N ENZIMAS DE RESTRICCION / MAPAS DE RESTRICCION n VECTORES DE CLONACION - TIPOS n GENOTECAS - TIPOS...
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ENZIMAS DE RESTRICCION / MAPAS DE RESTRICCION VECTORES DE CLONACION - TIPOS GENOTECAS - TIPOS CLONACION IDENTIF. DE SECUENCIAS CLONADAS METODOS PARA EL ANALISIS DE SECUENCIAS:
SOUTHERN/ NORTHEN/WESTERN PCR SECUENCIACION
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BIBLIOGRAFIAGriffiths et al. (2000)
Klug y Cummings (1999)Tamarin (1999)
Strachan et al. (1996)Kaplan et al. (1993)
wwwhttp://www.cbs.dtu.dk/dave/roanoke/genetics.html
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* Nucleasa sintetizada por las bacterias como un mecanismo de defensa natural
* Nucleasa capaz de reconocer y cortar una secuencia específica de nucleótidos en una doble cadena* Longitud de la secuencia reconocida de 4 a 8 bp* Reconocen secuencias palindrómicas
Primera enzima descubierta fue a partir de Haemophilus influenzae
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EXTREMOS COEXIVOS
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EXTREMOS ROMOS
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. MAPA DE RESTRICCION CONOCIDOUn único pto. De corte
. MARCADORES SELECTIVOSResistencia antibióticosCambios de color
. REPLICACION AUTONOMA
. RECUPERACION SENCILLA
. TIPOS:Plásmidos, fagos, cósmidos, YACs, BACs, etc.
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Factor F de Bacterias: plásmido con replicación
autónoma, que transfiere información genética durante la conjugación bacteriana
PolilinkerResistencia antibióticos
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1º Inserción del fragmento de DNA a clonar en un Vector de clonación:
MOLECULA DE DNA RECOMBINANTE
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2º Introducción mol. DNA recombinante en hospedador (bacterias)
3º Vectores se multiplican de forma autónoma
4º Bacteria se divide 5º Un gran nº de copias dará lugar
a un clon, con muchas copias del fragmento
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. Clonación de todas las secuencias del genoma . Presente al menos una copia de cada gen. Nº de clones depende: - tamaño inserto
- tamaño genoma. Tipos : genómicas, cromosómicas, cDNAln ( 1-p) N : nº de clones N = -------- P : Prob de recuperar
ln ( 1-f) f: fracción genoma en el clon
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ln ( 1-p) N : nº de clones N = -------- P : Prob de recuperar
ln ( 1-f) f: fracción genoma en el clon
Genoma humano: 3,0 x 106 KbP : 99%f : Inserto 17 Kb - 1,7 x 104 /3 x 109
N : 8.1 x 105 fagos
Genoma humano: 3,0 x 106 KbP : 99%f : Inserto 5 Kb N : varios millones
plásmidosGenoma humano: 3,0 x 106 KbP : 99%f : Inserto 50 Kb N : 400.000 cósmidos
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1º PASO
2º PASO
3º PASO
4º PASO
SOUTHERN BLOTTING
5º PASO
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1º PASO: DESNATURALIZACION
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2º PASO: ANILLAMIENTO DE PRIMERS
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3º PASO: ELONGACION
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METODO DE SANGER
1º Paso: Desnaturalización2º Paso: Adición de :
dNTPsDNApolimerasacebador
3ºPaso: adición de ddNTPs
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