DuPont Diagnosticos Métodos de prueba rápidos

¿Por qué analizar?

• Garantizar la seguridad humana (animal)

• Cumplimiento a regulaciones, reglñamentos y/o leyes

• Protección de la marca

•Requerimientos de clientes (cadenas comerciales, consumidores)

•Control de Calidad (ambientes y procesos)

Agencias Regulatorias

Food Industry

Consuidores

Service Labs

Impacto de las enfermedades transmitidas por alimentos

• ~48 milliones de enfermedades,~128,000 hospitalizacione, ~3000muertes por año atribuidas aenfermedades transmitidas poralimentos (estimado CDC, 2011)

• El costo en EU por enfermedades• El costo en EU por enfermedadestrasnsmitidas por alimentos es de~$152 Billones / año (ProduceSafety Project 2010)

• Los costos por retiros de productoscon riesgo de causar unaenfermedad es de ~$7 Billones(Washington Post)

RETIROS DE PRODUCTO

Advierte la FDA sobre queso contaminado10 Marzo de 2009Fuente: NotimexLa Administración de Medicamentos y Alimentos (FDA) de Estados Unidos advirtió hoy sobre la posible contaminación por listeria en queso fresco y cotija producidos en Nueva York.cotija producidos en Nueva York.

La FDA recomendó a los estadunidenses no consumir y desechar los quesos frescos y cotija elaborados en Nueva York por la compañí …….., porque alertó que "podrían estar contaminados con listeria monocytogenes".

La listeria puede provocar aborto e infecciones como meningitis ……..

La compañía ya está retirando del mercado los productos que fueron distribuidos en los barrios del Brooklyn, Queens, Bronx y Manhattan en Nueva York y en el estado de Pensilvania.

Proceso de seguridad alimentaria

Plan HACCP Tecnología

DETECCION +

Cliente

Proveedores

6/28/20135

RegulacionesRecursos

Grupos de consumidores

+PROTECCION

Análisis

Demanda

Proceso típico de AnálisisSample

Collection

Enrich Yes

Send samples to 3rd. Party lab

In-house lab? No

Yes

ProductDisposition

HoldProduct Food safety

process in control? No

Possible consequences

YesContinue NormalProcess

•Release Product

Enrich samples

Analyze samples

Yes

NoTest

negative?

Culture confirmation

Increase testing

Conf. Positive?

No

Yes

Production shut down

Reassessment of Sanitation and

quality programs

Recall product

6/28/20136

¿Qué preocupa a los clientes en cuanto a métodos ?

Velocidad

Seguridad

� Tiempo Total de resultado (TTR)

Tiempo en el

instrumento

Timepo Total de Resultado

Horas hombre(preparación

de la muestra)

Horas hombre

(recolección muestra)

Tiempo de enriquecimiento

Fácil de usar

Costo

Aprobaciones

• La importancia del tiempo total de resultadosdepende de la acción que el cliente tomará en función del resultado.

• “Ambiguedad ” en los resultados es un problema

Timepo Total de Resultado (TTR)

6/28/2013 7

Velocidad

Seguridad

� Sensitibilidad (rango falsos negativos)

• Probabilidad de que una prueba, de como resultado positivo

cuando el microrganismo objetivo esta presente

• Termino que hace relación al nivel de deteccion.

• Especificidad (rango falsos positivos)• Probabilidad de que una prueba, de como resultado positivo

¿Qué preocupa a los clientes en cuanto a métodos ?

• Probabilidad de que una prueba, de como resultado positivocuando el microrganismo objetivo NO esta presente

� Inclusividad

• Capacidad para detetctar todas las vartiantes de una mismaespecie .

• Termino asociado con la reducción de falsos negativos

� Exclusividad

• Capacidad de rechazar todas las especies no deseadas• Termino asociado con la reducción de falsos positivos.

6/28/2013 8

Fácil de usar

Costo

Aprobaciones

Velocidad

Seguridad

� Error humano

¿Qué preocupa a los clientes en cuanto a métodos ?

Fácil de usar

Costo

Aprobaciones

� Horas hombre o tiempo del analista

� Capacitación / Experiencia requerida

6/28/2013 9

Velocidad

Seguridad

� Costo de Kit, Medios de cultivo, and

consumibles

¿Qué preocupa a los clientes en cuanto a métodos ?

Fácil de usar

Costo

Aprobaciones

� Costo de personal

� Producto detenido

� Retiro de producto

6/28/2013 10

Velocidad

Segueridad

� Certificación AOAC/ AFNOR/ COFEPRIS

� Adopción y/o aprobación por USDA/FDA* /

¿Qué preocupa a los clientes en cuanto a métodos ?

Fácil de usar

Costo

Aprobaciones

� Adopción y/o aprobación por USDA/FDA* / SENASICA / Health Canada

� Desarrollo en conjunto USDA/FDA

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Tecnologías para la determinación de microorganismo s

� Métodos de referencia o tradicionales (Técnicas

basadas en el vertido en placa o medios de cultivo)

• USDA MLG, FDA BAM, Health Canada,

ISO, etc. Lateral FlowELISA

� Fenotípico - Métodos Inmopnológico (Bsado en

tecnología de Anticuerpos)

� Genotípico - Métodos Moleculares (basados en el

material genético ADN o ARN)

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Métodos Moleculares

Ventajas

PCR (Polymerase Chain Reaction – Reacción de la Cadena de polimerasa )

� Basado en el material genetico – ADN o ARN

� Alta sensibilidad y especificidad� No depende de la expresión de un antigeno

� Mejor nivel de detección 10^4 ufc/ml

Desventajas� PCR Tradicional con geles, requiere de

intenso trabajo en laboratorio.� PCR tradicional requiere de especialista no

así en los métodos auotmatizados� Costo

*Automated BAX® System

• No gels required• No expert skills

required• Excellent

primers/probes

� Mejor nivel de detección 10^4 ufc/ml• Tecnología de inoovación - automatizado

6/28/2013 13

AAdenine CCytosine

Estructura del ADN

GGuanineTThymine

Dado que cadenas son complementarias, cada una puede servir como una plantilla para producir una copia exacta de la molécula original

Que es la Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR)?

Etapas básicas PCR:

1. Desnaturalización de la cadena de ADN porcalentamiento

2. Unión de primers (iniciadores) que son complementarios con la secuencia de la cadenade AND

3. Extensión de la cadena de ADN por la reacción de la polimerasa

Propuesta de ValorP

rod

uct

os

Estás ahí? Que microorganismo es este?¿He visto este antes?, ¿ Cuando?, ¿Donde?

¿De donde viene?

Pro

pu

est

ad

e V

alo

r � Sistema automatizado, basado en

AND para la determianción de

patógenos en alimentos.

Certidifacado, validado y adoptado

alrededor del mundo

� Rápido, Fácil de usar, seguro y

confiable.

� Sistema automatizado, basado en AND

para monitorear procesos de producción y

rastreao de pountos de contaminación

Identificación y caracterización de cepas

simultaneamente

� Proporciona una huella digital genética

“fingerprints” en tan solo 8 horas

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Sistema DuPont BAX®Detección de patógenos

Sistema DuPont RiboPrinter® Identificacion y Caracetrización microbiana

Reactivos para PCR: TabletasContienen todos los reactivos necesarios para

PCR:Taq polimerasaNucleotidosIniciadores o primersReacción de ControlMarcador fluorescente – colorante

� Empacados en tubos para PCR� Empacados en tubos para PCR

� Contienen un control positivo de proceso interno

� Se eliminan las transferencias múltiples

� Se reducen los errores por operador: Mayor Reproducibilidad

� Incluyen ingredientes que previenen la inhibición d el PCR

� Los sistemas de tapas cerradas reducen la contaminación potencial por amplicones

Segundo

enriquecimiento

BHI

Lisis de las

muestras, todo

el proceso en un

mismo bloque

Hidratación de

tabletas PCR

Proceso de PCR

automatizado

Interpretacion

de resultados

Un solo protocolo ……… SENCILLO

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DuPont Nutrition & Health

CONFIDENCIAL

• Confiable

• Fácil de usar

• Reducción de manos hombre

• Menor espacio

• Listo para usar

• Confiable

• Fácil de usar

• Reducción de manos hombre

• Menor espacio

• Listo para usar

Kits Estandar

Detección con colorante fluorescente

• Cuando PCR finalizó, El colorante incluido en la tableta de PCR se intercala en la doble cadena durante la amplificación del ADN

• Mientras esta unida la cadena de al ADN, el colorante produce señal fluorescente cuando es excitado por la luz

• Cuando la muestras se calientan al punto de fusión, la doble cadena de ADN se desnaturaliza (separación de las cadenas), liberando el colorante.

Temperatura de fusión (Tm) es el punto en el cual el ADN se desnaturaliza Depende del largo de los fragmentos y del contenido de enlaces de G-CMayor numero de estos enlaces G-C--> Incrementa la temperatura de fusiónMayor contenido de enlaces G-C --> Incrementa la temperatura de fusión

Kits Estandard

Señal e Flourescencia (“raw data”) cae con calentamie nto generando la curva de fusión.

Fluorescencia

• Software analiza los datos crudos, por medio de algoritmos se genera los datos procesados.

No SeñalSeñalIncremento de temperatura

Fluorescencia

Kits Real Time

Señal de Flourescencia incrementa con el numero de ciclos sim el microroganismo objetivo esta presente.

Fluorescencia

No Señal SeñalIncrementos de Ciclos

Fluorescencia

Compañías requieren: Tecnología que le permita reaccionar en el menor ti empo posible ante crisis asociadas a bacterias.

�Inovador: Identificación y CaracterizaciónResultados basados en ADN

�Facilidad de uso: Automatizado, NO requiere personal especializadoPermite compartir información electrónica

�Seguridad: Interpretación objetiva

¿Qué microrganismo es? ¿Hemos visto esta cepa antes?¿Dónde? ¿Cuándo?¿De dónde proviene?

�Seguridad: Interpretación objetivaMayor precisiónResultados consistentes

� Velocidad: Resultados en 8 horas� Estandarizado: Menos horas hombre

Único protocolo �Soporte técnico: 365 días del año RiboPrinter® …TIENE

LAS RESPUESTAS!Capacidad de identificar bacterias descocnocidas utilizando una base de datos pre-instalada de > 8500 patrones conocidos , diferenciar a un nivel sub-especies y realizar la trazabilidad de los puntos como fuente de contaminación.

Como trabaja el Sistema Riboprinter ®

Proceso AutomatizadoPreparación ADNSeparación y Transferencia Procesamiento de la membrana Detección

Análisis automatizadoIdentificaciónDiferenciación de cepas

El Sistema genera automáticamente el patrón RiboPri nt TM

Analisis de datos - IdentificaciónLos patrones son compardos con la base de datos - conti nuamente se actualiza

Los patrones son actualizados (actualización con un CD)

Colaboración con las principales empresas farmaceúticas e instituciones encargadas de la colección de cepas y certificarlas, tales como: ATCC, DSMZ (Alemania) and Riken (Japón)

• Al comparar el patr ón, proporciona la identificaci ón de la muestra, con un umbral de similitud de 0.85

Análisis de Datos: La Diferenciación de cepas

Los patrones son compardos tambien con la base de d atos hist óricos del cliente, independientemente del an álisis de identificaci ón.

Mapeo microbiano, utilizando

Ambientes

Productos

Personal

Mapeo y Bases de Datos Microbianas

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utilizando sus propias bases de datos

Equipos

Riboprinter® permitiódeterminar la fuentede contaminación real.

S. epidermidis(Producto Terminado)

S. epidermidis(Materia Prima)

S. epidermidis(Manos del Personal)

Diferenciación - Es una Ventaja y Excelente herramie nta

1. Laboratorio tercería (+)

2. Sistema BAX®

3. Riboprinter 3. Riboprinter

Alimentos más seguros