7/25/2019 Mtodo de Coloracin de Ziehl Neelsen

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MTODO DE COLORACIN DE ZIEHL NEELSEN

La tincin de Ziehl Neelsen fue desarrollada inicialmente por Paul Ehrlich para

poner de manifiesto la presencia de los bacilos causantes de la tuberculosis enmuestras clnicas de pacientes.

Esta tcnica es capaz de diferenciar los bacilos Acido Alcohol Resistentes (AAR!.

La tcnica de Z"N fuerza la penetracin de la fucsina b#sica en la pared celular

mediante la accin combinada del fenol $ el calor% &ue aumentan la fluidez de la

capa de #cidos miclicos' el calor derrite) el componente ceroso $ el fenol act*a

a modo de disol+ente% permitiendo el paso del colorante b#sico &ue se une a los

#cidos miclicos con car,a ne,ati+a. -uando cesa la aplicacin de calor $o se

elimina el e/ceso de fenol mediante un la+ado con a,ua% la pared recupera su

consistencia cerosa% pero las molculas de fucsina &uedan atrapadas en su

espesor.-on la coloracin de Ziehl Neelsen se obser+an como bastoncitos del,ados%

li,eramente cur+os% ro0o fucsia% destac#ndose claramente contra el fondo azul.

MATERIALES:

Portaob0etos

1echero o encendedor indi+idual

Asa de siembra

Pipetas

Pinzas de madera

Microscopio ptico (12 Microscopios como mimo! E&uipo de tincin (barras paralelas!

REACTI"OS:

2ucsina fenicada b#sica

Alcohol acido 3%4 5

Azul de metileno

1uestra de esputo Aceite de inmersin.

6inta -hina

.

OTROS:

7uantes ,ranel 1ascarilla

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8abn papel toalla

#ROCEDIMIENTO:

La+arse las manos. -olocarse los materiales de proteccin personal

Preparacin del material

9rdenar las muestras.

Co$or%ci:

:isponer dos +arillas de +idrio en forma paralela% a una distancia de

apro/imadamente ; cm entre una $ otra% una sobre un soporte dentro del

la+adopileta de coloracin.

2iltrar la cantidad de fucsina necesaria para las tinciones a realizar en la

0ornada. cm entre ellas.

-ubrir totalmente la superficie del e/tendido con fucsina b#sica fenicada

recin filtrada. :ispensar el colorante con sua+idad% sin salpicar $ sin tocarcon el ,otero o con el embudo los e/tendidos.

-on la llama de un hisopo embebido en alcohol calentar sua+emente por

deba0o de los e/tendidos% con mo+imientos de +ai+n% hasta &ue obser+e

&ue se desprenden los primeros +apores blancos. No calentar con

mechero.

En caso de derrame del colorante% reponer la fucsina% no de0ar secar el

preparado.

En el trmino de apro/imadamente cinco minutos calentar tres +eces hasta

emisin de +apores? esto es suficiente para &ue la fucsina penetre

adecuadamente en el bacilo $ se fi0e a sus lpidos. No her+ir la fucsina

por&ue la pared de los bacilos puede destruirse $ colorearse mal.

-on una pinza% le+antar cuidadosamente la l#mina portaob0etos desde el

e/tremo m#s cercano al operador. En0ua,ar con abundante a,ua a ba0a

presin% con un frasco o un ,rifo. La+ar mu$ sua+e $ cuidadosamente la

superficie eliminando totalmente la solucin de fucsina. 7irar el e/tendido

$ la+ar con cuidado tambin la parte posterior.

@nclinar el portaob0etos para eliminar el e/ceso de a,ua $ as e+itar diluir los

reacti+os &ue se utilizar#n a continuacin.

D&co$or%ci:

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-ubrir la totalidad del e/tendido con solucin decolorante $ de0ar actuar

apro/imadamente 3 minutos.

En0ua,ar con abundante a,ua a ba0a presin.

erificar &ue el e/tendido se ha decolorado (las partes m#s ,ruesas del

e/tendido a lo sumo conser+an un le+e tinte rosado!.