NARANGINA
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Biotecnología Alimentaria Hernández Rangel Lessly Karina Loredo Torres Emmanuel Quintero Carrillo Anabel Rojas Vázquez Eva Luz Vega Rivera Carlos Alberto Hernández Hernández Juan El efecto de diferentes fuentes de carbono y sales en la producción de naranginasa por Aspergillus niger
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Biotecnología Alimentaria
Hernández Rangel Lessly KarinaLoredo Torres Emmanuel Quintero Carrillo Anabel Rojas Vázquez Eva Luz
Vega Rivera Carlos Alberto Hernández Hernández Juan
El efecto de diferentes fuentes de carbono y sales en la producción de naranginasa por Aspergillus niger
La naringina es un flavonoide (flavanona glicosilada) que se extrae de la cáscara de algunos Citricos y es el principal responsable de su sabor amargo.
Está presente también en la pulpa de los frutos, en hojas, flores y
semillas de la planta, la cantidad en cáscara varía de mayor a menor
en frutos inmaduros y maduros respectivamente.
INTRODUCCIÓN
FLAVONOIDES
Los flavonoides son metabolitos secundarios, se biosintetizan en todas las "plantas terrestres“.
Poseen propiedades muy apreciadas en medicina, como antimicrobianos, anticancerígenos, disminución del riesgo de enfermedades cardíacas, entre otros efectos.
Son los causantes de dar el color a las hojas y plantas.
La presencia de la naringina ha sido una limitación importante en la aceptación comercial de zumos de frutas cítricas, debido a que es el pricipal glucosido amargo.
Para mejorar las propiedades sensoriales y para estabilizar zumo de fruta, el nivel de naringina puede ser disminuido por diferentes tecnologías tales como: Eliminación del amargor por adsorción Métodos químicos Tratamientos con resina de intercambio iónico
Como desventajas tienen los cambios desfavorables en lo sensorial
propiedades y valor nutricional (Del Nobile et al., 2003).
BIOTECNOLOGÍA ALIMENTARIA
Usada en perfumería Para dar sabor a golosinas, bebidas y productos de
panadería, Propiedad antioxidante como estabilizante de
aceites Antimutagénico Como precursor del compuesto naringina
dihidrochalcona por su importante capacidad endulzante y para su aplicación potencial como edulcorante.
USOS DE LA NARANGINA
Naringinasa es una enzima que hidroliza naringina debido a su -L-ramnosidasa y actividades glucosidasa.
El -L-ramnosidasa es la enzima que hidroliza naringina en ramnosa y prunin, que la amargura es menos de un tercio de la naringina.
Naringinasa se ha aislado a partir de semillas, tejidos animales, plantas y microorganismos (Gallego et al., 2001).
Naringinasa es secretada por especies de hongos del género Aspergillus y Penicillium.
La producción de naringinasa depende de la fuente de inductor o de carbono determinado para el microorganismo.
NARANGINASA
MATERIALES Y METODOS
Químicos• Naringina, comercial naringinasa (Penicillium decumbens), ramnosa glucosa, extracto de malta y Agar Sabouraud se obtuvieron de Sigma, St.• Louis, EE.UU..•La melaza se obtuvieron de una Miguelito San molino de azúcar en el estado mexicano de Veracruz. Todos los demás reactivos utilizados fueron de grado analítico.
Preparación del inóculo de A. niger por turbidimetría
Una suspensión que contiene 9? 108 esporas / mL Se preparó para cada ensayo utilizando turbidimetríay la escala de MacFarland, de acuerdo con el método descrito por Sutton (2006), que estableció hasta que la escala de Mc Farland, representa espec co concentraciones. El espectrofotómetro (Thermo Spectronic, Genesys 20) utilizado en la presente estudio fue calibrada para la microbiano estimado concentraciones de medida de la turbidez a 540 nm (Li et al., 1993).
Microorganismo
•Aspergillus niger ATCC 1015 se obtuvo a partir de una colección de cultivos microbianos, Centro de Investigación y de Estudios Avanzados (México) y se mantuvieron en medio de Sabouraud a 5oC.•Este microorganismo se informó como el ácido cítrico y antígeno productor (CDBB: 177). La cepa se cultiva para obtener la cantidad requerida para las fermentaciones.
PREPARACION DEL INOCULO DE A.NIGER POR TURBIDIMETRIA
Una suspensión que contenía 9 x 108 esporas/mL fue preparada para cada ensayo usando turbidimetria y la escala de MacFarland (determinan concentraciones especificas).
Se midieron a 540 nm.
CONDICIONES DEL CULTIVO
Se esterilizaron 500 mL de BM (medio basal)en un matraz
Erlenmeyer de 1000 mL por 15 minutos a 15 psi.
El pH inicial del medio fue de 4.5
El medio fue inoculado con 9 x 108 esporas. mL -1, suspendido en 85% de cloruro de sodio esteril.
Los matraces fueron incubados a 30 °C en un agitador por 5 dias.
CRECIMIENTO Y PRODUCCIÓN DE PROTEÍNA
El crecimiento de A. niger fue determinado por filtración de 20 mL de cada
muestra, , desecándolo durante la noche a 50 °C y
manteniendo el peso constante.
La cuantificación de proteína extracelular fue
determinada por el método de Bradford.
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Una muestra de 0,5 ml de cada medios de cada medio diferente de
fermentación se mezcló con 1,5 ml de solución naringine como sustrato de
cada reacción.
La reacción se lleva a cabo a 35 ° C durante 15 min. Después, la reacción se detuvo por la adición de 4 ml de ácido 3,5-dinitrosalicílico, y se dejo
en ebullición por 5 min.
Las muestras fueron leídas a 540 nm.
Cada prueba fue echa por triplicado
CONCENTRACION DE PROTEINA
Se selecciono el medio basal con actividad enzimática mas alta para concentrar y separar la proteína
Por cada 100 ml de medio se agregaron 65 gr de sulfato de amonio para precipitar la proteína en baño de agua, alcanzando una saturación del 95%
Se hizo una diálisis de nuevo en agua usando una membrana de celulosa (Sigma Químicos Co).
La suspension se centrifugo a 19000 x gr a 5 min 4°C, el sedimento fue resuspendido en buffer citrato 0.05 M pH 6. L
Se determinaron proteinas por M. Bradford
RESULTADOS Y
DISCUSIONES
CRECIMIENTO MICROBIANO
El crecimiento de A. niger ATCC 1015 se observo durante 7 días de fermentación para todos los tratamientos. Solo cuando las melazas como fuente de carbono fue favorecido significativamente.La adición de los factores de crecimiento tuvieron un efecto positivo en el crecimiento cuando se hizo uso de las melazas.
Fig 1. Peso de micelio seco usando como fuente de carbono melazas agregando (0.01 mM.) o (0.01 mM.)
Mg
Ca
Se observa mas peso del micelio en carbonato de Calcio
Los resultados no están de acuerdo con lo que reporta Bram y Solomons en 1965, lo cual reporta que la adición de los factores de crecimiento, como el y no eran relevantes para la cepa A. niger NRRL 72-4Los resultados de que ellos dieron se pueden explicar por el hecho de que emplearon concentraciones de sal mas altas (0.5 y 1%).Se observo que las concentraciones de 1 y 0.1 mM no permitían crecimiento.
