reglas, normas, equipo y material

OPERACIONES BASICAS DE LABORATORIO

ALUMNO: Victor Hugo López BarragánMAESTRO: M.C. César Moreno

Víctor Hugo López Barragán


REGLAS, NORMAS, MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

OBJETIVOS

El principal objetivo al desarrollar el presente trabajo es que el alumno aprenda cuales son los riesgos a los que puede estar expuesto durante su aprendizaje en el laboratorio; saber resolver los posibles inconvenientes y accidentes; crear en el alumno una actitud mental lógica y de control ante cualquier accidente y por sobre todas las cosas, PREVENIR en lo posible todos los accidentes. Esto se logra con conciencia y conocimiento.

INTRODUCCIÓN

El manejo sin riesgos de un laboratorio es responsabilidad de su director. Esta responsabilidad puede delegarse, reasignarse, abandonarse o ignorarse, pero cuando se produce un accidente vuelve siempre sin excepción a recaer en el director del laboratorio. Este último debe desarrollar y aplicar un programa de seguridad operativa que minimice con eficacia los riesgos francos inherentes al laboratorio para todos los que están expuestos directa o indirectamente a ellos. Los riesgos potenciales del laboratorio pueden referirse a materiales infecciosos, químicos o radioactivos y a las instalaciones físicas de la institución. En este



resumen nos ocuparemos de los riesgos biológicos relacionados con la microbiología. Un buen programa de seguridad para un laboratorio debe abarcar consideraciones de almacenamiento, uso y eliminación de materiales riesgosos químicos y radiactivos, operación y mantenimiento de las instalaciones, capacitación del personal y vigilancia médica.

Debemos destacar que los riesgos de exposición a los agentes infecciosos no se limitan al personal del laboratorio microbiológico.

EVALUACIÓN DE LOS RIESGOS

Es difícil cuantificar el riesgo que supone trabajar con agentes infecciosos en un laboratorio. El riesgo individual aumenta previsiblemente junto con la frecuencia y el nivel de contacto con el agente.

Una preocupación fundamental en el laboratorio que trabaja con muestras y agentes de diversos origenes (microorganismos, animales, virus) es el riesgo de exposición e infección que corre el personal especializado y auxiliar que trabaja o entra en el laboratorio. En última instancia los riesgos están bajo la influencia de las interrelaciones, a menudo imprevisibles, de agente, huéspedes y actividades. los factores aplicables al agente incluyen virulencia, dosis infecciosa, vías de infección, toxigenicidad y espectro del huésped. En cuanto al huésped, las variables que influyen en el riesgo pueden incluir edad, sexo, raza, embarazo, presencia y nivel de anticuerpos y medicación. Finalmente, el tipo de actividad (producción, investigación, etc.) puede afectar notablemente el riesgo para el personal debido al tipo, la cantidad y la concentración de agentes manejados, manipulaciones utilizadas en el trabajo con el agente y efectividad de los equipos de contención primaria y secundaria y de las prácticas de laboratorio. Las instalaciones, los equipos de seguridad y las prácticas operativas descriptos y referenciados en este apunte tienen en común el objetivo de minimizar el riesgo de exposición, infección, enfermedad en el personal de laboratorio y accidentes en general.

ACCESO RESTRINGIDO

El acceso a los laboratorios que manejan materiales peligrosos (infecciosos, tóxicos, radiactivos, inflamables) debe ser restringido, excepto para el personal que trabaja o que desempeña con regularidad servicios auxiliares en ellos. Cualquier otra persona debe entrar en ellos con la autorización explícita del supervisor o encargado general. Toda persona que entre al laboratorio debe conocer los riesgos a que se expone y debe cumplir los requisitos que le sean aplicables, como inmunizaciones específicas y el uso de dosímetros, anteojos de seguridad y ropa o dispositivos de protección.

INFECCIONES DE LABORATORIO



La inmensa mayoría de los casos de infecciones (según las estadísticas) tuvo en común antecedentes de "trabajo con el agente" en el laboratorio. En los casos resultantes de accidentes conocidos, las causas principales fueron aspiración oral por pipeta, autoinoculación con agujas y jeringa, exposición a los aerosoles creados por vaporización de aguja y jeringa, o separación entre estas últimas, accidentes de centrifugación y mordedura de animales.

Casi todos los accidentes conocidos pudieron haberse evitado con una combinación de buena técnica microbiológica, equipos de seguridad apropiados y conocimiento por parte del interesado. Por ejemplo, los accidentes con pipeta por boca se evitan usando sistemas automáticos o con bulbo para manipular todos los líquidos infecciosos o tóxicos. En realidad el uso de pipetas bucales debe prohibirse formalmente en todos los laboratorios que emplean materiales tóxicos o infecciosos. El uso de agujas y jeringas debe evitarse excepto para la inyección parenteral de líquidos o la aspiración de líquidos, de hombres o animales. Las agujas y jeringas nunca deben usarse para sustituir a las pipetas.

Los accidentes centrífugos, que pueden producir aerosoles infecciosos y proyección de partículas traumatizantes, también son evitables. La seguridad centrifuga incluye una combinación de uso bien informado y correcto de los equipos (selección de tubos y tazas de centrifugación compatibles, buenos procedimientos de balance de aceleración y desaceleración) y selección y uso de dispositivos apropiados de contención física. Las tazas centrifugas de seguridad con cubiertas selladas son los dispositivos de contención de más amplia aplicación a los centrifugadoras. Una alternativa del uso de tazas de seguridad es la colocación de los aparatos en cámaras de escape de gases o gabinetes biológicos de seguridad que operan bajo presión negativa y exhalan sus gases por los filtros.

PLAN DE EMERGENCIA

Los laboratorios que trabajan con agentes infecciosos deben contar con planes de emergencias para anticiparse al tipo de accidentes más probables dentro de las instalaciones. Es básica en casi todos los laboratorios la posibilidad de derrames de material infeccioso y de incendios. Es responsabilidad del supervisor del laboratorio valorar las probabilidades de accidentes y emergencias de la operación del laboratorio, preparar un plan de emergencia, instruir el personal en los procedimientos aplicables y hacer ensayos del uso y la aplicación de dichos procedimientos y equipos.

Los componentes de un plan de emergencia son: establecimiento de criterios para la evacuación inmediata del laboratorio en caso de accidentes o emergencias que pueden contaminar el área con agentes infecciosos o sustancias químicas tóxicas; instalar un sistema para comunicar accidentes o emergencias al supervisor y/o al personal de seguridad; desarrollar la capacidad de valoración de accidentes identificando el personal de recursos; disponer la evaluación médica y la debida vigilancia y tratamiento correcto del personal expuesto, y desarrollar o identificar



procedimientos y recursos para realizar si es necesario la descontaminación o limpieza a fondo de las instalaciones.

Con respecto a la prevención de incendios, es necesario prestar atención especial al uso, el almacenamiento y la eliminación de solventes inflamables, el uso de gases comprimidos inflamables y la seguridad eléctrica. Extinguidores apropiados de incendios debe instalarse en los laboratorios, instruyendo a su personal sobre su uso.

PROCEDIMIENTOS DE DESCONTAMINACIÓN

Es básica para la operación de laboratorios la capacidad de manejar y descontaminar con eficiencia y efectividad materiales y desechos potencialmente infecciosos recibidos o generados en el laboratorio. Estos materiales y desechos incluyen muestras, medios y cultivos de tejidos inoculados, todos los cultivos viables de agentes microbianos, animales de experimentación (incluso huevos embrionarios) y todos los artículos de vidrio, instrumentos, equipos, superficies y espacios usados para manejar dichos materiales.

En el laboratorio no existe ningún sustituto práctico del autoclave a vapor para descontaminar muchos tipos de desechos infecciosos. Sin embargo, el autoclave a vapor no es un elemento a prueba de fallas. Su efectividad depende de muchas variables, como un personal que sepa usarlo debidamente y cargarlo como es debido, su vigilancia regular biológica y física y su mantenimiento apropiado. Los procedimientos operativos que se usen en cada instalación deben basarse en el tipo de materiales que van al autoclave y en la eficacia probada de tiempo-temperatura-presión contra los microorganismos efectores o simulantes.

Los preparados de microorganismos simulantes biológicos con características definidas de termosensibilidad (Bacillus stearothermophilus) se venden comercialmente y se recomiendan para la vigilancia regular de autoclave.

Otros métodos de descontaminación incluyen el uso de procedimientos físicos (calor seco, ebullición, irradiación, rayos ultravioletas) y químicos (fenólicos, hipocloritos, formaldehído), todos ellos con sus inherentes ventajas y limitaciones.

Si a consecuencia de operaciones de laboratorio, accidentes o derrames de materiales infecciosos, hay evidencias o indicaciones para la descontaminación de todo el laboratorio, la fumigación gaseosa puede usarse con eficacia. El gas formaldehído, generado por calentamiento o atomización de formalina (2 ml de formalina por pie cúbico: 0,028 m3, de espacio) o por calentamiento de para-formaldehído en polvo (0,3 g/pie3 de espacio), son algunos de los fumigadores gaseosos más comunes y efectivos. El formaldehído tiene amplia gama de actividad y su uso es más económico. Es más eficaz con temperaturas controladas (21°C) y humedad relativa también fija (70 %). El formaldehído gaseoso tiene las evidentes desventajas de su olor fuerte, sofocante e irritante y de su polimerización sobre las superficies. El formaldehído es explosivo en



concentraciones de 7 a 73 %, pero su uso recomendado corresponde aproximadamente al 10 % de la concentración explosiva mínima.

RECEPCIÓN DE MANEJO DE MUESTRAS

Es lógico suponer que todos las muestras son infecciosas, y es prudente manejar estos materiales en forma tal que permita impedir razonablemente la exposición franca del personal a los patógenos cuya presencia es más probable.

En consecuencia, y como precaución mínima, los laboratorios deben utilizar numerosas prácticas dictadas por el simple sentido común en la recepción y el manejo de todas las muestras. Por ejemplo, es necesario capacitar personal y reservar un área para recibir, abrir, registrar y distribuir dentro del laboratorio las muestras que ingresan a él. Esta área de recepción debe estar bien iluminada y provista de superficies de trabajo impermeables al agua y de fácil limpieza. El personal debe estar alerta a la probabilidad de muestras mal preparadas, dañadas o con filtraciones, derrames o pérdidas, a la posibilidad de exposición a agentes infecciosos en estas muestras, y debe conocer los procedimientos de descontaminación que es necesario practicar en caso de muestras que sufran pérdidas. El personal debe usar túnicas de laboratorio o uniformes apropiados para proteger la piel y la ropa de calle de la exposición a agentes infecciosos.

Los guantes de goma representan un nivel adicional de protección para el personal que trabaja en esta área. Las prácticas de higiene personal deben incluir el lavado de manos después de tocar recipientes de muestras, e impedir comer, beber, fumar y guardar alimentos en el área. Las prácticas de limpieza doméstica deben asegurar un área de trabajo limpia y sin obstáculos, con la limpieza y desinfección de las superficies de trabajo cuando finalizan las actividades e inmediatamente después de derrames de material infecciosos. El uso de servilletas de papel absorbente forradas con plástico facilita la limpieza de la superficie de trabajo después de su uso habitual o en caso de derrames. Los desechos, contaminados o no deben quitarse diariamente del área de recepción y descartarse o reciclarse después de una apropiada descontaminación.

Por último la seguridad en el laboratorio es mucho más que una serie de advertencias; es una forma de trabajo, es un respecto por los reactivos y microorganismos peligrosos, es un conocimiento sobre reactividades explosivas y es la responsabilidad con que cada individuo encara su tarea.

El principal objetivo al desarrollar el presente trabajo es que el alumno aprenda cuales son los riesgos a los que puede estar expuesto durante su aprendizaje en el laboratorio; saber resolver los posibles inconvenientes y accidentes; crear en el alumno una actitud mental lógica y de control ante cualquier accidente y por sobre todas las cosas, PREVENIR en lo posible todos los accidentes. Esto se logra con conciencia y conocimiento.

REGLAS GENERALES PARA LA SEGURIDAD EN EL LABORATORIO



SIEMPRE

Use protección para los ojos.

Use ropa adecuada.

Lave sus manos antes de dejar el laboratorio.

Conozca las normas y procedimientos de seguridad para cada acción a realizar.

Asegúrese que su aparato esté bien ensamblado.

Manipule los reactivos y cepas con cuidado.

Mantenga prolija su área de trabajo.

Esté atento a eventualidades.

Pregunte a su instructor si tiene alguna duda.

NUNCA:

fume en el laboratorio.

NUNCA:

coma en el laboratorio

NUNCA:

inhale, deguste o huela imprudentemente reactivos o medios de cultivos

NUNCA:

vagabundee o distraiga a sus compañeros.

NUNCA:

corra dentro del laboratorio.

NUNCA:

debe quedarse trabajando solo.

NUNCA:



lleve a cabo experiencias no autorizadas.

Muchas de estas reglas no necesitan explicación adicional. Simplemente, use su sentido común ( a veces, el menos común de los sentidos).

NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Normas generales

No fumes, comas o bebas en el laboratorio.

Utiliza una bata y tenla siempre bien abrochada, así

protegerás tu ropa.

Guarda tus prendas de abrigo y los objetos personales en un

armario o taquilla y no los dejes nunca sobre la mesa de

trabajo.

No lleves bufandas, pañuelos largos ni prendas u objetos que

dificulten tu movilidad.

Procura no andar de un lado para otro sin motivo y, sobre

todo, no corras dentro del laboratorio.

Si tienes el cabello largo, recógetelo.

Dispón sobre la mesa sólo los libros y cuadernos que sean

necesarios.

Ten siempre tus manos limpias y secas. Si tienes alguna

herida, tápala.

No pruebes ni ingieras los productos.

En caso de producirse un accidente, quemadura o lesión,

comunícalo inmediatamente al profesor.

Recuerda dónde está situado el botiquín.

Mantén el área de trabajo limpia y ordenada.

Normas para manipular instrumentos y productos

Antes de manipular un aparato o montaje eléctrico,

desconéctalo de la red eléctrica.



No pongas en funcionamiento un circuito eléctrico sin que el

profesor haya revisado la instalación.

No utilices ninguna herramienta o máquina sin conocer su

uso, funcionamiento y normas de seguridad específicas.

Maneja con especial cuidado el material frágil, por ejemplo, el

vidrio.

Informa al profesor del material roto o averiado.

Fíjate en los signos de peligrosidad que aparecen en los

frascos de los productos químicos.

Lávate las manos con jabón después de tocar cualquier

producto químico.

Al acabar la práctica, limpia y ordena el material utilizado.

Si te salpicas accidentalmente, lava la zona afectada con

agua abundante. Si salpicas la mesa, límpiala con agua y

sécala después con un paño.

Evita el contacto con fuentes de calor. No manipules cerca de

ellas sustancias inflamables. Para sujetar el instrumental de

vidrio y retirarlo del fuego, utiliza pinzas de madera. Cuando

calientes los tubos de ensayo con la ayuda de dichas pinzas,

procura darles cierta inclinación. Nunca mires directamente al

interior del tubo por su abertura ni dirijas esta hacia algún

compañero. (ver imagen)

Todos los productos inflamables deben almacenarse en un

lugar adecuado y separados de los ácidos, las bases y los

reactivos oxidantes.

Los ácidos y las bases fuertes han de manejarse con mucha

precaución, ya que la mayoría son corrosivos y, si caen sobre

la piel o la ropa, pueden producir heridas y quemaduras

importantes.

Si tienes que mezclar algún ácido (por ejemplo, ácido

sulfúrico) con agua, añade el ácido sobre el agua, nunca al



contrario, pues el ácido «saltaría» y podría provocarte

quemaduras en la cara y los ojos.

No dejes destapados los frascos ni aspires su contenido.

Muchas sustancias líquidas (alcohol, éter, cloroformo,

amoníaco...) emiten vapores tóxicos.

EQUIPO Y MATERIAL

1. Equipo de laboratorio

En la elaboración del equipo del laboratorio se utilizan los siguientes materiales:

• Metales: Los más utilizados son el hierro y sus aleaciones, cobre, níquel, platino, plata y plomo. Con estos metales se fabrican soportes, pinzas, anillos, trípodes, triángulos, rejillas, sacacorchos, recipientes para agua, crisoles, espátulas, mecheros y electrodos, entre otros.

• Porcelana: Se fabrican cápsulas, crisoles, navecillas, espátulas, embudos, triángulos.

• Madera: Gradillas, soportes de pie para tubos y embudos.

• Corcho: Se usa principalmente en la elaboración de tapones.

• Caucho: Para fabricar mangueras y tapones.

• Asbesto: Se emplea en la fabricación de mallas, guantes y como aislante térmico.

• Teflón: Utilizado en la fabricación de mangueras, válvulas, llaves para buretas, recipientes, empaques entre otros.

• Vidrio: Es uno de los materiales más usados en el laboratorio. Aquél que se destina a la fabricación de equipo de laboratorio debe ser resistente a los ácidos y a los álcalis y responder a determinadas exigencias térmicas y mecánicas.El material de vidrio de laboratorio puede clasificarse en dos categorías:

• Vidriería Común. Comprende los vasos de precipitados, los erlenmeyers, los balones de fondo plano y de fondo redondo, los embudos (al vacío, por gravedad, de decantación), tubos de ensayo, condensadores, frascos con tapón esmerilado, vidrios de reloj, tubos de Thiele y otros (figura 1).



• Vidriería Volumétrica (de alta precisión). Este material suele ser más costoso debido al tiempo gastado en el proceso de calibración. Comprende una serie de recipientes destinados a medir con exactitud el volumen que “contienen” o el volumen que “vierten”. En los recipientes volumétricos aparece señalado si el recipiente es para verter o para contener, lo mismo que la temperatura a la cual ha sido calibrado (figura 2).

Figura 1. Equipo básico de laboratorio (I)



Figura 2. Equipo básico de laboratorio (II)

La mayoría de la pipetas y las buretas están diseñadas y calibradas para “verter” líquidos, en tanto que los matraces o balones aforados están calibrados para contenerlos.

1.1 Pipetas

Las pipetas están diseñadas para trasvasar volúmenes conocidos de un recipiente a otro. Los tipos más comunes de pipetas son: las volumétricas (aforadas), las graduadas y las automáticas.

• Pipetas volumétricas. Se utilizan para medir exactamente un volumen único y fijo. Estas pipetas vienen para volúmenes desde 0.5 ml hasta 200 ml.

• Pipetas graduadas. Están calibradas en unidades adecuadas para permitir el vertido de cualquier volumen inferior al de su capacidad máxima. Los volúmenes oscilan entre 0.1 y 25 ml.

Las pipetas se llenan succionando suavemente con una pera de goma hasta unos 2 cm arriba de la línea de aforo (en lugar de la pera de goma puede usarse una jeringa o cualquier otro aparato de succión). Durante la operación de llenado, la punta de la pipeta se debe mantener sumergida en el líquido. Enseguida se coloca el dedo índice en la parte superior de la pipeta y se deja salir la solución hasta que el fondo del menisco coincida con la línea de aforo.

Las pipetas deben limpiarse si el agua destilada no resbala de manera uniforme por sus paredes, sino que se adhiere en forma de gotitas en la superficie interna. La limpieza puede hacerse con una solución caliente de detergente o con solución de limpieza.

Una vez se vierte el líquido, quedará un pequeño volumen en la punta de la pipeta la cual ha sido calibrada para tomarlo en cuenta, así que no se debe soplar para sacar esta pequeña cantidad pues de lo contrario se produce una alteración. No se debe confiar en las pipetas con las puntas dañadas.

1.2. Buretas



La bureta se utiliza para descargar con exactitud volúmenes conocidos (pero variables), principalmente en las titulaciones. Siempre se deben limpiar para asegurar que las soluciones se deslicen uniformemente por las paredes internas al descargarlas.

No es práctico dejar las soluciones en la bureta durante períodos largos. Después de cada sesión de laboratorio las buretas se deben vaciar y enjuagar con agua destilada antes de guardarlas. Es importante que las soluciones alcalinas no se dejen en las buretas ni siquiera durante períodos cortos. Estas soluciones atacan el vidrio.

1.3 La balanza granataria

Es uno de los instrumentos más utilizados en el laboratorio (figura 4) y su objetivo es determinar la masa de una sustancia o pesar una cierta cantidad de la misma.

La masa de un cuerpo se mide corrientemente comparando el peso del cuerpo con el peso de cuerpos de masas conocidas, denominadas pesas. Dependiendo del trabajo que se quiera realizar, se selecciona el tipo de balanza más adecuada en cuanto a sensibilidad y rapidez en la pesada. La sensibilidad de una balanza depende de su capacidad: una balanza diseñada para pesar kilogramos



difícilmente tendrá la sensibilidad necesaria para tener reproducibilidad en pesadas de miligramo. La tabla No. 1 muestra una clasificación parcial de las balanzas.

Tabla No.1 Clasificación de las balanzas

Clases de balanzas

Capacidad Sensibilidad TiposVelocidad de pesada

granataria 2600 g 0.1 – 0.01 gtriple brazo

moderada

analítica 200 g 0.1 mg un platillo alta

semimicro 100 0.01 mg un platillo alta

micro 30 g 1 un platillo alta

Dependiendo de la forma de construcción de la balanza, éstas pueden ser de doble plato o de un solo plato. Las balanzas de doble plato tienden al desuso, las balanzas de un solo plato, tienen un peso fijo a un lado de la balanza llamado contrapeso y unas pesas cambiables al otro lado.

Manejo de la balanza granataria

Al usar la balanza deben tenerse en cuenta las siguientes normas:

• Manejar con cuidado las balanza ya que es costosa.• No pesar sustancias químicas directamente sobre el platillo; usar un pesasustancias, un beaker, un papel para pesar, un vidrio de reloj o algún otro recipiente.• No derramar líquidos sobre las balanza.• Ajustar el cero de la balanza, solicitar instrucción al profesor o al técnico pues cada balanza tiene su modo de operar. • Después de pesar, regresar todas las pesas a cero (descargar la balanza).• Pesar el objeto o sustancia a la temperatura ambiente. ¿Por qué?• Limpiar cualquier residuo de productos químicos que estén en la balanza o en el área de la balanza.

1.4. El mechero

El mechero es un instrumento de laboratorio de gran utilidad. Fué diseñado con el propósito de obtener una llama que proporcione máximo calor y no produzca depósitos de hollín al calentar los objetos.

La llama del mechero es producida por la reacción química de dos gases: un gas combustible (propano, butano, gas natural) y un gas comburente (oxígeno, proporcionado por el aire). El gas que penetra en un mechero pasa a



través de una boquilla cercana a la base del tubo de mezcla gas-aire.

El gas se mezcla con el aire y el conjunto arde en la parte superior del mechero. La reacción química que ocurre, en el caso de que el combustible sea el propano (C3H8) y que la combustión sea completa, es la siguiente:

C3H8(g) + 5 O2(g) ---> 3 CO2(g) + 4 H2O(g) + calor

La llama es considerada como una combustión visible que implica desprendimiento de calor a elevada temperatura; ésta última depende entre otros factores de: la naturaleza de los gases combustibles y de la proporción combustible-comburente. En el caso del propano, la proporción de la mezcla es de cinco partes de aire por una de gas, obteniéndose una llama de color azul.

Si se reduce el volumen de aire, el mechero producirá una llama amarilla luminosa y humeante. Cuando el mechero funciona con la proporción adecuada de combustible y comburente, la llama presenta dos zonas (o conos) diferentes. El cono interno está constituído por gas parcialmente quemado, el cual es una mezcla de monóxido de carbono (CO), hidrógeno (H2), dióxido de carbono (CO2) y nitrógeno (N2). En el cono exterior esa mezcla de gases arde por completo gracias al oxígeno del aire circundante. Esta es la parte más caliente de la llama.

El mechero comúnmente empleado es el mechero Bunsen, el cual recibe su nombre del químico alemán del siglo XIX Robert Wilhem Bunsen (1811 - 1899). Existen otros mecheros de uso en el laboratorio, por ejemplo, el Tirrill, donde tanto el aporte de gas como el de aire pueden ajustarse con el fin de obtener una combustión óptima y una temperatura de la llama de más de 900 ºC.

El mechero Meker, tiene el tubo quemador mas ancho y tiene una malla montada en su parte superior. Esto produce un cierto número de pequeñas llamas Bunsen, las zonas exteriores de las cuales se funden para dar una llama maciza, exenta de la zona central mas fría. Con este mechero se obtienen temperaturas superiores a los 1000 oC.



Si se ajusta correctamente la entrada de aire por medio del collar, la llama tendrá un cono interior de color azul, no producirá hollín y tendrá el poder calorífico adecuado. También debe graduarse la entrada de combustible para evitar una llama de demasiado tamaño.


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