Microbiología 1

2014 [MICROBIOLOGA] taxonoma bacteriana

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La Microbiologa es la ciencia que se dedica al estudio de los microorganismos, observados con la ayuda de un microscopio, ya que escapan a nuestra capacidad visual. Sobre la faz de la Tierra hay una gran cantidad de especies diferentes de microogranismos, estamos poblados por una enorme cantidad de ellos; de hecho en nuestro propio cuerpo, la cantidad de organismos alojados en l supera en nmero al de nuestras propias clulas, siendo la mayora organismos unicelulares. Dentro de estos microorganismos tenemos: Bacterias: clulas procariontes Virus: parasito intracelular obligado Hongos: eucariontes, pudiendo ser uni o pluricelulares e incluso macroscpicos. Parsitos: eucariontes, uni o pluricelulares e incluso macroscpicos como gusanos.

Aqu se observan fotografas de representantes de cada grupo mencionado (fotografas de microscopia electrnica de barrido). La bacteria que ms se ocupa como modelo de estudio de las clulas procariontes, y por ende la ms conocida es la Escherichia coli. Tambin hay ciertos procesos de clulas eucariontes que se estudian en esta bacteria. Esta bacteria est presente en la mayora de los seres humanos y algunos animales, particularmente en el intestino grueso, y por consecuencia se encuentra en la materia fecal. Una manera de verificar el nivel sanitario de las comidas, es buscando la presencia o no de esta bacteria, si se encuentra, se dice que el alimento est contaminado con materia fecal.

E. coli

Virus influenza: causante de la mayora de los brotes de infecciones respiratorias en invierno


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Virus influenza Recordando materia del ao pasado, los virus no son seres vivos, son parsitos intracelulares que toman como husped a la clula. Tambin tienen un menor tamao que las clulas, y estn formados por material gentico y protenas. En algunos casos puede presentar hidratos de carbono o lpidos en su parte ms externa. El virus puede tener ADN o ARN como material gentico. Los que contengan ARN, tambin tienen la enzima transcriptasa reversa, la cual sirve para sintetizar ADN a partir de un molde de ARN. Otro dato a considerar, es que los virus son tan pequeos que se necesita un microscopio electrnico para visualizarlos, lo que los convierte en una entidad submicroscpica. Penicilium: Gnero bastante comn, representante de los hongos, ya que tiene relacin con la penicilina. Un hecho histrico dentro de la microbiologa fue el descubrimiento de los antibiticos, cuyo primer representante fue justamente la penicilina, la cual se descubri casualmente, por Alexander Fleming. Alexander trabajaba con el Staphylococcus aureus, y se le contamin con un hongo proveniente de esta familia, y se dio cuenta que el hongo produca algo que mataba la bacteria. Hoy en da hay una gama de

derivados de la penicilina para contrarrestar una gran variedad de bacterias. Hay tambin enfermedades producidas por hongos, una de estas es la candidiasis, enfermedad comn en las mujeres o en las guaguas, el hongo que lo produce es la Candida.

Hongo del gnero penicilium Trypanosoma cruzi: Ser vivo representante de los parsitos, es una especie de protozoo, o sea, un parsito unicelular y produce la enfermedad de Chagas, la cual es propia de Amrica Latina. Esta enfermedad tambin es un ejemplo de transmisin a travs de vectores, en este caso particular un insecto llamado vinchuca.


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Trypanosoma cruzi Ahora veremos algunos hechos histricos que fueron claves para la microbiologa. Anton van Leeuwenhoek: invent el primer microscopio, es el padre de la microbiologa. Describi con su microscopio a los animculos. El microscopio de Leeuwenhoek, que tena una pequea platina con un lente y un tornillo para poner la muestra, era un tamao tan pequeo que se poda tomar en la palma de la mano. Los microorganismos que el observo en su microscopio , llamados en ese tiempo por l como animaculos clasificados de acuerdo a su morfologa esferica o alargada, fueron los estreptococcus (cadena de celulas esfricas), como el streptococus nomeae que produce meningitis con alta tasa de mortalidad, el coccus (clulas esfricas no agrupadas), bacilos (clulas alargadas), como la escherichia coly presente en las heces de los seres humanos, estafilococcus (clulas esfericas agripadas en racimos) en donde uno muy conocido es el estafilococcus aereus el cual produce gran cantidad de infecciones de la piel como la esceptisemia. Hay personas que lo tienen dentro de la microbiota normal (bacterias que conviven normalmente con nosotros). Y espiroquetas, donde se destaca bajo esta

morfologa el treponema pallidum, que es el agente causal de la sfilis. Por eso es Leewenhoek considerado el padre de la biologa, gracias a su invencin, se desarrollo la microbiologa como ciencia independiente de la biologa. Otro investigador muy importante en microbiologa clnica es Louis Pasteur, que fue el primero en hacer una asociacin o identificacin de los microorganismos como agentes patgenos. Si bien Leeuwenhoek los observ, no hizo un link entre ese microorganismo y alguna enfermedad. Pasteur dijo algunos microorganismos pueden ser agente causal de enfermedad, tambin hizo otros aportes a la medicina; como la generacin y creacin de una de las primeras vacunas: la vacuna de la rabia (agente viral). Robert Koch fue otro investigador importante, quien creo los llamados postulados de Koch, que aun se usan para determinar si un agente patgeno es el causal de una enfermedad infecciosa determinada. Para establecer sus postulados Koch hizo un experimento: Se tienen dos ratones, uno sano y otro enfermo. Al ratn enfermo se le saca una muestra de sangre, la cual se sembrara o inoculara en una placa de cultivo. Luego se observa con el crecimiento qu tipo de bacteria creci all (en las colonias del patgeno sospechoso que crecieron en la placa de cultivo). Situacion que respondera al primer postulado El


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microorganismo debe estar presente en todos los individuos con la misma enfermedad. Es decir, en todos los animales que se han muerto por la misma causa o que presenten la misma sintomatologa. Recordar que las bacterias son organismos procariontes y se reproducen por fisin binaria (se divide de forma exponencial), y de tal manera, que al cabo de cierto tiempo van a haber millones de bacterias que provienen de una misma bacteria. Por lo tanto van a existir algunas bacterias muy parecidas y que se van a comportar de una manera muy similar. Esa colonia tiene un comportamiento determinado que se puede estudiar y a partir de eso saber de cual especie se trata. Postulados de Koch 1. El microorganismo debe de estar presente en todos los individuos con la misma enfermedad. 2. El microorganismo debe ser recuperado del individuo enfermo y poder ser aislado en medio de cultivo. 3. El microorganismo proveniente de ese cultivo debe acusar la misma enfermedad cuando se lo inocula a otro hospedero. 4. El individuo experimentalmente infectado debe de contener el microorganismo. Imagen: en la primera placa se logra aislar este microorganismo, desde el primer individuo enfermo, si yo tomo ahora una de esas colonias (de esas que se ven ms

aisladas) tomo una bacteria, la suspendo en un tubo de ensayo que tenga suero fisiolgico, y ese suero fisiolgico lo voy a inocular a un animal sano, este animal se va a enfermar y va a quedar como el primero. Y desde este segundo animal debo de tener el mismo microorganismo que el primero. Se comprueba tomando una muestra, se siembra en el mismo medio de cultivo y se obtiene la misma colonia con las mismas caractersticas. De esta manera, si se cumplen estas cuatro etapas se puede decir que este microorganismo que fue aislado de manera pura, es el agente causal de esa enfermedad infecciona

Estos postulados hoy en da tienen modificaciones porque no todos los microorganismos tienen el mismo comportamiento, hay algunos que no se pueden aislar en medio de cultivos, como los virus (parsitos intracelular obligados). En la placa de petri no los vemos porque no se pueden multiplicar solos.


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Las clamidias son importantes para el ser humano porque produce enfermedades de transmisin sexual. En la mujer producen enfermedades EPI (enfermedades plvicas inflamatorias) que pueden causar esterilidad. Microbiologa: es una disciplina con un enorme impacto hoy en da por que han habido muchos avances a lo largo de este desarrollo y muchos y varias agentes y bacterias son considerados micro no solamente estn los patgenos para el ser humano y este curso solo va a estar concentrado en una pequea proporcin el mnimo de bacteria son las patgenas para el hombre y el mximo son beneficiosas para el planeta en general. Nosotros nos enfocaremos en las bacterias patgenas para el ser humano, que pueden tener efectos dainos para el hombre Se estudiar: - Microbiologa bsica: estudia la naturaleza y propiedades de los microorganismos: morfologa, fisiologa, bioqumica, gentica, ecologa y taxonoma. Todo lo que respecta al microorganismo, como se comporta, como est estructurado, etc. Para que uno sea capaz, luego, saber cmo tratar ese microorganismo. - Microbiologa aplicada: utiliza los conocimientos generados por la microbiologa bsica para resolver problemas.

Microbiologa clnica Microbiologa de los alimentos

Microbiologa ambiental Microbiologa industrial y Biotecnologa. Para saber cmo son realmente las bacterias es necesario el uso del microscopio y las tinciones es posible la observacin de ellas a travs del microscopio ptico.

- Esfricas o cocos - Alargadas o bacilos - Enroscadas o espiroquetas. Las ms patgenas son los cocos y bacilos. NOTA: una espiroqueta muy famosa es el Treponema Palidum porque es el agente causal de la sfilis. Antes del descubrimiento de la penicilina las principales causas de muertes eran las infecciones como tuberculosis, neumona, sfilis, etc. Hoy en da la muerte no es tan comn, excepto algunas que no tienen el tratamiento adecuado. Depende del agente infeccioso, su resistencia y el antibitico que se use. El uso de antibitico no ha erradicado las enfermedades infecciosas, por el contrario a travs de los mecanismos de recombinacin se han generado bacterias multi resistentes, como las enfermedades infecciosas intrahospitalarias.


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DIVISION FILOGENTICA DE LOS ORGANISMOS

Caractersticas de las bacterias con respecto a las clulas eucariontes es la ausencia de la membrana nuclear. No tiene organelos membranosos, est delimitada por una membrana plasmtica y sobre ella una pared celular (no todos los procariontes la tienen, con importancia clnica), tambin pueden tener flagelos, y pili, diferentes a los cilios ya que las bacterias no tienen citoesqueleto, por lo que estn formados por filamentos proteicos diferentes. Las vas metablicas son conservadas y se mantienen como la glicolisis, ciclo de Krebs, fosforilacin oxidativa, vas de sntesis, reacciones de fermentacin. tiles para determinar qu tipo de bacteria es la presente en las muestras, se usa su metabolismo segn los medios de cultivos en los que se desarrolla.

Al microscopio se observa su material gentico disperso, sin organelos membranosos, ribosomas.

Las archeas no se consideran patgenas para el ser humano, y son utilizadas para fines industriales. El material gentico de las bacterias es circular de doble hebra, por lo general con excepciones de hasta 5 cromosomas mximo. Adems del material gentico circular las bacterias NO tienen histonas y para condensar su material gentico se ocupan los iones divalentes de Magnesio y Calcio, los cuales ayudan a compactar el material gentico junto con unas protenas parecidas a las histonas llamadas histonas like (funcin anloga pero distinta estructura). Otro elemento en las bacterias es la presencia de PLSMIDOS, cabe destacar que no todas las bacterias tienen plsmidos e incluso algunas pueden tener varios tipos de plsmidos o varias copias de un mismo tipo. Estos elementos tienen


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una gran importancia en la conjugacin (transferencia gentica horizontal) y hoy en da pueden ser incorporados de manera artificial para poner un gen especfico en la bacteria (ingenera bacterial), o tambin en la terapia gnica en organismos eucariontes. La pared de las bacterias es distinta a la de los hongos, est formada por PEPTIDOGLICN, formado por cadenas de azcares unidas entre s por pptidos. Los ribosomas son ms pequeos en las bacterias que en clulas eucariontes, teniendo un tamao de 70s (s: coeficiente de sedimentacin). En el caso de las bacterias existen un solo tipo de RNA polimerasas y en promedio las clulas procariontes miden entre 1 a 10 micrometros, el ojo humano no tiene la capacidad para ver ste tipo de tamao y para esto se necesita un microcopio ptico generalmente, y el aumento mximo en el microscopio es de 1.000x. Tipos de microscopios: ptico de campo claro: a la muestra se le atraviesa un haz de luz. ptico de campo oscuro: el haz de luz tiene una refraccin y no pasa completamente. ptico de fluorescencia: se necesitan fluorforos para distinguir ciertas diferencias. Electrnico: equipo ms sofisticado y llega hasta los mnimos detalles como los ncleos, poros,

membranas, organelos, virus, etc ya que el aumento es hasta de 1.000.000x. TINCIONES Para el uso de un microscopio de campo claro se necesita casi siempre la utilizacin de tinciones ya que las bacterias generalmente no tienen color, siendo transparentes naturalmente como las bacterias patgenas y las tinciones son de dos tipos: Tinciones simples y diferenciales. - Tinciones simples: un solo colorante si un microorganismo esta presente o no. Adems, nos permite ver la morfologa de la bacteria si es esfrica o es alargada. - Tinciones Diferenciales: En el caso de las tinciones diferenciales, se ocupa ms de un colorante, por lo general 2 colorantes, y adems, unas soluciones de lavado. Permitindonos ver distintos tipos de bacterias o nos permiten distinguir algunas estructuras determinadas dentro de las bacterias. La tincin ms utilizada en la microbiologa es la Tincin de Gram. MICROSCOPIOS Campo Oscuro: - Permite distinguir ciertas caractersticas de algunas bacterias - Mucho menos usado que el de Campo claro.


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- Ayuda en el diagnstico de algunas bacterias como: Treponema Pallydum (espiroqueta), la cual no se puede ver en el M. Campo Claro debido a que es una bacteria muy delgadita y finita. Aunque se realice una tincin de Gram y esta quede rosada (Gram -). No se puede observar porque existe mucha luz. - En cambio en el M. Campo Oscuro, todo el fondo se ve negro y la clula se ve mas brillante. Y adems en este caso se ve al fresco, sin teir nada (bacterias vivas). - Bacterias se ven con una alta movilidad. - La bacteria no se tie. - Ejemplo, Espermatozoides. (forma de evaluarlos, por su capacidad de movimiento) Fluorescencia: - Utiliza fluorforos (componentes qumicos), los cuales emiten luz cuando son excitados por la luz del microscopio. - Todos los lugares donde se encuentra la protena marcada(protena fluorescente verde) en la bacteria , por lo tanto en todos los lugares donde esta la protena se ve de coloracin verde. - En general esta microscopia sirve para ver a la bacteria cuando ya esta dentro de una clula eucarionte o cuando ya ha invadido a un tejido y queremos identificarlo.

Electrnico, dos tipos: a) Transmisin: - Que permite ver cortes de algn tejido o de alguna clula, con las estructuras correspondientes. (2D) b) Barrido - Permite ver al organismo completo con volmenes, como en 3 dimensiones (3D) - Se hace un barrido por el exterior de la bacteria o microorganismo, para verlo tambin en su comportamiento. Los virus solo se ven con el microscopio electrnico. Tincin de GRAM: Permite la clasificacin en 2 grandes grupos (GRAM + y -), adems permite ver la morfologa de la bacteria y la agrupacin de la bacteria. Fin: lograr identificar cul es la bacteria que est produciendo una infeccin determinada en un paciente. Tiene 4 etapas: 1) Agregar el colorante primario (se agrega en primer lugar a la muestra), se llama CRISTAL VIOLETA (de carcter bsico). 2) Agregar solucin de YODURO (I-/I-), comnmente se le llama lugol o solucin mordiente. El objetivo de agregar esto, es que estos tomos formen un complejo con el cristal violeta, que va a quedar retenido en la pared celular de algunas bacterias (las GRAM+).


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3) Agregar solucin de lavado, que es una mezcla de Etanol con Acetona (ambos solventes orgnicos), esta solucin tambin se llama solucin decolorante, sta es la etapa ms importante de la tincin o etapa limitante, debido a que algunas bacterias se van a descolorar, van a perder el cristal violeta con el lugol, pero otros grupos no lo pierden, quedan con el colorante retenido en la pared celular. 4) Etapa de contraste. Se agrega ZAFRANINA (tambin de carcter bsico) Aquellas bacterias que quedaron incoloras, se colorean rojo o rosado. Finalmente se ven algunas bacterias azules (GRAM +, las que fueron capaces de retener el colorante primario a pesar del lavado con etanol y acetona) Y veremos bacterias rosadas (GRAM- que se tien al final con safranina). Desde el punto de vista estructural, significa que la pared celular de las bacterias es diferente. GRAM+Tiene Pared celular GRUESA (Varias capas de peptidoglicn), y por fuera de la pared no hay nada ms. GRAM - Tiene Pared celular DELGADA (Pocas capas de peptidoglicn) y por fuera tiene una membrana externa.

Como ya sabemos, las bacterias estn compuestas desde adentro hacia afuera por una membrana plasmtica, que es similar a cualquier membrana plasmtica de otras clulas. Hacia el exterior vamos a encontrar una pared celular compuesta por peptidoglicn que es una molcula formada por pptidos y azucares. Es importante saber que en el caso del gram (+) es una pared muy gruesa, es decir, tiene muchas capas de peptidoglicn. Y por fuera de la pared no hay nada ms, es en esta donde qued retenido el cristal violeta. En el caso de las gram (-) tienen lo mismo pero lo que las diferencia de las gram (+) es el grosor de la pared, que en las gram (-) ser mucho menor, es decir, ser una pared celular ms delgada. La otra diferencia fundamental consiste en que las bacterias gram (-) poseen una membrana externa, que est por fuera del peptidoglicn y que se encuentra totalmente ausente en las bacterias gram (+). Por lo tanto las gram (-) van a tener una membrana plasmtica, una pared celular delgada y una membrana externa, que tiene las mismas caractersticas que cualquier membrana biolgica, es decir, est formada principalmente por fosfolpidos y protenas. Para este caso, la membrana plasmtica tradicional de la bacteria pasa a llamarse membrana interna y la membrana que queda fuera de la pared celular externa, sta bicapa, es asimtrica porque en una de las caras (cara externa) hay unos fosfolpidos especiales denominados


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LPS (lipopolisacaridos) que estn formados por un lpido y un polisacrido, como su nombre lo dice. Adems de estas molculas, vamos a encontrar unas protenas denominadas porinas (que no transportan solo agua, sino tambin otras molculas). Recordemos entonces que la bacteria gram (-) no va a tener la capacidad de retener el cristal violeta debido a que su delgada capa de pptidoglican se va a degradar con la solucin de lavado (etanol + acetona) y luego quedar teido con safranina, que es un colorante capaz de teir cualquier membrana biolgica. Desde el punto de vista de la microscopa electrnica cuando hacemos cortes y miramos bacterias gram (+) veremos un borde ms grueso por su pared celular, por otra parte, las bacterias gram (-) se vern con un contorno ms delimitado y con su doble membrana (externa e interna). Continuando con las tinciones diferenciales, debemos decir que no todas las bacterias se pueden teir con la tincin de gram, la gran mayora si, tanto las bacterias patgenas como las ambientales, pero hay algunas excepciones, en las cuales el cristal violeta no entra a la bacteria, por lo tanto no se teir nada, esa gran excepcin desde el punto de vista clnico (pueden existir ms excepciones, pero la profesora da hincapi en un gnero) es el gnero mycobacterium , fundamentalmente la mycobacterium tuberculosis, que es la bacteria causante de la tuberculosis humana. Por lo tanto esta queda fuera de la clasificacin de las gram

y se va a llamar bacteria acido-alcohol resistente, se llama as porque se utiliza otra tincin diferencial para observar esta bacteria que es la tincin de Ziehl-Neelsen. Por qu esta bacteria es diferente? Estructuralmente esta se compone de una membrana plasmtica y por fuera una pared celular de pptidoglican delgada, pero adems esta bacteria no va a tener una membrana externa por fuera de la pared, sino que vamos a encontrar una gran cantidad de molculas lipdicas (cido miclico, ceras B, etc.) que formarn una cubierta grasa sobre la bacteria que va a impedir la entrada del cristal violeta. Para esta bacteria vamos a utilizar otra tincin diferencial (Ziehl-Neelsen), en donde el colorante primario corresponde a la fucsina, entonces se le agrega la fucsina y la muestra se calienta con el mechero para que este colorante ingrese a la bacteria. Posteriormente se hace un lavado con una solucin de etanol + cido clorhdrico. Qu sucede despus de esto? Aquellas bacterias que no son de este gnero, es decir, no son alcohol-resistentes pierden este colorante como resultado del lavado, pero aquellas que son del gnero mycobacterium van a quedar con la fucsina retenida en su pared celular, por lo tanto las veremos de color rosado o fucsia. Un paciente con tuberculosis, tendr una tos con expectoracin importante, por lo que la muestra que vemos es de esputo, el paciente tose y se toma la muestra, por eso hay un fondo amarillento donde hay clulas epiteliales, mucosa amarillenta, etc.


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Eso que se ve entremedio ah como unas cosas alarga rosadas es el micobacterium tuberculosis si lo vemos en la muestra del paciente se tiene una alta sospecha de que este paciente tendr tuberculosis, es lo que se llama bacilescopia y es lo que se le pide a un paciente con sospecha de tuberculosis. En la tincin despus de que se hizo la decoloracin con esta mezcla de cido y alcohol se debe hacer una tincin de contraste para teir otras bacterias que hayan quedado entremedio, este se hace con azul de metileno. El resultado es que las bacterias acido-alcohol resistentes del genero micobacterium quedan rosadas (Como vemos en la foto), el resto de las clulas pueden quedar de color azul por el contraste. Aqu tenemos una de las tinciones que nos permite distinguir una caracterstica estructural de algunas bacterias, cuando hablamos de bacterias patgenas no todas necesariamente tienen que tener cpsula.

La cpsula es la capa de la bacteria que esta por fuera de todo lo dems, independiente de que la bacteria sea gram + o gram - , o micobacterium. Adems podra tener una cubierta de azcares (por lo general) que quedan pegadas a la bacteria. Para teir esta cpsula ocupamos lo que se llama tincin negativa, se llama as porque tambin agregamos dos colorantes pero que van a teir todo menos la capsula (por eso negativo), todo el fondo se ve rosado (tambin se podra ver negro porque se tie con tinta china) posteriormente se agrega un colorante de contraste que se llama fucsina o zafranina, este colorante tie la bacteria. Por ejemplo esta que esta solita, la bacteria alrededor tiene un aro incoloro y todo el fondo se ve oscuro. Esto blanco son los polisacridos que forman la capsula. Esto se llama tincin negativa que puede ayudar tambin en identificar algunas bacterias y para precisar si la bacteria cuenta o no con esta estructura. Para qu le sirve la capsula a una bacteria? Le ayuda a camuflarse del sistema inmune, son capaces de resistir varios mecanismos de fagocitosis (primera que acta en el sistema inmune innato). Qu es la fagocitosis? Es una clula que se come a otra (en este caso a la bacteria) para fragmentarla y para activar todo el resto del sistema inmune.


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Aqu no estamos viendo mayores detalles, pero estamos viendo como la podramos distinguir en el microscopio. La ltima tincin especial se puede emplear para ayudar a la identificacin de ciertas bacterias, es la identificacin de esporas.

Las esporas en el caso de las bacterias son distintas a las esporas de otros organismos porque estas la bacteria las va a generar. Se parece al ncleo de una clula, la espora contiene al material gentico de la bacteria totalmente compactado pero ahora cubierto con una cantidad de molculas que la van a proteger del medio ambiente, entonces se va a compactar el material gentico, se van a generar capaz o cubiertas en este material gentico y el resto de la bacteria (que por esta tincin se ve rosado) desaparecer y solo quedara la espora en el ambiente por cientos de aos. La espora bacteriana es una de las formas de vida ms resistentes que se conoce (incluso a los 100C la espora resiste) y es por eso que muchas infecciones intrahospitalarias estn producidas por esporas que se adquieren del ambiente que resisten todos los mtodos de desinfeccin y esterilizacin.

Aqu queremos ver que esta espora cuando se ha generado se puede teir con verde de malaquita. Se pone la muestra, se agrega el colorante, se calienta la muestra y este colorante penetra en la espora y despus agregamos un colorante de contraste, que se llama zafranina, la que tie todo el resto. Cuando la espora est dentro de la bacteria lo que se llama endoespora, si lo vemos en una etapa ms avanzada en el tiempo, todo lo rosado va a desaparecer y solo veremos los puntos verdes. Aqu por ejemplo ah un bacilo que se ve rosado por el contorno y al centro se le ve un centro verde, esa pelotita es la espora donde est concentrado todo el material gentico de la clula. Tambin puede servir en la identificacin de algunas bacterias porque no todas esporulan solo algunas en particular. Dentro de las tinciones, ya revisamos las simples y las diferenciales donde la tincin diferencial ms importante es la tincin de Gram, porque clasifica a las bacterias en dos grandes grupos dejando muy pocas bacterias fuera de esta clasificacin. Mycobacterium es el nico gnero (dentro del inters clnico) que no se puede teir por Gram, por lo que se usa la tincin cido-alcohol resistente. Tambin vimos tinciones especiales, que permiten distinguir alguna estructura que tengan algunas bacterias (cpsula, esporas).


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Tincin de esporas: permite distinguir cuando una bacteria ha esporulado y ha producido una estructura al interior de la clula de la bacteria que se ve de color verde por el colorante verde de malaquita, que es el colorante primario en esta tincin. Posteriormente se agrega un colorante de contraste que se llama safranina, que tie todo el resto de la bacteria rosada. MORFOLOGA BACTERIANA Adems de poder distinguir estructuras, las tinciones nos permiten ver la morfologa de la bacteria en el microscopio. Cuando vemos las bacterias redondas son cocos o cocceas, las cuales pueden estar agrupadas de distintas formas: coco (una), diplococos (dos), streptococo (en cadena, tambin da el nombre a gnero bacteriano particular), tetracocos o ttradas (cuatro), octetos y stafilococo (en racimo).

La otra morfologa posible es la de bacilos, que es una bacteria con un eje ms largo que el otro. Pueden ser de distinto tamao:

muy cortos (con un eje levemente ms largo que el otro), alargados, fusiformes (en forma de huso) y tambin pueden tener esporas que en algunos casos son ms grandes que el dimetro de la bacteria. Hay bacilos que se pueden curvar: vibrio (con forma de coma, tambin hay un gnero bacteriano con este nombre). El Vibrio cholerae es el ms famoso, produce el clera en el ser humano. Adems, pueden haber bacilos con ms de una curvatura (en el vibrio hay solo una): espirilo (mltiples curvas) y espiroqueta (como un espiral). Todas estas formas son observables al microscopio mediante tinciones como la tincin de Gram o azul de metileno, pero la tincin de Gram se usa porque nos permite adems de ver la forma, clasificarla en uno de los dos grupos segn la estructura de su pared celular, que es lo primero a distinguir en una infeccin bacteriana para elegir el tratamiento. La morfologa bacteriana est determinada por la pared celular. La pared celular es la responsable de darle la morfologa a la bacteria, ya que las clulas procariontes no tienen citoesqueleto. Los tamaos de las bacterias varan entre especies. En esta imagen se observan fotografas reales, a la izquierda de microscopa electrnica de barrido y a la derecha de microscopa ptica despus de hacer la tincin de Gram. Esto se utiliza en los


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laboratorios de microbiologa para hacer diagnstico.

Como ejemplo tenemos al staphylococcus aureus, es una de las bacterias ms conocidas y de distribucin universal ya que puede producir una amplia gana de enfermedades. Su morfologa es coco porque es esfrica y se determina porque al mirarla se ven varios circulitos. Como segundo ejemplo est el bacillus cereus que es una bacteria ambiental que puede producir esporas y en ser humano produce intoxicaciones por alimento, su forma es alargada por lo que es un bacilo. El vibrio cholerae es un bacilo pero que tiene una curvatura que le da la forma de vibrio. En la microscopia ptica es difcil distinguir la forma de vibrio, se ve solo como un bacilo y tampoco se puede distinguir el flagelo a menos que se use una tincin muy especial que permite verlo.

Pero en el microscopio electrnico se puede visualizar bien el vibrio. *Nota: Bacilo: un eje ms grande que el otro. Dentro de este hay agrupaciones; recto o curvados y dentro de los curvados puede que tenga una curva y ser vibrio, el espirilo tiene tres y la espiroqueta tiene varias curvas, es como un espiral. La espiroqueta treponema pallidum que es Gram -, tampoco se distingue su forma en microscopia ptica de campo claro porque es muy delgada, pero si en la de campo oscuro. La morfologa filamentosa es una especie de bacilo pero mucho ms alargado, los hongos tambin se ven parecidos a ellos pero son especies distintas. El gnero actinomices es una bacteria que se encuentra en la boca y es el nico que tiene una forma filamentosa y alargada. Se ve distinto a un bacilo comn y corriente porque se ven como pelos entrecruzados y cada uno de esos filamentos es una bacteria. El escherichia coli es un bacilo muy corto, hay algunas especies de su misma familia que son as y son llamados cocobacilos porque igual tienen un eje ms largo que el otro. Agrupaciones bacterianas Es importante aclarar, que no necesariamente todas las bacterias tienen que tener alguna agrupacin. En cuanto a morfologa si (una puede ser coccea, otra puede ser bacilos, y dentro de estos ms cortos, ms largos, etc). Pero en la


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agrupacin no necesariamente todas estn en vitro, en cadena o en racimo, hay algunas que estn de a una, y no necesariamente van a estar pegadas la una a la otra. A qu se debe que unas queden en cadena y las otras en racimo por ejemplo? Al plano de divisin. Recordar que las bacterias se dividen por fisin binaria, eso quiere decir que su material gentico se duplica, se genera un septum debido a que la membrana plasmtica se va hacia adentro, y se generan dos clulas hijas iguales, del mismo tamao. En ese sentido, cuando esa divisin ocurre en un solo plano de la clula, se va a generar la agrupacin de diplococo o de estreptococo (de cadena). Pero adems hay otros factores de la superficie de las clulas que hacen que vayan quedando unidas. En cambio en las ttradas, en los octetos, estafilococos o racimos, lo que ocurre es que hay distintos planos de divisin.

Dentro de las bacterias patgenas, lo ms comn es que los cocos (esfricas), son los

que adquieren distintos tipos de agrupaciones, en diplo, en cadenas o en racimos. En los bacilos es mucho menos habitual. Ellos, principalmente los bacilos Gram -, se encuentran separados o al azar. En los bacilos Gram + es ms comn encontrar agrupaciones, principalmente en cadena. Aqu tenemos ejemplos de agrupaciones. Cadena: Streptococcus pyogenes

Es una bacteria bastante comn, de distribucin universal, muy habitual ya que es quien produce la faringitis bacteriana y la amigdalitis. Este Streptococcus pyogenes es una coccea y en la muestra predomina la agrupacin en cadena. Hay cadenas de distintos tamaos. Racimo: Staphylococcus aureus


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Es una bacteria en forma de coccea, del tipo gram + porque se ve azul. En la muestra predomina el racimo, aunque pueden haber algunas que se suelten del racimo. Esta bacteria produce una gran variedad de enfermedades como infecciones de heridas, sinusitis, neumonia, infecciones de la va urinaria, septisemia, etc. Es una de las pocas bacterias que tiene un amplio rango de especificidad, es decir, que tiene una cantidad de receptores en la superficie que le permiten unirse practicamente a cualquier tipo de clula. Es por esto que produce una amplia variedad de infecciones, que pueden ir de leves a graves. Pares (diplos): Neisseria gonorrhoeae

Esta bacteria es coccea, con forma circular pero no circular perfecta, es un tanto amorfa. Es un gram -. Es el agente causal de la gonorrea, enfermedad de transmisin sexual. Agrupaciones pequeas y empacadas (ttradas, octetos): Sarcina lutea

Sarcina lutea es un gnero muy habitual en el ambiente y en el aire. Si se deja una placa de petri abierta con un medio de cultivo y luego se observa al microscopio, vamos a encontrar muchas bacterias de este gnero. No son patgenas para el ser humano. Hasta ahora tenemos que las bacterias tienen distintas morfologas determinadas por su pared celular: cocceas y bacilos. Dentro de los bacilos, dependiendo de la curvatura que tengan, podemos encontrar vibrios, espiroquetas, etc. Dentro de la agrupacion, determinada por la divisin celular, podemos tener cadenas, racimos, diplos, ttradas, octetos. Esto nos sirve porque la primera etapa en el diagnstico microbiolgico es, luego de examinar al paciente, la muestra clnica. Esta se mira al microscopio. Esto no dura mas de 10 minutos: se toma la muestra, se hace el frotis en el portaobjeto, se tie con el gram durante 6 minutos, se pone al microscopio y se mira. Se manda inmediatamente la respuesta en esos 10-20 minutos, de qu tipo de bacteria se trata. Por ejemplo si fuera una neisseria, igual como la que vimos hace un rato atrs, una neisseria gonorrea, pero en


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este caso sera una neisseria meningitidis. Tambin la vamos a ver como un diplococo gram negativo. Pero si est tomada desde lquido cefalorraqudeo, lo ms probable es que sea meningitidis y en ese caso con esta etapa basta para hacer el diagnostico de inmediato y despus se corrobora obviamente para empezar un tratamiento. Al final de todas las etapas se va a poder identificar cual es el agente etiolgico, que es el microorganismo responsable de una enfermedad infecciosa, que puede ser una bacteria, un virus, un hongo o un parasito. Y para que nos sirve eso? Para determinar la causa de la enfermedad, buscar inmediatamente el tratamiento ms apropiado, ya que si por ejemplo es un virus, no le vamos a dar un antibitico al paciente, ya que el antibitico se da cuando es bacteria, pero no cualquier antibitico, va a depender si es un gram- , gram +, de que sea una microbacteria, y dentro de los gram+ cul gram +?, y si es gram - cul gram-? Por lo tanto si es virus le vamos a dar un antiviral, si es que hay algn antiviral para ese virus, sino vamos a tratar simplemente los sntomas. Adems de un tratamiento apropiado, hay que hacer estudios epidemiolgicos, que quiere decir, determinar en un pas o regin determinada el nmero de casos por ejemplo que se dan al ao de meningitis por cierta bacteria, o de neumona por cierta bacteria. Porque eso

permite adems tomar medidas de salud pblica, como por ejemplo evitar los brotes en invierno y tomar las medidas de precaucin, decidir cuales vacunas deberan entrar en el programa de vacunacin nacional. Por ejemplo hoy en da estamos hablando de la neisseria meningitidis, el ao pasado se tom la medida de vacunar a todos los nios desde los dos aos por el brote epidmico que hubo desde el ao pasado con esa bacteria. Por tanto es sumamente importante no solo dar un tratamiento en el momento al paciente, sino que adems evaluar la incidencia que tiene esta bacteria en los pacientes durante un periodo de tiempo determinado. Dentro de las etapas siguientes, ya que dijimos que la primera etapa era mirar al microscopio y saber clasificar a la bacteria segn estos tres criterios que tenemos: - tincin de gram. - morfologa - agrupacin. Ahora tenemos que cultivarla, eso quiere decir tomar la muestra y colocarla en un medio de cultivo apropiado, en un medio que tiene nutrientes para que la bacteria se reproduzca in vitro. Se multiplique y as poder estudiar en mayor detalle las caractersticas de esta bacteria, esto es lo que se llama la siembra y el aislamiento, sembrar quiere decir, tomar la muestra del paciente colocarla en este medio de cultivo.


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El medio de cultivo como vemos ac se puede manejar en tubos de ensayo, o en placas de Petri y estos medios pueden ser lquidos, como en el tubito y se llama un caldo, el que tiene agua y fuente de nitrgeno y carbono. En contraste vemos el medio slido. Para hacer que sea slido a este mismo caldo le agregamos un polmero que se llama agar-agar, el que se obtiene de algas marinas y es muy eficiente para solidificar los medios de cultivo, queda con la consistencia de una jalea, lo podemos en poner en placa o en tubo y el tercero que se muestra , que se ve un poco ms turbio que el medio liquido es un media que se llama semislido , que tambin tiene agar-agar, pero que lo tiene en la mitad de la concentracin, de manera que queda como una jalea ms blandita

Usamos el medio lquido solo para cuando queremos aumentar la biomasa de bacterias, es decir, pasar de una o dos bacterias a millones y as poder

estudiarlas. En el medio slido, lo que se quiere lograr, sobre todo cuando la tenemos en placa, es que la bacteria se organice en colonias, algo sumamente importante, ya que la formacin de colonias, que solo ocurre en medio solido, permite estudiar algunas caractersticas tpicas de las bacterias de una manera ms sencilla, ya que lo hacemos a simple vista, vemos caractersticas macroscpicas, ya que una colonia est compuesta por millones bacterias y no requerimos del microscopio. Cuando pusimos la muestra, pusimos solo una bacteria, esta por fisin binaria se empieza a dividir sucesivamente de manera exponencial hasta que se forma una colonia. La colonia se ve distinta segn el tipo de bacteria que es, tienen aspectos macroscpicos diferentes. Y eso tambin constituye una de las etapas del diagnstico microbiolgico. Las personas con la experiencia, con tan solo ver la colonia pueden saber de qu bacteria se trata, incluso hay personas que pueden reconocer el olor y lo distinta que pueden ser unas de otras. La placa no se tie, pero a veces tienen un color distintivo dependiendo de los reactivos que se agregan al medio de cultivo, porque vamos a ver que hay distintos tipos de medios de cultivo, en este caso; tenemos un medio que se ve amarillento, porque es un medio bsico, vamos a ver el color de la colonia segn si


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la bacteria tiene algn color o no , pero hay otros medios que son de color, por ejemplo hay uno que es rojo y que se llama agar-sangre, al que le agregamos sangre por la utilidad que tiene. Porque dentro de las bacterias patgenas, una caracterstica bien importante es lo que se llama la hemolisis.

Siembra y aislamiento:

Aislamiento: vamos a tener colonias aisladas, para poder determinar sus caractersticas.

Observacin Macroscpica: Se describen las caractersticas de esa colonia

Colonias: Agrupacin bacteriana producida por la divisin sucesiva de una bacteria original. La colonia se observa a simple vista.

Observacin Microscpica: Ac se toma una colonia de bacterias o puede ser menos de una colonia, despus se tie y se pone en un portaobjeto y podemos ver la bacteria en el microscopio, en la imagen cada puntito es una bacteria.

Bacterias teidas con Tincin Gram. Se observan microscpicamente. Algunas bacterias de staphylococcus pueden hacer hemolisis como la staphylococcus aureus.


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Morfologa de colonias:

Taxonoma bacteriana: - CLASIFICACIN: Ordenamiento de los microorganismos en grupos (taxa) en base a semejanzas o interrelaciones - IDENTIFICACIN: Uso prctico de un esquema de clasificacin en base a distintas propiedades del M.O. - NOMENCLATURA: Nombrar un microorganismo segn sus caractersticas siguiendo las reglas internacionales. (ATCC) Escritura de nombres de bacterias en cursiva. Importante en el caso de publicaciones e informes. Deben siempre

ir bien escritos los nombres. Tiene mucha importancia seguir las reglas internacionales de nomenclatura para nombrar seres vivos. Es vlido para todos los microorganismos (bacterias, virus, hongos, los parsitos, etc..). Gnero con mayscula, especie con minscula y todo el nombre cursiva y en latn. Para clasificar y nombrar a las bacterias segn su taxonoma, se usan dos indicadores. Se estudia el fenotipo de las bacterias y tambin el genotipo cuando es necesario. Pero se comienza siempre por el fenotipo. Es lo ms prctico, rpido y barato. En todos los hospitales hay un laboratorio de microbiologa que contiene como mnimo todos los elementos necesarios para hacer taxonoma convencional, que significa poder estudiar el fenotipo de las bacterias. Algunas caractersticas fenotpicas son la morfologa, la agrupacin, la tincin de Gram, si tiene capsula o no, si tiene esporas, si la sembramos en un medio de cultivo slido y observamos cmo es la colonia, tambin corresponde a caractersticas fenotpicas. Pero existen casos que con la observacin fenotpica, no es suficiente para establecer la especie de la bacteria y tambin casos que se requiere llegar a un nivel ms especfico que la especie y que significa establecer el serotipo, o el serovar de la bacteria. Y que corresponde a revisar el genotipo de la bacteria y detectar pequeas diferencias en genes de estas bacterias. Para esto se utilizan herramientas biomoleculares. Tales como un PCR para aumentar la


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cantidad de algn gen en especfico o hacer un Southern Blot para buscar alguna secuencia especifica. En el anlisis fenotpico, adems de las pruebas que ya hemos visto, se hacen otros tipo de pruebas, llamadas Pruebas Bioqumicas. Y estas consisten en analizar el producto final de alguna va metablica o el producto intermediario. Y esto se hace porque dependiendo de las enzimas que tenga la bacteria, tendr un genotipo determinado, y esto nos permitir establecer con mayor exactitud y especificidad cual es la bacteria, para decir que gnero es, que especie, y ms all todava, que serovar, que serotipo o que cepa es. Por otro lado, existe la Filogenia, que estudia solamente el genotipo. La filogenia busca establecer relaciones evolutivas entre microorganismos y varios tipos de organismos. Se estudian las secuencias de genes que se conserven en todos los organismos que corresponden a los genes de los RNA Ribosomales. La filogenia clasifica desde lo ms amplio a lo ms especfico, y el primer nivel corresponde al Sper reino o Dominio bacteria, que luego se divide en 3 Phylum: Cianobacteria, Proteobacterias y Actinobacteria. Se estudiarn en Microbiologa las Proteobacterias ya que este Phylum contiene todo el grupo de bacterias patgenas para el ser humano. Luego del Phylum viene la Clase, es decir, dentro de las proteobacterias existen distintas Clases, y luego de esta vienen

varios rdenes, es decir, dentro de una clase hay distintos rdenes. Despus del filum viene la clase, es decir que dentro de las proteobacterias tendremos distintas clases de bacterias, como por ejemplo la clase gama proteobacteria. Dentro de la clase de bacterias tenemos varios rdenes de bacterias, como el orden enterobacterial. Entero corresponde a todas las bacterias que pasan por el intestino del ser humanos y de otros animales, ya sea las que viven en el intestino o las que pasan su ciclo infectivo a travs de l. Tenemos luego de esto, la familia. Una de las familias ms abundantes, conocidas y de mayor importancia clnica, es la familia enterobacteriaceae. Al hablar de familias siempre podremos renocerlas por el sufijo por el cual termina ceae, debido a que todas las familias se nombran con esa terminacin. Las clasificaciones siguientes desde familia hacia abajo, son las que se utilizan en el lenguaje clnico habitual. Las categoras anteriores se utilizan para agrupaciones evolutivas ms que para la interaccin normal de los mdicos. Al seguir con las clasificaciones, dentro de las familias encontramos los gneros. Por ejemplo las bacterias mencionadas con anterioridad que pasan por el intestino, slo encontraremos bacilos Gram +, los cuales pasan por el intestino del ser humano.


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Dentro de aquella familia, existen 10 gneros diferentes, los cuales son los ms comunes en enfermedades gastrointestinales e infecciones urinarias. Dentro de los gneros, cada uno tiene distintas especies, un ejemplo de especia de la enterobacteriaceae, es la salmonella. Esta agrupa enfermedades conocidas como salmonelosis, que por lo general son gastroenteritis. Por esto es que las personas se auto limitan, ya que presentan vmitos, diarrea, malestar, etc. Aun as, es poco comn que acudan a la consulta mdica. Estas bacterias usualmente provienen de alimentos, ya que tambin tienen su origen en el intestino de otro animal. Por ejemplo tenemos la salmonella enteritidis, es aquella que est en los huevos. Es por esto que muchas veces no es recomendable comer mayonesa casera o cosas que contengan el huevo crudo, porque comenzamos a presentar sntomas como la diarrea. Una familia como por ejemplo la enterobacteriaceae que incluye a todos aquellos Gram negativos que pasan por el intestino, ya sea para quedarse a vivir ah o slo temporalmente por su ciclo infectivo. Otro de los gneros dentro de las enterobacteriaceae que podemos encontrar es el de la escherichia, donde la ms conocida es la escherichia coli, la cual vive en nuestro intestino a diferencia de la salmonella que n slo pasa por su ciclo infeccioso.

Dependiendo del gnero de bacteria podemos encontrar determinado nmero de especies. Por ejemplo el gnero salmonella posee 2 especies, una de ella es la entrica. Por esto podemos ir abreviando al describir la bacteria, ya que quedara como S (salmonella) entrica, es decir, S.entrica. stas son todas aquellas que infectan el intestino del ser humano. En algunas ocasiones slo basta con llegar a la especie para una identificacin satisfactoria, de que se est produciendo en el paciente. Pero en otras ocasiones se requiere entrar en una categora ms especfica que es la de serovar o serotipo. La diferencia entre un serovar y otro es un pequeo porcentaje de su genoma. Aun as podemos encontrar serovares con una similitud de 99.9% de su genoma. Son similares, aunque ese 0.01% de diferencia de genoma, es el que marca la diferencia de patogenicidad de la bacteria.


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Un ejemplo de esto en la Salmonella entrica senovar tifi, puede diferenciarse en un 0.01% de la S.entrica serovar enteritidis. Esta ltima se caracteriza por generar una inflamacin en las clulas epiteliales del intestino. En cambio la tifi tambin ingresa por lo alimentos e infecta los epitelios, pero pasa a la sangre del individuo, circulando por ella y atacando a los monocitos, lo que progresivamente va a ir generando una inflamacin del vaso, del hgado, etc. Generando una serie de complicaciones que van a requerir que el paciente sea hospitalizado. Por lo que podemos apreciar claramente los cuadros infecciosos diferentes de cada bacteria con tan slo una pequea diferencia de genoma. Cuando esto ocurre es necesario llegar a la identificacin del serovar. En otras ocasiones tambin es necesario no slo el estudio del fenotipo, sino que tambin el del genotipo, para identificar algn gen en particular. Para poder ordenar todas las categoras de bacterias, siempre se har de lo ms general a lo particular hasta llegar a la especie, serovar o cepa que en algunas ocasiones tambin se denomina. La taxonoma convencional utiliza todas las caractersticas fenotpicas como la morfologa donde se ve si tiene o no cpsula por ejemplo, como es la

colonia, el uso de sustratos como la tolerancia al oxgeno a las vas metablicas que contenga una bacteria. Para poder llegar a una clasificacin satisfactoria de una bacteria, se hace un anlisis dicotmico, un anlisis a travs de caminos de clasificacin, el resultado final correspondera a un anlisis exacto de la bacteria, segn su naturaleza de membrana, forma, origen de su energa, etc. As Un anlisis dicotmico, debe hacerse independiente de la sospecha de infeccin, se debe seguir un protocolo para saber a ciencia a cierta el tipo de microorganismo que infecta al paciente. En este caso, se observa la clasificacin dicotmica de una bacteria, se ocupan criterios segn el anlisis macroscpico,

microscpico y bioqumico de la bacteria.


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En este caso estudiado, se observan pruebas de fermentacin, para identificar posibles vas energticas aparte de la va de la glucosa. Se van eliminando opciones dentro de la raz que se form, hasta llegar a un resultado positivo. En el ejemplo, se observa un metabolismo anaerbico facultativo, que termina con la produccin de indol como producto metablico. Debido a esto se llega a una hiptesis final sobre la identidad de esta bacteria (Escherichia Coli). NOTA: Para la aplicacin de un anlisis de dicotoma, todos los resultados deben estar tabulados, para poder compararlos con un punto en comn, y as discernir entre una bacteria y otra. En el caso de E. Coli, se observan distintos serotipos, para estos casos, se realiza una subtipificacin. Se emplean 2 tipos de pruebas: a) Anlisis serolgicos: Se estudian antgenos de la bacteria estudiada en su superficie. b) Anlisis gentico molecular: Amplificacin de un gen, secuenciacin de un gen, etc. Criterios moleculares y subtipificacin Para llegar con mayor exactitud al reconocimiento del patgeno. Se deben hacer estudios moleculares en casos como: a) Reclasificacin de especies. b) Muchas especies nuevas. c) Anlisis de especies que no han podido ser cultivadas.

d) Importancia epidemiolgica: Brotes epidmicos. e) Enfermedades infecciosas de declaracin obligada. Un ejemplo de criterios moleculares y pruebas para la identificacin de un microorganismo, es el % G-C. Esto debido a que el %G-C est secuenciado, y es caracterstico de cada especie que se haya estudiado. Otro estudio que se realiza, es la identificacin de genes de RNA ribosomales (subunidad menor 16S), con el fin de la reclasificacin ms exactas de algunas especies. NOTA: Para el estudio de un microorganismo, lo PRIMERO que debe hacerse, es la vista a travs de un microscopio, para tratar de identificar el tipo de bacteria, virus, etc. Porcentaje Guanina- Citosina Este porcentaje es una caracterstico de cada especie, y puede ser utilizado para clasificar las bacterias, pero solo en sepas cuyo genoma este secuenciado. Genes de RNA Ribosomal Otra secuencia que puede ser objeto de estudio con objeto de clasificar una especie bacteriana es la del gen de la subunidad menor de los ribosomas bacterianos (16s). Resumen de un estudio microbiolgico Se comienza con una muestra biolgica de un paciente, del cual se sospecha algn brote infeccioso. Para corroborar la


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bacteria que est generando la enfermedad nosotros seguimos los siguientes pasos: 1. Visualizamos en una primera instancia la muestra al microscopio. 2. Luego con la muestra buscamos obtener un cultivo puro, esto quiere decir que vamos a sembrar la muestra en una placa de cultivo de Petri ( cuando se habla de puro quiere, decir que todas las colonias que se visualicen deben ser iguales). 3. Cuando existe ms de un tipo de colonia se debe resembrar cada una de las colonias para obtener as solo cultivos puros. 4. Obtenido el cultivo puro se va a estudiar la morfologa de la bacteria y se proceder a realizar la tincin de Gram que nos va a permitir visualizar si es Gram positivo o negativo o incluso si queda fuera de esta clasificacin. 5. Luego se va a ver la agrupacin de la bacteria, caractersticas de crecimiento y propiedades tanto bioqumicas como antignicas. Dato 1: Infecciones polimicrobianas, son aquellas infecciones producidas por ms de una especie bacteriana. Dato 2: El tener colonias distintas no significa que existan dos tipos de especies bacterianas en la muestra sino que puede haber un agente externo por mal manejo de la muestra.

Microbiología 1

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