Presentación de PowerPointE1cticas/Pr%E1ctica... · 2005-10-28 · Detección de la Cutina 9Hacer...
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Práctica 3: Identificación de Componentes de la Pared Celular Vegetal
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Práctica 3
Contenidos teóricosLa pared celularModificaciones
Desarrollo práctico
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La Pared Celular
Micrografía electrónica de transmisión de paredes celulares. La pared primaria es construida cuando la célula es joven. Las paredes secundarias, más gruesas, se incorporan cuando las células han dejado de crecer. (x 3000).
CitosolCitosol
CitosolCitosol
Membrana plasmáticaMembrana plasmática
Pared celularPared celular
Pared celularPared celularLámina mediaLámina media
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Interior célula 1
Interior célula 2
Pared celular primaria
Capas depared celularsecundaria
Membranacelular
Lamela media
Pared Celular:Capas
Micrografía electrónica de transmisión de paredes celulares. Se aprecian las diferentes capas que forman la pared en una célula adulta. La pared secundaria, al ser la última en formarse, aparece pegada a la membrana plasmática. (x 3000).
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Macrofibrillas de celulosa al m.e. (disposición desordenada y entrecruzada)
Pared celular primaria
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Microfibrillas de celulosa
Moléculasde celulosa
Hemicelulosas
Pectinasneutras
Pectinasácidas
GlicoproteínasLa matriz de celulosa
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La Pared Celular:Modificaciones
• Lignificación. • Cutinización.• Suberificación.• Gelificación.• Pigmentación.• Mineralización.
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La Pared Celular:Modificaciones
• Lignificación. Impregnación de la pared celular con lignina. Se sitúa entre las capas de celulosa por intususcepción.– Responsable de la gran dureza de
algunas paredes.– Aparece en células conductoras,
mecánicas y de sostén.– Maderas blandas y maderas duras.
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La Pared Celular:Modificaciones
• Suberificación: superposición (por aposición) de láminas de suberina(polímero de ácidos grasos saturados e insaturados).– Aparece fundamentalmente en
tejidos derivados del felógeno.– Confiere gran impermeabilidad y
defensa contra agentes químicos, microorganismos, etc.
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La Pared Celular:Modificaciones
• Cutinización: acumulación de cutina por aposición y por intususcepción.– Químicamente muy similar a la
suberina.– Aparece en células en contacto con el
medio externo.– Forma la cutícula que recubre las
hojas y algunos tallos.
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La Pared Celular:Modificaciones
• Gelificación: solubilización de la pectina y acumulación de gomas y mucílagos.– Se da en frutos carnosos maduros.
• Pigmentación: proceso de coloración de las paredes.– Debido a sustancias tánicas.
• Mineralización: impregnación con sales inorgánicas como sílice, carbonato cálcico, oxalato cálcico, etc.
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Identificación de:
Lignina,Suberina yCutina
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Detección de la LigninaHacer cortes finos de tallo de geranio o de hiedra con el micrótomo de congelación.Colocar un corte sobre un portaobjetos.Secar ligeramente con papel de filtro.Añadir una gota de floroglucina alcohólica al 1% y dejar secar al aire.Añadir una gota de ClH concentrado.Colocar un cubreobjetos y observar al microscopio.Los tejidos lignificados adquieren una coloración rojiza.
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Detección de la Suberina
Hacer cortes finos de tallo de geranio con el micrótomo de congelación.Verter los cortes en un cestillo metálico.Sumergir los cortes en alcohol de 70º durante 3 minutos.Sumergir los cortes en Sudan III durante CUT-20minutos.Sacarlos y lavarlos varias veces con agua destilada.Depositar los cortes ya tratados en una placa Petri con agua.Colocar en un portaobjetos, poner un cubre y observar.La suberina (en súber) se tiñe de color naranja.
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Detección de la CutinaHacer cortes finos de tallo de hiedra con el micrótomo de congelación.Verter los cortes en un cestillo metálico.Sumergir los cortes en Sudan III durante CUT-20 minutos.Sacarlos y lavarlos varias veces con agua destilada.Depositar los cortes ya tratados en una placa Petri con agua.Colocar en un portaobjetos, poner un cubre y observar.La cutina (en cutícula) se tiñe de color naranja.
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Micrótomo de congelación
Unidad de control
Cuchilla
Platina de congelación
Indicación del grosor (en micras) del corte
LIG SUB CUT
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Cortes de tallo de geranio obtenidos con el micrótomo de congelación
LIG SUB
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Colocar uno de los cortes sobre un portaobjetos con ayuda de un pincel
LIG SUB
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Con ayuda de una tira de papel de filtro secar el corte ligeramente
LIG SUB CUT
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Añadir un gota de floroglucinaalcohólica al 1% sobre el corte y dejar que se evapore.
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Añadir un gota de HClconcentrado sobre el corte.
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Tapar con un cubreobjetos y observar al microscopio.
LIG SUB CUT
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FLOEMA
XILEMA
MÉDULA
CORTEZA
Paredes secundarias lignificadas teñidas con floroglucina
CAMBIUM VASCULAR
X 400.
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FLOEMA
XILEMA
MÉDULA
CORTEZA
Paredes secundarias lignificadas teñidas con floroglucina
CAMBIUM VASCULAR
X 400.
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Verter los cortes sobre una cestilla metálica.
Cestillos metálicos
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Colocar el cestillo metálico con los cortes en etanol de 70º durante 3 minutos.
Etanol de 70º
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Colocar el cestillo metálico con los cortes en Sudán III durante CUT-20 minutos.
Sudán III
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Hacer 2 o 3 lavados con agua destilada hasta que esta salga incolora.
Agua destilada
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Verter los cortes ya tratados con Sudán III en una cápsula de Petricon agua.
Agua destilada
Cestillo invertido
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Con ayuda de un pincel colocar uno de los cortes tratados encima de un portaobjetos.
Cortes tratados con Sudán III
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CORTEZA
TRICOMAS
SÚBER
X 100.
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CORTEZA
Paredes celulares ricas en suberina
SÚBER
X 400.
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Cortes de tallo de hiedra obtenidos con el micrótomo de congelación
LIG CUT
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Verter los cortes de tallo de hiedra sobre un cestillo metálico.
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MÉDULA.
XILEMA.
FLOEMA.
CORTEZA.
EPIDERMIS CON CUTÍCULA.
X 100.
COLÉNQUIMA
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COLÉNQUIMA
CUTÍCULA (Capa rica en Cutina).
CORTEZA.
EPIDERMIS
X 400.
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1
2
3
45
1
2
3
APOSICIÓN INTUSUSCEPCIÓN
45
Disposición de las microfibrillas
LIG CUT