OBJETIVOS Elaborar un medio de cultivo adecuado para el cultivo de apio

Realizar la desinfeccin de las semillas de apioEnsayar el cultivo in vitro de las semillas de apio

El cultivo in vitro Del apio

Permite obtener plantas libres de enfermedades (hongos, bacterias, micoplasmas, virus) Permite optimizar el uso de factores ambientales y nutricionales Puede conservar material biolgico por periodo de tiempo prolongados. Se puede hacer fitomejoramiento

desinfectadas con hipoclorito de sodio y alcohol (70%)

86 % de cultivos estriles

se las sembr utilizando el medio de cultivo M&S

M&S con un contenido adicional de auxinas y citoquininas (5mg/L)

condiciones de luz adecuadas

El apio (Apium graveolens)Introduccin Caractersticas morfolgicasCaractersticas morfolgicas Familia Umbelferas Planta silvestre

Tallo grueso, hueco estriado Compuesto por pencas varan color de claros a intensos Altura25 a 30 cm y 30 a 60 cm Color verde oscuro Sabor amargo agradable

apioEl apio es una de las hortalizas ms ligeras que existen en la naturaleza ya que el 95% de su composicin es agua, adems de contener tan slo 16 caloras cada 100 gramos, resultando un alimento saludable y refrescante. Pero la caracterstica por la que mejor se conoce es su funcin diurtica debida a su riqueza en aceites esenciales como apiol, limoneno, selineno y asparagina, que favorecen la actividad de diversos rganos internos como el hgado o los riones. Es un alimento regulador en todos los niveles, al que recurren los especialistas en diettica para incluirlo en los programas de prdida de peso. Su composicin proporciona adems poder antibacteriano, ayudando a combatir ciertas afecciones renales. Otra de las propiedades de este alimento es eliminar o regular los niveles de cido rico por lo que resultar beneficioso para los enfermos de reuma, gota, diabticos, o los que padezcan de piedras en el rin o la vescula. Tambin es rico en sales minerales por lo que en ensaladas, acompaado de otras hortalizas como la cebolla, ayudar a realizar la digestin incrementando los jugos intestinales, confirindole adems propiedades como laxante suave. Sus niveles de vitamina B1, B2 y B6 le otorgan beneficios para la vista, los huesos y el cabello, as como la riqueza en minerales (sobre todo potasio) ayudan a la transmisin y generacin del impulso nervioso y la actividad muscular. El consumo frecuente de esta hortaliza proporciona cierta regulacin en el aparato circulatorio, rebaja el colesterol, combate la hipertensin y evita la aparicin de enfermedades relacionadas con el corazn.

Siembra in vitroEl cultivo in vitro se define como el cultivo en un medio nutritivo, en condiciones estriles, de plantas, semillas, rganos, explantos, tejidos, clulas y protoplastos de plantas superiores. Estas tcnicas se caracterizan porque: Ocurren a microescala, sobre todo en una superficie pequea; Se optimizan las condiciones ambientales, en lo que se refiere a factores fsicos, nutricionales y hormonales; Se excluyen todos los microorganismos (hongos, bacterias y virus), as como tambin las plagas de las plantas superiores (insectos y nematodos). Generalmente no se reproduce el patrn normal de desarrollo de una planta, resultando que un tejido aislado puede dar origen a un callo o puede desarrollarse de otras formas poco usuales (por ejemplo, formacin de rganos, embriogenesis

somtica). La capacidad de cultivar protoplastos o clulas individuales permitemanipulaciones que antes era imposibles. El nombre de cultivo in vitro (que generalmente quiere decir en vidrio), se utiliz porque, al menos inicialmente, se usaron recipientes de vidrio para el cultivo.

Hormonas y reguladores del crecimiento en siembra in vitro de ApioEn la siembra in vitro de las semillas de apio utilizamos: Auxinas: promueven la elongacin celular, la formacin de callos y races adventicias, inhiben la formacin de brotes axilares adventicios y, a veces, inhiben la embriognesis. Son varias las auxinas que existen en el tejido vegetal, siendo el cido indolactico (AIA) la ms relevante en cuanto a cantidad y actividad. Otros como el cido indolacetonitrilo, o la indolacetamida estn presentes en menor cantidad y tienen poca actividad en relacin al AIA. Las auxinas pueden estar libres o bien unidas a azcares, steres, amidas; las molculas unidas a otro compuesto no son activas pero pueden serlo si se liberan. La mayor parte de las auxinas provienen del aminocido triptofno; el zinc (Zn) es un elemento crtico para que ocurra lo anterior, de tal forma que una sintomatologa visual de falta de cinc (Zn) en realidad es una falta de auxina para estimular crecimiento.

Citoquininas: son un grupo de fitorreguladores que gobiernan la divisin celular y la diferenciacin en tejidos vegetales, participan en el control del desarrollo y la senescencia. La N6-benciladenina pertenecen la activa citoquinina sinttica 6 -bencilaminopurina (BAP) y unos pocos derivados naturales hidroxilados.

PREPARACION DEL MEDIOSolucin stock Stock I Stock II Componentes NH4NO3 KNO3 Mg SO4. 7H2O Mn SO4. H2O Zn SO4. 7H2O Cu SO4. 5H2O Ca Cl2. 2H2O KI Co Cl2. 6H20 K H2 PO4 H3 BO3 Na2MoO4. 2H2O Fe SO4. 7H2O Na2 EDTA cido nicotnico Piridoxina Tiamina Glicina Mioinositol Concentracin litro 1,650 g 1,9g 0,181g 0,017g 8,6g 0.0025g 0,332g 0.083g 0.0025g 0.17g 0.62g 0.025g 2.784g 3.724g 0.05 0.05 0.1 0.2 2.5 Gramos / Cantidad para preparar 20 ml 10 ml

Stock III

10 ml

Stock IV

10 ml

Stock V Vitaminas

10 ml 5 ml 5 ml 1 ml 20 ml 10 ml

Medir la cantidad correcta de los componentes del medio correspondientes a los 500 ml de medio que se preparoPara Murashige y Skoog: aadir la cantidad de 15 g de azcar Aadir una barra magntica y una pequea cantidad de agua destilada y mezclar hasta que se disuelva. Llenar el envase con agua destilada hasta tener 500 ml y agite continuamente. Medir el pH y ajustarlo a 5.6 usando HCl o NaOH y mezclando completamente con la barra magntica. Aadir 3 gramos de agar al medio y mezclar para que se disperse. Aadir fitohormonas Colocar 50 ml de medio en frascos pequeos, cerrar la tapa de la botella sin asegurarla totalmente, cubrir los frascos con papel aluminio y llevarlos al autoclavado.

Esterilizar todo en autoclave (20 minutos a 121 C).

RESULTADOS

Da 1 6 12

Presencia de brotes de la planta Ninguno Ninguno Ninguno

Contaminacin Cero Cero Aparecimiento contaminacin frasco cero

Estado cultivo

del

medio

de

Un poco liquido Se estabilizo un poco leves de Se estabilizo el estado en un del medio menos en el frasco 5,6 Se estabilizo casi todos los medios de cultivo Medios de cultivo estado normal Estado normal Estado normal Estado normal Estado normal en

18 24 26 30 30 36

ninguno ninguno ninguno ninguno ninguno Ninguno

Contaminado un frasco

Contaminado un frasco Contaminado un frasco Contaminado un frasco Contaminado un frasco

DISCUSIN:Despus de la siembra este cultivo de apio se mantuvo una inspeccin cada 4 a 6 das, con temperatura constante y con luz 10 horas cada da, con lo cual hemos decidido que factores externos no incidieron en el crecimiento del perejil, lo cual nos deja solo una variable, que le medio usado murashige skoog, no estuvo en buenas condiciones optimas para garantizar el crecimiento de nuestro cultivo, al parecer estaba caducado y alm acenado de una manera errnea No hubo presencia de crecimiento, ya que el medio que nos proporciono el laboratorio estaba caducado y no se encontraba en bu en estado y este se vitrifico. Las fitohormonas que usamos fueron auxinas: AIA la cual se la uso para promover el desarrollo de races laterales y adventic ias, lo cual no sucedi porque el medio se vitrifico y nunca se estabilizo, otro factor la iluminacin solo fue horizontal el fototropismo que en un factor indispensable en el crecimiento de la planta no sucedi correctamente ya que los frascos estaban pegados uno a otro y no entro la luz horizontalmente. Esto determino que no exista el aparecimiento de races y un posterior enraizamiento. Las fitohormonas BAP permiten el aparecimiento y desarrollo de brotes, sin embargo por lo que el medio ocurri una vitrifica cin del medio no hubo crecimiento. Tambin hay que citar al momento que la esterilizacin la hicimos incorrectamente lo que hizo que las semillas rechacen y ne utralizan a las fitohormonas que estaban en el medio. Un medio se contamino por una esterilizacin no adecuada por una posible falla en el proceso de siembra de las semillas apio. No se realizo un estudio de viabilidad de las semillas de paio La esterilizacin fue efectiva en un 86 %. El medio no dio las condiciones para un crecimiento de las semillas de apio el cual estaba caducado hace bastante tiempo nunc a fue estable , esto nos llevo a que el medio caiga en un estado de vitrificacin. La vitrificacin del medio genero que los nutriente y a la vez las fitohormonas no se Puedan absorber de la misma forma y en las cantidades necesarias que permitan el desarrollo de las semillas No hubo un estudio de viabilidad de semillas de apio, lo que provoco este resultado, no hubo crecimiento.