Practica Biologia 2013-II (1-2)

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA PROFESIONAL QUIMICA

M A N U A L D E P R A C T I C A S

L A B O R A T O R I O DE

B I O L O G A

CH 061

SEMESTRE ACADEMICO 2013-1

PILAR GARCA AVELINO

Jefe de Prcticas

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA PROFESIONAL DE QUMICA BIOLOGA (CH 061)

Cronograma de Practicas de Laboratorio de BIOLOGA - CH 061

LABORATORIO Fecha de ejecucion

Entrega de Informe

CLASE INTRODUCTORIA AL LABORATORIO

10 y 11 de setiembre

1. Reconocimiento de Biomolculas 17 y 18 setiembre 24 y 25 set.

2. Extraccin de ADN 1 y 2 octubre 9 oct.

EXAMENES PARCIALES 14 16 octubre* NO HAY

LABORATORIO

3. Amilasa salival 22 y 23 octubre 29 y 30 oct.

PRACTICA CALIFICADA 1: Anlisis de un artculo cientfico

30 octubre

EXPOCIENCIA 5 al 8 noviembre NO HAY

LABORATORIO

4. Hongos ambientales 12 y 13 noviembre 19 y 20 noviembre

PRACTICA CALIFICADA 2 Bioseguridad y Laboratorios: 1, 2, 3

25 de noviembre En la clase de

TEORIA!

EXMENES FINALES 09 11 diciembre* NO HAY

LABORATORIO

EXMENES SUSTITUTORIOS 16 18 diciembre* NO HAY

LABORATORIO

En la fecha de realizacin de los laboratorios se entregaran los preinformes correspondientes. * Las fechas definitivas de los exmenes parcial, final y sustitutorio sern definidas por el Dr. Guy Carvajal

Prof. Pilar Garca Avelino


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PRESENTACION DEL MANUAL DE PRCTICAS

El propsito del Laboratorio es familiarizar al estudiante con la metodologa de trabajo de la biologa, proporcionarle un ambiente donde tenga oportunidad de encontrarse con sustancias e instrumentos que le motive a experimentar.

Considerando al laboratorio como un lugar donde el trabajo en equipo se facilita, da lugar a un proceso de constante integracin, comunicacin, investigacin, construccin de ideas, surgimiento de nuevas preguntas, donde las actividades experimentales propician la reorganizacin de conocimientos y facilitan el alcanzar un aprendizaje significativo.

Para logra tales fines, se propone esta gua que, como material de apoyo didctico, reforzara el proceso constante de enseanza aprendizaje, requiriendo la participacin y gua del profesor.

Material necesario para trabajar por alumno:

Individualmente: un mandil, gafas de seguridad, guantes, plumn marcador, toalla, cuaderno

de apuntes.

Por equipo: El que se indique para cada prctica.

INSTRUCCIONES GENERALES.

1. Busca conceptos, antecedentes previos a la realizacin de las prcticas.

2. Construye la hiptesis de trabajo, antes de solicitar su material.

3. Lee cuidadosamente los experimentos antes de ejecutarlos.

4. Recurre a tus libros de texto y/o consulta para aclarar dudas despus de realizadas las

practicas, o consulta al profesor responsable.

5. Al efectuar cada uno de los pasos del desarrollo experimental, observa minuciosamente

y anota los cambios ocurridos.

6. Al concluir el desarrollo experimental, resuelve el cuestionario para su futura revisin.

7. Elabora tus conclusiones.

PRECAUCIONES PARA EL DESARROLLO DE CADA EXPERIMENTO

Las medidas oportunas y la compresin de las prcticas a seguir, har del laboratorio un

lugar seguro como cualquier ambiente de clases.

Para ello debern tenerse en cuenta, en forma general las siguientes precauciones:

1. Observa donde dejas el material caliente, cerciorndote que este frio antes de tomarlo

con la mano.

2. Cuando calientes un tubo de ensayo, no lo apuntes hacia ti o hacia tus compaeros,

pude proyectarse su contenido.

3. Si cae sobre ti o en tu ropa un material corrosivo, lvate inmediatamente con

abundante agua, e infrmalo al profesor del curso.

4. Nunca pruebes una sustancia.

5. Al detectar el olor de un liquido, no coloques la cara sobre la boca del recipiente, con

tu mano abanica hacia ti el aroma.

6. Antes de usar un reactivo lee dos veces la etiqueta de su contenido.

7. Los tubos de ensayo no pueden calentar ser por el fondo sino por las paredes, para

evitar su expulsin del contenido.

8. No arrojes cuerpos slidos en los lavaderos, no viertas directamente los cidos.

9. Rotula tu material de trabajo, as te ser fcil identificarlos.

10. Cuando trabajes con el mechero mantn tu cabello recogido.

11. Nunca emplear papel para encender el mechero.


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PRESENTACION DEL INFORME

No olvidarse de indicar el grupo de laboratorio (incluido horario) que pertenecen: A1, A2, B1, B2, C1, C2

I. Resumen (1 p)

Qu teoras lo sustentan? En relacin al desarrollo de los experimentos.

II. Objetivos especficos (1 p) Tema central de estudio para cada experimento desarrollado

III. Observaciones experimentales, datos y resultados (para c/experimento) (3 p) Durante el desarrollo del experimento: Qu se observ? Qu datos hubieron? Cules fueron los resultados?Qu reacciones se dieron? Se indican los resultados tal y como se dieron durante la investigacin. Se debe describir los pasos ejecutados durante la experimentacin

Se pueden presentar los datos en tablas, grficas, o figuras, debidamente numeradas IV. Discusin de las observaciones experimentales, datos y resultados (3 p)

Se obtuvieron los resultados correctos segn la teora? Si, no? Qu sucedi? Es la etapa que encadena los resultados obtenidos por la investigacin. Se relaciona, interpreta y discute los resultados. Se pone a prueba la capacidad analtica y de autocrtica del investigador. La discusin pone el toque personal al trabajo.

V. Conclusiones (2 p) Qu significan los resultados? Las conclusiones estn relacionadas con los objetivos. Es el anlisis del cumplimiento de cada uno de los objetivos de la prctica

VI. Cuestionario (1.5 p) Preguntas relacionadas al tema

VII. Bibliografa (0.5 p)

Qu autores se consultaron para fundamentar la investigacin? Qu fuentes han sido consultadas (libros, artculos, tesis? REVISAR: Referencias Bibliografas al estilo Vancouver, en: http://www.unap.cl/p4_biblio/docs/Normas_VANCOUVER.pdf


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PREINFORME DEL LABORATORIO N 1

RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS

Nombre del Alumno: Calificacin

Grupo:

Fecha:

Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el da de realizacin del laboratorio,

se presenta en hojas A4 bond, que tiene un peso mximo de 4 ptos. sobre la nota del Laboratorio.

1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO de los experimentos a desarrollar PROCEDIMIENTO,

realice un esquema de trabajo de cada experimento.

Es el plan ordenado de la forma en que se realiz la prctica para lograr el objetivo de la

misma. (2 puntos)

Ejemplo:

Se indica el proceso (Se adiciona se separa)

a. Identificacin de azucares reductores

b. Hidrolisis de la sacarosa

c. Reconocimiento del almidn

d. Reconocimiento de protenas

e. Reconocimiento de lpidos

2. Cuestionario:

a. Mencione algunos carbohidratos alimenticios, segn la clasificacin de la siguiente

tabla:

Monosacridos (3 ej.)

Disacridos (3 ej.)

Oligosacridos (1 ej.)

Polisacridos (2 ej.)

b. Qu es la inversin de la sacarosa?

c. Qu sucede qumicamente al aadir lugol a las muestras positivas para la reaccin?

d. Cul es la reaccin que tiene lugar entre el reactivo de Biuret y las protenas?

e. Cul es el valor de la polaridad de la acetona y el cloroformo?

3. Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada

A

B

C


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GUIA DE LABORATORIO N 1


INTRODUCCIN

En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes de molculas orgnicas en gran

cantidad: carbohidratos, lpidos, protenas y nucletidos. Todas estas molculas contienen

carbono, hidrgeno y oxgeno. Adems, las protenas contienen nitrgeno y azufre, y los

nucletidos, as como algunos lpidos, contienen nitrgeno y fsforo.

Se ha dicho que es suficiente reconocer cerca de 30 molculas para tener un conocimiento que

permita trabajar con la bioqumica de las clulas. Dos de esas molculas son los azcares

glucosa y ribosa; otra, un lpido; otras veinte, los aminocidos biolgicamente importantes; y

cinco las bases nitrogenadas, molculas que contienen nitrgeno y son constituyentes claves

de los nucletidos.

En esencia, la qumica de los organismos vivos es la qumica de los compuestos que contienen

carbono, es decir, los compuestos orgnicos.

El carbono es singularmente adecuado para este papel central, por el hecho de que es el

tomo ms liviano capaz de formar mltiples enlaces covalentes. A raz de esta capacidad, el

carbono puede combinarse con otros tomos de carbono y con tomos distintos para formar

una gran variedad de cadenas fuertes y estables y de compuestos con forma de anillo. Las

molculas orgnicas derivan sus configuraciones tridimensionales primordialmente de sus

esqueletos de carbono. Sin embargo, muchas de sus propiedades especficas dependen de

grupos funcionales. Una caracterstica general de todos los compuestos orgnicos es que

liberan energa cuando se oxidan. Entre los tipos principales de molculas orgnicas

importantes en los sistemas vivos estn los carbohidratos, los lpidos, las protenas y los

nucletidos.

OBJETIVOS

Determinar cualitativamente los azucares reductores.

Hidrolizar la sacarosa.

Reconocer la presencia de almidn.

Reconocer cualitativamente las protenas presentes en muestras biolgicas.

Demostrar la solubilidad de los lpidos en diferentes tipos de solventes.

MATERIALES Y REACTIVOS Tubos de ensayo, mechero, placas petri, vasos de precipitado, gradillas, pipetas graduadas,

propipetas, pinzas de madera, pisceta, almidn.

Reactivo de Fehling, solucin de azucares, solucin de almidn, acetona, cloroformo, sulfato de

cobre, hidrxido de sodio

Por grupo: un huevo, 5 ml leche, 1 papa (elementos crudos)


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IDENTIFICACIN DE AZCARES REDUCTORES (I)

FUNDAMENTO

Los monosacridos (figura 1) y la mayora de los disacridos poseen poder reductor, que

deben al grupo carbonilo que tienen en su molcula. Este carcter reductor puede ponerse de

manifiesto por medio de una reaccin redox, llevada a cabo entre ellos y el sulfato de cobre (II).

Tras la reaccin con el glcido reductor se forma xido de cobre (I) de color rojo. De este modo

el cambio de color indica que se ha producido la reaccin y que el glcido presente es reductor.

Figura N1. Algunos monosacridos

Reaccin de Fehling:

Es una reaccin cualitativa que sirve para determinar la presencia de un azcar reductor que

no sea sacarosa (carece de carbono anomrico y no es azcar reductor).

El reactivo de Fehling presenta sulfato de cobre, carbonato de sodio, citrato de sodio, y agua.

En la reaccin para determinar a los azucares reductores los agentes estabilizantes de la

reaccin son el carbonato y citrato, el sulfato de cobre es el reactante especficamente el Cu

que va a reaccionar con los grupos qumicos de aldehdos y cetonas. Que en reacciones de

oxido reduccin el Cu se convierte en CuO dando un color rojo ladrillo que precipitar

posteriormente, como lo expresa la siguiente reaccin (figura 2):

Figura N2. Reaccin de Fehling

PROCEDIMIENTO

- Rotular 6 tubos de ensayo, adicionar el azcar correspondiente.

- Adicionar los reactivos en el orden sealado

- Mezclar por inversin el reactivo con cada uno de sus componentes

- Someter a la accin del calor hasta ebullicin

- La reaccin ser positiva si en la muestra se forma un precipitado color rojo ladrillo

(CH2O), y ser negativa si se queda azul o cambia a un tono de azul-verdoso.


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Tabla N1. Azucares reductores

COMPONENTES TUBO DE ENSAYO

1 2 3 4 5 6

1.Solucin de glucosa 1% 3 ml

2.Solucin de maltosa 1% 3 ml

3.Solucin de lactosa 1% 3 ml

4.Solucin de fructuosa 1% 3 ml

5.Solucion de galactosa 1% 3 ml

6.Solucin de sacarosa 0.5% 3 ml

Reactivo de Fehling A 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml

Reactivo de Fehling B 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1ml 1 ml

Calor: ebullicin (aprox. 5) mechero / bao mara

GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS (De las distintas muestras)


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HIDROLISIS DE LA SACAROSA (II)

FUNDAMENTO La sacarosa (figura 3) es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres por lo que

carece de poder reductor y la reaccin con el licor de Fehling es negativa, como ha quedado

demostrado en el anterior experimento. Sin embargo la presencia de HCl y el calor, la sacarosa

se hidroliza, es decir incorpora una molculas de agua y se descompone en los monosacridos

que la forman: glucosa y fructuosa, que s son reductores (figura 4).

Figura N 3. Sacarosa

Figura N 4. Disacridos: (a) reductor, (b) no reductor

PROCEDIMIENTO

- Mezclar por inversin el reactivo con cada uno de sus componentes, ver la tabla 3.

- Someter a la accin del calor hasta ebullicin

Tabla N2. Componentes de la hidrolisis de la sacarosa

COMPONENTES Muestra sacarosa

Solucin de sacarosa 0.5% 3 ml

cido clorhdrico HCl 1M 1 ml

Calentar al mechero 5

Enfriar

Hidrxido de sodio NaOH 1M 1 ml

Reactivo de Fehling A 1 ml

Reactivo de Fehling B 1 ml

Calor: ebullicin mechero

bao mara

- La reaccin ser positiva si en la muestra se forma un precipitado color rojo ladrillo

(CH2O), ser negativa, si la hidrolisis no se ha realizado correctamente, apareciendo

una coloracin verde en el tubo de ensayo.

GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS


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RECONOCIMIENTO DE POLISACARIDOS: ALMIDN (III) FUNDAMENTO

El almidn es un polisacrido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la

amilopectina. Esta prueba usa como reactivo el lugol, se basa en la especificidad del almidn

cuando est presente en solucin, la cual da un color azul en presencia del Yodo. El lugol

presenta: yoduro de potasio y yodo, ms agua (solucin de Lugol). El yodo de la solucin

tiene afinidad por los enlaces 1-4 y 1-6 de la molculas de almidn, esta interaccin del

yodo por dichos enlaces producen el cambio de coloracin no por una reaccin qumica sino

por una reaccin de adsorcin o fijacin de iodo en la superficie de la molcula de amilosa, lo

cual solo ocurre en frio (a temperatura ambiente) La amilosa en disolucin coloidal y en

presencia de iodo se colorea de azul toma color azul, la amilopectina da una coloracin rojo

violcea.

Figura N 5. Fragmento de la molcula del almidn (amilopectina)

En el crculo un monmero de glucosa.

PROCEDIMIENTO

- Colocar los componentes indicados en la tabla 4, adicionar el reactivo de lugol y

observar los primeros cambios de coloracin.

Tabla N 3. Reconocimiento del almidn


1 2 3

Solucin de almidn 2% 1 ml

Papa rallada 1 ml

Albmina 1 ml

Reactivo de Lugol 3 gotas 3 gotas 3 gotas


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- Mezclar por inversin y anotar los resultados, ser positivo si se torna azul, violceo.

- Calentar suavemente, sin que llegue a hervir, hasta que pierda el color.

- Enfriar el tubo de ensayo en agua fra, observar como a los 2-3 minutos reaparece el color azul

GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS


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RECONOCIMIENTO DE PROTENAS (IV) FUNDAMENTO Las protenas son macromolculas formadas por la unin de muchos aminocidos (figura 6) por

enlace peptdico (estructura primaria). Adems pueden darse uniones por enlaces dbiles de

distinta naturaleza que hacen que la protena adquiera una conformacin tridimensional

caracterstica (estructura terciaria) ver la figura 7. Las variaciones de pH, temperatura o

concentracin salina pueden destruir esos enlaces dbiles de manera que la protena pierde

su conformacin y se dice que se desnaturaliza.

Figura N6. Unidad de la protena:

aminocido

Figura N7. Estructura de las protenas

Las protenas debido al gran tamao de sus molculas forman con el agua soluciones

coloidales que pueden precipitar formndose cogulos al ser calentadas a temperaturas

superiores a 70C o al ser tratadas con soluciones salinas, acidas, alcoholes, etc.

Una de las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven para su

identificacin, cabe resaltar la reaccin de Biuret (figura 8). Esta reaccin los producen los

pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ello se debe a la presencia del enlace

peptdico CO-NH que se destruye al liberarse los aminocidos

Reaccin de Biuret (figura 8)

Se debe a los componentes que presenta: el hidrxido de sodio y sulfato de cobre (II); el cual el

agente denaturante de las protenas es el hidrxido y el reactante es el sulfato de cobre. Las

protenas despus de ser denaturadas facilitan la interaccin del Cu con los pares de

electrones sin compartir del grupo amino del pptido mediante enlaces de coordinacin con la

formacin de un complejo coloreado prpura violceo, cuya intensidad depende de la

concentracin de protenas.


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Figura N8. Complejo de cobre formado en la reaccin de Biuret

PROCEDIMIENTO

- Rotular tres tubos de ensayo, en el primero agregar 2 ml de albmina (huevo), en el

segundo tubo 2 ml de leche, y en el tercero 2 ml de la solucin de almidn.

- Aadir 0.5 ml de hidrxido de sodio (NaOH) al 5%, y 0.5ml de sulfato de cobre

(Cu2SO4) al 1% a cada tubo.

Tabla N4. Ensayos de protenas


1 2 3

Albmina (huevo) 2 ml

Casena (lcteo) 2 ml

Sol. almidn 2 ml

NaOH 5% 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml

Rvo. Biuret: Cu2SO4 1%

0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml

- Observe la formacin del color violeta en los tubos que presentan protenas, siendo

Biuret (+), de no haber un cambio de color ser Biuret (-).

GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS


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RECONOCIMIENTO DE LPIDOS (V)

FUNDAMENTO

Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en

pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso que es transitoria, pues al

dejarlo en reposo desaparece por la reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que por

su menor densidad se sita sobre el agua. Las grasas son solubles en disolventes orgnicos.

En este experimento el reconocimiento de lpidos ser por la prueba de solubilidad,

identificando el comportamiento de las molculas de aceite con el agua, las cuales no se

homogenizan, debido a que estas presentan caractersticas diferenciales, mientras que el agua

es polar, el aceite es no polar, esto hace que microscpicamente se note que el aceite forme

micelas en solucin acuosa. Donde las colas hidrofbicas de las molculas de aceite se

esconden del agua adoptando la forma de micelas.

PROCEDIMIENTO

Tabla 8. Reconocimientos de lpidos por solubilidad


1 2 3

Aceite 1 ml 1 ml 1 ml

Agregar por las paredes del tubo cada componente:

Agua destilada 2 ml

Acetona 2 ml

Cloroformo 2 ml

- Rotular los tubos y en cada uno de ellos adicionar 1 ml de aceite

- Luego por las paredes de cada tubo adicionar: 2ml de agua para el primer tubo, 2ml de

cloroformo para el segundo tubo y cloroformo para el tercer tubo

- NO HOMOGENIZAR! Hacer la primera observacin.

- Mezclar por inversin cada tubo, dejar en reposo por 5 minutos

- Anotar las observaciones respectivas.

Tabla 9. Resultados de la solubilidad de los lpidos

Muestra Aceite

+ agua destilada Aceite

+ acetona Aceite

+ cloroformo

Soluble

GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS


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INFORME DEL LABORATORIO N 1


1 Resumen (1p)

Nombre del alumno (Apellidos, Nombre)

Pre informe (4 p)

Informe (12 p)

Desempeo (4 p)

Nota


16

2 Objetivos especficos (1p)

3 Datos y observaciones experimentales (4 p)

Experimento N 1: Identificacin de Azucares Reductores

Tabla N1. Resultados de azucares reductores

GLCIDO glucosa maltosa lactosa fructuosa galactosa sacarosa

Reductor

Importante: Es necesario indicar la formacin de precipitado y la cantidad con un signo (+++).


17

Experimento N 2: Reconocimiento del Almidn

Tabla N2. Resultado de reconocimiento del almidn

Muestra almidn papa Clara de huevo

Reaccin al lugol

Experimento N 3: Reconocimiento de polisacridos: Almidn

Tabla N3. Resultado de reconocimiento del almidn

Muestra almidn papa huevo

Almidones?

Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++).


18

Experimento N 4: Reconocimiento de Protenas

Tabla N4. Ensayos de protenas

Muestra albmina casena almidn

Protenas

Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++).

Experimento N 5: Reconocimiento de Lpidos

Tabla N5. Resultados de la solubilidad de los lpidos

Muestra Aceite

+ agua destilada Aceite

+ acetona Aceite

+ cloroformo

Soluble


19

4 Discusin de observaciones, datos y resultados (3 p)


20

5. Conclusiones (2 p)

6. Cuestionario (1.5 p)

1. Qu azcares son reductores?

2. Qu funcin tiene el cido clorhdrico?

3. Al trabajar con el lugol Por qu se da el cambio de coloracin despus de sometido al

calor? Fundamente su respuesta.

4. Qu es la desnaturalizacin?

5. Qu la provocado que la desnaturalizacin en la muestra?

6. Cul de las muestras empleadas tiene mayor cantidad de protenas?

7. Qu es una emulsin transitoria?

8. Qu es una emulsin permanente?

9. Con cul de los solventes orgnicos fue soluble el aceite?

10. En nuestro sistema digestivo que enzima se encarga de solubilizar las grasas que

consumimos?

7. Bibliografa (0.5 p)


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ANEXO 1

PREPARACION DE REACTIVOS

LABORATORIO: RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS

a. Soluciones de azucares glcidos al 1%

Glucosa, maltosa, lactosa, fructuosa, galactosa, sacarosa, almidn.

Se pesa 1 gramo de un glcido y se disuelve en 100 ml de agua destilada, agitando

hasta disolverse por completo.

Se vierte en un frasco limpio y se rotula, indicando la fecha de preparacin.

As para cada uno de ellos.

Para el caso del almidn, debe emplearse agua destilada caliente y agitacin constante

b. Solucin de almidn al 2%

Se pesa 2 gramos de almidn y se disuelve en 100 ml de agua destilada caliente y en

agitacin constante.

c. Hidrxido de sodio al 5%

Se pesa 5 gramos de NaOH y se disuelve en 100 ml de agua destilada.

d. Reactivo de Fehling

Solucin A: solucin al 3% de sulfato cprico cristalizado

Pesar 30 g de sulfato cprico Cu2SO4 y aforar en un litro con agua

destilada

Solucin B: solucin al 15% de sal de Rochelle (tartrato de sodio y potasio) en

solucin acuosa al 5% de hidrxido de sodio NaOH.

Preparar un litro de hidrxido de sodio al 5% (50 grs en 1 L) y adicionarle

150 g de tartrato de sodio y potasio

e. Solucin de lugol: yodo/yoduro de potasio

Adicionar 2 g de yoduro de potasio y1 g de yodo a 80 ml de agua destilada, agitar hasta

solubilizar los reactivos Aforar 100ml de agua.

f. Reactivo de Biuret

Solucin A: 17.3 g de sulfato de cobre Cu2SO4 en 100 de agua destilada caliente

Solucin B: 17.3 g de citrato sdico Na2CO3y 100 g de bicarbonato de sodio anhidro

NaHCO3 en 800 ml de agua destilada caliente.

Se mezclan ambas soluciones, se enrazan a un litro y se ponen en un matraz cubierto

para evitar la accin de la luz. El reactivo se guarda en un frasco color mbar.


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PREINFORME DEL LABORATORIO N 2

EXTRACCION DE ADN ANIMAL

Nombre del Alumno: Calificacin

Grupo:

Fecha:

Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el da de realizacin del laboratorio,

se presenta en hojas A4 bond, que tiene un peso mximo de 4 ptos. sobre la nota del Laboratorio.

1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO de los experimentos a desarrollar PROCEDIMIENTO,

realice un esquema de trabajo de cada experimento.

Es el plan ordenado de la forma en que se realiz la prctica para lograr el objetivo de la

misma. (2 puntos)

Ejemplo:

Se indica el proceso (Se adiciona se separa)

2. Cuestionario:

Qu es el ADN basura? Qu es cdigo gentico? Cuntos genes tiene el hombre? Hay espacio vaco entre los tomos en una doble hlice de ADN?

3. Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada

A

B

C


23


GUIA DE LABORATORIO N 2

EXTRACCIN DE ADN ANIMAL

INTRODUCCIN El ADN es una cadena de nucletidos, es un polinucletido. Esta

cadena est formada por muchas unidades de nucletidos unidas entre

s, por un enlace peptdico, y cada nucletido est formado por un

azcar (desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adenina

(A), timina (T), citosina (C) guanina (G)) y un grupo fosfato que acta

como la unin de nucletidos. Ver la figura 1.

La secuencia del ADN se especifica nombrando slo la secuencia de

sus bases. La disposicin secuencial de estas cuatro bases a lo largo

de la cadena, es decir, el ordenamiento de los nucletidos, es la que

codifica la informacin gentica.

El ADN se presenta como una doble cadena de nucletidos, en la que

las dos hebras estn unidas entre s por enlaces. El ADN forma el gen,

que es la unidad bsica de la herencia.

Figura 1. Estructura del ADN

El ADN tiene algunas propiedades por las que es importante en la evolucin:

1) Almacena informacin,

2) Es una molcula estable, por lo que no cambia (muta) con mucha frecuencia.

3) En ocasiones ocurren pequeos cambios en el ADN que dan lugar a la variacin

necesaria para que se produzca la seleccin natural.

En las plantas, los animales y los hongos, el ADN se encuentra mayormente en el ncleo de las

clulas. Para extraer el ADN de las clulas vegetales hay que romper la fuerte pared celular

exterior, emulsionar los lpidos de la membrana plasmtica y la envoltura nuclear.

La extraccin del ADN celular es una etapa clave en muchos procedimientos de biologa

molecular y aplicaciones de ingeniera gentica. El mtodo vara dependiendo de la clula o

tejido desde donde se necesita extraer el DNA, sin embargo, cualquier protocolo tiene las

siguientes etapas bsicas:

Primero las clulas deben ser homogenizadas, lisadas (rotas) para liberar el ncleo (si est

presente). El ncleo tambin debe ser roto para liberar el DNA. En este punto el DNA debe ser

protegido de enzimas que podran degradarlo (nucleasas). Una vez que el DNA es liberado.

Debe ser precipitado con alcohol (etanol) para purificarlo y concentrarlo. Dependiendo de las

aplicaciones posteriores, puede ser necesario someter el DNA a etapas de purificacin

adicionales. Usualmente el DNA extrado se analiza mediante electroforesis en geles de

agarosa y/o espectrometra UV.

OBJETIVOS

Lograr la extraccin y visualizacin de ADN de una muestra animal.


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MATERIALES Y REACTIVOS

Vasos de precipitado de: 500, 250 y 100 ml; probetas de 100 y 50 ml, 2 pipetas graduadas de

10 ml, 1 propipeta,1 pisceta, 1 pipeta pasteur, 2 tubos de ensayo de 15 ml, 1 gotero, 1 gradilla,

1 varilla de vidrio, 1 embudo, gasa, papel filtro, hielo, shampoo de color claro,

cloruro de sodio 2M, alcohol a bajas temperaturas (muy frio: 0 C), azul de metileno.

Por grupo: gasa, alcohol de 96 C muestra animal: hgado de pollo

FUNDAMENTO

El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y replegado, unido a protenas

para formar la cromatina. Para extraerlo es necesario homogenizar el tejido y romper las

clulas para separar el ncleo, al lograrlo se libera el ADN, se debe separar de las protenas y

precipitarlo para extraerlo de la solucin. Se visualizara como un agregado de fibras

blanquecinas que se podrn adherir a una varilla de vidrio.

EXTRACCION DE ADN ANIMAL

PROCEDIMIENTO

A cada paso indicado, escriba la finalidad

1. Triturar una porcin de hgado de pollo (20 grs) con 50 ml de agua destilada fra en un mortero, aadir 1 gramo de arena fina, seguir homogenizando.

2. Filtrar 1 vez el homogenizado en una gasa contenido sobre un embudo en la probeta de 50 ml, para obtener la suspensin

3. En un vaso precipitado de 50 ml colocar 5 ml de la suspensin, adicionar 5 ml de NaCl 2M frio y agitar. Este vaso deber estar contenido en otro vaso precipitado de 500 ml que contenga hielo.

4. Aadir 1 ml de detergente (shampoo en solucin fra) y remover suavemente con la varilla

de vidrio, mezclando, y evitando la formacin de espuma. Repetir el procedimiento 3 veces

dejando reposar un minuto cada vez. Si de forma espuma retirarla con la pipeta pasteur.

Trasvasar el material contenido en el vaso precipitado de 50 ml a un tubo de ensayo

grande.

5. Aadir 10 ml de alcohol frio, inclinando el tubo de ensayo y dejando resbalar muy lentamente el alcohol por la pared, para formar una capa sobre la solucin. Dejar reposar, no mover, evitando que se mezclen ambas soluciones. Porque?

6. El ADN aparecer poco a poco lentamente en la interfase de agua-alcohol en forma de grumos blancos. Se favorece la precipitacin y recoleccin as se va recogiendo mediante la varilla de vidrio o un hisopo largo, introducindola lentamente bajo la interfase y hacindola girar suavemente mientras se extrae. As se conseguir que se adhiera a la varilla unas hebras blancas, poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto, retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado.

7. Tomar una muestra de ADN, depositarlo sobre un portaobjetos y teir con azul de metileno durante 3 minutos. Secar la lmina y observarla al microscopio. Describir la muestra al microscopio.


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INFORME DEL LABORATORIO N 2


1. Resumen (1p)

Nombre del alumno (Apellidos, Nombre)

Pre informe (4 p)

Informe (12 p)

Desempeo (4 p)

Nota


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2. Objetivos especficos (1p)

3. Datos y observaciones experimentales (4 p)

Experimento: EXTRACCION DE ADN ANIMAL

3.1 Triturar una porcin de hgado de pollo (20 grs) con 50 ml de agua destilada fra

en un mortero, aadir 1 gramo de arena fina, seguir homogenizando.

3.2 Filtrar 1 vez el homogenizado en una gasa contenido sobre un embudo en la

probeta de 50 ml, para obtener la suspensin.


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3.3 En un vaso precipitado de 50 ml colocar 5 ml de la suspensin, adicionar 5 ml de

NaCl 2M frio y agitar. Este vaso deber estar contenido en otro vaso precipitado

de 500 ml que contenga hielo.

3.4 Aadir 1 ml de detergente (shampoo en solucin fra) y remover suavemente con

la varilla de vidrio, mezclando, y evitando la formacin de espuma. Repetir el

procedimiento 3 veces dejando reposar un minuto cada vez. Si de forma espuma

retirarla con la pipeta pasteur. (Trasvasar el material contenido en el vaso

precipitado de 50 ml a un tubo de ensayo grande)


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3.5 Aadir 10 ml de alcohol frio, inclinando el tubo de ensayo y dejando resbalar muy

lentamente el alcohol por la pared, para formar una capa sobre la solucin. Dejar

reposar, no mover, evitando que se mezclen ambas soluciones. Porque?

3.6 El ADN aparecer poco a poco lentamente en la interfase de agua-alcohol en

forma de grumos blancos. Se favorece la precipitacin y recoleccin as se va

recogiendo mediante la varilla de vidrio o un hisopo largo, introducindola

lentamente bajo la interfase y hacindola girar suavemente mientras se extrae.

As se conseguir que se adhiera a la varilla unas hebras blancas, poco a poco

se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto,

retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar

adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado.


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3.7 Tomar una muestra de ADN, depositarlo sobre un portaobjetos y teir con azul

de metileno durante 3 minutos. Secar la lmina y observarla al microscopio.

Describir la muestra al microscopio.

4. Discusin de observaciones, datos y resultados (3 p)


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5. Conclusiones (2 p)


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6. Cuestionario (1.5 p)

a. Explique, cmo se puede determinar la concentracin del ADN. b. Presente un diagrama de flujo de la extraccin de ADN en una muestra de sangre, piel o cabellos? c. Cmo se puede preservar el ADN despus de haberlo extrado? d. Cul es la diferencia de extraer ADN animal, vegetal y bacteriano? (sealarlas) e. Cul es la importancia de estudiar el ADN en muestras arqueolgicas? Y en la actualidad?

7. Bibliografa (0.5 p)

Practica Biologia 2013-II (1-2)

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