Que seraaaa???Polimorfismo

Se define como la existencia simultanea en una población de genomas con distinto alelos para un locus determinado, sea este génico o no.

Afecta:

regiones codificantes (polimorfismo génico)

regiones no codificante

Una variación en los genes polimorfos ( alrededor de 25.000) una cuarta parte, determina el polimorfismo génico.

Se pueden distinguir dos situaciones :

Sin efecto fenotípico

Con alteración del fenotipo

Polimorfismo en regiones codificantes

La causa mas frecuente son mutaciones en el gen que codifica la enzima galactosa1-fosfato uridiltrasferasa (GALT).

Los niños afectados son homocigotos en el locus GALT para un alelo mutante.

La frecuencia de estos alelos varían mucho dependiendo de la población considerada.

Galactosemia

http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Autorecessive-es.svg

Imagen: biología molecular de José Luque http://www.memechef.com/memes/view/771/meme-fraid

Existen regiones del ADN que forman parte del gen pero no codifican su producto génico. Promotores Intrones Regiones 5’ 3 ’

Polimorfismo en regiones génicas no codificantes

o La mayor parte de las mutaciones del genoma ocurren en regiones del ADN que no codifican ningún producto.

o Los cambios de base s en este ADN no tienen efecto fenotípico: es decir no se altera la secuencia, la estructura o la función proteica, por lo que no tiene ningún interés patológico directo.

Polimorfismo en regiones no génicas

hemos determinado que el arma homicida fue un cuchillo de sushi..

Ahora que tenemos las Evidencias.. Analicémoslas y Acabemos con este caso.. Me dio hambre tanta especulación…

¿Tendría hambre el culpable? ¿Quizás no consiguió salmón en su supermercado y regreso enfadado a casa?

Dejemos las especulaciones para los escritores de telenovelas mexicanas…

Análisis de las EvidenciasCriminalística de Laboratorio

¿QUE ES UN RFLP?

Se basa en la detección de las variaciones de la secuencia del ADN que tienen como consecuencia un cambio en una diana de restricción

o Se utilizan distintas estrategiaso La forma mas directa es la secuencia de ADNo Se suele acudir a otras técnicas (ej. RFLP)

Detección del polimorfismo de secuencia de adn

Restriction Fragment Length Polymorphism o Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción

Me da flojera muchachos… Estúdiense en capitulo 27 del

Luque… y dejémoslo así

CHAVEZ SOLO EL SHOW

QUE NO HAY TARIMA…

SOLO DEL LUQUE

Bueno.. Ya nos metimos con Chávez… Sigamos investigando a nuestros sospechosos…

Realicemos un RFLP

Imagen: bioquímica con aplicación técnica Thomas Devlin

Primero tengamos en cuenta algunas cosas…

o Solo se puede aplicar en muestras que estén nucleadas

o Se utilizan marcadores (sondas)o Este estudio se basa en la hibridacióno Los fragmentos se analizan por el método de

SOUTHERMo Se realiza mediante una electroforesis

Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción

Producción de una sonda reactiva

Imagen: biología celular y genetica de Mosby

A B C ADN

Papel Absorbente

Papel Absorbente

Filtro de Nitrocelulosa

Gel Agarosa

Endonucleasas de restricción

Electroforesis

A B C

o 1.- Extraemos la muestra de ADNo 2.- Insertamos endonucleasas de restricción

Por cierto.. Ellas que hacen!?

o 3.- Realizamos una electroforesis en gel de agarosa

o 4.- Se coloca el gel sobre papel absorbente húmedo con disolución salina, y sobre el gel un filtro de nitrocelulosa y luego otra capa de papel absorbente.

oLa solución salina por capilaridad fluye hacia arriba a través de todas las capas superiores.

oUna vez adherido se hibrida con ADN marcado

Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricciónMétodo de Southern

Día Paso Descripción

1 1 Se prepara la digestión y se incuba durante unas 2 horas

2 Los productos de digestión se colocan en el gel de agarosa y se someten a electroforesis durante unas 2 horas

3 Se tiñe el gel, se visualiza con luz ultravioleta u se fotografía

4 Se lava el gel en hidróxido sódico, se prepara la transferencia de Southern y se deja transfiriendo toda la noche

2 5 Se desmonta la transferencia y se fija el ADN a la membrana

6 Se marca radiactivamente la sonda

7 La sonda y la membrana se hibridan durante toda la noche

3 8 Se lava la membrana para eliminar la sonda no hibridada

9 Se expone la membrana con una película radiográfica

4 o 5

10 Se revela la película

Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricciónMétodo de Southern

Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción

Imagen: biología molecular de José Luque

RFLP Como diagnostico de polimorfismo en la b-globina

Imagen: biología molecular de José Luque Imagen: biología celular y genetica de Mosby

imagen: http://faculty.ksu.edu.sa/haseeb/Pages/AnimationRFLP.aspx

Acerca de la técnica de southern

Consideraciones Técnica de Southern

Cantidad de ADN necesario Aprox. 5 microg

Tiempo medio 4 – 5 días

Adecuación a la automatización

No

Resultados erróneos Infrecuente

Problemas de contaminación Raro

Aplicaciones del RFLPo Diagnostico de la paternidad biológica y seguimiento de

arboles genealógicos

o Identificación de sospechosos en procedimientos penales, por comparación con el ADN procedente de diversos restos biológicos (sangre, semen, saliva, raíces de cabello, tejidos corporales diversos, piezas dentales, etc.)

o Identificación post-mortem de individuos, en casos judiciales o catástrofes

o Otras aplicaciones de interés diverso. Por ejemplo, es posible aplicar esta metodología a muestras clínicas con el fin de comprobar identidad de las biopsias, posibilidades de trasplante, inestabilidad genética característica de ciertos tumores, etc.

http://www.enciclopediasalud.com/categorias/terapias/articulos/biopsia/

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/kidneytransplantation.html

SABIAS QUE…

En el futuro se podrá disponer de marcadores tan fiables y sofisticados que pudiese diagnosticarse precozmente la alteración molecular!???

Los son fruto de la biología molecular y la informática, están destinados al diagnostico molecular del futuro discriminando de una manera mas sencilla, rápida y automatizada la presencia de la enfermedad

Se trata de placas de silicio, vidrio u otro material, a cuya superficie se han adherido de manera ordenada y conocida, diversas moléculas de ADNc especificas para un determinado gen y así detectar en que posiciones se encuentra el marcaje y diagnosticar la enfermedad

biochips, genochips o

genosensores

Imagen: biología molecular de José Luque

BIEN, YA ANALIZAMOS LA EVIDENCIA

CERREMOS ESTE CASO

Sospechoso 1Sospechoso 2

y EL CULPABLE ES……..

ACERTARON.. EL SOSPECHOSO 1

Imagen: bioquímica Lehninger

Biología Celular y

Genética.- Mosby

Bioquímica. Lehninger

Bioquímica con

aplicaciones clínicas.Thomas Devlin

Biología MolecularJosé Luis

Luque

BIBLIOGRAFIA

ESPERAMOS NO SE hayan Convertido EN PARTE DE ESTE CASO…

GRACIAS!!!