proteínas totales

La sangre está formada por una solución acuosa que contiene moléculas de tamaño variable y diversos tipos de elementos celulares. Los elementos formes de la sangre se encuentran formando una suspensión en agua denominada plasma. Aunque el plasma es el medio natural de

Las células sanguíneas, la mayoría de las determinaciones químicas se hacen en suero.

Las proteínas del plasma pueden clasificarse en dos grupos: las que son sintetizadas por el hígado (albúmina) y las inmunoglobulinas (producidas por las células plasmáticas de la médula ósea). El plasma humano tiene una en proteínas de 60 a 80 g/L (frecuentemente se expresa en g/dL; 6 a8 g/dl).

Casi la mitad de esta proteína plasmática es albúmina, cuyo rango de concentración es 35 a 45 g/L. La albúmina es una proteína de 62.000%D que actúa como proteína de reserva, además de importante transportador (ácidos grasos, bilirrubina y fármacos) y regulador osmótico. Es producida por el hígado. Su concentración aumenta en casos

de deshidratación y disminuye en casos de ascitis/edema y daño hepático severo.

La determinación de la concentración de proteínas en sangre puede ser llevada a cabo por diferentes métodos. En esta práctica vamos a utilizar uno de los métodos que se utilizan con más frecuencia: el método de Biuret.

En él la disolución de proteína se mezcla con un reactivo que determina que aparezca o se intensifique un color (azul) que se cuantifica midiendo la absorbancia a una determinada longitud de onda frente a un blanco de reactivo.

Marco teorico

Las proteínas totales son un conjunto de compuestos orgánicos macromoleculares, de un peso molecular elevado, que están formadas por aminoácidos que se unen entre si por enlaces peptídicos. Son introducidas en el organismo a través de los alimentos, donde se dividen en aminoácidos para formar posteriormente las nuevas proteínas a través del proceso conocido como síntesis de proteínas.

Las proteínas totales: Son el resultado de sumar: Alfa 1, Alfa 2, Beta gama globulina y Albumina. Las proteínas fraccionadas, al contrario que las proteínas totales y fraccionadas, son útiles a la hora de determinar estados anormales y enfermedades que pueden afectar a nuestro organismo.

Proteínas totales en suero.

Se miden en suero como parte de casi todos los análisis de química sanguínea. Su rango de referencia es de 6,4 a 8,2 g/dL. Su función es mantener la presión osmótica coloidal

del plasma. Esta presión evita las pérdidas de líquidos hacia los tejidos. El contenido en proteínas totales del suero depende del estado nutricional, funcionamiento hepático, funcionamiento renal, errores metabólicos y afecciones como mieloma múltiple. La deshidratación hace que todas las fracciones de proteínas aumente dando lugar a hiperproteinemia. La deshidratación puede ser resultado del descenso en el consumo o aumento de la pérdida de líquidos en enfermedades como el mal de Addison, acidosis diabética, diarrea grave o deshidratación por exposición a altas temperaturas. La hipoproteinemia se debe a un aumento de las pérdidas proteicas o a un bajo consumo de proteínas por inanición o malabsorción. Aumento de pérdidas: síndrome nefrótico (pérdida de albúmina a través de los túmulos renales dañados), hemorragias por traumatismos o extensas quemaduras.

Para la determinación de proteínas totales se utiliza el método de Biuret; cuyo nombre se debe al biuret, una molécula formada a partir de dos moléculas de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva a esta reacción. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos, presentando un máximo de absorción a 540 nm. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de proteínas totales presentes en la muestra.

Albumina

Constituye más de la mitad de todas las proteínas séricas y gran parte de la presión oncótica depende de ella. Transporta sustancias menos solubles como ácidos grasos, bilirrubina, hormonas, calcio, metales, fármacos y vitaminas. Su concentración de de 3,4- 5,0 g/dL. Sufre una reducción en procesos como afecciones hepáticas, glomerulonefritis o nefrosis, afectaciones gastrointestinales e inanición. También existe analbuminemia hereditaria, aunque se trata de un proceso poco común. Por su parte, su aumento puede ser indicativo de deshidratación

Marco teorico

La albúmina es una proteína que se encuentra en gran proporción en el plasma

sanguíneo, siendo la principal proteína de la sangre, y una de las más abundantes en el

ser humano. Es sintetizada en el hígado.

La concentración normal en la sangre humana oscila entre 3,5 y 5,0 gramos por

decilitro, y supone un 54,31 % de la proteína plasmática. El resto de proteínas presentes

en el plasma se llaman en conjunto globulinas. La albúmina es fundamental para el

mantenimiento de la presión oncótica, necesaria para la distribución correcta de los

líquidos corporales entre el compartimento intravascular y el extravascular, localizado

entre los tejidos. La albúmina tienecarga eléctrica negativa. La membrana basal

del glomérulo renal, también está cargada negativamente, lo que impide la filtración

glomerular de la albúmina a la orina.  En el síndrome nefrótico, esta propiedad es menor, y

se pierde gran cantidad de albúmina por la orina.

la albúmina es sintetizada en el hígado, órgano que además sintetiza otras proteínas plasmáticas como transferrina, ceruloplasmina, haptoglobina, alfa 1 glicoproteína ácida, factores de la coagulación, algunos factores del complemento, etc. Los niveles de estas proteínas son muy variables, de manera que sus concentraciones en el plasma podrían no reflejar el grado de enfermedad hepática, excepto en la insuficiencia hepática en estado terminal.Puede resultar útil la medida de la albúmina sérica como índice del grado de enfermedad hepática crónica o del avance de una enfermedad aguda en el curso de varias semanas. Por otro lado, los niveles de albúmina en la sangre no son generalmente un índice sensible de la función hepática, porque la degradación de la albúmina circulante disminuye siempre que esté deprimido el índice de síntesis, cualquiera sea el mecanismo del efecto anterior.Por lo común, los niveles de albúmina en el suero son bajos en pacientes con enfermedad crónica del hígado. Los cambios de la velocidad de degradación permitirán la concentración normal de albúmina en la sangre a pesar de las alteraciones de la síntesis. La deficiencia de albúmina y otras proteínas reflejan únicamente la severidad de la enfermedad hepática. El hígado normal produce de 12 a 15 gramos de albúmina por día y puede aumentar la producción en más de 2 gramos por día cuando hay pérdidas mayores de 3,5 gramos por día (Síndrome Nefrótico) para prevenir la hipoalbuminemia.

Determinación de proteínas totales:

El método utilizado se basa en la reacción de biuret en el cual los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ion cúprico Cu**, en medio alcalino, para da un complejo color azul violeta con máximo de absorción a 540 nm. El color formado se mide colorimétricamente, cuya intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en la muestra.

Colocar:

Mezclar e incubar durante 10 minutos a 37°C

Leer las absorbancias 540 nm en el espectrofotómetro llevado a cero con el blanco reactivo. El color resultante es estable por lo menos treinta minutos.

Fc = St. Proteínas g/dl

D.O. Standard

Valores de Referencia

Se determine el contenido de proteínas totales en sueros de personas sanas, de ambas sexo, con alimentación mixta normal y edades entre 17 y 40 años. Se obtuvo el siguiente rango:

Proteínas totales: 6,0 a 8,0 g/dL

F= 4.9g/dl / 1.275 = 3.843137255

3843137255*0.3410 = 1.310509804

Resultado de proteínas totales: 1.31

El verde de bromocresolftaleina, es un colorante indicador, que a ph3, 8 se encuentra de color amarillento. La albúmina al estar en contacto con el reactivo se protoniza haciéndolo menos ácido al medio, lo que causa el cambio de color indicador.

Procedimiento:

Mezclar e incubar por 30 min a temperatura ambiente. Leer a 620nm.

Calibrar a cero usando el tubo blanco correspondiente.

Calculo:

Factor = [S tan dard]

Abs. St

Albumina (g/dl) = abs. Muestra x Factor

Factor = 2.7g/dl / 0.723 = 3.734439834

3.734439834*1.021=3.812863071

Resultado de albumina: 3.81g/dl

BM 0.911

Blanco 0.996

Standar 1.275

Muestra 0.3410

BM 0.008

Blanco 0.212

Standar 0.723

Muestra 1.021

Valores normales: 3.5- 5.0 g/dl

Conclusiones:

Las proteínas se necesitan para la mayoría de las funciones normales del cuerpo como el mantenimiento, crecimiento, reproducción, lactación y producción del pelo.

El déficit de proteína en la dieta reduce las reservas en sangre, hígado y músculos y predisponen a los animales a padecer una variedad de enfermedades graves o incluso fatales.

Durante el desarrollo de práctica realizada se procedió aplicar los principales métodos que se usan en el laboratorio para saber qué cantidades se encuentran presentes en una solución determinada.

A través de la separación de las proteínas por medio de la curva de calibración se pudo observar que durante el experimento realizado, se obtuvieron datos normales.

Cuestionario :

1)¿ diga el fundamento de la determinación de proteínas totales y albuminas ?

Proteínas totales :

Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico en medio alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 540 nm, cuya intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en la muestra.

Albumina :

La albúmina reacciona específicamente (sin separación previa) con la forma aniónica de la 3,3',5,5'-tetrabromo cresolsulfon ftaleína (BCG). El aumento de absorbancia a 625 nm respecto del Blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de albúmina presente en la muestra.

2)¿ cuales son los principales tipos de proteínas plasmáticas del ser humano ?

1. Fibrinógeno: se forma en el hígado y juega . un papel importante en la coagulación de la sangre. Debido a su peso molecular elevado, es uno de los factores que condiciona la viscosidad sanguínea.

2. Albúmina: de peso molecular bajo, se forma predominantemente en el hígado, pero también, si bien en menor cantidad, en otros tejidos. Es responsable principalmente por la

presión coloido-osmótica del plasma. Otra de sus funciones consiste en el transporte de sustancias. Al unirse con las hormonas, vitaminas, bilirrubina, medicamentos, etc., las lleva por la circulación a sus órganos efectores.

3. Globulinas: son producidas principalmente en el hígado (80%) y en los linfocitos (20%). Se conocen tres tipos de globulina: alfa, beta y gamma. Las primeras (gluco y lipoproteínas) son las transportadoras del angiotensinógeno, de las vitaminas liposolubles y del cobre (ceruloplasmina). Las betaglobulinas (lipoproteínas), incluyen, entre otras, la transferrina y las transportadoras de vitaminas y hormonas. Las gammaglobulinas (producidas por las plasmazellen, plasmocitos y linfocitos) son, en su mayor parte, anticuerpos. Son llamadas también euglobulinas.

3) ¿Cuál es la importancia de proteínas plasmáticas del ser humano ?

Ayudan al balance de Fluídos (Agua y electrolitos) � Regulan el equilibrio ácido/base � � Respuesta de fase aguda crean Anticuerpos Construcción y reparación de tejidos � � Ayudan a la Coagulación

4)¿ Que tipos de proteínas constituyen las globulinas?

Principales grupos de globulinas

- globulinas alfa 1 y 2

- globulinas beta

- globulinas epsilon

Globulinas alfa 1

La alfa 1 o antitripsina: Es la encargada de controlar la acción de las enzimas lisosomales.

La TBG: Se encarga de fijar la hormona tiroidea. Transporta T3 y T4.

La alfa 1 glucoproteína ácida: También conocida como orosomucoide, es un reactivo de fase aguda sintetizado en el hígado como respuesta a la inflamación y daño del tejido.

La RBP: Es la hormona fijadora de retinol, la cual transporta vitamina "A". Normalmente se asocia a la prealbúmina.

Globulinas alfa 2

El grupo de las globulinas alfa 2 está compuesto por las siguientes:

La macroglobulina (alfa 2): La función primordial de ésta es neutralizar las enzimas proteolíticas.

La haptoglobina: Es la encargada de fijar la Hb plasmática de los eritrocitos, y la transporta al hígado para que no se excrete por la orina.

La ceruloplasmina: Transporta y fija el 90 por ciento del cobre sérico.

La eritropoyetina: Sintetizada en el riñón ante una hipoxemia, es la resposable de la formación de eritrocitos y plaquetas.

Globulinas beta

La hemopexina: Es la que fija y transporta el grupo hemo de la hemoglobina (Hb) hacia el hígado.

La transferrina: Transporta hierro del intestino a depósitos de ferritina en diferentes tejidos, y de allí a donde sean necesarios.

Nota: Es un reactivo de fase aguda.

El complejo C3 del complemento: Son proteínas séricas que actúan en inmunidad inespecífica, provocando la lisis de distintas bacterias.

Globulinas gamma

Corresponden a las inmunoglobulinas séricas o anticuerpos (IgA, E, G, M).

5)¿Qué importancia tiene la determinación de proteínas totales y albuminas para un nutricionista?

Es importante debido a que si los valores salen alterados nos indicaría una enfermedad y tendríamos que variar la dieta de esta persona para no complicar más su estado de salud.