolitos eliminados al administrar estos fármacos en animales de

experimentación. Para ello se recomienda usar ratas o perros debido a que su patrón de

excreción urinaria es más regular. Los métodos que únicamente miden diuresis son

cualitativos, como el usado en esta práctica. Existen otros métodos para estudiar

mecanismos y sitio de acción de estos medicamentos (métodos de aclaración renal,

métodos de diuresis interrumpida, métodos de micropunción y métodos de

microperfusión en segmentos de la nefrona).

Objetivo

Demostrar la diuresis en ratas producida por fármacos o sustancias con

propiedades diuréticas.


MATERIAL BIOLÓGIO

1 Rata Wistar de 150-200 gramos de peso, de preferencia del mismo

sexo y edad.

MATERIAL Y EQUIPO

Jaula Metabólica

Probeta Graduada

Balanza Granataria

Jeringas de 1 y 5 mL

REACTIVOS

Solución fisiológica (NaCI 0.9 %), que se utiliza como control negativo.

Furosemida (Control positivo)

Metodología

1. Pesar e identificar a cada animal de experimentación.

2. Al grupo control negativo (sin tratamiento) se administra 25 mL/kg de solución

salina vía I.P.

3. Al grupo control positivo (con tratamiento) se le administrará por vía I.P. 25

mL/kg de solución salina más una dosis de furosemida (20 mg/kg de peso).


Diu

rétic

os

39

4. Se colocan las ratas en jaulas metabólicas durante 2.5 horas.

5. Se mide el pH y el volumen de orina excretada cada 15 minutos, durante las 2.5

horas.

6. Se determina la orina acumulada durante las 2.5 horas.

7. Terminado el experimento, se retiran los animales de las jaulas metabólicas.

8. Determinar y tabular: pH, densidad y volumen de cada una de las muestras.

CÁLCULOS:

Realizarlos siguientes cálculos para cada animal de experimentación:

• Excreción urinaria:

• Acción Diurética:


Diuréticos

40

Cuestionario

1. El método usado en este experimento permite determinar la diuresis de diferentes

fármacos, ¿es suficiente para evaluar el efecto diurético? Diga que otro tipo de

análisis realizaría y porqué.

2. ¿Qué otros métodos existen para investigar el mecanismo de acción de los

diuréticos?

3. La elección de la rata como animal de experimentación, ¿es correcta? Fundamente su

respuesta.

4. Esquematice el mecanismo de acción de la furosemida.

5. Indica los factores fisicoquímicos involucrados en la acción de los diuréticos en

general.

Referencias

1. FLISER D, SCHROTER M, NEUNECK M, RITZ E. Coadminis-tration of thiazides

increases the efficacy of loop diuretics even in patients with advanced renal faiiure.

Kidney int 199;446(2):482-8.

2. SUKI WN, STINEBAUGH BJ, FROMMER JP, EKNOYAN G. Physiology of diuretic action.

En: Seldin DN, Giebisch G. eds. The kidney: physiology and pathophysiology. New

York: Raven, 1985:2127-62.

3. BYERS J, GOSHORN J. How to manage diuretic therapy. Am J Nurs 1995;95(2):38-43.

4. MELILLO L. Diuretic plants in the paintings of Pompeili. Am J Nephrol 1994;14(4-6):423-

5.

5. VAN MEYEL JJ. Comparison of the diuretic effect and absorption of a single dose of

furosemide and free and the fixed combinations of furosemide and triamterene in

hearthy male adults. EUR J CLIN PHARMACOL 1990;39(6):595-7.

6. KANG MJ, YOON WA, KIM ON, LEE MG. Effects of water deprivation for 48 hours on

the farmacodynamics of furosemide in rats. J Clin Pharm Ther 1995;20(1): 13-21.

7. Goodman & Gillman's, Las bases Farmacológicas de La terapéutica, 10a ed., Me.

Graw Hill, México 2003

8. BertrandG. Katzung, Farmacología Basica y Clínica, 8a ed., Manual Moderno, México

2002

9. C. Barastegui Almagro. Esquemas y Prácticas de Farmacología. Editorial Espax,

1976, Barcelona, España.

10. Cairo M., Fresneda M.V., Campos D. Determinación del efecto diurético de

Cymbopogon citratus (DC) Stapf (Caña Santa). Rev. Cubana Plant. Med. 1(3): 13-

17, sept.-dic. 1996.

11. Nedi, T. ET AL Diuretic effect of the crude extraets of CARISSA EDULIS in rats. Journal

of Ethnopharmacology 2004; 95: 57-61


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Efecto de los Fármacos Hipoglucemiantes

Práctica No. 8


Efecto de los F

ármacos H

ipoglucemiantes

42

Introducción

Una de las enfermedades más importantes a nivel mundial, que es un serio problema

de salud publica y que ataca a toda sociedad sin importar su estado de desarrollo de la

DIABETES MELLITUS, el 8.2% de la población entre los 20 y 69 años de edad la

padecen y cerca del 30% de estos individuos afectados desconoce si es diabético.

Además ocupa el tercer lugar de la mortalidad.

En condiciones normales el control del metabolismo de los carbohidratos se da por un

antagonismo fisiológico entre dos hormonas: la insulina, que disminuye la glucemia

mientras que el glucagón la aumenta. Ambas son secretadas por el páncreas en lugares

diferentes, la insulina en las células β y el glucagón en las células α de los islotes de

Langerhans.

La DIABETES MELLITUS TIPO I (Diabetes Juvenil), se desencadena por la

destrucción de las células β produciendo carencia de insulina y por lo tanto hiperglucemia,

por lo que, quienes la padecen son candidatos a la administración de insulina como

terapia de sustitución. La Diabetes Mellitus tipo II se desencadena por factores

metabólicos incluyendo una función deficiente de las células beta y la resistencia a la

insulina en musculo esquelético, tejido adiposo e hígado, actualmente se sabe que su

origen es genético. El tratamiento en este caso se sabe que es con el uso de

hipoglucemiantes orales con diferentes mecanismos de acción.

Secretagogos de insulina: nitaglenida, repaglinida y sulfonilureas (estimulan a

las células beta del páncreas para incrementar la liberación de insulina)

Antihiperglucemiantes: inhibidores de alfa glucosidasas, (retrasan la

absorción de los carbohidratos en la luz intestinal), las biguadinas y las

tiazolidinedionas (aumenta la sensibilidad de la insulina).

En el caso de la práctica nos enfocaremos a dar las características generales de la

insulina que es el fármaco a evaluar como hipoglucemiante.

La insulina es una proteína sintetizada en las células beta en los islotes de Langerhans

en el páncreas y está formada por dos cadenas peptídicas (A con 21 aminoácidos, B con

30) unidas por dos puentes disulfuro. Su función fisiológica es promover la captación de

glucosa por las células de todos lo órganos, pero los sitios especiales para el

almacenamiento de ésta, es el hígado, tejido adiposo y musculo esquelético.

Su mecanismo de acción se da cuando se une a un receptor en la membrana celular,

desencadenándose una seria de fosforilaciones incluyendo la del transporte de glucosa

que al estar fosforilado promueve la captación de ésta al interior de la celular.

Fig.7.1 Mecanismo de

acción de la insulina a

nivel celular y

molecular


Efe

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es

43

Antiguamente se utilizaban insulinas de origen bovino y porcino que hasta ahora ya

han desaparecido del mercado. Hoy en día todas las insulinas humanas sintetizadas por

ingeniería genética (DNA reconbinante) por lo que están purificadas y solo contiene una

fracción proteica de la insulina. El único factor que las diferencia es la duración de acción,

razón por la cual se adquieren en preparaciones inyectables que retardan la liberación.

Dicho retardo se logra:

Mediante la unión a otras proteínas (protamina)

Mediante una cristalización

Dependiendo de cada sistema de retardo de su acción las insulinas pueden ser

rápidas, intermedias y lentas.

La vía de administración adecuada para pacientes ambulatorios es la subcutánea, solo

en coma diabético se usa la vía intravenosa y es recomendable la acción rápida en estos

casos.

Como una alternativa a un futuro corto, se esta evaluando la administración por vía

inhalatoria; ya se están realizando estudios donde se observa que la tendencia de

preferencia de los pacientes varia en un 10% con respecto a la vía de administración

convencional.

Objetivo

Demostrar el efecto hipoglucemiante de la insulina en ratas hiperglucemicas,

determinando la concentración de glucosa en sangre.


MATERIAL BIOLÓGICO

1 Rata

MATERIAL Y EQUIPO

3 jeringas de insulina

3 jeringas de 10 mL

Reloj

Equipo para baño María

REACTIVOS

Tiras reactivas para la medición de glucosa en sangre.


Efecto de los F

ármacos H

ipoglucemiantes

44

Metodología

En este procedimiento la evaluación del fármaco (insulina) se lleva acabo comparando

el efecto hipoglucémico en el animal experimental contra controles, un positivo

(previamente cargado de solución glucosada) y un negativo manipulado igual que el de

experimentación y C+, en vez de solución glucosada se le administra el mismo volumen de

solución salina. A ningún control se le administra insulina. Esto es con el fin de que se vea

el efecto del fármaco administrado exógenamente contra el efecto más lento que se

observará de la insulina endógena previa estimulación por la carga de glucosa (control (+)

) y el control (-) servirá como referencia de la concentración de glucosa normal y para

asegurar que la disminución de glucosa en sangre del animal experimental se debe al

fármaco y no a la manipulación.

1.- Marcar las ratas del 1 al 4. Tomar una muestra a tiempo cero antes de manipular al

animal, para obtener el valor basal de glucosa. La muestra se toma realizando una

incisión en la arteria caudal de la cola de la rata.

2.- La rata marcada será utilizada según la siguiente indicación

Rata 1 (control -): Administrar por vía intraperitoneal 7mL de solución

salina.

Rata 2 (control +): Administrar por vía intraperitoneal 7mL de solución

glucosada.

Rata 3 (experimental): Administrar por vía intraperitoneal 7mL de solución

glucosada.

Rata 4 (experimental): Administrar por vía intraperitoneal 7mL de solución

glucosada.

3.- Tomar muestra cada 10 minutos hasta los treinta minutos.

4.- Para observar la absorción de glucosa; después de la última toma administrar el

volumen correspondiente de solución salina, insulina o matarique, dependiendo del

número de rata:

Rata 1: Administrar el volumen correspondiente de solución salina vía

subcutánea.

Rata 2: Administrar el volumen correspondiente de solución glucosada vía

subcutánea.

Rata 3: Administrar 3 unidades de insulina vía subcutánea.

Rata 4: Administrar el volumen correspondiente de la infusión de

matarique.

5.- Posterior a esta administración tomar muestras cada 15 minutos hasta los 90

minutos o hasta alcanzar el nivel basal de glucosa.

6.- La determinación de la concentración de glucosa se realiza por medio de tiras

reactivas (ver las instrucciones para correcta lectura del resultado), la lectura la deberá

realizar una sola persona. Con los resultados obtenidos construya una gráfica de

concentración de glucosa contra el tiempo.


Efe

cto

de lo

s F

árm

acos

Hip

oglu

cem

iant

es

45

Nota: conjuntar los resultados de todo el grupo para sacar promedio y graficar

como se indica anteriormente.

Cuestionario

1. Indica la clasificación de la Diabetes Mellitus.

2. Qué es la insulina?

3. Qué son los hipoglucemiantes orales?

4. Cuáles son las vías de administración de la insulina?

5. Explique el mecanismo de acción de la insulina?

6. Por qué razón la insulina no se administra por vía oral

7. A qué se refiere el término de antagonismo fisiológico entre la insulina y el

glucagón?

8. Qué importancia tienen los controles utilizados en la práctica?

Referencias

Tébar Massó F J y Escobar Jiménez F. Diabetes mellitus en la práctica clínica.

Argentina; Medica panamericana. 2009.

Goodman Luis S y Gilman Alfres. Bases farmacológicas de la terapéutica. 5 ed.

México; Interamericana.1978. 1281- 1285

Rang H.P et al. Farmacología 6ª ed. España: Elsevier. 2008. 397- 408

Anexo Práctica 3: Simulador 46

Janet Edith Santamaría Víquez

Anexo Práctica 7: Valoración 63

Anexo Práctica 7: Valoración 64

Manual de Prácticas de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II..

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