MANUAL DE SERIE ROJA 2014-2015.pdf

CARRERA PLAN DE

ESTUDIOS CLAVE DE LA ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUMICO FARMACUTICO

BILOGO 2014-2015 LABORATORIO DE SERIE ROJA

PRCTICA

NMERO NOMBRE DE LA PRCTICA DURACIN

1 BIOSEGURIDAD 2 HORAS 1 INTRODUCCIN

El laboratorio clnico, es el establecimiento pblico, social o privado, legalmente establecido,

independiente o ligado a otro establecimiento para la atencin mdica de pacientes hospitalarios o ambulatorios, que tiene como finalidad realizar anlisis fsicos, qumicos o biolgicos de diversos componentes y productos del cuerpo humano. Sin embargo, dentro de las acciones a seguir en el

laboratorio clnico para el anlisis de estos productos biolgicos, desde la recepcin, transporte, manipulacin, procesamiento, almacenamiento y eliminacin, los profesionales del laboratorio

conllevan un potencial riesgo a su salud, puesto que estos productos son catalogados como material RPBI, que de acuerdo con la NORMA Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Proteccin ambiental- Salud ambiental- Residuos peligrosos biolgico infecciosos- Clasificacin y

especificaciones de manejo, son todos aquellos materiales generados durante los servicios de atencin medica que contengan agentes biolgico-infecciosos segn son definidos en esta norma, y

que puedan causar efectos nocivos a la salud y al ambiente. Es por ello, que diversas organizaciones nacionales e internacionales han implementado Normas de Bioseguridad en los laboratorios clnicos, con el propsito de prevenir la exposicin a agentes

infecciosos del personal que se encuentra en contacto directo con material RPBI. En un laboratorio clnico, las vas de exposicin ms comunes se dan por la ingestin, inoculacin,

contaminacin de piel o mucosas e inhalacin: VIAS DE EXPOSICION

INGESTION Pipeteo con boca Salpicaduras en la boca Colocacin en boca de art culos o dedos contaminados

Consumo de comida en lugar de trabajo

INOCULACION Accidentes con agujas Cortaduras con objetos punzo cortantes Mordedura de animales

CONTAMINACION DE PIEL O MUCOSAS Contacto con superficies, equipo o art culos contaminados

Salpicaduras en piel intacta o no intacta (lesin) Salpicadura en ojos, boca o nariz.

INHALACION Por diversos procedimientos que producen aerosoles

Por esta razn, los profesionales de laboratorio deben portar obligatoriamente equipo de proteccin

que sirvan de barrera ante los productos infecciosos manipulados. El equipo de barrera fundamentalmente est constituido por bata, gafas de laboratorio, mascarilla o cubrebocas y guantes; sin embargo, esto representa lo bsico en proteccin, puesto que basados en la

clasificacin realizada por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) los laboratorios pueden implementar otras medidas de bioseguridad en funcin del grupo de riesgo al que pertenecen los

patgenos o material RPBI manejados. La misin primordial de las reglas de Bioseguridad en un laboratorio, ya se trate de laboratorio de investigacin, de anlisis y diagnstico clnico, de patologa, industriales, de enseanza a diferentes

niveles educativoses lograr un ambiente de trabajo seguro para el personal y para las personas ajenas al laboratorio, incluyendo las que se encuentran fuera de las instalaciones, y es por esto, que

todo laboratorio debe mantener una reglamentacin general de bioseguridad.

2 OBJETIVOS

Informar al alumno acerca de las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio.

Explicar al alumno la importancia de los RPBI (residuo peligroso biolgico infeccioso), su

clasificacin y desecho.

3 FUNDAMENTO

La Ley General del Equilibrio Ecolgico y la Proteccin al Ambiente, definen como residuos peligrosos a todos aquellos residuos que por sus caractersticas corrosivas, reactivas, explosivas,

txicas, inflamables y biolgico-infecciosas, que representan un peligro para el equilibrio ecolgico o el ambiente.

4 PROCEDIMIENTO

A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO

EQUIPO DE BARRERA PRIMARIA

Bata Gafas Cubrebocas

Guantes Gorro

MATERIAL DE RPBI Recipiente hermtico color amari llo y rojo Bolsas de polietileno color amarillo y rojo

B DESARROLLO DE LA PRCTICA

EQUIPO DE PROTECCION

MATERIAL DE ALMACENAMIENTO RPBI

C REPORTE DE RESULTADOS

Realizar anotaciones de la exposicin del catedrtico en la sesin, as como tus observaciones.

5 INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES

Desarrolla tus discusiones y conclusiones en funcin a lo aprendido en esta sesin, enriqueciendo tus discusiones con lo que conocas del tema.

6 ANEXOS

Revisar la NORMA Mexicana NMX-AA-22-1985.

Revisar la NORMA Oficial NOM-083-SEMARNAT-2003.

Revisar la Ley General para la Prevencin y Gestin Integral de los Residuos.

Revisar las Buenas Prcticas de Laboratorio.

OJO: De cada una de las actividades anteriores deber hacerse un resumen, el cual debers hacerlo en la bitcora.

7 REFERENCIAS

http://www.cenetec.salud.gob.mx/descargas/equipoMedico/normas/NOM_007_SSA3_2011.p

df

http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57611111003

http://epidemiologiamolecular.com/barreras-primarias-equipos-proteccion-personal/

http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/087ecolssa.html

CARRERA PLAN DE ESTUDIOS

CLAVE DE LA ASIGNATURA


QUMICO

FARMACUTICO BILOGO

2014 2015 LABORATORIO DE SERIE ROJA

PRCTICA NMERO

NOMBRE DE LA PRCTICA FECHA Y DURACIN

2 PROCEDIMIENTO DE RECOLECCION 2 horas 1 INTRODUCCIN

El objetivo del laboratorio clnico es la obtencin de informacin sobre el estado de salud de una persona. Esta informacin puede utilizarse para establecer un diagnstico, evaluar una evolucin

y/o pronstico de una enfermedad, valorar la efectividad de un tratamiento, realizar un cribado en la poblacin, etc. Para ello, a partir de muestras biolgicas, se realizan pruebas en las que se miden una serie de magnitudes de diferente ndole: bioqumicas, hematolgicas, inmunolgicas,

microbiolgicas, parasitolgicas, toxicolgicas, etc. La flebotoma constituye una de las etapas ms importantes en el trabajo del laboratorio clnico.

Por una parte representa el primer contacto entre el laboratorio y sus pacientes y desde el punto de vista de la muestra sangunea, la enorme importancia que conlleva una muestra apropiadamente colectada, la seguridad de su origen y el correcto envasado y transporte,

constituyen factores fundamentales en la evaluacin e informe de los exmenes a realizar.

2 OBJETIVOS

Aplicar las recomendaciones mencionadas en la sesin para efectuar una adecuada puncin venosa y capilar.

Conocer los diversos sistemas existentes para llevar a cabo la extraccin sangunea:

sistema Vacutainer, uso de jeringa, aguja mariposa, lancetas.

Utilizar los conocimientos aprendidos en la sesin 1, acerca del desecho del material RPBI.

3 FUNDAMENTO

Levar a cabo la extraccin sangunea no se limita al acto de obtener la muestra de estudio, sino

que tambin se hace necesaria la aplicacin de ciertas medidas previas a la extraccin, que tienen como propsito brindar al paciente un servicio de calidad, desempeado con alto grado ticoy de

manera responsable por parte de los profesionales de laboratorio, ofreciendo al paciente las recomendaciones necesarias para obtener una muestra en condiciones idneas y que arrojen resultados confiables sobre su estado de salud.

PREPARACION DEL PACIENTE

Se han descrito factores preanalticos que pueden afectar de forma decisiva a la calidad de los resultados finales. Algunos de los factores relacionados con el paciente son inmodificables y por tanto no controlables, es decir, no podemos actuar sobre ellos (sexo, edad, raza, embarazo, etc.),

sin embargo la correcta identificacin de los mismos puede ayudarnos a evitar interpretaciones errneas. Existen otro grupo de factores preanalticos que si son modificables, como por ejemplo:

Dieta y ayuno: La dieta y la ingesta de lquidos pueden tener influencia en varias magnitudes bioqumicas y

hematolgicas. Por otra parte, la desnutricin y el ayuno prolongado tambin pueden alterar algunas magnitudes de manera clnicamente relevante. Por esta razn, es recomendable informar a los pacientes la importancia que tiene el guardar un

periodo de ayuno de por lo menos 8-12 hrs previo a la toma de muestra, a fin de evitar una errnea interpretacin de los resultados.

Ejercicio: El ejercicio fsico reciente, tambin puede alterar notablemente el resultado de algunas magnitudes biolgicas. Ello es debido a cambios hormonales, cambios en la distribucin de volumen por

sudoracin. Por ello, el paciente debe ser interrogado sobre la realizacin de ejercicio reciente y anotarlo, para que pueda ser tenido en cuenta en la interpretacin de los resultados.

Medicacin, ingesta de alcohol, drogas, entre otras.

EL PROCEDIMIENTO DE LA FLEBOTOMIA

La muestra debe tomarse correctamente y bajo las condiciones ms favorables para evitar errores. Esto incluye la absoluta identificacin del paciente, el sitio a puncionar y el volumen a colectar.

Adems, requiere de colocar al paciente en una posicin cmoda; as que, tratndose de pacientes ambulatorios la posicin adecuada es sentado en una si lla, con el antebrazo colocado en un apoyabrazos inclinado y el brazo extendido, de manera que forme una lnea recta desde el

hombro a la mueca. El brazo debe apoyarse firmemente en el apoyabrazos y no debe estar doblado a nivel de codo. En cambio, cuando los pacientes se encuentran en cama, este debe

descansar sobre su espalda. Si se necesitara un apoyo adicional, puede colocarse una almohada bajo el brazo del que se va a extraer la muestra. El paciente debe extender su brazo, de manera que forme una lnea recta desde el hombro hasta la mueca.

SELECCIN DEL SITIO A PUNCIONAR

Al proceder a seleccionar el sitio a puncionar, hay que evitar las reas con hematoma, fistulas, quemaduras, escoriaciones de la piel o cicatrices.

Palpacin:

Antes de proceder a puncionar, se debe escoger la vena. La mejor manera es realizando una palpacin de las mismas para esa decisin. Para ello el torniquete se coloca por arriba del sitio

seleccionado, para visualizarlas mejor. Las venas ms utilizadas para la venopuncin, estn localizadas en el rea antecubital. Entre estas tenemos:

Asepsia:

Una vez que se ha decidido por la vena a puncionar, debe procederse a descontaminar el rea con alcohol etlico o isopropilico al 70% utilizando algodn y con movimientos circulares del interior al exterior. Realizado esto, no debe volverse a tocar el rea venosa.

Vena cubital: Es la ms larga y gruesa de todas y es la preferida por bordear la

musculatura del brazo.

Vena ceflica: Tiene caractersticas similares a la

vena cubital, solo que esta

es ms delgada.

Vena baslica: Es ms

pequea que la vena cubital y ceflica, esta vena. Esta cerca de la arteria branquial,

por lo que su puncin es riesgosa y su rea es ms sensible y dolorosa para el

paciente.

4 PROCEDIMIENTO

A MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS EQUIPO DE APOYO

Algodn (torundas) Alcohol

Recipientes RPBI para punzocortantes Tubos vacutainer con/sin anticoagulante Agujas para vacutainer

Capuchn para sistema vacutainer Ligadura

Agujas mariposa para jeringa Tubos de ensaye de vidrio Agujas para jeringa

Jeringa de 5ml Lancetas

Capilares con/sin anticoagulante Gradilla

B DESARROLLO DE LA PRCTICA PUNCIN VENOSA CON SISTEMA VACUTAINER

1. Se rotula el tubo vacutainer con/sin anticoagulante con el nombre del paciente y se coloca en la gradilla.

2. Se verifica que la aguja para vacutainer se encuentra sellada. Se enrosca la aguja en el

capuchn y para ello debe romperse el sello a la vista del paciente. 3. Se ubica cerca del rea de puncin todo lo necesario: el recipiente RPBI, torundero,

capuchn con aguja vacutainer, ligadura.

4. Se localiza la vena del paciente con ayuda de la ligadura (no dejar en el brazo por mucho tiempo).

5. Se debe realizar asepsia en la zona localizada para la puncin. 6. Se introduce en la piel la aguja para vacutainer cuidando que el bisel de la aguja se

encuentre hacia abajo.

7. Se toma el tubo vacutainer y se introduce en el capuchn, lo cual da como resultado la extraccin.

8. Mientras se llena el tubo, se quita la ligadura del brazo del paciente. 9. Lleno el tubo vacutainer con muestra, se retira del capuchn (si el tubo tiene anticoagulante

debe mezclarse con movimiento vortx con la finalidad de que se mezcle con este).

10. Se toma una torunda colocndola sobre la zona de puncin y se retira rpidamente la aguja. 11. Se desecha la aguja en el recipiente RPBI para punzocortantes.

PUNCIN VENOSA CON AGUJA MARIPOSA

12. Se ubica cerca del rea de puncin todo lo necesario: el recipiente RPBI, torundero, aguja

mariposa para jeringa, ligadura, tubo de ensaye de vidrio. 13. Se localiza la vena del paciente con ayuda de la ligadura (no dejar por mucho tiempo en el

brazo). 14. Se realiza asepsia en la zona de puncin. 15. Se toma la aguja mariposa teniendo presente que el bisel se encuentre abajo y tomando las

orejas de la aguja. 16. Se realiza la puncin para extraer la muestra sangunea.

17. Se retira la ligadura del brazo del paciente. 18. Se coloca una torunda sobre la zona de puncin y se retira la aguja rpidamente. 19. Se desecha la aguja mariposa (solo la aguja) en el recipiente RPBI para punzocortantes.

PUNCIN VENOSA CON JERINGA

20. Se ubica cerca del rea de puncin todo lo necesario: el recipiente RPBI, torundero, jeringas, ligadura.

21. Se saca la jeringa de su empaque y se asegura la aguja. 22. Se localiza la vena del paciente con ayuda de la ligadura (no dejar por mucho tiempo en el

brazo). 23. Se realiza asepsia en la zona de puncin. 24. Se efecta la puncin con jeringa cuidando que el bisel se encuentre abajo.

25. Se retira la ligadura del brazo del paciente. 26. Para extraer la muestra sangunea se jala el embolo de la jeringa de forma lenta evitando

sacar accidentalmente la aguja. 27. Tras obtener el volumen de sangre deseado, se coloca una torunda sobre la zona de

puncin y se retira la aguja rpidamente.

28. Se desecha la aguja en el recipiente RPBI para punzocortantes y el cuerpo de la jeringa se desecha en la bolsa RPBI color rojo.

PUNCIN CAPILAR

29. Se ubica cerca del rea de puncin todo lo necesario: el recipiente RPBI, torundero,

lancetas, capilares con/sin anticoagulantes. 30. Se realiza asepsia en la zonade puncin (yema de los dedos medio o anular).

31. Se dispara la lanceta desechando la primera gota que salga. 32. Se toma un capilar con/sin anticoagulante y se ubica en la puncin para que se llene

partes del capilar.

33. Se desecha el capilar en el recipiente de RPBI de punzocortantes.

C CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

Observar la tcnica empleada por los compaeros de mesa y con ello hacer anotaciones en la bitcora de todo lo ocurrido durante la puncin.

Reportar con fotografas, dibujos.


Elaborar una conclusin en funcin al objetivo planteado en esta prctica.

6 ANEXOS

CUESTIONARIO 1. Mencione tres ventajas y tres de una puncin capilar.

2. Mencione tres ventajas y tres desventajas de una puncin venosa. 3. Cules son los tipos de eleccin para llevar a cabo una puncin capilar y una puncin en

nios?

4. Qu determinaciones hematolgicas se efectan en un frotis sanguneo? 5. Mencione cinco tipos de anticoagulantes empleados en hematologa?

6. Cuantos tipos de tubos vacutainer existen y que indica el color del tapn?

7 REFERENCIAS

1. Sans-Sabrafen J et al. Hematologa Clnica. 4 Edicin. Editorial Harcourt. Espaa.2001. 2. Ruiz Arguelles G. J. et al. Hematologa .2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Mxico.

2000.

3. Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995. 4. Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico.

1998. 5. McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa.

1998.




QUMICO

FARMACUTICO BIOLOGO


PRCTICA NMERO


3 CUANTIFICACION DE HEMOGLOBINA SANGUINEA

POR EL METODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA.

2 horas

1 INTRODUCCIN

La BiometraHemtica (BH), tambin denominada citometra o citologa hemtica, es uno de los estudios de laboratorio que con ms frecuencia se solicitan inicialmente tanto para los pacientes

ambulatorios como para los hospitalizados. La importancia de esta prueba de laboratorio radica en que a travs de este, se puede hacer un

estudio morfolgico y cuantitativo de los elementos celulares de la sangre (eritrocitos, leucocitos y plaquetas) y la evaluacin de parmetros como el tamao, forma y volumen celular; lo cual, resulta significativo determinar en los pacientes, puesto que la evaluacin correcta de estos

parmetros citomorfologicos ofrece informacin acerca de los padecimientos primarios del tejido hematopoytico, y de otros trastornos no hematolgicos permitiendo ampliar la variedad de

diagnsticos diferenciales. En la Biometra Hemtica (BH), el anlisis de la lnea celular eritroide est fundamentado en la determinacin de algunos ndices primarios, como lo es la cuantificacin de hemoglobina.

La Hemoglobina es una de las protenas ms importantes del organismo, dado que transporta el oxgeno hacia todas las clulas, ocupa cerca de 33% del volumen del eritrocito y participa en

90% del peso seco total de la clula. Est constituida por cuatro subunidades, cada una de ellas conformada por la globina, un grupo hemo y una molcula de hierro que se une de forma reversible con el oxgeno.

Su medicin en el laboratorio clnico es til para el diagnstico de anemia, evento que se presenta cuando la hemoglobina disminuye por debajo 12 gr/dl en mujeres mayores de 15 aos o

13 gr/dl en varones mayores de 15 aos, y cuya prevalencia global estimada por la Organizacin Mundial de la Salud es de 24.8%, siendo los nios de edad preescolar y las mujeres no embarazadas los grupos de mayor riesgo.

Adems de su importancia en nios y mujeres, la determinacin de la hemoglobina es de gran relevancia en poblaciones como pacientes crticos, quirrgicos y de urgencias, principalmente

para decidir oportunamente la necesidad de una transfusin. Para la cuantificacin de la hemoglobina se han diseado e implementado diversas metodologas en respuesta a diferentes necesidades clnicas, como realizar procedimientos no invasivos o

dolorosos; y tecnolgicas, como emplear baja cantidad de muestra, obtener de forma inmediata la cuantificacin y facilidades para el transporte de equipos. Entre los mtodos empleados se

tiene: El gravimtrico con sulfato de cobre, caracterizado por ser menos costoso, pero arroja gran

proporcin de resultados falsamente normales en sujetos anmicos, El espectrofotomtrico, basado en la cuantificacin de un complejo coloreado, la

cianometahemoglobina, mtodo de referencia que se utiliza ampliamente para determinaciones con sangre capilar y venosa, en analizadores hematolgicos o

hemoglobinmetros porttiles y Mtodos elctricos, acsticos y pticos, los cuales se caracterizan por ser no invasivos.

Adems de los anteriores mtodos, en la dcada de los 90 se inici la determinacin de hemoglobina reticulocitaria, parmetro que indica la hemoglobina de los reticulocitos ms no de

los glbulos rojos maduros, como sucede con los mtodos inicialmente mencionados y cuya relevancia radica en la deteccin temprana de eritropoyesis deficiente en hierro.

2 OBJETIVOS

Que el alumno prepare el reactivo (estndar) de cianometahemoglobina.

Cuantificar la hemoglobina por medio de la tcnica manual de cianometahemoglobina.

3 FUNDAMENTO

En la actualidad existen diversas tcnicas para la cuantificacin de hemoglobina; sin embargo, y pese a que hoy en da muy pocos laboratorios fabriquen reactivo de cianometahemoglobina para

desarrollar la tcnica con el mismo nombre, en los laboratorios de enseanza esta tcnica sigue siendo la ms empleada para la cuantificacin de este ndice primario. La sangre entera es diluida con reactivos de cianometahemoglobina y el lquido diluyente

hemoliza a los eritrocitos para liberar la hemoglobina en una solucin. Los iones ferrosos (Fe2+) de las molculas de hemoglobina se oxidan con ferrocianuro de potasio a iones frricos (Fe3+).

Esta oxidacin resulta en la formacin de metahemoglobina, la cual se combina con los iones de cianuro (CN-) para formar cianometahemoglobina, compuesto estable que puede cuantificarse con el uso de

espectrofotometra. Cuando se mide en forma espectrofotomtrica a 540 nm, la absorbancia de las

cianometahemoglobinas sigue la ley de Lambert-Beer y es directamente proporcional a la concentracin de la hemoglobina en la sangre. Debe prepararse una curva de referencia (estndar) con soluciones estndar de cianometahemoglobina las cuales tienen concentraciones

conocidas de hemoglobina as, una concentracin desconocida de hemoglobina puede calcularse de la absorbancia medida o leerse en una curva de calibracin estndar.

4 PROCEDIMIENTO


Muestra de sangre con Hb determinada para elaborar el estndar de cianometahemoglobina.

Reactivo de Drabkin Tubos de ensaye Gradilla

Micropipetas y puntillas Cubetas para leer en espectrofotmetro.

Muestra de sangre con anticoagulante (EDTA)

Espectrofotmetro


PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACIN Para elaborar esta curva se tomara una muestra de sangre con Hb determinada

proporcionada por el laboratorio clnico de esta institucin. 1. A partir de la concentracin de la muestra con Hb conocida preparar el estndar haciendo

los clculos necesarios para obtener concentraciones de Hb de 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16,

18, 20 que corresponde a la concentracin de Hb que va contener cada tubo. 2. Se preparan los ml necesarios de estndar de cianometahemoglobina con la muestra de

Hb conocida. 3. En una gradilla, colocar tubos rotulados con dichas concentraciones de hemoglobina. 4. Se deja reposar 10 minutos a temperatura ambiente.

5. Se toman lecturas en espectrofotmetro a 540 nm, usando reactivo de Drabkin (como blanco).

6. En papel milimtrico se diseara el grafico de las absorbancia de cada solucin valorada en el eje de las ordenadas (y), contra las concentraciones en el eje de las abscisas (x).

PROCEDIMIENTO PARA LA MUESTRA PROBLEMA

7. Obtener sangre venosa y mezclar perfectamente con un anticoagulante.

8. En un tubo de ensaye que contenga 5 ml de reactivo de Drabkin, adicionar 20 l de la sangre problema.

9. Se deja reposar durante 10 minutos a temperatura ambiente. 10. Se lee en espectrofotmetro a 540 nm. 11. Registrar la lectura de absorbancia dela muestra problema en el grafico del estndar para

conocer la concentracin de la hemoglobina.


En la bitcora debern estar los clculos realizados para la preparacin del estndar de

cianometahemoglobina (C1*V1= C2*V2); as como, el grfico de dicho estndar.


6 ANEXOS

1.-Mencione las ventajas y desventajas de la tcnica de la cianometahemoglobina 2.-Diga cuantos tipos de hemoglobina se pueden determinar?

3.-Describa como se lleva a cabo la formacin de hemoglobina y su destruccin y eliminacin del organismo.

Elabora de manera terica un estndar a partir de una Hb de 36 g/dlhasta una concentracin de 0 g/dl. Esta tabla deber estar en tu bitcora y de igual manera el grfico absorbancia vs

concentracin.

7 REFERENCIAS

1. http://www.revistaamicac.com/biometria%20hematica%20interpretacion.pdf

2. http://www.ejournal.unam.mx/rfm/no53-4/RFM053000405.pdf 3. http://www.redalyc.org/pdf/2390/239028092005.pdf




QUMICO

FARMACUTICO BILOGO


PRCTICA NMERO


4 DETERMINACIN DE HEMATCRITO Y DE

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR 2 horas

1 INTRODUCCIN

Dentro de los ndices eritrocitarios primarios considerados en la biometra hemtica se encuentran:la determinacin de hematocrito y velocidad de sedimentacin globular.

El hematocrito se define como el volumen que representa el paquete globular en el total del volumen sanguneo, que denota el porcentaje de eritrocitos en un volumen conocido de sangre entera. El hematocrito es una de las pruebasde laboratorio ms simple y ms reproducible, til en la deteccin de anemia y policitemia. En cambio, la velocidad de sedimentacin globular (VSG) es una medida de la velocidad a la cual

asientan los eritrocitos en el plasma. La velocidad de asentamiento depende de:

La composicin de protenas del plasma

El tamao y forma de los eritrocitos

La concentracin de los eritrocitos

El incremento de valores de las protenas del plasma (principalmente fibringeno, alfa globulinas o gamma globulinas) resulta en una disminucin del potencial Z que rodea a los eritrocitos. Con un potencial Z menor, los eritrocitos pueden unirse en formacin de pila de monedas y asentarse

en el plasma a una velocidad ms rpida. De igual manera, el tamao y la forma de los eritrocitos afectan la velocidad de la sedimentacin.

Los macrocitos se asientan ms rpidamente que los eritrocitos normales, y los microcitos de manera ms lenta. La concentracin de los eritrocitos afecta directamente a la VSG y mientras mayor es la

concentracin de los eritrocitos menor es la VSG; un paciente anmico parece tener aumento de la VSG.

La VSG se usa para demostrar la presencia de inflamacin o destruccin tisular, o ambas afecciones. Es una prueba no especfica que indica destruccin de tejido, pero no identifica la causa.

2 OBJETIVOS

Que el alumno adquiera los conocimientos necesarios acerca de los ndices primarios

eritrocitarios contemplados en la Biometra Hemtica: HEMATOCRITO, VELOCIDAD DE

SEDIMENTACION GLOBULAR.

3 FUNDAMENTO

Para la determinacin de VSG, se han usado principalmente dos mtodos: el mtodo de Westergren y el mtodo de Wintrobe.

El mtodo de Wintrobe consiste en dejar que la sangre sedimente por la accin de la gravedad formando un paquete ms o menos compacto separado del plasma; para ello, se utiliza sangre entera no diluida y un tubo denominadotubo de Wintrobe, el cual se llena hasta la marca 0 y se le permite asentarse en posicin vertical durante 60 minutos. La VSG se mide como la distancia (mm) entre el menisco del plasma y la parte superior de los eritrocitos, y la distancia

resultante es la velocidad de sedimentacin globular en mm/hora.

Para determinar el hematocrito, se puede emplear la tcnica de macrohematocrito, as como la

de microhematocrito, donde el principio que las rige es acelerar el proceso de sedimentacin mediante la centrifugacin de una muestra de sangre anticoagulada que darcomo resultado la acumulacin de eritrocitos en el fondo del tubo o capilar, segn sea el caso. Sin embargo, se

prefiere emplear la tcnica de microhematocrito sobre el macrohematocrito debido a que requiere menos tiempo de centrifugacin, menor cantidad de muestra y se puede utilizar sangre capilar o

venosa. 4 PROCEDIMIENTO


Muestra de sangre venosa

Torundas con alcohol

Tubo Vacutainer con EDTA

Agujas y capuchn de sistema Vacutainer

Recipientes RPBI para punzocortantes

Capilares

Tubos de Wintrobe

Jeringa con cnula

Mechero de alcohol o encendedor

Base de plastilina

Microcentrifuga

Centrifuga


HEMATCRITO (HTO)

MACROMTODO: MTODO DE WINTROBE.

Se obtiene sangre venosa, se coloca en un tubo con anticoagulante y se mezcla por inversin.

Para llenar el tubo de Wintrobe con la muestra de sangre venosa del paciente la jeringa con cnula ser de gran ayuda para evitar la formacin de burbujas. Por tanto, el llenado deber hacerse con cuidado y desde el fondo del tubo subiendo lentamente hasta llegar a

la marca de 10.

Se centrifuga a 3000 rpm durante 30 minutos.

La altura de la columna de glbulos rojos se toma como valor hematocrito y se multiplica por 100 para expresarlo en valor porcentual.

MICROMTODO: CAPILAR

Por capilaridad, llenar partes del capilar con la sangre del paciente.

El extremo seco del capilar se sella con la llama de un mechero.

El capilar se centrifuga en microcentrfuga durante 5 minutos a 10 000 rpm.

Se lee el valor del hematocrito en un Hematimetro.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR (VSG)

MACROMETODO: TUBO WINTROBE

Con ayuda de la jeringa con cnula, se llena el tubo de Wintrobe (sin formar burbujas).

Se deja reposar en posicin vertical a temperatura ambiente durante 60 minutos.

El valor se expresa en mm/hr.

MICROMTODO: CAPILAR

Por capilaridad, llenar partes del capilar con la sangre del paciente.

Se coloca el capilar en posicin vertical sobre una base de plastilina y debe

permanecer as durante 60 minutos.

Se lee el valor del VSGpor medio de una regla de tres.


Reporta los datos obtenidos durante la sesin. 5 INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES

6 ANEXOS

1. Cul es la importancia de la determinacin de hematocrito, desde el punto de vista de diagnstico clnico?

2. Indique otros mtodos para calcular el valor del hematocrito. 3. Que ventajas y desventajas tienen el microhematcrito con respecto al macrohematcrito? 4. Enumere tres padecimientos en los cuales se encuentra alterado el hematocrito.

5. A qu se deben los cambios en la sedimentacin de los glbulos rojos? 6. Mencione 5 padecimientos en los que se encuentra elevada la VSG.

7. Como se realiza la correccin de la VSG en padecimientos con anemia. 7 REFERENCIAS

http://www.jano.es/ficheros/sumarios/1/0/1622/55/1v0n1622a13093325pdf001.pdf

http://wiki.fisiologia.me/images/4/42/Practic6.pdf




QUMICO

FARMACUTICO BILOGO


PRCTICA NMERO


5 RECUENTO DE ERITROCITOS Y DETERMINACIN

DE CONSTANTES HEMATOLGICAS. 2 horas

1 INTRODUCCIN

El eritrocito es un disco bicncavo de ms o menos 7 a 7.5 m de dimetro y de 80 a 100 fl de volumen, estos constituyen cerca del 45% del volumen sanguneo. Sin embargo, en casos de

anemia o policitemia la cantidad de eritrocitos en sangre puede encontrarse disminuida o aumentada que van a ser el reflejo de la funcin hematopoytica de la medula sea, por ellose

recurre a determinar el nmero total de eritrocitos que se encuentran en 1 mm3 de sangre, a lo que se conoce como recuento de eritrocitos. Adems, se hace importante la determinacin de los ndices eritrocitarios, puesto que son de

extrema utilidad para clasificar a los eritrocitos de acuerdo con su tamao y contenido de hemoglobina. Se usan la hemoglobina, el hematocrito y la cuenta de eritrocitos para calcular los

tres ndices:

HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM), es una valoracin del peso promedio de la hemoglobina en eritrocitos individuales expresado en pg.

VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (VCM), indica el volumen promedio de los eritrocitos individuales expresado en femtolitros.

CONCENTRACION MEDIA DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR (CMHC), es la concentracin promedio de hemoglobina expresada en un decilitro de eritrocitos g/dL.

Los ndices proporcionan al cientfico de laboratorio clnico un indicio sobre cmo deben verse los eritrocitos en frotis de sangre teido. Como la morfologa anormal de los eritrocitos es caracterstica de diferentes tipos de anemia, los ndices son de utilidad como clasificacin inicial

de los estados anmicos.

2 OBJETIVOS

Determinar el nmero de eritrocitos por mm3 y las constantes hematolgicas, parmetros muy importantes, para el diagnstico de anemias.

3 FUNDAMENTO

Los principios generales de este recuento se basan en 2 puntos bsicos, los cuales consisten:

Primero escoger un lquido de dilucin, que no solamente diluya los eritrocitos hasta cifras legibles, sino que tambin permita identificarlos y que destruya otros elementos celulares

que en ese momento no nos interesen y,

Segundo utilizar equipos automatizados que nos proporcionen las lecturas del nmero de

eritrocitos por mm3.

Los diluyentes ms utilizados en el recuento de eritrocitos son el Lquido de Hayem, las

Soluciones de Gower, o bien simplemente solucin salina de cloruro de sodio al 0.85%

El recuento de glbulos en la sangre es una prctica poco habitual en el laboratorio clnico, en el cual se determina el nmero de eritrocitos por mm3 de sangre, con la ayuda de la cmara de Neubauer o hemocitmetro. La cmara de Neubauer o hemocitmetro es un grueso portaobjetos

de vidrio, en el centro de su superficie se encuentra un cuadrado de 3 mm de lado dividido en 9 cuadros grandes cada uno de 1 mm, donde el cuadro central est dividido en 25 cuadros los

marcados con la letra E son utilizados para el recuento de eritrocitos.

4 PROCEDIMIENTO


Muestra de sangre venosa con EDTA Recipiente RPBI para punzocortantes

Tubo Vacutainer con EDTA Aguja y capuchn de sistema Vacutainer Torundas con alcohol

Cmara de Neubauer con cubrehematmetro Micropipetas y puntillas

Solucin salina .85% Tubos de ensaye

Microscopio


1. Tomar la muestra por puncin venosa con sistema Vacutainer.

2. Con solucin salina y la muestra del paciente preparar una dilucin 1:200 3. Se procede al llenado de la cmara de Neubauer cuidando que el lquido llene por

completo el espacio situado por debajo del cubrehematimetro sin que ninguna porcin se haya deslizado al fosocentral y sin que se formen burbujas.

4. Se dejan sedimentar las clulas durante algunos minutos pero evitando que haya

evaporaciones hace la observacin microscpica en objetivo de bajo aumento para demostrar una distribucin homognea de las clulas en la cuadricula.

5. Se hace el recuento de los eritrocitos en cinco de los 25 cuadros centrales que tiene a su vez 16 cuadrados ms pequeos tomando en cuenta que o para evitar confusiones al contar las clulas sobre las lneas superior e izquierda estas deben considerarse como si

estuvieran dentro de los cuadrados pero las lneas derecha e inferior del cuadrado no deben contarse, de esta forma, se evitan contar dos veces a una misma clula.


RECUENTO DE ERITROCITOS Si se contaron 5 cuadros de los 25: num. GR / mm3 = num. GR x Factor de dilucin

CONSTANTES HEMATOLGICAS O DE WINTROBE: VGM= EL VGM ES EL VOLUMEN MEDIO DE LOS ERITROCITOS INDIVIDUALES.

HEMATCRITO % X 10

VGM = --------------------------------------- NUM. G.R/ mm3

HCM = EL HCM ES EL CONTENIDO DE HEMOGLOBINA EN UN ERITROCITO INDIVIDUAL.

HEMOGLOBINA ( g/dl) X 10 HCM = -------------------------------------------------

NUM. G.R /mm3

CMHC = LA CMHC ES LA CONCENTRACION MEDIA DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR POR 100 ml DE ERITROCITOS CONCENTRADOS.

Hb (g/dl) X 100 CMHC = --------------------------

HTO (%)


6 ANEXOS

EJERCICIO: INDIQUE 3 CASOS EN LOS QUE SE OBTENGAN VALORES DE VGM, CMHB, HbCM PARA CLASIFICAR UNA ANEMIA:

a) microcticahipocrmica b) normocticanormocrmica

c) normocticahipocrmica d) macroctica

1.- Mencione la composicin qumica de los tres lquidos empleados en la cuanti ficacin de glbulos rojos.

2.- Esquematice la cuadricula de la cmara de neubauer donde se realiza el recuento de eritrocitos. 3.- Explique cmo se obtiene el factor de 10 000 de los glbulos rojos.

4.- Culsera el factor si realiza un recuento en a) los 25 cuadros, b) un cuadro? 5.- Cmo realiza el clculo de eritrocitos si realiza una dilucin de 400 en lugar de 200?

7 REFERENCIAS http://artemio-parasitologiaartemio.blogspot.mx/2012/03/practica-no-3-hematologia. html# !/

2012/03/practica-no-3-hematologia.html

CARRERA

PLAN DE

ESTUDIOS

CLAVE DE LA

ASIGNATURA


QUMICO FARMACUTICO

BILOGO


PRCTICA NMERO


5 RECUENTO DE RETICULOCITOS 2 horas 1 INTRODUCCIN

Los reticulocitos representan a los eritrocitos inmaduros en el estado final de diferenciacin. Se

originan de los eritroblastos ortocromticos luego de la eyeccin del ncleo y maduran gradualmente, parte en la mdula sea (3 das en promedio) y en la sangre perifrica (1 da). Hay

cambios morfolgicos y estructurales y el proceso de maduracin consiste en una reduccin gradual en la cantidad de RNA ribosomal y protenas. El primer intento para clasificar a los reticulocitos por madurez lo realiz Heilmeyer en 1932. Los dividi en 4 categoras de acuerdo al

contenido retculofilamentoso.

Ilustracin 1. Clasificacin de los reticulocitos de acuerdo con la edad. Las clulas del grupo I son las menos maduras y las del grupo IV, las ms maduras

2 OBJETIVOS

Identificar reticulocitos por medio de tincin supravital para describir la funcin

eritropoyetica de la medula sea. 3 FUNDAMENTO

La cuantificacin de los reticulocitos presentes en la sangre perifrica proporciona un mtodo

para evaluar la actividad eritropoyetica de la medula sea, la cual se usa en el diagnstico diferencial de anemias y en la vigilancia de la respuesta eritropoyetica de un paciente en tratamiento.

Con el uso de un colorante supravital (nuevo azul de metileno) se precipita el RNA ribosmico residual dentro de los reticulocitos. Se prepara un frotis sanguneo con la mezcla de sangre anticoagulada y colorante supravital que se examina en el microscopio. Un eritrocito que contiene

dos o ms partculas de material teido de azul es un reticulocito. El nmero de reticulocitos se expresa como porcentaje del nmero total de eritrocitos contados.

4 PROCEDIMIENTO

A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS

MATERIAL DE APOYO

Muestra de sangre venosa con EDTA Recipiente RPBI para punzocortantes Torundas con alcohol

Agujas y capuchn para sistema Vacutainer Tubo vacutainer con EDTA

Colorante nuevo azul de cresilo Pipeta Pasteur Portaobjetos

Microscopio

Incubadora


1. Tomar muestra por puncin venosa con sistema Vacutainer. 2. Poner 6 gotas del colorante para reticulocitos en un tubo de ensaye y aadir 6 gotas de

sangre del paciente y mezclar. 3. Incubar 15 minutos a 37 grados centgrados.

4. Hacer frotis. 5. Dejar secar el frotis observar a 100x x y contar el nmero de reticulocitos en 500 clulas.

OPCIONAL: Teir el frotis con el mtodo de Wright y contar el nmero de reticulocitos por cada 100 eritrocitos.


RETICULOCITOS (%) = RETICULOCITOS CONTADOS X 100 --------------------------------------------------

500

% DE RETICULOCITOS X NUM. G.R / mm3

RECUENTO RETICULOCITARIO ABSOLUTO= --------------------------------------------------- 100

% DE RETICULOCITOS X HTO DEL PACIENTE RECUENTO DE RETICULOCITOS

CORREGIDOS = -------------------------------------------------------------------

HTO. NORMAL (45 %)

RECUENTO DE RETICULOCITOS CORREGIDOS NDICE DE PRODUCCIN RETICULOCITARIA= --------------------------------------------------------------------

TIEMPO DE MADURACIN( 2 DAS )


6 ANEXOS

CUESTIONARIO

1. Cul es el fundamento de la tcnica de coloracin del nuevo azul de metileno para reticulocitos.

2. Como se prepara el reactivo para coloracin de reticulocitos ( nuevo azul de metileno) 3. Mencione tres casos en los que se encuentre elevado el porcentaje de reticulocitos y tres

casos en los que se encuentre disminuido 4. Como se realiza la correccin del porcentaje de reticulocitos y como se calcula el nmero

total de reticulocitos

5. Indique otro reactivo para teir reticulocitos y su mtodo de preparacin. 6. Porque se utilizan estos colorantes, explicar.

7 REFERENCIAS

http://www.sah.org.ar/revista/numeros/vol17-n1-67-69-Sah1-5C.pdf

CARRERA PLAN DE

ESTUDIOS

CLAVE DE LA

ASIGNATURA NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUMICO FARMACUTICO

BIOLOGO 2014 2015 LABORATORIO DE SERIE ROJA

PRCTICA

NMERO NOMBRE DE LA PRCTICA DURACIN

7 FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS

1 INTRODUCCIN

En las anemias hemolticas existe una elevada tendencia a la destruccin de los glbulos rojos. La

clasificacin de estas anemias se basa en la localizacin del factor causante de la hemlisis que puede ser:

1. Factores hereditarios o intracorpusculares. 2. Factores adquiridos o extracorpusculares.

Se ha estudiado el lmite de tonicidad de los eritrocitos, y se ha visto que la fragilidad osmtica est aumentada en la esferocitosis hereditaria, en algunas ocasiones en la anemia hemoltica

autoinmune, en la enfermedad hemoltica del recinnacido (por anti-A y con menos frecuencia con anti Rh) y en la anemia hemoltica por envenenamiento qumico o por quemaduras graves. Se ha observado mayor resistencia globular en soluciones hipotnicas en la talasemia, anemia de

eritrocitos falciformes(drepanocitosis) y en otros trastornos en los que aparecen eritrocitos de escaso espesor( blanco de tiro o dianocitos)

2 OBJETIVOS

El alumno efectuar e interpretar la prueba de fragilidad osmtica de los eritrocitos frente a

las soluciones salinas hipotnicas. 3 FUNDAMENTO

En este procedimiento se agrega sangre entera a soluciones crecientemente hipotnicas de cloruro de sodio amortiguado y se incuban a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se

determina la cantidad de hemolisis en cada concentracin al medir de manera espectrofotomtrica la absorbancia del lquido sobrenadante. Se prepara una grfica de fragilidad osmtica al registrar

el porcentaje de hemolisis de cada solucin respecto de su concentracin, y comparar los resultados con un testigo normal. Los eritrocitos normales comienzan a hemolizarse a una concentracin aproximada de .50% de NaCl, y la hemolisis se completa a .30%.

4 PROCEDIMIENTO

A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS

MATERIAL DE APOYO

Muestra de sangre venosa con EDTA Recipiente RPBI para punzocortantes

Torundas con alcohol Agujas y capuchn para sistema Vacutainer

Tubo vacutainer con EDTA Solucin Stock: NaCl al 10% Solucin de trabajo: NaCl al 1%

Tubos de ensaye Gradilla

Agua destilada

Espectrofotmetro

Micropipetas y puntillas B DESARROLLO DE LA PRCTICA

1. Tomar muestra por puncin venosa con sistema vacutainer. 2. Hacer la prueba de fragilidad osmtica de 30 minutos. Usando tubos de ensaye de la

siguiente manera: 3.

No. TUBO CONCENTRACION % NaCl

SOLUCION DE TRABAJO

AL 1%

AGUA DESTILADA

SANGRE DESFIBRINADA

1 0.09 4.50 0.50 0.05

2 0.85 4.25 1.00 0.05

3 0.80 4.00 1.50 0.05

4 0.75 3.75 1.75 0.05

5 0.70 3.50 2.00 0.05

6 0.65 3.25 2.25 0.05

7 0.60 3.00 2.50 0.05

8 0.55 2.75 2.75 0.05

9 0.50 2.50 3.00 0.05

10 0.45 2.25 3.25 0.05

11 0.40 2.00 3.50 0.05

12 0.35 1.75 3.75 0.05

13 0.30 1.50 4.00 0.05

14 0.20 1.00 4.25 0.05

15 0.10 0.50 4.50 0.05

16 0.00 0.00 5.00 0.05

4. Mezclar bien las soluciones antes de agregar la sangre y al agregar esta, mezclarlo por

inversin usando papel parafilm. 5. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente.

6. Centrifugar 5 minutos a 2000 r.p.m. 7. Leer el sobrenadante en el espectrofotmetro a 540 m. 8. Determinar el porcentaje de hemlisis en cada celdilla aplicando la formula:

%hemlisis= _D.O TUBOS 1-15 X 100 D.O TUBO 16

9. Graficar en papel milimtrico (abscisas- concentracin de NaCl) ordenada % de hemlisis).


I NFORME DE RESULTADOS 30 min

Fragilidad osmtica: Paciente ------------------------% NaCl Dada en 50% Hemlisis normal ----------------- ------% NaCl


6 ANEXOS

1. Qu sucede con los eritrocitos cuando se exponen a soluciones hipotnicas de NaCl?

2. Qu indica la fragilidad aumentada? 3. Indique 5 casos en los cuales se encuentra aumentada la fragilidad osmtica. 4. indique 5 casos en los cuales se encuentra disminuida la fragilidad osmtica.

7 REFERENCIAS

Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995.

Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico.

1998.

McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa.

1998.

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