Microcultivo en Micologia

CUADERNO DE PRACTICAS

DE MICROBIOLOGIA

AUTORAS: Mª PAZ MERINO JIMENEZ

MIREIA LLINARES MARCELO

Autoras: Mª Paz Merino jimenez, Mireia Llinares Marcelo

Maquetación: Patricia Penavella Soto

Edita: Educàlia Editorial, S.L.

Imprime: Publidisa SA

ISBN: En curso

Depòsit Legal: En curso

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PREFACIO

El Cuaderno de Prácticas de Microbiología es un

trabajo fundamental en el desarrollo de la asignatura de

FUNDAMENTOS Y TECNICAS DE ANALISIS

MICROBIOLOGICOS. Dicha asignatura lleva una carga

teórica que paralelamente tiene que ir desarrollada con

prácticas que se realizan en el laboratorio. Por ello debe

existir una consecución en la ejecución de las prácticas al

mismo tiempo que se vaya impartiendo la teoría.

Con este cuaderno el desarrollo de las prácticas

seguiría un orden, fundamental para cumplir los protocolos

de actuación en el laboratorio de Microbiología. El alumno

siguiendo los pasos de dicho cuaderno irá desarrollando la

práctica con corrección hasta la obtención de los resultados

finales que es lo que se pretende.

INDICE CUADERNO DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA

1. MANEJO DEL MICROSCOPIO

2. RECONOCIMIENTO DE MATERIAL

3. DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS EN LA NATURALEZA.

4. ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO.

5. ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO.

6. ACTIVIDADES DE ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN.

7. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

8. ÉCNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

9. URINOCULTIVO

10. PLEGADO DE UN FILTRO

11. INDICA LA MORFOLOGIA, DISPOSICION Y MOVILIDAD DE LAS

BACTERIAS VIVAS QUE CONTIENE LA MUESTRA.

12. PREPARACIÓN DE COLORANTES Y REACTIVOS PARA LA

TINCION SIMPLE Y TINCION NEGATIVA.

13. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA

TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR


TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR


TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE ESPORAS


TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE CAPSULAS

17. REALIZACION DE UNA TINCION SIMPLE.

18. REALIZACION DE UNA TINCION NEGATIVA.

19. REALIZACION DE UNA TINCION DE GRAM

20. REALIZACION DE UNA TINCION DE ZIEHLNEELSEN O ACIDO

ALCOHOL RESISTENTE.

21. REALIZACION DE UNA TINCION DE ESPORAS

22. REALIZACION DE TINCION DE CAPSULAS. METODO DE BURRI

O DE LA TINTA CHINA.

23. PRUEBAS BIOQUÍMICAS.

24. ANTIBIOGRAMA.

25. HACER UNA SIEMBRA EN CONDICIONES ANAEROBIAS

26. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TÉCNICA DEL

PORTAOBJETOS

27. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TÉCNICA DEL

CUADRADITO DE AGAR

28. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TÉCNICA DEL HOYO EN

PLACA

29. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TÉCNICA DEL CUBRE

ESCAVADO EN PLACA

30. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TÉCNICA DE LA GOTA

PENDIENTE

31. TECNICA DE VISUALIZACION DE HONGOS: VISUALIZACIÓN

DIRECTA CON LA TÉCNICA DE LA CINTA ADHESIVA.

PRÁCTICA 26. TÉCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TÉCNICA DEL

PORTAOBJETOS.

VISIÓN MACROSCÓPICA

MATERIAL

- Alcohol

- Mechero Bunsen

- Portaobjetos

- Placa Petri

- Papel filtro

- Agua destilada

- Medio de cultivo Sabouraud

- Pipeta Pasteur estéril

- Asa de siembra

- Muestra de hongos

- Estufa Pasteur

TÉCNICA

1º. Preparar 100 ml de medio de cultivo Sabouraud (Práctica 7.6).

2º. Limpiar el portaobjetos con alcohol, secar y flamear.

3º. Cubrir el portaobjetos con una fina capa de medio de cultivo (todavía en estado líquido)

con la ayuda de una pipeta Pasteur estéril.

4º. Dejar secar el medio.

5º. Recortar un círculo de papel de filtro de la misma medida que la placa de Petri.

6º. Colocarlo en el fondo de la placa y humedecerlo con un poco de agua destilada para

mantener el ambiente húmedo para el crecimiento del hongo.

7º. Con el asa de siembra esterilizada y humedecida con agua estéril tomar un poco de

muestra.

8º. Colocar la muestra en el centro del portaobjetos realizando un pequeño movimiento

circular con el asa.

9º. Colocar el portaobjetos en la placa de Petri.

10º. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.

PROCEDIMIENTO EN IMÁGENES

Preparar 100 ml de Sabouraud

1 2

Limpiar portaobjetos

3

Cubrir con medio Sabouraud

4

Dejar secar

5

Cortar círculo de papel de filtro Humedecer

6

7

Tomar muestra Sembrar en el centro del porta

8

INDICAR EL RESULTADO MACROSCÓPICO OBTENIDO

VISIÓN MICROSCÓPICA

MATERIAL

- Cubreobjetos

- Pipeta Pasteur

- Colorante azul de lactofenol

- Muestra ya incubada (técnica del portaobjetos)

- Pinzas

- Mechero Bunsen

- Microscopio

TÉCNICA

1º. En el portaobjetos donde habíamos realizado la técnica, echamos una gota de azul de

lactofenol.

2º. Poner un cubreobjetos encima.

3º. Observar al microscopio a 40x.


Gota azul en porta

1 2

Cubre sobre la muestra

Observar al microscopio

3

INDICAR EL RESULTADO MICROSCÓPICO OBTENIDO


CUADRADITO DE AGAR.


MATERIAL

- Alcohol

- Mechero Bunsen

- Placa Petri con medio agar Sabouraud

- Bisturí

- Pinzas

- Asa de siembra

- Muestra con hongos

- Portaobjetos

- Cubreobjetos

- Placa Petri vacía

- Papel filtro

- Agua destilada

- 2 capilares de microhematocrito

- Estufa

- Regla

- Tijeras

TÉCNICA

1º. Dibujar en un papel un cuadradito de 1’5x1’5 cm. Colocar sobre el papel la placa con agar

Sabouraud y cortar un cuadrado siguiendo las líneas dibujadas anteriormente con la ayuda de

un bisturí.

2º. Con unas pinzas estériles coger el cuadradito de agar y ponerlo en el centro de un

portaobjetos. El portaobjetos deberá haberse limpiado anteriormente con alcohol y flameado.

3º. Coger con el asa de siembra, esterilizada y humedecida, un poco de muestra.

4º. Sembrar tocando con el asa en los cuatro laterales del cuadrado.

5º. Colocar un cubreobjetos limpio sobre el agar.

6º. Colocar el portaobjetos en una placa con papel de filtro humedecido y dos capilares.

7º. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.


Cortar cuadrado de agar

1 2

Colocar en portaobjetos

3

Coger muestra

4

Sembrar en los laterales

5

Colocar cubreobjetos Colocar en la cámara húmeda

6


MATERIAL

- Portaobjetos

- Cubreobjetos

- Pipeta Pasteur


- Muestra ya incubada (técnica del cuadradito de agar)

- Pinzas

- Mechero Bunsen

- Microscopio

TÉCNICA A

1º. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.

2º. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habíamos puesto sobre el

cuadradito de agar.

3º. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.

4º. Poner el cubre sobre la gota de azul.




1 2

Coger el cubre

Poner gota de azul

3 4

Poner cubre sobre la gota de azul

4

TÉCNICA B

1º. Coger un cubreobjetos, limpiar con alcohol y flamear.

2º. Con las pinzas esterilizadas retiramos el cuadradito de agar que quedará sobre el

portaobjetos.

3º. En el portaobjetos ponemos una gota de azul de lactofenol.

4º. Poner el cubreobjetos limpio sobre la gota de azul.




HOYO EN PLACA.


MATERIAL

- Alcohol

- Mechero Bunsen

- Placa de Petri (la que hemos usado en la práctica 27)

- Cubreobjetos

- Asa de siembra


- Pinzas

TÉCNICA

1º. Con un asa de platino esterilizada cogemos un poco de muestra.

2º. Cogemos la placa que hemos usado en la práctica anterior, y sembramos en las paredes del

hoyo que ha quedado tras sacar el cuadradito de agar.

3º. Con una pinza estéril colocar sobre el hoyo sembrado un cubreobjetos (previamente lavado

con alcohol y flameado).

4º. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.



Coger un poco de muestra

1 2

Sembrar paredes del hoyo

3

Colocar cubreobjetos


MATERIAL

- Portaobjetos

- Pipeta Pasteur


- Muestra ya incubada (técnica del hoyo en placa)

- Pinzas

- Mechero Bunsen

- Microscopio

TÉCNICA


2º. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habíamos puesto sobre el hoyo.





INDICA RESULTADO MICROSCÓPICO OBTENIDO


1 2

Coger el cubre

Poner gota de azul

3 4


4


CUBRE ESCAVADO EN PLACA.


MATERIAL

- Alcohol

- Mechero Bunsen

- Placa de Petri con medio de cultivo Sabouraud.

- Cubreobjetos

- Asa de siembra


- Pinzas

TÉCNICA

1º. Con unas pinzas estériles, colocar 3 ó 4 cubreobjetos limpios en un ángulo de 45o en la

placa con medio Sabouraud.

2º. Coger un poco de muestra con un asa de siembra estéril.

3º. Sembrar donde se juntan el cubreobjetos con la superficie del medio.

4º. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo



Cubreobjetos en ángulo de 45 o

1 2

Coger muestra

3

Sembrar Cerrar e incubar

4


MATERIAL

- Portaobjetos

- Pipeta Pasteur


- Muestra ya incubada (técnica del cubre inclinado en placa)

- Pinzas

- Mechero Bunsen

- Microscopio

TÉCNICA


2º. Con unas pinzas esterilizadas cogemos uno de los cubreobjetos que habíamos puesto en la

placa.







1 2

Coger el cubre

Poner gota de azul

3 4


4

PRÁCTICA 31. TÉCNICA DE VISUALIZACIÓN DE HONGOS.

VISUALIZACIÓN DIRECTA CON LA TÉCNICA DE LA CINTA

ADHESIVA.

MATERIAL

- Alcohol

- Mechero Bunsen

- Pipeta Pasteur estéril

- Cinta adhesiva transparente

- Portaobjetos

- Azul de lactofenol


- Microscopio

TÉCNICA

1º. Limpiar un portaobjetos con alcohol, secar y flamear.

2º. Cortar un trozo de cinta adhesiva y pegarlo a la parte de la muestra donde se encuentran

los hongos.

3º. Poner una gota de azul de lactofenol en el portaobjetos.

4º. Colocar la cinta adhesiva sobre la gota de azul de lactofenol.



INDICAR EL RESULTADO MICROSCOPICO OBTENIDO


1 2

Tomar muestra

3

Gota de azul en porta Colocar cinta sobre la gota

4

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