Medio de Cultivo

INFORME N° 6

Medios De Cultivo

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

Facultad de Ingeniería Ambiental y Recursos Naturales

Alumna:

Bruno Grey, Karen Victoria

Asignatura: Laboratorio de Microbiología General

Profesora: Blga. Suyo Beatriz

Grupo Horario: 91 G

Turno: Lunes de 11 – 2 pm.

Semestre: 2015-B

Ciclo: V

Fecha de Entrega: 26/10/2015

Callao, Perú

universidad nacional del callao MICROBIOLOGIA GENERAL

MEDIOS DE CULTIVO

I. MARCO TEÓRICO

I.1. Medio de Cultivo

Es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de

microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe

sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los organismos

van a crecer y multiplicarse para dar colonias.

Los microrganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en

condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una

amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes

para su desarrollo están en el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e

hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de

crecimientos específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre

ellos.

Condiciones generales para el cultivo de microorganismos:

- Disponibilidad de nutrientes adecuados

- Consistencia adecuada del medio

- Presencia o ausencia de oxígeno y otros gases

- Condiciones adecuadas de humedad

- Luz ambiental

- pH

- Temperatura

- Esterilidad del medio

I.2. Clasificación de los medios de cultivo

A. Según su origen

Naturales : Son los preparados a partir de las sustancias naturales de origen

animal o vegetal como ser extractor de tejidos o infusiones y cuya

composición química no se conoce exactamente.

Sintéticos : Son los medios que contienen una constitución química definida

cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados

reproducibles.


Semisintéticos : Son los sintéticos a los que se le añade factores de

crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, ejm: extracto

de levadura.

B. Según su consistencia:

Líquidos : Se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución

acuosa. Permite observar sedimentos con un elevado número de

microorganismos.

Sólidos : Se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón

de 15 g/l. Este conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en

placas Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y

diferenciar bacterias.

Semisólidos : Contienen 7.5g de agar/litro de caldo. Se utilizan para

determinar la motilidad de las especies de estudio.

C. Según su composición:

Comunes o universales: Su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de

los microorganismos pocos existentes. Es el medio más frecuente utilizado

para mantener colonias microbianas. Ejemplo: Agar común o caldo común.

Enriquecidos: Están compuestos de un medio base como apoyo del

crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como

suplementos nutritivos, ejemplo: sangre, suero, líquido. Se utiliza para

microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.

Selectivos: Son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las

condiciones físicas del medio o añadiendo o suprimiendo componentes

químicos específicos con el fin de inhibir el crecimiento de especie cuyo

crecimiento no interesa. Se utiliza para seleccionar y aislar

microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Ejemplo: Agar salado

manitol.

I.3. Preparación de los medios

Deben efectuarse de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Se debe utilizar

material de vidrio limpio y libre de productos químicos, con agua destilada o

desionizada, a menos que la preparación tenga una especificación adicional. El

medio preparado debe ser calentado hasta la disolución.

Esterilización : Debe realizarse en el menor tiempo posible para evitar la

desnaturalización de algunas sustancias por exceso de calentamiento.


Servido : Los medios de cultivo luego de ser esterilizados deben ser enfriados a

temperatura promedio de 45°C – 55°C para luego ser adicionado a los

recipientes finales.

II. CÁLCULOS

Se necesitan:

Del Agar EMB:

1000 ml 17.5 gr

160 ml x

III. RESULTADOS

x= 2.8 gr

Servir en placas y tubos y dejar enfriar.

Llevar la solución a hervor y dejar enfriar hasta 45°C

aproximadamente.

Colocar el polvo en un matraz y agregar agua

destilada

Pesar el polvo del Agar EMB

4 placas Petri (15 ml ) 2 tubos de ensayo (10 ml )

Total: 60 ml Total: 20 ml


IV. ANALISIS DE LOS RESULTADOS

Luego de realizar el procedimiento experimental, se obtuvo una sustancia gelatinosa

cuajada de color entre ámbar y transparente, tanto en placas como en tubos.

V. CONCLUSIONES

Concluida la práctica, se aprendió a preparar un medio de cultivo el cual nos servirá

para la próxima práctica.

Alga Lavado Extracción Filtración Prensado y secado

MoliendaAgar - Agar


CUESTIONARIO

1. ¿Qué es Agar, de donde se extrae?

El agar o agar-agar es una gelatina vegetal de origen marino. Es un polisacárido sin

ramificaciones obtenido de la pared celular de varias especies de algas de los

géneros Gelidium, Euchema y Gracilaria, entre otros, resultando, según la especie,

de un color característico. El agar nutritivo es usado como medio de cultivo para el

crecimiento de bacterias y hongos, pero no para virus.

Obtención:

2. ¿Es necesario autoclavar el medio de cultivo, porque?

Sí, porque un medio de cultivo está constituido por una mezcla de agua y sustancias

orgánicas e inorgánicas, los que en conjunto proporcionan los requerimientos

nutricionales para el desarrollo de los microorganismos. Entonces Una vez disuelto el

medio se debe esterilizar para evitar el crecimiento de contaminantes.

3. ¿Por qué se utiliza agua destilada en la preparación de los medios de

cultivo?

Porque el agua destilada a diferencia del agua que proviene del caño, cuenta con

una calidad microbiológica y fisicoquímicamente adecuada. Deben de haberse

sometido a controles periódicos que aseguren su calidad

Requisitos: controles de conductividad, pH, contaminación microbiana, libre de

sustancias bactericidas, inhibidoras o interferentes.


INFORME N° 7

Cultivo de Microorganismos

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

Facultad de Ingeniería Ambiental y Recursos Naturales

Alumna:

Bruno Grey, Karen Victoria

Asignatura: Laboratorio de Microbiología General

Profesora: Blga. Suyo Beatriz

Grupo Horario: 91 G

Turno: Lunes de 11 – 2 pm.

Semestre: 2015-B

Ciclo: V

Fecha de Entrega: 26/10/2015

Callao, Perú


CULTIVO DE MICROORGANISMOS

I. MARCO TEÓRICO

I.1. Definiciones

Siembra: Es la incorporación a un medio de cultivo de una muestra (inóculo),

con propósitos cuantitativos o cualitativos.

Cultivo: Es el crecimiento de microorganismos en un medio de cultivo y a

condiciones de laboratorio controladas.

Colonia: Multiplicación bacteriana en un medio de cultivo.

I.2. Clases de Siembra

a. Siembra por estría: La técnica de siembra en estría es usada para aislar cepas

puras en una placa Petri a partir de un inóculo o muestra con diferentes

especies. La técnica consiste en, mediante un asa de siembra previamente

esterilizada, rayar la superficie de cultivo de una placa Petri de forma que en

cada pasada sea menor el número de células depositado, las últimas pasadas

deberán depositar un número tan bajo de células que, una vez incubada s, se

formen colonias puras.

b. Siembra por dispersión y agotamiento: Tomar un asa de siembra y colocarla

en un extremo del medio sólido, realizar movimientos del ZIG ZAG hacia el

centro de la placa. Luego girar la placa 45° y hacer el mismo procedimiento,

tomando solo una vez la asada de la muestra. Finalidad: obtener colonias

aisladas.

c. Siembra por puntura : Con una aguja de platino, tomar una pequeña cantidad

de una colonia, sembrar en el agar semisólido o sólido introduciendo la aguja

en forma vertical.

d. Siembra por inoculación: Con una asa de siembra, previamente esterilizada a

la llama, tomar una cantidad suficiente de inoculo o muestra e introducirla

hasta el fondo del tubo líquido, sin tocar las paredes del mismo. Flamear la

boca del tubo antes y después de la siembra para evitar contaminaciones.

Rotular e incubar.


II. PROCEDIMIENTO

Siembra en Placas

Siembra en tubos de ensayo:

III. RESULTADOS – ANÁLISIS

Se sembraron 8 placas por el método de dispersión y agotamiento, y en 2

tubos de ensayo por el método de puntura.

Los resultados (crecimiento – desarrollo de colonias) dependerán de la forma

cómo se sembró durante el experimento.

IV. CONCLUSIÓN

Se entendió y conoció las formas y métodos de siembra cuyos resultados

se evidenciarán luego.

Flamear el asa en arco para esterilizar.

Destapar el tapón con el meñique y tomar la

muestra (Chicha de Jora).

Aplicar en zigzag, cerca al mechero, girando en

un ángulo de 45°.

Flamear el asa en punta para esterilizar.

Destapar el tapón con el meñique e introducir el asa de siembra en la

muestra.

Destapar el tapón del tubo con el meñique.


CUESTIONARIO1. ¿Cuándo realizaría cultivo por diluciones?

Cuando un determinado microorganismo que se busca en un cultivo mixto está en

mayor cantidad que los otros microorganismos. Este microorganismo puede ser

obtenido en cultivo puro mediante una serie de disoluciones en tubo, del medio de

cultivo apropiado. Cuando la muestra está muy diluida contendrá solamente la

bacteria que buscamos.

2. ¿Cómo se realiza los cultivos por diluciones de alimentos?

Debido a la alta carga microbiana que generalmente tienen los alimentos es

necesario, por lo general, hacer diluciones de la muestra con objeto de poder

obtener, en los medios de cultivo, colonias perfectamente diferenciadas; de esta

forma podremos estudiarlas, contarlas y llegar al aislamiento e identificación de los

gérmenes existentes.

a. Para alimentos líquidos

Método

Mezclar bien el total de la muestra.

Tomar 10 mL de la muestra con pipeta estéril.

Poner en frasco de dilución con 90 mL de diluyente estéril. La dilución

obtenida es al1/10. Se desecha la pipeta.


Tomar 10 mL de la dilución anterior con nueva pipeta estéril.

Poner en bote de dilución con 90 mL de diluyente estéril. La dilución obtenida

es al 1/100. Desechar la pipeta.

Por el mismo procedimiento hacer las diluciones al 1/1000. 1/10000. etc.

según se estime el grado de contaminación.

La inoculación en los medios de cultivo debe hacerse antes de 30 minutos

después de hacer las diluciones.

b. Para alimentos sólidos con partículas de pequeño tamaño (harina, pienso,

etc...)

Método

Pesar asépticamente (en recipiente estéril) 10 g. de la muestra

Echar en bote de dilución estéril (sin diluyente).

Completar hasta 100 mL con diluyente estéril.

Agitar la suspensión 25 veces. Si el sólido es soluble o parcialmente soluble se

completa de nuevo hasta 100 mL si es necesario. La dilución queda al 1/10.

Por el mismo procedimiento que en los líquidos hacer diluciones a 1/100.

1/1000. etc.

c. Alimentos sólidos (carne, pescado, etc.)

Método

Pesar asépticamente 10 g. (mejor 50) de alimento

Poner en el recipiente del homogeneizador con 90 mL (ó 450) de diluyente

estéril.

Homogeneizar durante 2 minutos a 8000 rpm. La dilución es al 1/10

Por el mismo procedimiento que en líquidos hacer las restantes diluciones.


3. ¿Cómo se realiza los cultivos de agua contaminada?

La técnica de dilución para agua contaminada consiste en inocular una serie de

frascos tipo antibiótico que contienen 9 ml del medio de cultivo apropiado según el

tipo de bacteria que se quiera evaluar.

Se obtiene 1 ml de la muestra usando una jeringa descartable, estéril, de 1 o 2

ml de capacidad.

Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el mismo, se invierte y

se retira 1 ml que se inocula en el 2° frasco.

Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco N° 2, previamente agitado, y

se inocula el frasco N° 3 y así sucesivamente, utilizando una nueva jeringa

para cada frasco.

Una vez inoculados los frascos y rotulados convenientemente, se incuban

durante 7 días o 14 días en estufa de cultivo a ±5ºC respecto de la

temperatura del agua muestreada, efectuando lecturas diarias para observar

aquellos frascos que manifiestan desarrollo positivo.

La manifestación de crecimiento bacteriano se observa por la turbidez del medio de

cultivo que se compara por transparencia con un frasco sin inocular.

4. ¿Qué otras formas de siembra existen, explique?

a. Siembra en placa: Una porción de una colonia que se pase a un medio de

cultivo en tubo viene a ser cultivo puro. Después de una incubación apropiada,

el desarrollo de cada cultivo se observa al microscopio para verificar que es

puro.

b. Placa invertida: El principio es la dilución de la muestra en los tubos. El medio

se mantiene en estado líquido (45 – 52°C) para permitir que el inóculo se

distribuya adecuadamente en el medio.


c. Siembra por difusión en placa: Se usa una varilla de cristal para esparcir la

muestra. Esta operación hace posible adelgazar la muestra de tal manera que

en la superficie del agar quedan las bacterias separadas unas de otras.

Medio de Cultivo

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