practica_recoleccion_de_semen

8/7/2019 practica_recoleccion_de_semen

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REPRODUCCION ANIMAL

PRESENTADO POR:

JHON JAIRO CHAMORRO GOMEZ

COD: 13042030

PRESENTADO A:

ALVARO FERNAN CASTELLANOS

PRACTICA RECOLECCION DE SEMEN BOVINO

BOGOTA D.C

UNIVERSIDAD DE LA SALLE

2005


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MARCO TEORICO

Coleccin de Semen

La inseminacin artificial ha tenido una gran importancia en el mejoramiento

gentico de los animales, especialmente en el ganado bovino donde su

prctica es un requisito indispensable para acceder a animales de altas

producciones en un corto perodo de ti empo y as poder ser competitivo en un

mercado tan estrecho.

Mejor aprovechamiento del macho: por ejemplo un toro en monta natural

deposita en la hembra todo el semen producido en una eyaculacin, en cambio

con inseminacin artificial ese semen puede ser diluido y alcanzar para 1.400

vacas y tambin congelarse y preservarse en el tiempo.

- Mejoramiento gentico ms rpido.

- En general es ms econmico que tener un macho de monta libre.

- Evita la transmisin de enfermedades venreas.

- Aumenta la fertilidad del rebao por ser ms controlada que la monta natural.

- Permite usar machos con excelentes caractersticas pero con algn problema

fsico no hereditario (quiebre o daos en extremidades, ciegos, etc.).

- Uso de machos a grandes distancias mediante semen congelado.

Para realizar una inseminacin artificial lo primero que hay que hacer es

recolectar el semen del macho.

La coleccin del semen se puede realizar mediante:

a) Electroeyaculacin: aplicable a toros y carneros.

b) Manual: utilizado en cerdos, aves y peces.

Vagina artificial: es el ms prctico y el que da mejores resultados. Consiste en

un tubo rgido con una manga de goma que se llena con agua tibia (40) a finde simular la temperatura corporal


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El semen colectado es sometido a un completo examen de viabilidad.

La inseminacin se puede realizar con semen fresco, utilizado inmediatamente

despus de la extraccin (pavos, gansos y cerdos) o congelado (vacas), lo cual

permite usarlo mucho tiempo despus de obtenido y ser transportado largas

distancias.

Tambor con semen congelado y almacenado

En nitrgeno lquido a -196C

En vacas, para utilizar el semen congelado, ste debe ser descongelado en

agua a 35C por 20 a 30 segundos, para llevarlo a temperatura corporal. Este

proceso debe realizarse rpidamente a fin de evitar la reorganizacin de

cristales de agua en el interior de los espermios, lo que provocara la ruptura de

membranas y muerte de stos. Una vez descongelado el semen, la pajuela que

lo contiene debe introducirse en la vagina de la hembra en un tiempo mximo

de 2 minutos:


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Diagrama de la inseminacin artificial de una vaca

Descripcin de la vagina artificial: Cuerpo de la vagina: consiste en un tubo

cilndrico, provisto de una vlvula y una tapa, generalmente de caucho

resistente, tienen 40 a 50 centmetros de largo y 7 a 10 centmetros de

dimetro.

Funda interna: goma elstica o de ltex que se ubica en el interior del tubo

cilndrico y representa las paredes de la vagina, sus extremos se doblan sobre

la parte externa del tubo y se fija con bandas de caucho.

Cono de ltex: se fija en uno de los extremos de la vagina cerca de la vlvula

para el agua.

Tuvo colector de semen: se coloca en el otro extremo del cono; este tuboest protegido por una cubierta protectora, que generalmente es una jeringa

plstica, cuya finalidad es proteger el semen de la luz y de los cambios de

temperatura.

Foto 1. Partes de la vagina

artificial

Foto 2. Proceso de llenado

de la vagina artificial


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Recoleccin de Semen

Por una vlvula ubicada en la vagina artificial se introduce agua a una

temperatura de 50 a 60 grados centgrados, hasta llenar los dos tercios de su

capacidad total

En el momento de recoger el semen, la temperatura ptima en el interior de la

vagina debe ser de 38 a 39C. Sin embargo, existen toros que exigen una

mayor temperatura para eyacular.

Luego se procede a la toma del eyaculado, sujetando una hembra en celo u

otro macho o un maniqu. El tcnico encargado de la recoleccin se coloca a laderecha del toro y mantiene la vagina artificial en la mano derecha, con la

abertura dirigida hacia el pene, mientras que con la mano izquierda colocada

sobre el prepucio lo dirige hacia la abertura de la vagina.

Debe evitarse tocar directamente el pene, ya que la ereccin puede ser inhibida

y el toro negarse a montar. Es recomendable practicar la falsa monta, con la

finalidad de que el toro alcance el mximo grado de ereccin y de esta manera

obtener un semen de buena calidad. Luego de practicar la falsa monta, se

procede a efectuar la recoleccin, mediante la introduccin del pene en la

vagina artificial hasta lograr la eyaculacin; despus el operador retira la vagina

artificial y el eyaculado o semen se deposita en el tubo colector.

Foto 3. Recoleccin del

semen


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Evaluacin del Semen

Una vez realizada la recoleccin del eyaculado, debe conservarse en un

recipiente con agua a 37C para evitar los cambios de temperatura que afectan

su calidad.

La evaluacin del semen se divide en dos partes:

1) Examen macroscpico y 2) examen microscpico.

1) Examen macroscpico

Volumen: vara desde uno hasta ocho centmetros cbicos. La mayora de los

toros proporcionan de 3 a 6 cc.

Color: depende de la cantidad de espermatozoides; cuando el semen es de

buena calidad, presenta una coloracin blanco lechosa o cremosa y cuando es

de baja calidad su color es similar a leche aguada.

Olor: el semen en buenas condiciones presenta un olor similar a la leche

fresca. El olor a orina nos indica que el semen est contaminado con sta.

Cuando el olor es muy desagradable, se sospecha alguna enfermedad en los

testculos o en otra parte del aparato reproduct ivo.

Aspecto: depende de la concentracin de espermatozoides y se mide por el

mayor o menor grado de opacidad que presenta la muestra de semen.

PH: se determina mediante el empleo de una cinta colorimtrica, su valor vara

entre 6,4 a 6,9; valores por encima de 6,9 son indicativos de semen de baja

calidad.

2) Examen microscpico

Mortalidad masal: se determina colocando una gota de semen en un

portaobjetos y luego se observa al microscopio con pequeo aumento. En toda

la gota de semen se observa la presencia de ondas y remolinos y ste se

puede clasificar atendiendo a las caractersticas de las ondas en:


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y Semen muy bueno: presenta ondas oscuras marcadas en rpido

movimiento.

y Semen bueno: se observan ondas menos oscuras que el anterior,

marcadas con movimiento moderado.

y Semen regular: presenta ondas claras con movimiento muy ligero.

y Semen malo: no hay ondas, se observan los espermatozoides inmviles.

Motilidad individual: debe evaluarse colocando sobre el portaobjetos una gota

de semen diluido con suero fisiolgico o citrato de sodio. Luego se coloca un

cubreobjetos y se observa al microscopio con mayor aumento. De acuerdo al

movimiento individual, el semen se clasifica de la siguiente manera:

y Semen muy bueno: igual o mayor de 70% de motilidad individual.

y Semen bueno: 50-69% de motilidad individual.

y Semen regular: 30-49% de motilidad individual.

y Semen malo: menor de 29% de motilidad individual.

Morfologa: se determina mediante la observacin al microscopio de un frotis

de semen coloreado con tinciones especiales; generalmente, se utiliza la tintachina. Las anormalidades observadas se clasifican en primarias y secundarias.

Para las primeras se aceptan un valor entre 2 a 5% y para las segundas un

valor de 10 a 14% (Foto 4).

Foto 4. Examen microscpico del

semen


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Concentracin: el nmero de espermatozoides por mm3 se determina

diluyendo 0,1 cc de semen en 7.9 cc de citrato de sodio. Luego con la ayuda de

un aparato denominado Spectronic, se obtiene una lectura que se compara con

una tabla para obtener la concentracin de esperma tozoides. Generalmente, la

concentracin vara de 1000000 a 1200000 espermatozoides/mm3 (Foto 5).

Foto 5. Determinacin de

la concentracin del

semen

Procesamiento del Semen

Los propsitos del procesamiento del semen son los siguientes: aumentar el

volumen del eyaculado para inseminar mayor nmero posible de hembras.

Proteger los espermatozoides para mantenerlos frtiles el mayor tiempo

posible. El procesamiento del semen comprende las siguientes fases: Dilucin:

para diluir el semen se utilizan diferentes dilutores, entre los ms conocidos

tenemos citrato-yema, fosfato-yema y dilutores a base de leche. A estos

dilutores se les agrega antibiticos, con el propsito de frenar el desarrollo de

grmenes que pudieran estar presentes en el eyaculado.

En la Estacin Experimental Carrasquero, para el procesamiento del semen se

utiliza el dilutor a base de citrato -yema, en la siguiente proporcin:

Citrato de sodio 74 partes Yema de huevo 25 partes

Glucosa 1 parte Penicilina 1000 UI/cc Estreptomicina 500 mg/cc


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El grado de dilucin del semen depende de la concentracin espermtica y de

la tcnica de conservacin.

Conservacin a 5C: cuando el semen se va a mantener a temperatura de

5oC, el grado de dilucin que se realiza es menor, en comparacin con la

tcnica de la congelacin. Bajo estas condiciones el semen conserva su poder

fecundante por un periodo de cuatro a cinco das.

Conservacin mediante congelacin: el grado de dilucin que se realiza es

mayor que el anterior y una vez congelado en nitrgeno lquido, el semen se

conserva por un tiempo indefinido. Proceso de congelacin en nitrgeno lquido

Una vez determinada la concentracin espermtica se procede a determinar la

cantidad de dilutar que se puede agregar al semen, en base a la siguiente

frmula:

N de

pajuelas =

V x Ml x C(ml)

N de

espermetazoide/pajuelas

Donde:

V = volumen del semen en mL

MI = motilidad individual en porcentaje

C = concentracin espermtica expresada en ml

Despus de determinar el nmero de pajuelas se procede a calcular el volumen

del dilutor de la siguiente manera:

Volumen dilutor = NP x 0,5 -V

Donde:

NP = nmero de pajuelas


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0,5 = corresponde al volumen de las pajuelas medianas

V = volumen del semen en ml

El dilutor a base de citrato-yema, se divide en dos fracciones: la fraccin A que

no contiene glicerol y la fraccin B a la cual se le agrega glicerol en la

proporcin del 14%.

Seguido de la recoleccin del semen y despus de calcular el volumen del

dilutor, se agrega la fraccin A para conservarlo. El semen diluido en la fraccin

A, se lleva hasta una temperatura de 5oC. Una vez que alcanza esta

temperatura se le agrega la fraccin B.

Foto 6. proceso de llenado de Pajuela

Luego de agregar la fraccin B es necesario esperar un perodo de tiempo de

tres a seis horas, que se llama perodo de estabilizacin, antes de empezar a

congelar. Con el propsito de ganar tiempo, antes del perodo de estabilizacin,

se procede al llenado y sellado de las pajuelas. El llenado se efecta

corrientemente utilizando una bomba de vaco y el sellado de la pajuela se

realiza con el polvo sellador a base de polietileno.


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Foto 7. Proceso de sellado de las

pajuelas

Despus del llenado y sellado de las pajuelas y una vez que se ha alcanzado el

perodo de estabilizacin se procede a la congelacin en nitrgeno lquido.

Primeramente se colocan las pajuelas en un termo con vapores de nitrgeno

hasta alcanzar la temperatura de 120C en 10 minutos. Este proceso se llama

precongelacin (Foto 8).

Inmediatamente las pajuelas se introducen directamente en el nitrgeno lquido

para alcanzar una temperatura de 196c, este proceso recibe el nombre de

congelacin (Foto 9).

Foto 9. Proceso de CongelacinFoto 8. Proceso de congelacin


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EVALUACIN DE SEMEN BOVINO CONGELADO

Para evaluar semen resulta esencial contar con un microscopio de calidad,

preferentemente con adaptacin para contraste de fase, una platina trmica y

un bao Mara. Segn Barth, en la evaluacin del semen congelado se deben

tener en cuenta al menos 3 parmetros bsicos. Ellos son:

- Viabilidad post-descongelacin.

- Morfologa.

- Nmero de espermatozoides con motilidad progresiva por dosis inseminante.

Algunos investigadores consideran conveniente realizar controles

bacteriolgicos y/o virolgicos a espacios de tiempo variables segn el caso.

Barth recomienda determinar la presencia de microorganismos patgenosnicamente cuando hembras frtiles fracasan en ser preadas con semen de

buena viabilidad y morfologa, en dosis adecuada o cuando una historia de

infertilidad implica una posible causa infecciosa. En nuestro laboratorio

efectuamos de rutina un control bacteriolgico a partir del mome nto que

registramos un caso donde un semen que haba superado la evaluacin de los

parmetros bsicos, pero que tena un elevado grado de contaminacin con

grmenes inespecficos, afect seriamente la fertilidad de un lote de

vaquillonas inseminadas.

Viabilidad post-descongelacin

Se determina mediante el porcentaje de espermatozoides con motilidad

progresiva y el vigor espermtico. Es recomendable efectuar adems, un

examen directo del acrosoma.

El dao a la membrana puede no ser completamente expresado

inmediatamente despus de la descongelacin. Por ello, el semen debe ser

incubado a 37 C durante 2 horas. Esta evaluacin es conocida como pruebade termorresistencia o de incubacin.

Esta prueba puede ser realizada de distintas formas. En nuestro laboratorio

normalmente descongelamos 2 pajuelas de la misma partida simultneamente.

A la hora 0, vaciamos el contenido de una de ellas en un tubo de vidrio que

contiene un volumen de solucin fisiolgica equivalente al de la pajuela,


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procediendo de inmediato a evaluar la motilidad progresiva y el vigor

espermtico. La otra pajuela permanece en el bao Mara y es diluida en el

momento de efectuar las determinaciones correspondientes a la hora 2.

Las pastillas se diluyen en 1 ml de solucin fisiolgica y el semen se mantiene

tapado dentro del bao en un tubo de vidrio neutro.

a) Examen de motilidad: el porcentaje de motilidad progresiva y el vigor son

determinados inmediatamente despus de descongelado el semen y luego de

2 horas de incubacin.

Diversos mtodos pueden ser utilizados para determinar motilidad. Cuando se

cuenta con experiencia, generalmente se realizan estimaciones visuales

rpidas, sin efectivamente contar clulas.

Una gota de semen delgada y uniforme es colocada entre porta y cubreobjeto

tibios procediendo a evaluar a 100 aumentos el porcentaje de espermatozoides

con motilidad progresiva y luego, la tasa de progresin (vigor). Esta, puede ser

cuantificada utilizando la siguiente escala:

0= sin movimiento.

1= ligera ondulacin o vibracin de cola, sin progresin.

2= progresin lenta, incluyendo detencin y comienzo de movimiento.

3= movimiento progresivo continuo y moderada velocidad.

4= movimiento progresivo, rpido.

5= movimiento progresivo muy rpido, en el cual las clulas son difciles de

seguir visualmente.

El semen de buena calidad, que ha sido recientemente descongelado,

normalmente tiene 40-50% de espermatozoides con motilidad progresiva y un

vigor de 3-4. Despus de 2 horas de incubacin, estos valores generalmente

disminuyen un 10- 15% y 1 punto, respectivamente.

Las normas mnimas para motilidad exigidas en nuestro laboratorio son las

definidas por el Departamento de Medicina del Rodeo y Teriogenologa de la

Universidad de Saskatchewan, Canad y que se corresponden con las de las

normas ISO 9002. Ellas son:

0 hs= 25% de espermatozoides con motilidad progresiva. Vigor 3.

2 hs= 15% de espermatozoides con motilidad progresiva. Vigor 2.


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En los ltimos aos han sido intro ducidos anlisis por sistemas de

computacin, los cuales proporcionan un mtodo objetivo de determinacin de

la motilidad espermtica. Una cmara de circuito cerrado de televisin,

montada sobre un microscopio alimenta informacin a un sistema de

computacin, el cual entrega inmediatamente el porcentaje de motilidad

progresiva, el vigor, la concentracin espermtica y el nmero de

espermatozoides mviles por mililitro.

El costo del equipamiento para este sistema es muy alto y no ofrece ventajas

para predecir la fertilidad en forma ms acabada que los mtodos tradicionales

b) Porcentaje de acrosomas intactos: la determinacin del porcentaje de

acrosomas intactos es un mtodo morfolgico de medicin de la viabilidad

post-descongelacin, el cual tiene correlacin con la fertilidad. Es un valioso

complemento de la motilidad, para determinar la viabilidad y fertilidad potencial

del semen congelado.

Para examinar el acrosoma, el movimiento de los espermatozoides debe ser

detenido. Esto se logra mezclando el semen con glutaraldehido bufferado al

0,2%, que fija las membranas y previene su deterioro posterior. La preparacin

puede ser hecha sobre el portaobjeto, colocando una pequea dosis de semen

prxima a una gotita de glutaraldehido mezclndolas bien y colocndo les un

cubreobjeto. Doscientas clulas deben ser examinadas a 1000 aumentos,

inmediatamente despus de descongelado el semen y luego de 2 horas de

incubacin. Los valores mnimos para una clasificacin satisfactoria son:

0 hs= 50% de acrosomas intactos.

2 hs= 35% de acrosomas intactos.

Otra prueba que se utiliza para determinar integridad de membrana es el Test

de resistencia osmtica. El semen es incubado, 2 hs a 37 C, en una solucin

hipoosmtica de fructosa y citrato de sodio. Se realizan observacio nes

seriadas (horas 0, 1 y 2) entre porta y cubreobjeto, determinndose el

porcentaje de espermatozoides vivos. Estos reaccionan al shock osmtico

enrollando la cola. Debe haber como mnimo un 40% de espermatozoides

reaccionantes.

La viabilidad post-descongelacin es el parmetro ms importante y

generalmente aparece comprometida en aquellos casos donde se ha producido

algn inconveniente en la conservacin del semen. En el Servicio de


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Evaluacin de Semen que funciona en nuestra Facultad, peridicamente se

registran casos en que se solicita dicha evaluacin al comprobarse que, por

descuido o accidente, el termo ha quedado sin nitrgeno lquido por algn

perodo ms o menos prolongado. Tambin hemos comprobado que la

viabilidad post-descongelacin suele verse afectada en aquellos casos en que

el anlisis revela un elevado grado de contaminacin con microorganismos

inespecficos que si bien son incapaces de provocar una enfermedad

reproductiva, pueden afectar la viabilidad de los espermatozoides al competir

con ellos por el oxgeno y los nutrientes

Morfologa espermtica

La coloracin de eosina-nigrosina es ideal para evaluar la morfologa

espermtica dado que al carecer de pasos de lavado, todo lo que est en el

semen se descubrir en el frotis.

El concepto de defectos primarios y secundarios sirve bien para evaluar la

aptitud reproductiva de un toro pero no para predecir la fertilidad de cierta

partida de semen congelado. Cabe recordar que por definicin, un defecto

primario es aquel que se origina durante la espermatognesis dentro del

testculo y un defecto secundario, el que se origina dentro del epiddimo o en el

laboratorio.

Blom, citado por Barth, introdujo un sistema de clasificacin en defectos

mayores y menores. Un defecto mayor es aqul que, presente en gran

nmero, ha sido asociado con infertilidad. Los defectos menores son

desviaciones que hasta ahora no han sido asociadas con infertilidad. Este

sistema de clasificacin es abierto y deber ser modificado a medida que

avance el conocimiento.

Una nueva clasificacin en defectos compensables y no compensables fue

propuesta por Saacke y col. Los espermatozoides con defectos compensables

son aquellos incapaces de alcanzar el oviducto o de participar del proceso de

fertilizacin. Tales espermatozoides tendran poco efecto sobre la fertilidad, si

se insemina con un nmero suficiente de espermatozoides aptos. En cambio,

los espermatozoides con defectos no compensables (crteres y vacuolas

nucleares -defecto diadema-) acceden al vulo como los espermatozoides

normales, son capaces de penetrar la zona pelcida desencadenar la reaccin


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cortical impidiendo la entrada de otros espermatozoides. La presencia de este

tipo de defectos suele ser la causa de baja fertilidad dado que, luego de la

fertilizacin, se desarrollan embriones de mala calidad que mueren durante los

primeros das de gestacin.

Si bien cada nueva clasificacin parece ms apropiada que la anterior, cuando

se evala la morfologa espermtica siempre surgen interrogantes tales como:

Qu tipo de modificacin en la estructura de los espermatozoides es

realmente una anormalidad y si constituye una causa significativa de

infertilidad?

Qu nivel de anormalidad es tolerable?

Un conteo de 100 clulas es satisfactorio cuando no existen problema s

mayores. Cuando un gran nmero de defectos espermticos est presente,

hasta 500 clulas deben ser contadas para obtener un espermograma preciso.

Se exige un 70% de clulas normales.

Con las colocaciones ms comunes que se utilizan habitualmente en los

laboratorios es difcil detectar alteraciones en la morfologa espermtica que no

se vean reflejadas en parmetros ms sensibles como lo es por ejemplo, la

viabilidad post-descongelacin

Nmero de espermatozoides con motilidad progresiva por dosis

Surge de multiplicar el nmero de espermatozoides totales por el porcentaje de

espermatozoides con motilidad progresiva a la hora 0 pos descongelacin.

Existen al menos 4 formas distintas de determinar el nmero de

espermatozoides. En nuestro laboratorio, se utili za el mtodo hemocitomtrico

Un criterio vigente durante aos, basado en la definicin de pubertad, indicaba

que la dosis inseminante no deba ser inferior a 10 millones de

espermatozoides con motilidad progresiva. Cuando el semen congelado en

pastillas dominaba el mercado de la IA en nuestro pas, esta cifra era superada

con creces dado que las pastillas generalmente tenan 40 millones de

espermatozoides, oscilando el porcentaje de motilidad progresiva generalmente

entre un 30 y 40 %.

La descongelacin de pajuelas, por tratarse de un proceso automatizado con

tasas de enfriamiento estrictamente controladas, signific un gran avance. Al

resultar menos traumticos los procesos de congelacin y descongelacin fue


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posible disminuir de manera significativa el nmero de espermatozoides

contenidos en cada dosis de semen.

La situacin actual, caracterizada por una alta competencia, hace que cada

Centro de Inseminacin Artificial quiera obtener el mximo provecho de sus

reproductores, sacando mayor cantidad de dosis de cada eyaculado. Esto es

comn de observar en el semen de toros de alto valor gentico de razas

lecheras, donde el nmero de espermatozoides por dosis se ajusta de acuerdo

a los datos de no retorno que los Centros reciben peridicamente

Las normas ISO 9002 establecen que la dosis inseminante debe tener un

mnimo de 8 millones de espermatozoides con motilidad progresiva. Este

nmero puede reducirse a 6 millones si el semen posee ms de 30% de

espermatozoides con motilidad progresiva y si la tasa de anorma lidades es

inferior al 25% o si, el porcentaje de no retomo 60/90 de 300

primoinseminaciones resulta equivalente al obtenido con 8 millones.

A los efectos de una correcta interpretacin de los anlisis de laboratorio, se

debe tener presente que la evaluacin del porcentaje de espermatozoides con

motilidad progresiva es subjetiva y que los toros difieren en el porcentaje en el

que expresan su mxima fertilidad. Al mismo tiempo, hay que recordar que por

ms que se establezcan valores mnimos de referencia, no es conveniente

ceir eventos biolgicos a la ms pura matemtica.

METODOS

1. se realiza un lavado abdominal2. se realiza un lavado interno dentro del prepucio3. con un masaje prepucial se deja que el toro arroje los residuos de

solucin salina y orina.4. se lleva el toro donde esta la vaca para que realice la monta5. cuando valla a realizar la eyaculacion se le introduce la vagina artificial6. despus de recolectar el semen es recolectado en el termo a 33 grados

centgrados.

Movilidad basal e individualProcedimiento:

Se calienta la laminilla y con una pipeta pster se saca un poco de semen paraobservarlo en el microscopio este procedimiento se debe realizar rpido paraque no se mueran los espermatozoides.


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Motilidad individual

Se coloca semen una gota para diluirlo y se hace un extendido la vida til delos espermatozoides es de 24 horas

Cmara de new bauver

- dilucin semen 1 a 200 hasta la segunda raya-se coloca en la cmara de new bauver-se realiza el conteo en x

Vivos y muertos

Se le adiciona una gota de semen a una laminilla con nigrosina y se mezcla sedeja secar y se coloca en el microscopio y mirar si presenta acromosomas,cola doblada. Nos dio como resultado

-80% vivos

-20muertos

Caractersticas microscpicasColor = cremosoVolumen=8mlTextura= denso

Resultado del ejercicio

50% espermatozoides viables

1400*8=11.200.000.000*0.5=56.000.000.000

=280.52 pajillas


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BOGRAFIA

1. http://www.ceniap.gov.ve/publica/divulga/fd17/texto/coleccion.htm

2. http://www.puc.cl/sw_educ/prodanim/caracter/fi8.htm

3. http://www.produccionbovina.com/informacion_tecnica/inseminacion_artificial/05-evaluacion_de_semen_bovino_congelado.htm

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