RESUMEN EJECUTIVO

Esta investigacin se llev a cabo con los objetivos de identificar los agentes causales del enchurcamiento de las hojas de oiti (Licania tomentosa), aplicar pruebas de patogenicidad para los organismos patgenos identificados y evaluar el control con algunos productos qumicos y biolgicos, en laboratorio y vivero.

En el desarrollo de la investigacin, primero se realiz un muestreo de los rboles de oit, en Bucaramanga y su rea metropolitana, incluyendo a los municipios de Girn, Piedecuesta, Floridablanca, a travs del cual se tomaron muestras de material vegetal de rboles enfermos, con sintomatologa como manchas oscuras en las pstulas de color naranja y enchurcamiento de las hojas. Luego las muestras se llevaron al Laboratorio de Diagnostico Fitosanitario del Instituto Colombiano Agropecuario-ICA, Seccional Santander, en el cual se hizo el diagnstico de los agentes causales de las sintomatologas, siguiendo los procedimientos del manual de procedimientos ICA (2005), para hongos o bacterias. En el diagnostico fitopatolgico, se pudieron identificar los hongos de los gneros Pestalotia sp., Colletotrichum sp., Puccinia sp., Fusarium sp., y Cladosporium sp., como los agentes causales del dao.

Para corroborar si estos hongos son los causantes de la enfermedad, se realizaron pruebas de patogenicidad siguiendo los Postulados de Koch (Duarte, 2007). En estas pruebas se indujeron algunos sntomas como el necrosamiento de las hojas, producido por la interaccin de Colletotrichum sp., y Pestalotia sp. Sin embargo, no se pudo inducir el enchurcamiento de las hojas, ya que pueden existir otros hongos asociados a la etiologa del dao, como Puccinia sp., Fusarium sp y Cladosporium sp, de los cuales no se pudo hacer pruebas de patogenicidad ni evaluacin de controladores, por dificultades presentadas al momento de aislarlos a cultivo puro en el laboratorio.

Para el control de los agentes causales del enchurcamiento de las hojas, se realiz un ensayo en laboratorio, en el que se evaluaron 4 tratamientos qumicos (Vercani, Antrasin, Control 500 y Kazugal), un tratamiento biolgico (Kocide) y un control o testigo, a travs de un diseo experimental de bloques completos al azar y 3 repeticiones. Los resultados indicaron que el producto qumico Antrasin en dosis de 3 g/L de agua, fue el ms efectivo para el control de los patgenos Colletotrichum sp., y Pestalotia sp.

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En un ensayo conducido en el vivero Nazareth, de propiedad de la CDMB, localizado en la ciudad de Bucaramanga, se evaluaron los mismos tratamientos y diseo experimental y repeticiones iguales a los empleados en el ensayo de laboratorio. Los resultados que se obtuvieron concuerdan con los de laboratorio, ya que el tratamiento con Antrasin, en dosis de 3 g/L de agua, fue el ms efectivo para controlar el enchurcamiento de las hojas de oit, al reducir la incidencia en forma significativa con respecto a los dems tratamientos, de100% a 91,3%, mientras que en los dems tratamientos sta estuvo entre96,6% y 99,6%.

A la luz de los resultados, no se puede concluir que los hongos Colletotrichum sp., y Pestalotia sp., son los causantes del enchurcamiento de las hojas de oit, sin embargo, la aplicacin del producto qumico Antrasin, fue la que redujo en un mayor porcentaje la incidencia de la enfermedad en el vivero.

INTRODUCCION

La Corporacin Autnoma Regional para la Defensa de la Meseta de Bucaramanga (CDMB) y el Instituto Colombiano Agropecuario (ICA), seccional Santander, son entidades gubernamentales encargadas de la vigilancia, proteccin y administracin de los recursos naturales del departamento de Santander, dentro de estos recursos naturales se encuentran las plantaciones forestales y los sistemas agroforestales, los cuales han ido presentando problemas fitosanitarios que deben ser identificados y tratados a tiempo.

La CDMB en conjunto con el ICA, busca mejorar la situacin sanitaria de las plantaciones forestales y los sistemas agroforestales, as como de especies arbreas ornamentales. En el caso de la zona verde de Bucaramanga, se ha identificado al oit (Licania tomentosa), como la especie arbrea ms abundante y, adems, ha venido presentado un enchurcamiento en las hojas, que se ha generalizado en todos los rboles de la ciudad.

En estudios preliminares, se ha identificado a los hongos patgenos Pestalotia sp., y Peronospora sp., como los agentes causales del dao sanitario (Escobar et, al., 2007); sin embargo, an faltan ms elementos de diagnstico para estar seguros de la causa de la afectacin de los rboles y cul sera la forma ms efectiva para su control, razn que justific la realizacin de esta investigacin.

1. OBJETIVOS

1.1 General

Realizar la identificacin y pruebas de control del o los agentes causales del enchurcamiento de las hojas en el oit (Licania tomentosa).

1.2 Especficos

Identificar el o los agentes causales del dao del enchurcamiento de las hojas en el oit (Licania tomentosa).

Aplicar pruebas de patogenicidad para los organismos patgenos identificados.

Evaluar el control de la enfermedad con productos qumicos y biolgicos, en laboratorio y vivero.

2. MARCO TEORICO

2.1 Clasificacin taxonmica del oit

Reino: PlantaeDivisin: Magnoliophyta Clase: Magnoliopsida Subclase: Rosidae Orden: RosalesFamilia: CrisobalanaceaeGnero: LicaniaEspecie: tomentosa Benth.

2.2 Morfologa

Raz: Sistema radicular profundo con races laterales.Tallo: rbol de 10 a 15 metros de altura; tallo leoso ramificado a partir de los 2 metros aproximadamente, corteza lisa de color grisceo, copa frondosa.Hojas: Alternas, de color verde claro en su estado inicial, con una pubescencia blanquecina tanto en el haz como en el envs, el cual cumple la funcin de evitar la excesiva evaporacin del agua.Flores: Inflorescencias, tipo racimo, son florecillas pequeas, blancas, aromticas, filamentosas, estaminales de cinco ptalos.Fruto: carnoso, tipo drupa de forma ovoide de 8 a 10 centmetros de largo con olor caracterstico.

2.3 Ecologa y Manejo: La especie es originaria del Brasil y se emplea como rbol ornamental en ciudades como Bucaramanga y Ccuta; su mejor adaptacin se presenta en zonas clidas y secas, y permanece frondoso durante todo el ao. Como rbol ornamental se puede emplear en barreras contra el ruido y contaminantes, para dar privacidad, controlar vientos, y como rbol vistoso en parques, orejas de puentes, cerros, laderas y caadas. Sus frutos de mediano tamao pueden limitar su uso en zonas de trfico vehicular y peatonal (Escobar et, al., 2007).

2.4 Importancia del rbol urbano

El rbol urbano desempea mltiples funciones que contribuyen al mejoramiento de la calidad de vida en las ciudades. Estas funciones consisten en la produccin de lea y alimentacin de humanos y la fauna silvestre; establecimiento de barreras contra el ruido, los vientos y los contaminantes como monxido de carbono (CO), dixido de carbono (CO2), monxido de

azufre (SO), dixido de azufre (SO2), xido ntrico (NO), dixido de nitrgeno (NO2), xido nitroso (N2O), ozono troposfrico (O3) y partculas en suspensin; sombro; mejoramiento de la biodiversidad; uso, reutilizacin y conservacin del agua; conservacin del suelo, tales como control de erosin, taludes y cauces (Escobar et, al., 2007).

2.5 Composicin de las especies arbreas de Bucaramanga

De acuerdo a un muestreo realizado en las principales calles, avenidas y parques de la ciudad de Bucaramanga, as como en pequeas reas en el norte de la ciudad y el municipio de Floridablanca, se encontraron 4.722 rboles, representados en 75 especies diferentes y 29 familias. De acuerdo con los resultados, la especie ms abundante es el oit (Licania tomentosa), con una participacin del 32,2%, es decir la tercera parte del total de rboles encontrados en la muestra. Otras especies abundantes son los guayacanes (Tabebuia rosea y T. crysantha) con 14,1%, el gallinero (Pithecellobium dulce) con 7,6%, palma real (Roystonea regia) con 6,1%, laurel (Ficus benjamina) con 5,5%, leucaena (Leucaena leucocephala) con 3,5%, almendro (Terminalia catappa) con 2,8%, tulipn africano (Spathodea campanulata) con 2,8%, palma areca (Chrysalidocarpus lutescens) con 1,9% y mango (Manguifera indica) con 1,8% (figura 2). (Escobar et, al., 2007).

2.6 Principales enfermedades de los rboles urbanos de Bucaramanga

Segn Escobar et, al., en 2007, se identificaron 13 especies de hongos patgenos ocasionando diferentes daos en los arboles urbanos de la ciudad de Bucaramanga, estos, se ilustran en la tabla N 1

Tabla N 1: Agentes patolgicos identificados en rboles urbanos deBucaramanga, Santander.

AGENTE CAUSALCLASE/ORDENNOMBRE COMUNSINTOMAS

Colletotrichum sp.MuertedescendenteColoracin pardaazulosa en las ramas.

Graphium sp.Muerte fustePudricin de fuste

Fusarium proliferatumPudricinDestruccin sistema radicular

Phythopthora sp.PudricinDestruccin del sistema radicular.

Botrytis sp.Pudricin blandaPudricin hmeda en hojas.

Cercospora sp.DeuteromycetesNecrosis foliarCausa amarillamiento

(Moniliales).del follaje.

Cylindrocladium spAmarillamiento foliarManchas foliares color pardo oscuro.

Pestalotia sp.Deuteromycetes(MelanconialesRoyaHojas con manchas coloracin amarilla.

Nectria spPudricin basal

Armillaria mellea.BasidiomyceteNecrosis foliarAmarillamiento y cadaprematura de hojas.

Capnodium sp.AscomycetesDothidealesFumaginaHojas pelcula negrasobre el haz.

Rosenillia spAscomycete(Shaeriales).Pudricin fusteRetardos de crecimiento y poco follaje, clortico.

Phoma sp.Manchas foliaresManchas necrticas enfollaje.

Fuente: Escobar, et al., 2007.

2.7 Los Postulados de Koch

Robert Koch enunci sus ya famosos postulados en el curso de sus investigaciones sobre el carbunco bacteriano, una enfermedad que se transmita de forma frecuente al hombre desde el ganado lanar y vacuno. En sus investigaciones sobre el carbunco bacteriano, Koch descubri que el patgeno se encontraba siempre en la sangre de los animales enfermos, por lo que, en una primera fase de investigacin, tom pequeas muestras de sangre de estos animales y se las inocul a animales sanos. El resultado fue la transmisin de la enfermedad y, por tanto, el establecimiento de la etiologa de la enfermedad. En una segunda fase de investigacin, Koch descubri que el patgeno poda ser aislado de los individuos enfermos y cultivado en el laboratorio sin perder su capacidad patognica, ya que cuando se les inoculaba a nuevos individuos se reproduca la enfermedad. (Fuentes, 2007).

A partir de estas investigaciones propuso los siguientes postulados:

1. La bacteria patgena debe aislarse siempre de animales enfermos y nunca de animales sanos.

2. Cuando un animal est enfermo la bacteria debe aislarse en cultivo puro.

3. Si la bacteria se inocula a otro individuo debe reproducirse la enfermedad.

4. La bacteria debe aislarse nuevamente en cultivo puro.

Robert Koch public sus postulados por primera vez en el ao 1882 en un artculo sobre la etiologa de la tuberculosis, pero no fue hasta 1890 cuando

estos postulados fueron publicados tal y como los conocemos hoy. No hay duda de que la publicacin de estos postulados, junto con otros descubrimientos de sus contemporneos, supuso una autntica revolucin para la comunidad cientfica y sobre todo para la nueva ciencia microbiolgica. (Fuentes, 2007).

3. METODOLOGIA

3.1 Identificacin de los agentes causales del enchurcamiento de las hojas en el oit (Licania tomentosa).

3.1.1 Toma de muestras

Las muestras se recolectaron de frutos o partes de plantas enfermas o con sntomas de aparente enfermedad o sintomatologa de enchurcamiento de hojas, en el rea metropolitana de Bucaramanga, departamento de Santander.

Los sitios muestreados se encuentran en la tabla N 2

Tabla N 2: Geoposicin, en coordenadas geomtricas de los sitios de muestreo para toma de material vegetal de oit, en Bucaramanga y su rea metropolitana

NWALTITUD(m.s.n.m)

06.98539 073.05138 1018

06.98945 073.05167 995

06.99341 073.05209 1005

07.06498 073.16645 688

07.06493 073.16656 684

07.06490 073.16653 686

07.06490 073.16653 688

07.06498 073.16650 684

07.07307 073.16634 690

07.07307 073.16632 682

07.13006 073.11555 1029

07.13029 073.11538 1030

07.13029 073.11548 1030

07.13029 073.11558 1030

07.11738 073.10833 1004

07.11668 073.10585 997

07.11865 073.10475 985

07.11871 073.10473 982

07.11176 073.10712 960

07.11851 073.10477 956

07.09466 073.11206 906

07.09438 073.11212 907

07.08570 073.11375 918

07.08532 073.11654 916

07.10230 073.11762 916

07.07437 073.16506 700

07.06621 073.16834 748

07.07231 073.10039 884

06.98530 073.05048 1040

06.99872 073.05486 1042

06.99947 073.05436 1046

07.06517 073.08900 954

07.06517 073.08910 954

07.08649 073.11262 921

07.49054 073.26273 908

07.13472 073.13242 923

3.1.1.1 Materiales

Bolsas nuevas de polietileno, calibre 5 mm, de diferentes tamaos Lupa Navaja o tijeras Tijeras de podar Alcohol al 70% Hipoclorito de sodio al 0.5% Cinta de enmascarar Papel absorbente suave

3.1.1.2 Procedimiento

Para garantizar la buena calidad de la muestra se consideraron varios aspectos:

Seleccin de partes afectadas. Estados de desarrollo de la enfermedad Se recolectaron las muestras cuando estaban libres de humedad de lluvia o roco. Antes de cortar la muestra de la planta sta se introdujo dentro de la bolsadonde se empac, para evitar la contaminacin externa. El corte de la muestra se realiz con una tijera podadora, la cual estaba bien afilada y muy limpia. Cada muestra estaba debidamente marcada (nombre, nmero, fecha) yacompaada de su respectivo formato.

3.1.2 Procesamiento de las muestras para diagnostico fitopatolgico

Al llegar la muestra al laboratorio se analizaron los sntomas y de acuerdo a estos se realiz el montaje para hongos, bacterias o para identificacin de material insectil.

3.1.2.1 Diagnstico de bacterias

La muestra se lav con abundante agua corriente. Se cortaron fragmentos de la lesin y de partes sanas. Se realiz una suspensin del tejido enfermo, que consisti en incubar los trozos cortados en agua destilada estril durante 24 horas entre 25 y 30 C. Se sembr en agar nutritivo y se incub durante 24 horas entre 25 y 30 C. Se sembr en agares especficos para identificacin, segn el gnero del cual se sospechaba, siguiendo el diagrama de Schaad (Garcs et al., 1996), ver anexo A Se realiz coloracin de Gram (Vase el Anexo B) a partir de cultivo en agar nutritivo, a los bacilos Gram negativos se les realizaron pruebas de la batera bioqumica para identificacin, tales como: utilizacin de citrato, TSI, LIA, prueba de O-F, movilidad, indol, Rojo de Metilo y Vogues Proskauer. (ICA,2005).

3.1.2.2 Diagnstico de hongos

La muestra se lav con abundante agua corriente. Se cortaron fragmentos de la lesin y de partes sanas, para los cultivos en agar (cuadrados de 5 mm aproximadamente). Para los cultivos en agares, se tomaron los fragmentos que se cortaron anteriormente y se introdujeron en Hipoclorito de sodio al 0.9%, en una proporcin de 1 a 3 (que cubra totalmente la muestra) por un tiempo de 1 a 3 minutos. Se enjuag con agua destilada estril por 1 a 3 minutos. Se sec con papel filtro estril. La siembra en agar se realiz colocando 5 trozos de la muestra sobre agarPDA, avena y/o extracto de malta, incubar de 5-15 das a 25-28 C. Se realiz tincin con azul de Lactofenol (Vase el Anexo C) para la caracterizacin microscpica de los aislamientos. (ICA, 2005).

3.2 Pruebas de patogenicidad para los organismos patgenos identificados

Las pruebas de Patogenicidad se realizaron en el Laboratorio de Diagnstico Fitosanitario del ICA Bucaramanga, tomando tejidos de plantas de oit que se encontraban sanas, se les realiz la desinfeccin del material, se coloc en una cmara hmeda dentro de la cual se inocul con el patgeno previamente aislado a cultivo puro, realizando una pequea incisin sobre el tejido (Duarte,2007), se evalu el tejido cualitativamente, mediante la observacin diaria de la sintomatologa despus de la inoculacin con el patgeno.

3.2.1 Rutina de desinfeccin de tejidos para montaje de pruebas de patogenicidad:

Lavar con agua y jabn 3 veces (elimina materia orgnica). Sumergir en solucin de Hipoclorito de sodio durante 1 minuto. Sumergir en etanol al 70% durante 30 segundos. Lavar 3 veces con agua destilada estril.

3.3 Evaluacin del control de la enfermedad en laboratorio y vivero

3.3.1 Pruebas de efectividad en laboratorio

Se evalu la capacidad de los controladores comerciales para los patgenos identificados; para los productos qumicos, se prepararon medios de cultivo PDA a los cuales se les adiciono cada uno de los productos a evaluar (Tabla N3) y posteriormente se realizo la siembra de los patgenos sobre cada medio de cultivo con el producto, para la evaluacin de la efectividad se midi el dimetro de crecimiento en centmetros del hongo cada 2 das; para el producto biolgico se realizo una solucin de 2 g/ 1 L de agua y tambin se realizaron soluciones con los patgenos previamente asilados a cultivo puro, estas soluciones fueron inoculadas en pozos equidistantes que se encontraban en cajas petri con medio PDA; este ensayo se realiz por duplicado para cada uno de los tratamientos y el control. El efecto antagnico se evalu midiendo el dimetro de crecimiento de los microorganismos alrededor de los pozos cada 2 das. En las figuras N1 y N2 se ilustra la distribucin de los tratamientos para las evaluaciones de los productos qumicos y el biolgico para Pestalotia sp.

Figura 1: Distribucin de los tratamientos para controlar al hongo Pestalotia sp.Fuente: Maldonado, 2011.

Figura 2: Distribucin de los tratamientos para controlar al hongo Colletotrichum sp.Fuente: Maldonado, 2011.

3.3.2 Aplicacin y evaluacin de los controladores en vivero

Las plntulas de oiti para la evaluacin de los productos controladores en vivero, se seleccionaron del vivero la Rosita de propiedad de la CDMB. Todas las plntulas de oiti se encontraban enfermas y presentaban la sintomatologa del enchurcamiento de las hojas.Se realiz el montaje de la estructura de malla que protege las plntulas de oiti que se utilizaron para la evaluacin de los productos, este montaje se realiz en el vivero Nazareth de propiedad de la CDMB (Figura N 3).

Figura 3: Estructura de malla en el vivero Nazareth.Fuente: Maldonado, 2011.

Se estableci el ensayo en vivero siguiendo el modelo de bloques completamente al azar; con 6 tratamientos, 3 repeticiones y una unidad experimental de 8 plntulas de oit. A las plntulas se les realiz una aplicacin de Urea 3 das despus del establecimiento en la casa de malla y posteriormente otra aplicacin, 22 das despus, buscando con esto, la generacin de nuevas hojas en las plntulas y de esta manera obtener mas tejido vegetal para la evaluacin de la incidencia de la enfermedad.Los tratamientos, con sus concentraciones se ilustran en la tabla N 3, se realizaron 10 aplicaciones con intervalos de 4 das; antes de cada aplicacin se realizo la evaluacin de la incidencia de la enfermedad siguiendo la siguiente frmula:

%INC

# plantasAf ectadas 00

1#totalPlantas

Tabla N 3: Distribucin de los productos en el montaje de prueba en vivero.

TRATAMIENTOPRODUCTOCONCENTRACION

ControlSin aplicacin

Tratamiento 1Vercani2 g/ 1 L de agua

Tratamiento 2Antrasin3 g/ 1 L de agua

Tratamiento 3Control 500600 ml/ 200 L de agua

Tratamiento 4Kocide2 kg / 200 L de agua

Tratamiento 5Kazugal1.5 L / 200 L de agua

La distribucin de los tratamientos y sus repeticiones en uno de los bloques se ilustra en la figura N 4.

Figura 4: Distribucin de los tratamientos y sus repeticiones en uno de los bloques.Fuente: Maldonado, 2011.

3.3.3 Anlisis estadstico

Los anlisis de varianza y comparacin de medias mediante la Prueba de Tukey, del crecimiento de los hongos (Colletotrichum sp. y Pestalotia sp.) en laboratorio y de la incidencia de la enfermedad en plantas de oit en vivero, fueron analizados a travs del programa Biometric (Olivares, 1994).

4. RESULTADOS Y DISCUSION

4.1 Identificacin de los agente causales del dao del enchurcamiento de las hojas en el oit (Licania tomentosa)

4.1.1 Toma de muestras

Se tomaron un total de 54 muestras de material vegetal de oit en Bucaramanga y su rea metropolitana, con sntomas como enchurcamiento de las hojas nuevas (Figura 5), manchas oscuras caf o negro en las hojas (Figura6) y pstulas de color naranja en las hojas o manchas polvosas (Figura 7), para su anlisis en el Laboratorio de Diagnostico Fitosanitario del ICA.

Figura 5: Rebrotes de hojas nuevas de oit con enchurcamiento.Fuente: Maldonado, 2011.

Figura 6: Mancha oscura en hojas de oit.Fuente: Maldonado, 2011.

Figura 7: Pstulas de color naranja en hojas de oit.Fuente: Maldonado, 2011.

4.1.2 Diagnostico Fitopatolgico

A las muestras vegetales recolectadas se les realizo diagnostico Fitopatolgico segn el Manual de Procedimientos ICA, 2005.

4.1.2.1 Pestalotia sp.

Se aisl el hongo del gnero Pestalotia sp., de muestras de hojas con manchas oscuras (Fig. 5), en cultivo el hongo presenta un micelio de color negro o caf y blanco (Fig. 8), de los cuales se observaron conidias cortas y oscuras elpticas, con apndices apicales (Fig. 9) (Barnett y Hunter, 1996).

Figura 8: Caractersticas microscpicas de Pestalotia sp.Fuente: Maldonado, 2011.

Figura 9: Esporas de Pestalotia sp., vistas al microscopio en aumento de 40X.Fuente: Maldonado, 2011.

4.1.2.2 Puccinia sp.

Se identifico el hongo del genero Puccinia sp., de las hojas que presentaban pstulas de color naranja en la superficie, las estructuras que forman estas pstulas fueron identificadas como urediniosporas (Fig. 10), que son las estructuras de reproduccin de este hongo dentro del ciclo asexual (Fig. 11) ( Milus et. al., 2010).

Figura 10: Urediniosporas de Puccinia sp., vistas al microscopio en aumento de 10X.Fuente: Maldonado, 2011.

Figura 11: Ciclo de vida de Puccinia graminis.Fuente: Milus et. al, 2010.

4.1.2.3 Fusarium sp.

Se identific el hongo del genero Fusarium sp., en muestras de tejidos vegetales. Segn la publicacin de Barnett y Hunter, 1996, Fusarium sp., presenta un micelio considerable y textura algodonosa en cultivo, frecuentemente con algunos matices rosa, prpura o amarillo. Microscpicamente, presenta conidiforos variables, escasos y simples o corpulentos, cortos con ramificaciones irregulares, conidias hialinas, macroconidias ovoides algunas conidias se subdivides en 2 o 3 clulas (Fig.12)

Figura 12: Macroconidias de Fusarium sp., vistas en aumento de 40XFuente: Maldonado, 2011.

4.1.2.4 Colletotrichum sp.

A las muestras de material vegetal de oiti se les realizo el proceso para identificacin de hongos fitopatgenos y se aisl el hongo del genero Colletotrichum sp., esta especie ocasiona la antracnosis de muchas plantas de cultivo (Agros, 2004). Se observaron en el laboratorio, acrvulos en forma de disco o almohadilla (Figura 13), serosas, subepidrmicas, conidiforos simples, alongados, conidias hialinas unicelulares, ovoides o elongadas que coincide con la descripcin de Barnett y Hunter, 1996.

Figura 13: Esporas de Colletotrichum sp., vistas en aumento de 40XFuente: Maldonado, 2011.

4.1.2.5 Cladosporium sp.

Responsable de la enfermedad conocida como Moho de las hojas, la cual afecta gran parte de la superficie foliar y queda inutilizada para realizar fotosntesis, microscpicamente, se observa conidios y micelio obscuro, macrosifonado y septado (Pea et al., 1998) como se ilustra en la figura N 14.

Figura 14: Estructuras microscpicas de de Cladosporuim sp., en aumento de 40XFuente: Maldonado, 2011.

4.2 Pruebas de patogenicidad

Se realizo montaje de pruebas de patogenicidad, siguiendo la metodologa de Duarte, 2007 para los patgenos Colletotrichum sp., Pestalotia sp., y para la interaccin de estos 2 patgenos en conjunto, los resultados se ilustran en las figuras 15, 16, 17 y 18, en ninguno de los montajes se obtuvo la sintomatologa de enchurcamiento de las hojas; en la figura 15 se observa una coloracin negro-caf en la nervadura de la hoja; Colletotrichum sp., produce antracnosis en muchas plantas, la cual se caracteriza por lesiones oscuras en hojas, tallos y frutos (Agrios, 2004). En la Figura 16 se observan cuerpos fructferos en el

tallo, estos son acrvulos caractersticos del hongo del genero Pestalotia sp., los cuales constituyen estructuras de reproduccin asexual (Agrios, 2004); en las figuras 17 y 18 se observan etapas iniciales de formacin de acrvulos de Pestalotia sp.

Los hongos de los gneros Puccinia sp., Colletotrichum sp., y Cladosporuim sp., no se pudieron aislar a cultivo puro en el laboratorio, ya que no se obtuvo crecimiento micelial, a pesar de que se hicieron mltiples siembras en agar PDA. Por esta razn, no se realizaron las pruebas de patogenicidad ni la evaluacin de la efectividad de los productos en laboratorio.

Figura 15: Sintomatologa de Colletotrichum sp., para pruebas de patogenicidadFuente: Maldonado, 2011.

Figura 16: Sintomatologa de Pestalotia sp., para pruebas de patogenicidadFuente: Maldonado, 2011.

Figura 17: Sintomatologa de Pestalotia sp., en conjunto con Colletotrichum sp., para pruebas de patogenicidadFuente: Maldonado, 2011

Figura 18: Sintomatologa de Pestalotia sp., en conjunto con Colletotrichum sp., para pruebas de patogenicidad, se observan los acrvulos de Pestalotia sp., sobre la hoja.Fuente: Maldonado, 2011.

4.3 Evaluacin del control de la enfermedad en laboratorio y vivero

4.3.1 Pruebas de efectividad en laboratorio

Los ensayos de laboratorio se realizaron por separado para los hongosColletotrichum sp., y Pestalotia sp.

El anlisis de varianza hecho para el crecimiento de las colonias de Colletotrichum sp., indica que hubo diferencias significativas entre los tratamientos (P> F 0.000) y entre bloques (P>F 0.000) (tabla No. 4).

Tabla N 4 Anlisis de varianza del crecimiento de las colonias deColletotrichum sp., en cm, en el ensayo de laboratorio.

FVGLSCCMFP

Tratamientos514.1888202.83774618.08050.000

Bloques925.9901582.88779518.39920.000

Error457.0628430.156952

Total5947.241821

Para saber cual tratamiento fue el mas efectivo se realiz una prueba de comparacin de medias donde se puede observar entre cuales tratamientos hay diferencias significativas. Esta comparacin indica que entre los tratamientos con Vercani, Kazugal y el control no hubo diferencia significativa y tuvieron las medias ms altas denotando baja efectividad en el control de la enfermedad; el tratamiento con Control 500 tuvo un efecto intermedio; mientras que la aplicacin de Kocide y Antrasin redujo significativamente la colonia del Colletotrichum sp., por lo que se puede concluir que stos tratamientos fueron los ms efectivos en el control de este patgeno (Tabla N5).

Tabla N 5. Comparacin de medias del crecimiento de Colletotrichum sp., en pruebas de laboratorio (Nivel de significancia = 5%).

TratamientosMedia

2 (Vercani)1.4700 A

6 (Kazugal)1.3900 A

1 (Control)1.1700 AB

4 (Control 500)0.9300 B

5 (Kocide)0.4000 C

3 (Antrasin)0.1700 C

Al analizar el crecimiento del hongo Colletotrichum sp. a travs del tiempo en cada uno de los tratamientos, se observa que el tratamiento 2 con Antrasin es el que menor crecimiento presento del hongo (figura 19).

Figura 19: Crecimiento de las colonias de Colletotrichum sp., en cm, por tratamiento, en 10 evaluaciones realizadas.

El anlisis de varianza hecho para las colonias de Pestalotia sp., indica que hubo diferencias significativas entre los tratamientos (P>F 0.000) y entre bloques (P> F 0.000) (tabla No. 6).

Tabla N 6. Anlisis de varianza del crecimiento de las colonias de Pestalotia sp., en el ensayo de laboratorio.

FVGLSCCMFP

Tratamientos58.0968361.61936710.84690.000

Bloques934.5468333.83853725.71150.000

Error456.7181590.149292

Total5949.361828

Al igual que en el ensayo con las colonias de Colletotrichum sp., la comparacin de medias, indica que entre los tratamientos con Vercani, Kazugal y el control o testigo no hubo diferencia significativa y tuvieron las medias ms altas, denotando baja efectividad en el control de Pestalotia sp. , al igual que el Kocide, que fue efectivo en el control de Colletotrichum sp.; el tratamiento con Control 500 tuvo un efecto intermedio; mientras que la aplicacin de Antrasin redujo significativamente la colonia del Pestalotia sp sp., por lo que

se puede concluir que ste tratamiento fue el ms efectivo en el control del patgeno (tabla No. 7).

Tabla N 7. Comparacin de medias del crecimiento de Pestalotia sp., en pruebas de laboratorio (Nivel de significancia = 5%)

TratamientosMedia

1 (Control)1.3200 A

2 (Vercani)1.2600 A

5 (Kocide)1.0000 AB

6 (Kazugal)1.0000 AB

4 (Control 500)0.8500 B

3 (Antrasin)0.2000 C

Al analizar el crecimiento del hongo Pestalotia sp., a travs del tiempo en cada uno de los tratamientos, se observa que el tratamiento 2 con Antrasin es el que menor crecimiento presento del hongo (figura 20).

Figura 20: Crecimiento de Pestalotia sp., en evaluacin de los controladores en laboratorio

4.3.2 Aplicacin y evaluacin en vivero

El anlisis de varianza hecho para la incidencia del enchurcamiento de las hojas, indica que hubo diferencias significativas entre los tratamientos (P>F0.000) y entre bloques (P>F 0.000) (tabla No. 8).

Tabla N 8:.Anlisis de varianza de la incidencia en % del enchurcamiento de las hojas en plntulas en vivero.

FVGLSCCMFP

Tratamientos5510.187500102.0374987.23530.000

Bloques9521.31250057.9236114.10720.001

Error45634.62500014.102777

total591666.125000

Los resultados de la comparacin de promedios de la incidencia de cada tratamiento, indica que no hubo diferencias significativas entre las aplicaciones de Kazugal, Control 500, Vercani y Kocide con el control o testigo, cuyos valores oscilaron entre el 96.65% y 100%; y solamente el Antrasin present diferencias significativas con los dems tratamientos, al reducir la incidencia hasta el 91.28% (tabla No. 9). Todo lo anterior indica que el Antrasin fue el nico tratamiento que fue efectivo en el control del dao, denotando adems la bondad de los productos qumicos en el manejo de la enfermedad.

Tabla N 9: Comparacin de medias de la incidencia del enchurcamiento de las hojas de oiti de cada tratamiento.

TratamientosMedia

1 (Control)100.000 A

6 (Kazugal)99.5800 A

4 (Control 500)98.3200 A

2 (Vercani)97.9000 A

5 (Kocide)96.6500 A

3 (Antrasin)91.2870 B

Al analizar el comportamiento o la evolucin de la incidencia en un perodo de40 das, se observa que sta comienza a disminuir con la aplicacin de los tratamientos, a partir del da 24, la cual no cambia en el control cuya tendencia se mantiene igual y decrece en los dems tratamientos, siendo mayor en el tratamiento 2, o sea aquel que corresponde a la aplicacin del Antrasin (figura21).

Figura 21: Incidencia de la enfermedad del enchurcamiento de las hojas de oiti en vivero.

5. CONCLUSIONES

5.1 En los rboles de oiti de Bucaramanga y rea metropolitana, que comprende los municipios de Floridablanca. Girn y Piedecuesta, se lograron identificar los hongos del los gneros Pestalotia sp., Puccinia sp., Colletotrichum sp., y Fusarium sp., en el diagnostico fitopatolgico de la enfermedad del enchurcamiento de las hojas del oiti (Licania tomentosa).

5.2 Las pruebas de patogenicidad mostraron como resultado la sintomatologa de Colletotrichum sp., como manchas caf y oscuras en las hojas; Pestalotia sp., acrvulos oscuros en tallos y hojas y manchas oscuras en las hojas y la interaccin de estos 2 patgenos en conjunto, como manchas y acrvulos sobre las hojas.

5.3 En laboratorio se obtuvo que el mejor tratamiento para el control de los hongos de los gneros Pestalotia sp., y Colletotrichum sp., fue Antrasin, inhibiendo el crecimiento de los hongos en el medio de cultivo que lo contena.

5.4 En vivero, el mejor tratamiento para la enfermedad del enchurcamiento de las hojas de oiti, fue, al igual que en laboratorio, el tratamiento con Antrasin, reduciendo la incidencia de la enfermedad hasta un 79%, por los que se puede concluir que este producto, es efectivo para controlar la afeccin en plntulas.

6. RECOMENDACIONES

6.1 Los hongos del genero Puccinia sp., Cladosporuim sp., y Fusarium sp., no se lograron aislar a cultivo puro en el laboratorio, se recomienda hacer evaluaciones de diferentes medios de cultivo para su aislamiento y posterior evaluacin de agentes de control.

6.2 Se recomienda realizar aplicaciones peridicas del producto Antrasin en una concentracin de 3 gr./litro de agua, a plntulas en vivero para disminuir la incidencia de la enfermedad.

7. REVISIN BIBLIOGRAFICA

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ESCOBAR Mnera Milagro, DAZ Fonseca Alfonso, ANGARITA Garca Myriam,2007, Identificacin y manejo de problemas sanitarios en arboles urbanos de Bucaramanga, Santander, Colombia, 33 pginas.

FUENTES Castillo, Carlos, 2007, los postulados de koch: revisin histrica y perspectiva actual, revista complutense de ciencias veterinarias (RCCV), ISSN: 1988-2688, RCCV Vol. 1 (2), 5 Pginas.

GARCES deGranada Emira, COBA de Gutirrez Bertha, CASTILLO Nancy Isabel,1996, Identificacin de bacterias Fitopatgenas, Universidad Nacional de Colombia, Facultad de ciencias, Departamento de biologa, Primera edicin, 57 pginas.

ICA Bucaramanga, 2005, Manual de procedimientos laboratorio de Diagnostico Vegetal, pg. 15-54.

MILUS Gene, DEWOLF Erick, DILL-MACKY Ruth, STEFFENSON Brian, WEGULO Stephen, BERGSTROM Gary, SORRELLS Mark, McMULLEN Marcia, PAUL Pierce, HUNGER Robert, MUNDT Chris, ISARD Scott, STEIN Jeff, MURRAY Timothy, BAKER Heyward, BULLUCK Russ, DIVAN Chuck, ENGLE Jessica, HEBBAR Prakash, BOWDEN Bob, CARSON Marty, CHEN Xianming, JIN Yue, MARSHALL David, SMITH Kent, SZABO Les, 2010, Recovery Plan for Stem Rust of Wheat, (caused by Puccinia graminis f. sp. tritici Ug99 (race TTKSK) and other newly emerging races derived from it), 27 pginas.

OLIVARES Senz, Emilio, 1994, Paquete de diseos experimentales, FAUANL, versin 2.5, Facultad de agronoma UANL.

PEA, Carola, SHANUM M., Victoria, LUCANA Ch, Celia, MIRANDA CH., Mara, GIMENEZ T., Alberto, 1998, Aislamiento, identificacin y perfil biolgico de especies fngicas de tierras, revista BIOFARBO, volumen VI, 8 Pginas

STREETS Rubet B, 1982, The Diagnosis of plant diseases, 245 Pginas.

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Rubet B. The Diagnosis of plant diseases.

STREETS

8. ANEXOS

Anexo A. Diagrama de Schaad para identificacin de bacterias fitopatgenos

Anexo B. Procedimiento para la coloracin de Gram

Cubrir la preparacin con cristal violeta por un minuto Lavar muy bien con agua corriente. Eliminar el exceso de agua Cubrir con lugol de Gram. por un minuto Lavar con agua corriente, eliminando el exceso de agua Decolorar con alcohol etlico de 95% por 15 segundos Lavar con agua corriente, eliminando el exceso de agua Cubrir la preparacin de safranina por un minuto Lavar con agua corriente. Dejar secar al aire y observar al microscopio. Con el objetivo de 100x y utilizando aceite de inmersin. (ICA, 2005).

Anexo C. Procedimiento para la coloracin con azul de lactofenol.

1) Poner una gota de azul de Lactofenol en un portaobjetos estril.2) Con una cinta transparente realizar impronta al cultivo tomando las hifas con cuidado de no daar el tejido3) Pegar la cinta sobre el portaobjetos.4) Observar al microcopio las estructuras del hongo en estudio para comparar con claves de identificacin. (ICA, 2005).

Anexo D. Composicin de los productos usados como tratamientos para el control de la enfermedad del enchurcamiento de las hojas de oiti

1. Vercani:Lecanicillium lecanii 1*105 Esporas/ gr. Ingrediente activo Arroz y tensoactivos

Sulfato de cobre pentahidratado2%Sulfato de calcio dihidratado18%Ingrediente activo csp100%2. Antrasin:

3. Control 500Clorotalonil 200 gr./ LtIngredientes activos csp 1 Litro

4. KocideOxido cprico 77% Ingredientes activos 23%

5. KazugalKazugamicina 20 gr. / LtIngredientes activos 1 Litro

Anexo E. Registro fotogrfico de la evaluacin de los controladores qumicos y biolgicos en laboratorio

Foto #1: Evaluacin en laboratorio del tratamiento con Kazumin como controlador de Pestalotia sp.

Foto #2:Evaluacin en laboratorio del tratamiento con Kocide como controlador de Colletotrichum sp..

Foto #3: Evaluacin en laboratorio del control biolgico a base de Lecanicillium lecanii, como antagonista para Colletotrichum sp.

Foto #4: Evaluacin en laboratorio del control qumico Control 500, paraColletotrichum sp.