REPORTE MICROBIOLOGICO de SUELO

ÁREA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLOPROGRAMA ACADÉMICO DE QUÍMICA

ESPECIALIDAD TECNOLOGÍA AMBIENTAL

GRUPO

QU-301

MATERIA

MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

TITULO

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS

DE LA MATRIZ AMBIENTAL: ______SUELO_____

ASESORA

Dra. ROSA RICO MATA

DATOS DE IDENTIFICACIÓN DE LOS ANALISTASFecha de inicio del análisis: 03/07/2015Fecha de término: 10/07/2015

Nombre Cargo Becerra Calvillo Rubén Isaías Responsable

Martínez Sarabia Diana Aurora del Rocío Administrador

González Díaz José Luis Laboratorista 1

Martínez Sarabia Diana Aurora del Rocío Laboratorista 2

Becerra Calvillo Rubén Isaías Laboratorista 3

Martínez Sarabia Diana Aurora del Rocío Muestreador

GENERACIÓN: 2014-2016

Página 1/16 MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL UTL

DATOS DEL SITIO EN ESTUDIO1.- Breve descripción del estatus ambiental del sitio de estudio:El sitio de estudio es una zona poco transitada con gran cantidad de árboles y pasto lo cual nos da un índice de que el sitio de estudio es un área fresca. Este sitio tiene bastante materia orgánica como hojas secas y gran diversidad de organismos vivos como hormigas, moscas, sancudos y chirrioneros.

SITIO DE MUESTREO

Nombre Ubicación /coordenadas GPS

Imagen de mapa satelital

Universidad Tecnológica de León

Blvd. Universidad Tecnológica #225

col. San CarlosCoordenadas: 101° 34' 43.57" W, 21° 3' 42.69" N

Fig.1 Sitio a muestrear (Google maps.com)2. Evidencia fotográfica del sitio

Fecha: 06/07/2015 Hora: 2:15 Fecha: 06/07/2015 Hora: 2:20

Fig.2 planta de tratamientoFig.3 sito a muestrear

DATOS DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR

1. Identificación

Matriz ambiental: Suelo Hora de toma de muestra: 2:20 pm Hora de siembra: 2:30 pm

Punto de Muestreo (ubicación /coordenadas GPS): 101° 34' 57.07" W, 21° 3' 46.98" N

Tiempo de exposición (aplica solo para muestra de aire)N/A

Nombre del/ los analistas que tomaron la muestra:Becerra Calvillo Rubén Isaías

Nombre del/ los analistas que sembró la muestra:Martínez Sarabia Diana Aurora del Rocío

2.Parámetros Fisicoquímicos Color: Café obscuro Temperatura (o C) ambiental: 26°C pH: 6.7

Olor: Tierra húmeda Describir condiciones climatológicas: Día nublado, viento moderado.

3. Evidencia fotográfica del sitio de toma de muestra

Fig. 4 Zona específica del muestreo Fig.5 Excavación superficial para la recolecta de la muestra

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS


1. Justificación del proceso para la identificación bacteriana

Se llevó a cabo la recolección de la muestra dentro de la Universidad Tecnológica de León ya que ésta tiene una planta de tratamiento que tiene como fin llevar a cabo el tratado de toda el agua residual generada por la misma universidad, así pues, se optó por tomar la muestra de los alrededores de la planta debido a la gran cantidad de agua residual que puede llegar a filtrarse por la tierra. Además que, para la identificación de microorganismo se requieren de ciertos factores como; el ser humano, ya que en ellos se encuentran la mayor parte de los microorganismos a identificar, esto a través de la orina o heces fecales producidas por el mismo ser humano.

2. Dos medios de siembra (Nombre y Receta)

Agar Mac Conkey Agar sangrePeptona…………………………..17.0 Infurción de musculo de corazón….0.375Pluripeptona……………………3.0 Peptona………………………………………..10.0Lactosa…………………………….10.0 Cloruro de sodio……………………………5.0Mezcla de sales biliares……1.5 Agar……………………………………………….15.0Cloruro de sodio………………5.0Agar………………………………...13.5Rojo neutro……………………..0.03Cristal violeta……………………0.001

Morfología Colonial (Medio 1) Morfología Colonial (Medio 2)

DescripciónEnterococcus faecalis es una bacteria en forma de coco dispuesta en cadenas o pares, son colonias diminutas, con consistencia mucosa, incoloro-opaca o rosa-violeta, con forma de esfera y bordes redondeados.

DescripciónEnterococcus faecalis. Tienen un tamaño entre 0.5 y 1 mm, a menudo opacas y blancas, que suelen ser α hemolíticas o no hemolíticas, aunque en algunos casos aparecen como β hemolíticas. Puede crecer a temperaturas entre 10 y 45°C, aunque su temperatura óptima de crecimiento es 35ºC

Imagen

Fig.6 Agar Mac Conkey con Enterococcus faecalis (fundacionio.org)

Imagen

Fig.7 Agar sangre con Enterococcus faecalis(flickr.com)

3. Dos Medios selectivos de resiembra (Nombre y receta)


Agar Mac Conkey Agar bilis esculina Peptona…………………………..17.0 Extracto de carne……….3.0Pluripeptona……………………3.0 Peptona de carne……….5.0Lactosa…………………………….10.0 Bilis de buey………………40.0Mezcla de sales biliares……1.5 Esculina……………………..1.0Cloruro de sodio………………5.0 Citrato férrico…………….0.5Agar………………………………...13.5 Agar……………………………15.0Rojo neutro……………………..0.03Cristal violeta……………………0.001

Morfología Colonial (Medio 1) Morfología Colonial (Medio 2)

DescripciónEnterococcus faecalis es una bacteria en forma de coco dispuesta en cadenas o pares, son Colonias diminutas, con consistencia mucosa, incoloro-opaca o rosa-violeta, con forma de esfera y bordes redondeados.

DescripciónColonias color obscuras bajo la luz ultravioleta, posee formación de un complejo color negro, el medio preparado es color ámbar u oscuro ligeramente opalescente. El medio con esculina tiene un tinte azulado.

Imagen

Fig.8 Enterococcus faecalis en agar Mac Conkey (microbiologypictures.com)

Imagen

Fig.9 Enterococcus faecalis en agar bilis esculina(telmeds.org)

4. Procedimiento de Aislamiento(describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)

Materiales/Reactivos/Medios de cultivo/ Equipo a utilizaro Materiales 4 cajas Petri. 1 charola de pesado. 1 espátula. 1 matraz Erlenmeyer de 250 mL. 1 Piceta. 1 probeta. 1 mechero bunsen. 1 asa microbiológica.o Reactivos


Agua destilada. Alcohol etílico.o Medios de cultivo Agar Mac Conkey.o Equipo a utilizar Balanza analítica. Autoclave. Incubadora

Preparación de medios de cultivo:1. Lavar cuidadosamente el material a utilizar.2. Esterilizar las placas y el material a utilizar (cajas Petri e hisopos).3. Tomar el agar Mac Conkey y con una charola de pesado y espátula pesar correctamente. 4. Suspender 50 g del polvo en litro de agua destilada.NOTA: Realizar los cálculos correspondientes de acuerdo a la cantidad de ml de agar Mac Conkey a preparar.

50 g de polvo Mac Conkey / 1000 mL = 3.25 g polvo Mac Conkeyx65 mL de agar Mac Conkey

5. Vaciar 3.25 g de polvo Mac Conkey a un matraz Erlenmeyer de 250 ml y agregar 60 ml el agua destilada.

6. Reposar 5 minutos y mezclar con un movimiento circular de muñeca hasta uniformar.7. Tomar un mechero y Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta disolver.8. Tapar el matraz Erlenmeyer correctamente con un tapón de algodón cubierto de gasa.9. Colocar aluminio en la parte superior del matraz tapado la boquilla correctamente.10. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.11. Dejar enfriar por 1 minuto. 12. Verter 15 mL del agar Mac Conkey en cada una de las placas previamente esterilizada e identificada.

NOTA: La realización del paso 9 se debe de llevar a cabo dentro de la

13. Dejar reposar la caja por 3 minutos parcialmente abierta para que se solidifique.14. Tapar la caja y almacenar hasta la siembra.15. Tirar el sobrante de agar Mac Conkey en residuos.

Pasos para el aislamiento del microorganismos (siembra, selección de la colonia y resiembra):

Procedimiento para siembra de Enterococcus faecalis.

1. Llevar a cabo la toma de muestra de suelo cuidadosamente.2. Elegir una superficie en la cual la muestra pueda ser fácil de extraer.3. Tomar un frasco de vidrio y colocar la muestra con una espátula.4. Cerrar el frasco de vidrio con la muestra.

Nota: Si la muestra requiere ser trasladada a algún laboratorio lejano se deberá preservar a 4 °C hasta su siembra.

5. Tomar la muestra de suelo extraída anteriormente abrir el frasco de vidrio cuidadosamente.6. Colocar el mechero en un lugar con el cual te resulte fácil laborar.7. Con un hisopo realizar la extracción de la muestra.8. Tomar la caja Petri con el agar Mac Conkey y abrirla cerca del mechero.


9. Realizar un estriado por desgaste en la placa.10. Cerrar la placa. Desechar el hisopo en alcohol.11. Guardar la caja Petri en la incubadora por 72 h a 48 °C ± 2.12. Una vez pasando las 72 h revisar las cajas Petri y observar el crecimiento de colonas.13. Si hay crecimiento realizar la resiembra.

Procedimiento para la resiembra.1. Prender el mechero bunsen.2. Tomar la placa con la siembra elaborada anteriormente y tomar otra placa con el medio de cultivo agar

Mac Conkey.3. Calentar ligeramente la tapa de la placa con la que se ara la resiembra con el fin de que tu placa se

encuentre en temperatura óptima para hacer el traslado microbiano. 4. Abrir la caja petri con la siembra cerca del mechero 5. Tomar el asa y calentarla en el mechero, esto con el fin de eliminar bacterias que puedan afectar el

crecimiento microbiano.6. llevar el asa a la placa con la siembra y tomar la colonia que se encuentre aislada y que sea fácil de

identificar para realizar la extracción.7. Una vez extraído la colonia pasarla a la otra placa con agar Mac Conkey sin muestra realizando un

estriado de forma uniforme en uno de los cuadrantes de tu placa.8. Volver a tapar las dos cajas petri y calentar el asa nuevamente.9. Realizar nuevamente los paso 6, 7, 8.

NOTA: asegúrate de que el estriado se haga solo una vez por cuadrante y de forma opuesta para una mejor visualización, recuerda que el último estriado lo realizaras de forma que quede una cola en el centro de la placa.

10. esterilizar el asa bajo calentamiento. 11. Cerrar las placas.12. Llevar la placa de resiembra a la incubadora almacenarla por 24h a 37 °C y llevar la placa de siembra

en el refrigerador.


5. Esquema del Perfil bioquímico (metabólico ) para la identificación del microorganismo seleccionado


Enterococcus faecalis

TINCIÓN DE GRAM (+) MOVILIDAD (-)

FERMETACION DE LACTOSA (-)

CAPSULA (+/-)

FERMENTACION DE GLUCOSA (+)

FERMENTACION ALCOHOLICA (-)

FERMETACION DE SACAROSA (-)

PRUEBA DE CITRATO DE SIMMONS (-)

PRUEBA DE CATALASA (-)

PRODUCCION DE SULFURO (-)

PRUEBA DE PRODUCCION DE INDOL (-)

RESULTADOS DEL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN 1. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO DE LA MUESTRA (SIEMBRA)

Fig.10 Placa con siembra Fig.11 Placa con siembra

2. MORFOLOGÍA COLONIAL OBSERVADATipo de colonia 1: Descripción

Se formó una colonia pequeña de forma alargada entre color blanquecina y transparente, de consistencia mucosa.

FOTO 1

Fig.12 Enterococcus faecalis

Tipo de colonia 2: Descripción

En la placa con la muestra de suelo hubo poco crecimiento de colonias mucosas por lo que la placa fue almacenada por 72 h para su mejor apreciación e identificación de Enterococcus faecalis presuntivos.

El cambio de color en el agar Mac Conkey fue solamente alrededor de la colonia ya que se pudo apreciar un color naranja-amarillo

FOTO 2

Fig.13 Presuntivamente Enterococcus faecalis


3. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO PURO (RESIEMBRA)FOTO 1

Fig.14 Colonia generada en agar Mac Conkey la cual fue seleccionada para resiembra.

FOTO 2

Fig.15 Resultado de la resiembra en agar Mac Conkey de posible Enterococcus faecalis.

4. MORFOLOGIA COLONIAL OBSERVADA

Descripción

Colonias aisladas de forma circular con bordes enteros con una elevación plana, de superficie lisa y con una consistencia mucosa de color rosado opaco.

FOTO 1

Fig.16 Seis colonias identificadasFOTO 2

Fig.17 Placa de resiembra


234

65

1

5. EVIDENCIA FOTOGRÁFICA DEL RESULTADO DEL PERFIL BIOQUÍMICONombre de la

pruebaMedio de cultivo

utilizadoResultado obtenido

(positivo/negativo)Evidencia fotográfica

1.- Prueba de Tinción Gram

N/A Negativo (-)

Fundamento de la pruebaLa tinción Gram es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y poder realizar la observación en microscopio óptico. Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algún tratamiento previo.Las células fijadas al calor sobre un portaobjetos se tiñen, primero con una solución de cristal violeta y son lavadas después para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las células, tanto las Gram positivas como las Gram negativas, están teñidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces con una solución de yodo-yoduro potásico. El ingrediente activo es aquí el I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las células Gram positivas como las Gram negativas se encuentran en la misma situación. Se lleva a cabo después la decoloración, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (Gram positivos) no se decoloran, mientras que otros (Gram negativos) lo hacen.

2.- Prueba de fermentación alcohólica(Voges Proskauer)

Medio: MR-VP Negativo (-)

Fundamento de la prueba

La reacción de VP se basa en la detección de acetoína como producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. Ésta es metabolizada en ácido pirúvico, intermediario clave en la glucólisis. A partir del ácido pirúvico, una bacteria puede seguir muchas vías. La producción de acetoína (precursor de la producción de 2,3-butanediol) que es uno de los ciclos para la degradación dela glucosa en las bacterias. La formación de acetoína y butilenglicol es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico. Las bacterias que utilizan esta vía producen solo pequeñas cantidades de ácidos mixtos que son insuficientes para disminuir el pH del medio de rojo de metilo, lo bastante como para producir un cambio de color. Por este motivo muchas de las especies de Enterobacterias son VP positivas, con pocas excepciones son RM negativas y viceversa.El primer reactivo agregado a una alícuota incubada es el catalizador alfa-naftol porque éste actúa como intensificador del color, lo que aumenta la sensibilidad de la reacción sin pérdida de su especificidad.


El segundo reactivo es el KOH que cuando se agrega al medio de VP contribuye a la absorción de CO2. No debe excederse de un volumen exacto. El KOH reaccionará con la peptona dando un color rosado salmón y con el agregado posterior de alfa-naftol no habrá alteración del color.Reacción:

Alfa-naftol (catalizador) + acetoína KOH Diacetilo + Núcleo de guanidina Condensación color rojo rosado

3.- Prueba fermentación de glucosa

(Rojo de Metilo)

Medio: MR-VP Negativo (-)

Fundamento de la pruebaComprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la producción de ácido (determinación de pH). Las bacterias que principalmente siguen la vía de fermentación de ácidos mixtos a menudo producen suficiente ácido para mantener un pH menor de 4.4.

La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH para determinar la concentración de iones hidrógeno presentes cuando un organismo fermenta glucosa. Las bacterias RM positivas producen ácidos estables manteniendo una alta concentración de iones hidrógeno hasta alcanzar cierta concentración y entonces cesa toda actividad.

Los organismos RM negativo también producen ácidos pero tienen una menor concentración de iones hidrógeno porque hay una reversión hacia la neutralidad debida a la nueva degradación de los ácidos orgánicos en carbonatos.

La validez de la prueba de RM depende de un tiempo de incubación suficiente como para permitir que se produzca la diferencia en el metabolismo de la glucosa. Los organismos en estudio se incubarán por lo menos 2 días, lo que permite que todos los organismos con baja proporción gaseosa muestren su límite en la concentración de iones hidrógeno.

4.- Prueba de Citrato de Simmons

Medio: Citrato de Simmons

Positivo (+)


Fundamento de la pruebaEn el medio de cultivo, el fosfato mono amónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino.

El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad.El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa.

Reacción:

Citrato Oxalacetato + acetato Piruvato + CO2

PH básico:

Citrato Co2+ Acido Fórmico + 2 ácido acético

PH Ácido:

2 piruvato acetato +Co2 + lactato

2 piruvato acetoina+ 2 Co2

5.-Prueba de Indol Medio SIM negativo (-)


Fundamento de la pruebaEl triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos principales: indol, es catol e indol acético. Diversas enzimas intracelulares que intervienen en éste proceso reciben el nombre de triptofanasa, lo que implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la producción del indol. El principal intermediario en la degradación del triptófano es el ácido indol pirúvico. La degradación del triptófano libera indol, ácido pirúvico, amoniaco y energía. El ácido pirúvico puede ser nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucolítico o entrar en el ciclo de Krebs para liberar CO2 y H2O y una gran producción de energía. El NH3 puede ser utilizado para sintetizar nuevos aminoácidos empleando la energía que se encuentra para la reacción anabólica.La prueba de indol se basó en la formación de un complejo de color rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído de p-dimetilaminobenzaldehído (sustancia activa del reactivo de Kovacs).La formación de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces de fermentar los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la fermentación de la glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibirla enzima.El agregado de triptófano estimula la producción de indol mientras que la glucosa la inhibe.Reacción:

L-triptófano triptofanasa H2O Desaminación indol + acido pirúvico + Amoniaco

6.-Prueba de sulfuro Medio SIM NEGATIVO (-)

Fundamento de la pruebaLa bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reacción de reducción que da un sulfito y un sulfato. Este es un proceso de respiración anaeróbica donde el átomo de azufre sirve como aceptor de electrones para la oxidación de los sustratos orgánicos. El tiosulfato reemplaza al sulfato como aceptor de electrones y es una fuente de azufre para el organismo. El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citratoférrico de amonio para producir un precipitado negro insoluble, sulfuro ferroso.Reacciones:

Bacteria (medio ácido) + tiosulfato de sodio gas SH2

SH2+ iones férricos sulfuro ferroso (pp. negro)

7.- Prueba de motilidad

Medio SIM Negativos (-)


Fundamento de la pruebaEl agar es el agente solidificante y a esta concentración le otorga al medio la propiedad de ser semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde más allá de la línea de siembra del microorganismo en estudio.Las bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos, que se encuentran principalmente entre los bacilos; sin embargo algunas formas de cocos son inmóviles. Las bacterias móviles pueden contener un solo flagelo o muchos; además su localización varía con su especie bacteriana y las condiciones de cultivo. A veces, las bacterias con movilidad producen variantes no móviles que parecen se restables y raramente se revierten en formas móviles.

8.- Prueba de fermentación de glucosa

Agar TSI Negativos (-)


En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La glucosa, es uno de los hidratos de carbono fermentables. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de azúcar, se produce ácido, que se detecta por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.Reacción:

Glucosa Ciclo de Krebs Co2 + H2O +Energía anaerobia

9.-Prueba de fermentación de lactosa

Agar TSI Negativa (-)


En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, es uno de los hidratos de carbono fermentables. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de azúcar, se produce ácido, que se detecta por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.


Reacción:Lactosa glucosa + galactosa

10.-Prueba de fermentación de sacarosa

Agar SIM Negativos(-)


En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, es uno de los hidratos de carbono fermentables. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de azúcar, se produce ácido, que se detecta por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.

IDENTIFICACIÓN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL

EN LA MATRIZ DE ESTUDIO: _______suelo__________

1.- Nombre científico del o los microorganismos identificados de acuerdo a los resultados del perfil bioquímico planteado ( género y especie)

Género: Enterobacter Especie: aerogenesDe acuerdo con los resultados obtenidos en las pruebas bioquímicas se obtuvo como resultado el perfil de una bacteria diferente a la Enterococcus faecalis que es la que se esperaba obtener. Con los resultados de las pruebas realizadas, se dedujo que la Enterococcus aerogenes es la que posee un perfil más similar al obtenido, ya que de 11 pruebas realizadas, solo 1 no coinciden con el resultado (prueba VP). Por lo que consideramos la mala preparación del reactivo. Por lo que se tomó la identificación de Enterobacter aerogenes.

2. Taxonomía del o los microorganismo identificadosEnterobacter aerogenes

Dominio: BacteriaFilo: Proteobacteria

Clase: GammaproteobacteriaOrden: Enterobacteriales

Familia: EnterobacteriaceaeGénero: EnterobacterEspecie: E. aerogenes

3. Ccaracterísticas generales

Enterobacter aerogenes

Enterobacter spp. Bastoncillos Gram negativa con forma de varilla microorganismo de la familia


Enterobacteriaceae. De los cuales varias cepas son patógenos oportunistas en los nosocomios. Se encuentran sobre la piel humana, las plantas, los suelos, el agua, las cloacas, los tractos intestinales y en algunos productos lácteos.

Enterobacter especies son conocidas por su resistencia a los medicamentos, que se cree que ha sido amplificada por el uso de cefalosporinas de amplio espectro en los hospitales (Giamarellou, 2005). E. aerogenes utiliza tres mecanismos de resistencia, enzimas inactivadoras, alteración de las dianas de fármacos y la alteración de la capacidad de los fármacos para entrar y acumularse o en sus células.

Marcha bioquímica de Enterobacter aerogenes.P. de RM

P. de VP

P. de catalasa

P. de indol

P. de motilidad

P. de citrato de Simmons

P. de sulfuro

P. de glucosa

P. de lactosa

P. de sacarosa

Tinción Gram

- + + - +/- + - - - - -Resultados de Marcha bioquímica elaborada.

P. de RM

P. de VP

P. de catalasa

P. de indol

P. de motilidad

P. de citrato de Simmons

P. de sulfuro

P. de glucosa

P. de lactosa

P. de sacarosa

Tinción Gram

- - + - - + - - - - -

4. Ciclo(s) biogeoquímicos en el(los) que intervienen

Ciclo del Nitrógeno, ciclo del Carbono

5. La función que juegan en la transformación de la materia orgánica a través de los ciclos biogeoquímicos

El proceso a través del cual la Enterobacter aerogenes reduce el nitrógeno hasta una forma utilizable es conocido como Fijación Biológica de Nitrógeno (FBN, por sus siglas en español). El proceso puede ser llevado a cabo por los microorganismos en vida libre o en simbiosis con plantas, y permite no sólo usar el nitrógeno atmosférico, sino también revertir o reducir la degradación del suelo. Las bacterias Enterobacter aerogenes son componentes importantes del suelo y requieren una fuente de energía química.

Estudios han mostrado que además de la fijación de nitrógeno, estas bacterias secreta cantidades considerables de sustancias biológicamente activas como vitamina B, ácido nicotínico, ácido pantoténico, heteroxinas, giberelinas, ácido indol acético, etc. las cuales ayudan al crecimiento de la planta (Behl y col., 2003). Las bacterias se alimentan de las sustancias liberadas por las raíces de la planta, y ésta a su vez se beneficia de los nutrientes que las bacterias le proporcionan mediante la fijación de nitrógeno.

Las bacterias nitrificantes y sulfato reductoras son las que principalmente llevan a cabo las funciones de degradación de la materia orgánica en los sedimentos anaeróbicos y microaerofilicos del manglar. Las bacterias sulfato reductoras, además de ser los principales descomponedores de materia orgánica en suelos anaerobios, participan en la mineralización del azufre y en la disponibilidad de hierro y fósforo en manglares.La participación de microorganismos en el funcionamiento y transformación de nutrientes dentro de los ecosistemas de manglar ha sido muy exitosa.

6. Conclusión parcial sobre las interacciones bacterianas en la matriz estudiada y la importancia de la microbiología en el área ambiental

Se concluyó que cada bacteria tiene un perfil bioquímico especifico lo cual nos permite llegar a la identificación


de microorganismos diferentes de acuerdo al resultado de las pruebas, Ya que una de ellas puede llegar a cambiar completamente el perfil de la bacteria esperada, o buscada y por esta razón es de suma importancia llevar a cabo cada prueba lo mejor y más profesionalmente posible, ya que si esto no se realiza con los cuidados adecuados, el resultado obtenido al finalizar la marcha bioquímica no permitirá la identificación del microorganismo.

Una de las ramas de mayor importancia para la formación académica de los alumnos del área de química, es la de microbiología ambiental, ya que esta tiene como base muchos procesos fundamentales para el aprendizaje y el desarrollo intelectual del alumno, estos conocimientos se pueden aplicar a procesos de investigación o remediación de lo que sucede en el suelo, el agua y el aire como matrices ambientales, o como área de interés propia. Dichos procesos se basan en la caracterización e investigación de microorganismos como bacterias, hongos, enzimas, algas, entre otros, y posteriormente después de la caracterización investigar cómo es que se puede emplear e uso de estos microorganismos para que produzcan un beneficio para la sociedad y para el medio ambiente.

La salud e integridad física de las persona es uno de los factores más importantes que se deben de cuidar en el área de microbiología ya que puede llegar a contraer alguna infección, enfermedad o daño, tanto para el propio analista como para los que se encuentran cerca. Es por esto que todos los materiales y equipos que se manipulen dentro del laboratorio deben ser esterilizados o desinfectados al finalizar las actividades y especialmente si estuvieron en contacto con las muestras, cajas o medios inoculados.

Se concluyó que es de suma importancia la microbiología y los procesos por el cual se lleva a cabo la identificación de la bacteria para la sustentabilidad ambiental, ya que de ella dependen muchos proceso que pueden ser beneficios para la preservación del medio ambiente.

Se llegó a la conclusión de que la bacteria que se esperaba identificar en el inicio de la práctica no fue la misma que se obtuvo ya que muchos factores pueden afectar los resultados de las pruebas, como por ejemplo la mala toma de muestra, la implementación errónea del equipo de trabajo, reactivos contaminados o caducados o materiales no esterilizados, que pueden contaminar la muestra o a la bacteria. Los datos que se obtuvieron nos pudieron dar la identificación casi completa de varias bacterias como; Shigella dysenteriae y Enterobacter aerogenes ya que estas al igual que la Enterococcus faecalis se puede generar en un medio selectivo como el agar mac conkey y la mayoría de las pruebas bioquímicas emiten el mismo resultado, además de que se producen en las mismas condiciones ambientales como la temperatura ambiente, el oxígeno presente, entre otros factores naturales.


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