RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS

OBJETIVOS:

Identificar las proteínas existentes en las soluciones problemas a través de pruebas bioquímicas.

Identificar los aminoácidos aromáticos que conforman las proteínas.

FUNDAMENTO TEORICO:

Identificación de proteínas mediante la reacción el Biuret: La presencia de proteínas

en una mezcla se puede determinar mediante la reacción del Biuret. El reactivo de

Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o

KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a

la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de

electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.

La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de urea

(H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción, común a

todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos consecutivos en sus

moléculas.

Espectrofotometría. Principios básicos: A diferencia de las pruebas realizadas

anteriormente, la reacción de Biuret es cuantificable, es decir, a mayor concentración de

proteínas, mayor intensidad de color violeta. Esta reacciones, en las que el color

formado es proporcional a la cantidad de sustancia se llaman reacciones

colorimétricas.

Midiendo la intensidad de color se podría conocer la concentración de la sustancia que lo produce. Para ello se aplican técnicas fotométricas, empleando un aparato llamado colorímetro (si mide sólo un determinado color) o espectrofotómetro (si realiza una medida de todo el espectro de colores).

C

NH

C H

C

NH

C H

R

R

O

O C

N H

CH

C

N H

CH

R

R

O

O

C u2 +

Identificación de cadenas Laterales Aromáticas - Reacción Xantoproteica:

Es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando

las proteínas son tratadas con acido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo

en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos (Aromáticos),

especialmente en presencia de tirosina.

MATERIALES Y REACTIVOS:

Clara de Huevo Tubos de ensayo Vaso de precipitados Gradilla Pipetas

Varillas de vidrio Acido nítrico concentrado Reactivo de Biuret: Hidróxido

de sodio al 20% y Sulfato cúprico al 1%

METODOLOGIA:

1. Reacción del Biuret: Separar la clara del huevo en un vaso de precipitado Colocar a un tubo de ensayo 2 a 3 cc. de albúmina de huevo. Colocar a otro tubo d ensayo agua. Añadir 1 ml de Reactivo de Biuret a cada uno de los tubos. Observar y anotar la coloración que aparezca.

2. Reacción Xantoproteica: Colocar en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de solución problema (clara de

huevo). Colocar a otro tubo de ensayo agua. Añadir 1 cc. de HNO3 y agitar. Calentar a baño maría Enfriar en agua fría.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN:

REACCION DE BIURETPRIMER TUBO (albumina) SEGUNDO TUBO (agua)

Violeta (Biuret +) Celeste bajito (Biuret -)REACCION XANTOPROTEICA

PRIMER TUBO (albumina) SEGUNDO TUBO (agua)Anillos aromáticos amarillos (+) Nose formaron los anillos (-)

1. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína

Para saber si una sustancia desconocida, es una proteína se utiliza el Reactivo de Biuret ya que por medio de este se puede detectar la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos.

2. ¿Qué coloración da la reacción de Biuret

El color violeta indica la presencia de proteínas.

3. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción de Biuret La reacción de Biuret reacciona con cualquier proteína, liquida o solida.

Entonces si puede dar la ración de Biuret con una proteína coagulada.

4. Si se realiza la reacción de Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿ Es positiva o negativa

La glicina no reacciona con el reactivo de Biuret ya que esta de forma libre y no tiene enlaces peptídicos para poder reaccionar. Entonces la glicina es negativa.

5. Como podríamos saber si la proteína está formada por un aminoácido que poseen en su cadena R (lateral) un grupo aromático o lineal

Cuando las proteínas tienen aminoácidos portadores de grupos bencénicos la reacción Xantoproteica da como resultado la formación de unos anillos aromáticos amarillos