FACULTAD DE FARMACIA

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE

TRABAJO FIN DE GRADO

Mecanismos moleculares implicados en la regulación

de la muerte celular y patologías asociadas a

alteraciones en dicha regulación

Autor: Natalia María García Simón

D.N.I.: 05467178D

Tutor: Almudena Porras Gallo

Convocatoria: Junio

- 2 -

Contenido

Resumen……………………………………………………...………………………………..3

Introducción y antecedentes………………………………………………………………….3

1. Muerte celular……………………………………………………………………...3

2. Apoptosis o muerte celular programada: mecanismos………………...………..….4

3. Proteína p53………………………………………………………………………..5

4. Cáncer………………………………………………………………………………8

Objetivos………………………………………………………………………………………9

Palabras clave…………………………………………………………………………………9

Metodología…………………………………………………………………………………...9

Resultados y discusión………………………………………………………………………..9

1. p53 y enfermedad………………………………….……………………….…….8

1.1 p53 y cáncer de pulmón……….……...…….…………………………...10

1.2 p53 y cáncer de mama……………….……….………………………….11

1.3 p53 y cáncer de colon..……..……………….…………………………..12

2. p53 y tratamiento.………………………………….…………………………….13

2.1 Moléculas que actúan sobre p53 salvaje……………..………………….13

2.2 Moléculas que actúan sobre p53 mutada……………….….……..…….....15

Conclusiones……………………………………………………………………………...….17

Bibliografía……………………………………………………………………………….….17

Abreviaturas

ADPRT: Adenosina difosfato ribosil transferasa

APC: adenomatous polyposis coli Bcl-2: célula B de linfoma 2

CDK kinasas ciclina-dependiente

FHIT: Bis(5'-adenosil)-trifosfatasa

Mdm2: doble minuto murina 2

MdmX: doble minuto murina X

NBS1: nibrin

OGG1: oxoguanina glicosilasa

XPA: xeroderma pigmentosum complementación grupo A

- 3 -

Resumen

La apoptosis es uno de los principales mecanismos de muerte celular por el cual el organismo

elimina las células envejecidas o dañadas. La proteína p53 es un factor de transcripción entre

cuyas funciones se encuentra la activación y regulación de la apoptosis. Como consecuencia

de su mutación, se desarrollan una amplia variedad de enfermedades, entre las cuales se

encuentra el cáncer. En este trabajo se estudió la relación entre p53 y los cánceres de pulmón,

mama y colon, que son los principales tipos de cáncer en España. También se investigó sobre

el posible uso de p53 en el desarrollo de terapias anti-tumorales. Se concluyó que la mutación

de p53 está involucrada en varios procesos de desarrollo de los distintos tipos de cáncer

presentándose como una importante diana terapéutica a partir de la cual se están llevando a

cabo investigaciones.

Introducción y antecedentes

1. Muerte celular.

La muerte celular se puede llevar a cabo por tres principales vías: la necrosis, la autofagia y

la apoptosis.1, 2

La autofagia es el principal proceso catabólico proteico por el cual se produce la degradación

de proteínas citoplasmáticas longevas. Además, la autofagia también puede desencadenar la

muerte celular tanto en el desarrollo normal como en situaciones patológicas. Esta autofagia

(o macroautofagia) se lleva a cabo mediante el secuestro de orgánulos y proteínas

citplasmáticas en vesículas con doble membrana (autofagosomas). Seguidamente, estos se

unen a los lisosomas, creando autolisosomas, donde el contenido es degradado.3, 4

La necrosis es la muerte celular que conlleva a una rápida pérdida de la membrana celular que

permite la salida de los componentes celulares al espacio extracelular. Estos componentes

atraen células del sistema inmune provocando la activación de un proceso inflamatorio que

daña las células sanas vecinas.4, 5

Sin embargo, la apoptosis (también denominada muerte celular programada) no provoca

daños a su alrededor, siendo el principal mecanismo por el cual los organismos pluricelulares

eliminan células indeseadas y dejan paso a otras nuevas. Se inicia con una picnosis (reducción

del volumen celular), condensación de la cromatina y fragmentación del DNA que provoca la

destrucción de la célula. La célula apoptótica se divide en cuerpos apoptóticos, vacuolas, que

recogen fragmentos celulares e impiden que lleguen a la matriz extracelular. Seguidamente

- 4 -

serán eliminados por fagocitos lo que evita que se produzca inflamación y con ello, el daño a

las células vecinas.4-6

A continuación, se explica de manera resumida los mecanismos de la apoptosis.

2. Apoptosis o muerte celular programada: mecanismos.

Existen dos vías principales por las que se induce la apoptosis en una célula: la vía intrínseca

y la vía extrínseca.

La cascada de señales que componen la vía intrínseca da comienzo cuando las células están

dañadas o sufren algún tipo de estrés. El paso principal de esta cascada es la liberación hacia

el citosol de varios componentes de la mitocondria, entre ellos el citocromo c. En estado

fisiológico normal, el citocromo c se encuentra en la membrana interna mitocondrial, pero

cuando comienza el proceso de apoptosis, este atraviesa la membrana externa mitocondrial

por permeabilización de la misma y pasa al citosol. Aunque los estímulos que desencadenan

esta permeabilización de la membrana externa mitocondrial (MOMP) son variados, está

mediada principalmente por proteínas de la familia Bcl-2. Dentro de esta familia se pueden

distinguir las proteínas anti-apoptóticas de las pro-apoptóticas, donde las primeras bloquean la

apoptosis por inhibición de las segundas mediante interacciones proteína-proteína. Dentro de

las últimas también se pueden distinguir dos subgrupos: las que contienen varios dominios

homólogos a Bcl-2 (llamados BH) como son BAX, BAK, BOK; y aquellas que sólo tienen

uno, el BH3, como BID, BIM, PUMA, NOXA, BIK, BAD, HRK, y BMF . Tras activarse la

apoptosis, BAX y BAK, se insertan en la membrana externa mitocondrial en forma de

oligómeros e interaccionan con proteínas antiapoptóticas para provocar la apertura del poro

mitocondrial, aumentado la permeabilidad de la misma y permitiendo la salida de diversas

moléculas como el citocromo c. Una vez se encuentra en el citosol, el citrocromo c se une a

Apaf-1 (factor 1 activador de la proteasa apoptótica) y a ATP formando un complejo

denominado apoptosoma. El apoptosoma presenta un dominio amino terminal que es capaz de

unirse a la pro-caspasa 9, atrayendo varias moléculas de pro-caspasa 9, que se activan entre sí,

y dan lugar a una cascada de activaciones de otras caspasas efectoras (3, 2 y 7), especialmente,

la caspasa 3, que en última instancia activan la degradación de los componentes celulares

(Figura 1). 5, 7

- 5 -

Por otra parte, existen también señales extracelulares que activan el mecanismo de apoptosis a

través de su unión a receptores de muerte, lo que se conoce como vía extrínseca. Esta ruta se

lleva a cabo por la unión de ligandos

extracelulares como son TNF- (Factor de

Necrosis Tumoral ), FASL (FAS ligando)

o TRAIL (ligando inductor de apoptosis

relacionado con TNF-), con los dominios

extracelulares de receptores transmembrana

de TNF- tipo1, FAS (CD95/Apo-1) o

receptores TRIAL. Una vez se ha unido el

ligando al receptor, el dominio intracelular

de muerte de éste (DD) se une a otros DD de

la proteína adaptadora FADD (dominio de

muerte asociado a FAS) o TRADD (dominio

de muerte asociado a TNF). Estas proteínas

adaptadoras cuentan también con un

dominio de muerte efector (DED) que es

capaz de interaccionar con DED presentes

en la pro-caspasa 8, formando un complejo de inducción de muerte (DISC) que promueve la

autoactivación de pro-caspasa 8. Esta caspasa activa otras caspasas efectoras que llevan a la

muerte de la célula.4, 7

Al contrario de lo que se puede pensar, ambas vías no son mutuamente

excluyentes, pues existen algunas células (células tipo II) en las cuales proteínas de la vía

intrínseca son activadas por caspasas de la vía extrínseca, mediante la intermediación de BID:

la caspasa 8 proteoliza BID, transformándose en BID truncada (tBID) que es capaz de

permitir la liberación del citocromo c por MOMP y promover la formación del apoptosoma

como muestra la Figura 1.5

Para regular estos procesos de muerte celular, se cuenta con varios mecanismos de control.

El más directo es la regulación a nivel de caspasas. Existen unas proteínas inhibidoras de la

apoptosis (IAP), que según su tipo inhibirán a unas caspasas o a otras mediante ubiquitinación

o bloqueo. Para que estas puedan ser activas, el IAP se escinde de la caspasa por

intermediación de la proteína Smac/DIABLO, la cual, pasa al citosol desde la mitocondria

junto con el citocromo c.

Figura 1. Apoptosis: vía extrínseca (1) e intrínseca (2).

Las líneas negras indican activación y las líneas rojas

inhibición. El asterisco indica la cascada de unión

entre la vía extrínseca y la intrínseca.5

*

- 6 -

Además, existe una ruta de control genómico en la cual proteínas concretas regulan la

expresión de ciertos genes que intervienen en el proceso apoptótico. Es el caso de la proteína

p53, un factor de transcripción que regula la expresión de cientos de genes involucrados en la

regulación del crecimiento celular, división y también, apoptosis.8

3. Proteína p53

Esta proteína es un supresor tumoral que actúa frente a diversas señales de estrés, como es el

DNA dañado, eventos oncogénicos anormales, erosión de los telómeros e hipoxia. Su misión

final es evitar la replicación de DNA dañado, y la realiza mediante la inducción de la parada

del ciclo celular, la reparación del DNA y muerte celular.9

Esta proteína es un factor de transcripción que regula la expresión de muchos genes. Su

estructura se puede dividir en tres dominios: dominio N terminal transactivador, encargado

de activar la transcripción; dominio rico en prolina; dominio central de unión al DNA;

dominio de tetramerización; y dominio regulador C terminal, en donde existe una señal de

localización nuclear. Es importante señalar, además, que el dominio central es el más

susceptible a sufrir mutaciones en determinados puntos (denominados “hot spots” en inglés),

que son, en la gran mayoría de los casos, las responsables de un mal funcionamiento de p53 y

con ello, de la aparición de las patologías asociadas (Figura 2).5, 9

Para su regulación, p53 sufre un variado número de modificaciones post-traducionales

mediante fosforilación, acetilación, metilación y ubiquitinación, Las reacciones de

Figura 2. Estructura de p53 y modificaciones post-traduccionales. La estructura de p53

compone por varios dominios: dominio N terminal transactivador (TAD), dominio rico

en prolina (PRID), dominio central de unión al DNA (DBD), dominio de tetramerización

(TD), dominio regulador C terminal (CRD). Debajo se muestran los sitios principales de

modificaciones post-traduccionales, con las enzimas responsables de cada modificación a

la derecha. Adaptada de: Apoptosis: controlled demolition at the cellular level.5

- 7 -

fosforilación en restos de serina y treonina abarcan toda la proteína pero se concentran

principalmente en los dominios N y C terminal, donde se regula su actividad o los cambios

conformacionales. La fosforilación en el dominio N terminal es una de las modificaciones

más importantes para activar a p53.10

Las reacciones de acetilación de residuos de lisina

predominan en el dominio de tetramerización y C terminal, y se ha visto que son requeridos

para la formación del tetrámero y localización nuclear. En estos mismos dominios se

concentran también los sitios de metilación, principalmente en restos de lisina pero también

en restos de arginina, cuya repercusión puede ser de activación o de represión según la

localización y los grupos metilo incorporados. Por último, las reacciones de ubiquitinación se

concentran también en el dominio de tetramerización y C terminal. En este caso, es

importante distinguir entre mono ubiquitinación, que favorece la translocación de p53 al

citosol (importante, como se verá a continuación para activar la apoptosis no transcripcional),

y poliubiquitinación, cuyo objetivo es la degradación proteosomal de p53 (Figura 2). Una de

las enzimas que realiza esta modificación por ubiquitinación es Mdm2, principal actor en la

degradación de p53. En estados fisiológicos normales donde la célula no debe entrar en

apoptosis, Mdm2 por su actividad ubiquitin ligasa poli-ubiquitiniza p53 para promover su

salida del núcleo y dirigirlo a la degradación por proteasomas. Para este proceso, se cuenta

también con MdmX la cual se une a Mdm2 y p53 creando un complejo que mejora la eficacia

de la ubiquitinación y afianza la inactivación trnascripcional de p53. Cuando se requiere que

la célula entre en apoptosis, p53 se escinde de estas enzimas por pérdida de afinidad mediante

fosofrilación. 8, 9, 11

Cuando se detecta un daño a nivel del DNA, se activa p53 mediante la escisión de p53 con

Mdm2 y MdmX, mediante fosforilación, así como la expresión de p53. Los estímulos que

activan a p53 componen un amplio abanico, desde radiaciones hasta hipoxia, y según qué

estímulo incida, los mediadores y las cascadas que la activan son también numerosos. Con el

fin de restaurar los daños, p53 pone en marcha una complicada red de mecanismos para

detener el ciclo celular y activar la reparación, a través de la expresión del gen de la proteína

p21, entre otros muchos como son los que codifican para Gadd45, 14-3-3σ, PTGFβ, etc.12

Una de las funciones de la proteína p21 es la inhibición de CDK. Las CDK, en forma de

complejo junto con ciclinas D y E, fosforilan diversas proteínas entre las que se encuentra

pRB. La fosforilación de pRB favorece la liberación del factor de transcripción E2F para que

pueda unirse al DNA. Al inhibir las CDKs, p21 evita que E2F quede libre y por tanto no

puede llevar a cabo su función, deteniéndose el ciclo celular para que la célula repare el daño

antes de seguir dividiéndose.13

- 8 -

Sin embargo, si la reparación no es viable porque el daño es muy extenso, p53 pone en

marcha mecanismos de apoptosis evitando la propagación del daño. Para ello, puede utilizar

dos mecanismos: uno transcripcional y otro no transcripcional. La vía dependiente de

transcripción se basa en la función de p53 como factor de transcripción, para lo cual se

transloca al núcleo y se tetrameriza, lo que favorece la expresión de varios de sus genes diana

que codifican para proteínas pro-apoptóticas de la familia Bcl-2 como Bax, Noxa o Puma que,

como se ha explicado, activan la vía intrínseca de la apoptosis. p53 también puede inducir la

expresión de receptores de muerte.14, 15

En la vía independiente de transcripción, p53 se transloca desde el citoplasma hasta la

mitocondria, en donde interacciona directamente con proteínas antiapoptóticas de la familia

de Bcl-2, Bcl-2 y Bcl-XL, rompiendo el complejo que forman con BAX y BAK. Una vez

liberadas, estas proteínas inducen la formación del poro en la membrana mitocondrial externa

como se ha mencionado, activando la apoptosis. Además, p53 también puede activar

directamente a BAX y BAK.13, 16

4. Cáncer

El cáncer es definido por la OMS como un término genérico que designa un amplio grupo de

enfermedades que pueden afectar a cualquier parte del organismo y se caracteriza por la

multiplicación rápida de células anormales que se extienden e invaden partes adyacentes del

cuerpo o se propagan a otros órganos, lo que se denomina como metástasis.17

Este proceso se

desarrolla a través de varios estadios durante los cuales las células tumorales van adquiriendo

las alteraciones genéticas necesarias para proliferar y sobrevivir. Estas alteraciones las

capacitan para inactivar los mecanismos de apoptosis, por lo que aun estando rodeadas de un

constante estrés que debería poner en marcha su destrucción, esta no se lleva a cabo. Esta

modulación de la apoptosis se realiza mediante cambios transcripcionales, traduccionales y

post-traduccionales, los cuales, no son mutuamente excluyentes si no que se pueden

desarrollar varios mecanismos a la vez para evitar la apoptosis. En algunos casos, las células

tumorales escapan de la apoptosis disminuyendo la expresión o estabilización de genes

proapoptóticos, como es el caso de p53, mediante modificaciones post-traduccionales como la

fosforilación. Así pues, la pérdida de la funcionalidad de p53 se presenta como uno de los

enclaves principales del desarrollo del cáncer por lo que el estudio de sus mutaciones en

relación con los diversos tipos de cáncer nos acerca a una mejor comprensión de esta

enfermedad así como a nuevas terapias eficaces frente a ella.18

- 9 -

Objetivos

Los objetivos específicos de este trabajo son:

1. Analizar la implicación de las mutaciones de p53 en el desarrollo de los cánceres de

pulmón, mama y colon.

2. Determinar la importancia de conocer el estado de p53 a la hora de aplicar el

tratamiento

3. Determinar el interés de tratamientos anti-tumorales basados en la presencia de p53.

Palabras clave: apoptosis, p53, mutación, cáncer, tratamiento

Metodología

Este trabajo se ha llevado a cabo mediante una revisión bibliográfica realizada,

principalmente, a través de artículos procedentes de los buscadores más populares y usados, a

saber: PubMed, Scienci Direct, Search Medica. La búsqueda de los artículos a partir de los

cuales se ha sacado la información, se ha realizado principalmente mediante las palabras clave

mencionadas, en lengua inglesa, anteponiendo aquellos con fechas más actuales. Se usaron 42

artículos de revistas científicas, además de otras páginas de información como la OMS y

SEOM (Sociedad Española de Oncología Médica), en este caso en lengua española.

Resultados y discusión

1. p53 y enfermedad

p53 es uno de los genes que con más frecuencia se encuentra mutado en las patologías

tumorales. Como se ha mencionado anteriormente, la proteína p53 se compone

principalmente de tres regiones. La mayoría de las mutaciones que se relacionan con procesos

patológicos, y más concretamente con el cáncer, se localizan en el dominio central, que es el

de unión al DNA.19, 20

Además, se ha visto que los tumores que presentan la proteína p53

mutada tienen una mayor capacidad de invasión y agresividad que aquellos que con la forma

salvaje de p53.21,

En contraste con la actividad supresora de tumores que presenta la proteína

p53 salvaje, la presencia de mutaciones en el gen de p53 puede dar lugar a tres situaciones: 1)

mutaciones que hagan inviable la expresión de la proteína; 2) mutaciones que dan lugar a una

proteína no funcional; y 3) mutaciones que le confieran a p53 nuevas funciones, lo que se

denomina “ganancia de función”, a través de las cuales se acentúa directamente la progresión

del cáncer.8, 22

El problema que se presenta en las dos primeras situaciones, las más comunes,

- 10 -

es que no se puede desarrollar la función normal de factor de transcripción de p53,

provocando fallos en los múltiples procesos en los que interviene como la reparación de DNA

o la inducción de la apoptosis. Es decir, no se lleva a cabo su función antitumoral haciendo

más fácil el desarrollo de procesos tumorales. La tercera situación es todavía más grave

debido a que existe esa pérdida de función antitumoral a lo que se le une esa “ganancia de

función” que se relaciona con varios procesos que favorecen el desarrollo y progresión

tumoral como son el aumento de la capacidad de invasión e inducción de metástasis, la

resistencia a quimioterapia y en último término el aumento de la mortalidad.18, 23

Seguidamente, se realiza un desglosamiento de la implicación de p53 mutada en los

principales cánceres presentes en la población española.

1.1 p53 y cáncer de pulmón

Según datos de la OMS, el cáncer de pulmón es la primera causa de muerte por cáncer, no

sólo a nivel nacional sino también a nivel mundial.17

Si desglosamos los datos por sexos a

nivel nacional, el cáncer de pulmón constituye la primera causa de muerte por cáncer en

hombres y la tercera en mujeres.24

En aproximadamente un 50% de casos de cáncer de pulmón se ha encontrado mutación en el

gen p53. Uno de los factores de riesgo principales en el desarrollo de este tipo de cáncer es el

tabaco, y es responsable de la aparición de mutaciones en varios genes, entre las que se

encuentran las mutaciones en p53. Se ha visto que en cánceres de pulmón hay un mayor

número de transversiones G:C a T:A, a diferencia de otros tipos de cáncer, aunque el origen

de ello sigue siendo desconocido. Sin embargo, actualmente se ha encontrado que un

componente del tabaco, BPDE (benzo[a]pireno dihidrodiol epóxido), es responsable de

mutaciones en el gen de p53 al ser capaz de formar aductos de guanina en varios codones

dentro de los puntos calientes (hot spots). Entre ellos, se encuentra el codon 157 que tiene

mayor probabilidad de mutación en pacientes fumadores, y el aducto que induce BDPE en ese

sitio provoca una distorsión estructural. Según lo señalado en la Figura 2, el codón 157 se

encuentra en la región de unión al DNA, por lo que esta distorsión lleva a una unión

incorrecta con el DNA y con ello a un mal funcionamiento de la proteína p53 que no permite

el desarrollo normal de los mecanismos en los que interviene, entre ellos la apoptosis,

pudiendo influir en la aparición del cáncer.25, 26

Existen otros mecanismos por los que se puede desarrollar a una mutación de p53 que derive

en cáncer de pulmón. Uno de ellos es el inducido por la infección del virus del papiloma

humano (VPH). Aunque este virus se relaciona fundamentalmente con el cáncer de cuello

- 11 -

uterino, también tiene un papel en el desarrollo del cáncer de pulmón. Según un estudio

realizado, se ha visto que los casos de cáncer con VHP positivo tenían una tasa mayor de

mutaciones de p53 que en aquellos con VHP negativo. EL VPH inhibe la función de p53

mediante ubiquitinación a través de su proteína E6 en forma de complejo junto a una E3

ubiquitin ligasa (E6AP). Para que VPH pueda inducir cáncer de pulmón, se estudió además la

posible necesidad de cooperación de la pérdida de FHIT. Esta enzima cataliza la reacción de

formación de ADP y AMP a partir de P1, P3-bis (5'-adenosil) trifosfato que está involucrada

en la ruta de síntesis de purinas. El VPH es capaz de integrarse en el sitio frágil FRA3B que

incluye el gen FHIT y provocar por consiguiente la pérdida de la enzima. Sin embargo, el

estudio concluye que esta correlación aún no está clara y se promueve una más profunda

investigación.27

Sin embargo, no sólo los factores externos son responsables de mutaciones en p53 que dan

lugar a cáncer de pulmón, sino que también existen factores genéticos que predisponen.

Existen ciertos polimorfismos de un solo nucleótido (SNPs) que pueden regular la presencia

de mutaciones de p53. Se estima una relación entre la presencia de varios genotipos malignos

derivados de esos polimorfismos, con el incremento de la prevalencia de mutaciones de p53.

Por ahora, se han relacionado con estas mutaciones cuatro SNP, a saber: rs1800975 en el gen

XPA, rs1052133 en el gen OGG1, rs1136410 en el gen ADPRT, y rs1805794 en el gen NBS1.

Así, pacientes que poseen 3 ó 4 genotipos de este tipo tienen una mayor frecuencia de

mutaciones en la proteína p53 que aquellos con menos o ninguno de esos genotipos.28

1.2 p53 y cáncer de mama

El cáncer de mama representa la principal causa de muerte en mujeres por enfermedad

tumoral, tanto a nivel mundial como nacional. 17, 24

Como en todos los procesos tumorales,

dentro de un tipo de cáncer existe una clasificación de varios subtipos, pero en el caso del

cáncer de mama es de vital importancia ya que el tratamiento depende del tipo que se trate.

No se trata de una clasificación morfológica, sino de una clasificación por expresión o

ausencia de ciertos receptores: 1) cáncer receptor hormonal positivo, donde están presentes

receptores de progesterona y estrógenos; 2) cáncer HER2 positivo, en el cual el receptor

HER2 está sobre-expresado; y 3) cáncer triple negativo, donde no están presenten los

receptores hormonales ni hay sobre-expresión de HER2.29

En relación con p53, se encuentran

mutaciones de p53 en un gran número de casos, especialmente en aquellos subtipos altamente

agresivos, en los cuales, p53 está mutada hasta en un 80% de los casos.30

Existen una gran

- 12 -

variedad de mutaciones de p53 resultando en distintos mecanismos de inducción de tumores,

de los cuales, algunos ya han sido explicados y otros quedan todavía por describir.20

Uno de ellos se lleva a cabo por la alteración de la vía de regulación del factor de

transcripción KLF17 (Kruppel-like-factor) por p53. En condiciones normales, KLF17 impide

la generación de metástasis inhibiendo la transición epitelio mesénquima (EMT) a través de la

regulación de sus genes. En este caso, las mutaciones que conducen al desarrollo de la

enfermedad son aquellas que provocan una ganancia de función de p53. Estas mutaciones,

localizadas en el dominio central, le confieren a p53 la capacidad de inhibir la expresión de

KLF17. Por lo tanto, no existe un control negativo de la EMT, favoreciendo la migración e

invasión de las células tumorales en el cáncer de mama.19

Sin embargo, este no es el único mecanismo que favorece la migración e invasión de estas

células tumorales. Debido a mutaciones puntuales en el dominio central de unión a DNA, p53

pierde su conformación original y adopta una nueva que le permite interaccionar con otras

proteínas de la familia como es p63. Esta proteína es también un factor de transcripción, entre

otras cosas, regula la expresión de genes que inhiben los procesos de invasión celular y la

actividad de algunos receptores de membrana, como el receptor del factor de crecimiento

epidérmico (EGFR). Por ello, la unión de p53 mutada a p63 impide el correcto

funcionamiento de esta última, provocando un incremento de la invasión celular.31

El cáncer de mama también se puede desarrollar por un fallo en la función de algún miRNA

debido a una interacción con p53 mutada. Concretamente, la mutación R273H de p53

posibilita la unión de la proteína al promotor de miRNA30a, inhibiendo su expresión y

favoreciendo la expresión del receptor del factor de crecimiento insulínico tipo 1 (IGR-1R).

La vía de señalización que induce este receptor promueve la proliferación y, en última

instancia, la migración de células tumorales. Por tanto, la expresión de p53 mutada lleva a un

incremento de la migración en células tumorales mamarias.32

1.3 p53 y cáncer de colon

El cáncer de colon supone en España la segunda causa de muerte por cáncer, tanto en varones

como en mujeres24

. El proceso de desarrollo de esta enfermedad comprende varios estadios:

desde un colon sano, pasando por un adenoma pequeño seguido de uno mayor, acabando

finalmente en un adenocarcinom.33

La evolución de este proceso puede darse a partir de

diferentes y diversos mecanismos, entre los cuales destacan las mutaciones de varios genes.34

De forma generalizada, los genes que con mayor frecuencia se encuentran involucrados en

este tipo de cáncer son el oncogen K-ras y los factores supresores de tumores, APC y p53.33-36

- 13 -

El gen p53 se estima que se presenta mutado en aproximadamente el 40-60% de los casos de

cáncer de colon.34

A pesar de su prevalencia, los mecanismos a través de los cuales, p53 induce cáncer de colon

no se conocen bien. Se sabe que dentro de la variedad de mutaciones que puede sufrir, los

codones que se presentan mutados con mayor frecuencia son los codones 175, 248, 273,

situados en el dominio central, que modifican la conformación normal de p53, así como las

interacciones entre p53 y distintas proteínas.34, 37

Un claro ejemplo de ello es la interacción

entre p53 y APC. Ambas proteínas son supresoras de tumores y se encargan de activar la

apoptosis en células dañadas. Además, p53 es un regulador de la expresión de APC. Cuando

p53 está activa, aumenta la actividad del promotor del gen de APC, lo que aumenta su

expresión y activa la apoptosis. Si una mutación en p53 impide la correcta unión entre p53 y

el promotor de APC, la activación de la apoptosis se ve comprometida y se favorece la

aparición de células cancerosas en el colon.35

2. p53 y tratamiento

Según lo visto anteriormente, p53 juega un papel importante en el control y desarrollo de los

procesos tumorales. Son, por tanto, necesarias investigaciones sobre posibles terapias

anticancerosas dirigidas a actuar sobre p53. La primera es favorecer el aumento de los niveles

de p53 salvaje en aquellas células cuyo gen no esté mutado, pero que por otras razones no está

funcionando correctamente (alteraciones de Mdm2, exclusión del núcleo, etc.), y por tanto,

inducir a apoptosis en las células que contengan daños a otro nivel. En el caso de que existan

mutaciones en el gen, se pueden desarrollar moléculas que corrijan o eliminen la proteína

mutada. Para conseguirlo, se está estudiando la posibilidad de utilizar terapias genéticas en las

cuales se introduzca la propia proteína salvaje, se utilicen vectores con moléculas que corrijan

la mutación o se usen adenovirus modificados que reconozcan células con p53 mutada y la

destruyan.38

A continuación, se detallan algunas de las estrategias más novedosas que están en fase de

investigación y las cuales, según los resultados obtenidos hasta el momento, se presentan

prometedoras.

2.1 Moléculas que actúan sobre p53 salvaje

Como se ha comentado los procesos tumorales pueden cursar con una disminución de la

actividad de p53 por factores que no son intrínsecos a ella como es alteraciones en Mdm2 que

provocan una mayor degradación de p53 de la requerida. Frente a este problema, varias

moléculas están siendo investigadas. La más estudiada y que está presentando mejores

- 14 -

resultados es Nutlina (nutlin). Las Nutilinas son una serie de pequeñas moléculas que

interrumpen la unión entre p53 y Mdm2 al tener una alta afinidad de unión por Mdm2 que

bloquea el sitio de unión con p53 impidiendo así la degradación de la proteína, y por lo tanto,

aumentando sus niveles. En concreto, nutlina-3 ha demostrado aumentar los niveles y la

actividad de p53 en varios tipos de cáncer entre los que se encuentran el de pulmón, mama y

colon. 26, 38

Con un mecanismo de acción muy parecido, se encuentra la molécula MI-219 que

imita los residuos de p53 y se une a Mdm2 con mayor afinidad que la propia p53 lo que le

permite eludir su degradación y aumentar sus niveles.38

En una línea similar, está el agente anticanceroso FL118. Esta molécula, similar a lo que

ocurría con las anteriores, tiene como objetivo impedir la ubiquitinación de p53 por Mdm2.

En concreto, su mecanismo de acción se basa en disminuir las interacciones entre p53 y

Mdm2, y estimular las que se producen entre Mdm2 y MdmX, lo que provoca una

ubiquitinación y posterior degradación de MdmX. Como resultado se ve aumentada la

concentración de p53. Una ventaja que añade esta molécula frente a Nutlina es que es capaz

de inducir un proceso apoptótico independiente de p53 cuando esta está ausente o hay

sobreexpresión de Mdmx. Esta molécula se ha estudiado en líneas celulares de cáncer de

colon y se prevé su uso principalmente en este tipo de cáncer.36

Siguiendo la línea de inhibición de la actividad de Mdm2, pero utilizando otros mecanismos,

encontramos los siRNAs (RNAs de interferencia). Estas moléculas de RNA pequeñas son

capaces de inducir la degradación del RNAm diana disminuyendo así los niveles de la

proteína codificada, en este caso, MDM2. Con ayuda de nanotubos de carbono, se promueve

la introducción de siRNAs en las células cancerosas que impide la expresión de Mdm2 y se

favorece el acúmulo de p53 y la posterior activación de la apoptosis de la célula dañada.39

Por otro lado, con el mismo mecanismo en mente, pero dirigiéndose más a una terapia

específica de cáncer de pulmón, se está intentando desarrollar una terapia a través de la

curcumina. La curcumina se usa como colorante natural, pero en las últimas décadas ha

aumentado su interés como terapia anticancerosa, ya que se le ha relacionado con múltiples

vías de señalización en tumores. Una de sus implicaciones es en la activación de la vía p53-

microRNA-XIAP. En esta vía, la curcumina aumenta la expresión de p53, que actúa como

factor de transcripción de los genes que codifican para los miRNA, miRNA-192-5p y

miRNA-215. Estos miRNA inhiben la expresión de XIAP, un miembro de la familia de las

IAP que inactiva la caspasa 3, favoreciendo la apoptosis. Esta posible terapia se quiere dirigir

a tratar NSCLC (cáncer de pulmón de células no pequeñas), uno de los tipos de cáncer de

pulmón más comunes (constituye el 80% de todos los casos por cáncer de pulmón).40

- 15 -

Por otro lado, no sólo la liberación de Mdm2 aumenta los niveles de p53. En este camino,

encontramos a KP46. Se trata de un complejo gálico cuya actividad anticancerosa se

desarrolla por la competición que existe entre el hierro y el galio para ser absorbidos por la

célula. Según el estudio, la acumulación de KP46 en la mitocondria coincide con una

disminución de los niveles de hierro y con un aumento de la actividad de p53. Para que p53

pase al citosol y sea degradado por las ubiquitinasas debe unirse a hemoglobina. Como el

hierro es requerido por las mitocondrias para sintetizar hemoglobina, los niveles de esta se

ven reducidos. Por tanto, al no poder trasladarse al citosol, p53 aumenta sus niveles en el

núcleo donde desarrolla su función transcripcional. En concreto, los resultados indican que el

tratamiento de células tumorales con KP46 hace del gen que codifica para BNIP3L la diana

mayoritaria de p53. BNIP3L es una proteína pro-apoptótica perteneciente a la familia de Bcl-

2 entre cuyas funciones se encuentra aumentar la permeabilización de la mitocondria para

activar la apoptosis. Este tratamiento se ha estudiado en líneas de cáncer de colon.41

Sin embargo, Mdm2 no es la única molécula a la cual se puede dirigir una terapia de

activación de p53. Sin la intervención de terceras moléculas, se está estudiando un nuevo

compuesto derivado de naftalamida, denominado NA-17. Su mecanismo de acción se basa en

aumentar los niveles de p53 fosforilada en el núcleo y mitocondria. Según los resultados, las

moléculas de p53 fosforiladas inducidas por NA-17 en el núcleo se unen directamente al

promotor del gen de Bcl-xl inhibiendo su transcripción; mientras que en la mitocondria, las

moléculas de p53 fosforiladas se unen al complejo Bak-Bcl-xl causando la disociación de Bak

del complejo y por consiguiente la activación del proceso de apoptosis. Adicionalmente,

comparando los efectos entre las diferentes líneas de células utilizadas, se ha visto que NA-17

tiene mayor actividad en aquellas líneas celulares tumorales con p53 inactivada, y sin

embargo, en las líneas celulares normales, presenta una baja toxicidad, de lo que se infiere

que NA-17 es capaz de distinguir entre células tumorales y células sanas.10

2.2 Moléculas que actúan sobre p53 mutada

Como se ha indicado anteriormente, más de la mitad de los cánceres cursan con una p53

mutada frente a lo cual las terapias anteriores no tienen validez. Con la idea de salvar este

obstáculo, aparecieron otras propuestas como es PRIMA-1. Este compuesto se podría utilizar

en casos en los que la proteína p53 esté mutada ya que su mecanismo de acción se asienta en

una unión entre él y el domino central de la p53 mutada permitiendo una alquilación de los

grupos tioles de la proteína, que induce a una transformación en su conformación

estabilizándola y asemejándola a la de p53 salvaje y restaurando su funcionalidad. Esta

- 16 -

molécula ha sido testada en varias líneas de células tumorales, pero los mejores resultados se

han obtenido en líneas de cáncer de pulmón.26, 38

Otra novedosa estrategia que promete buenos resultados, emplea dos inhibidores de la enzima

histona desacetilasa (HDACI): el ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA) y el butirato

sódico (NaB). Esta terapia está enfocada sobre todo al cáncer de mama triple negativo

(TNBC), por varias razones ya que representa uno de los subtipos de cáncer de mama más

agresivos, para el cual no existe tratamiento actual porque no existen dianas. En torno a un

52% cursa con mutaciones en p53. SAHA-NaB se basa en la inhibición de la transcripción del

gen p53 mutado a través del bloqueo del eje HDAC/YY1 (factor de transcripción Yin Yan 1).

YY1es uno de los factores de transcripción que regulan positivamente la transcripción del gen

que codifica para p53 mutada. Para ello, YY1 debe unirse al promotor del gen p53, para lo

cual se requiere que YY1 esté desacetilada. Esta desacetilación, en concreto, de YY1, la lleva

a cabo HDAC8. El mecanismo de acción de SAHA y NaB se basa en inhibir la asociación

entre HDAC8 y YY1 para evitar la desacetilación de este último. Esto consigue que YY1 esté

hiperacetilada lo que provoca que disminuya su capacidad de unión a DNA, y por tanto, se

disminuya la transcripción de p53 mutada.42

En una dirección más concreta, dirigida sobre todo al tratamiento de cáncer de colon, se están

estudiando dos nuevas moléculas. El primer agente, es la molécula CP-31398, que actúa a

nivel de la proteína ya formada. Su mecanismo de acción se basa en restaurar y estabilizar la

conformación original de la p53 salvaje a partir de p53 mutada. Se ha visto que en células con

p53 mutada tratadas con CP-31398, se producía detección del ciclo celular y se inducía la

apoptosis. De estas repuestas, se dedujo que la actividad de p53 había sido restaurada. Por lo

tanto, CP-31398 transforma p53 mutada en p53 salvaje y con ello se recupera la capacidad de

inducir la parada del ciclo celular y la apoptosis.43

El segundo agente, tiene como objetivo corregir la proteína a nivel de RNA. Mediante

adenovirus modificados que actúen como vector, se introduce un mRNA de p53 salvaje, es

decir sin mutaciones, que se empalma al mRNA mutado endógeno. Mediante un

espliceosoma se realiza un corte y empalme en trans con el mRNA introducido, que corrige

el mRNA mutado de la célula. De esta manera, se presenta una nueva terapia en el tratamiento

de cáncer de colon, presumiblemente extensible a otros tipos. Aunque existen ciertas

desventajas en esta terapia, pues no todas las mutaciones fueron corregidas, y existe una

limitación en la cantidad de exones que se pueden corregir, también presenta grandes ventajas.

No presenta la desventaja con respecto al espacio limitado que se manifiesta en las terapias

con vectores porque sólo se requiere introducir un fragmento del gen; además no se espera la

- 17 -

presencia de efectos adversos en células normales pues sólo tiene que activarse el mecanismo

cuando esté presente el RNA diana.44

Conclusiones

- Los mecanismos por los cuales un fallo en p53 puede derivar en cáncer de colon, mama o

pulmón son variados según el tipo de cáncer que se trate e incluso existe variedad dentro de

un mismo tipo.

- A la hora de dirigir una terapia es importante saber si p53 se encuentra mutada o no. En caso

de mutación se opta por una terapia de restauración de la acción, mientras que en casos con

p53 salvaje, se dirige a un aumento de su actividad fisiológica.

- La proteína p53 se presenta como una potencial diana anticancerosa interesante, y los

estudios realizados sobre terapias en base a ella obtienen resultados prometedores para poder

incluirla en tratamientos actuales en un futuro.

Es por tanto, que desde este trabajo se promueve e incentiva la investigación y elaboración de

nuevas estrategias para acercarnos más a una terapia de curación efectiva y segura del cáncer.

Bibliografía

1. Degterev A, Yuan J. Expansion and evolution of cell death programmes. Nat Rev Mol

Cell Biol. 2008; 9(sd5):378-90

2. Galluzzi L, Vitale I, Abrams JM, Alnemri ES, Baehrecke EH, Blagosklonny MV, et al.

Molecular definitions of cell death subroutines: recommendations of the Nomenclature

Committee on Cell Death 2012. Cell Death Differ. 2012; 19(1):107-20.

3. Ben Loos, Anna-Mart Engelbrecht, Richard A. Lockshin, Daniel J. Klionsky, Zahra Zaker.

The variability of autophagy and cell death susceptibility. Autophagy. 2013

Sep;9(9):1270-85.

4. Vassiliki Nikoletopoulou, Maria Markaki, Konstantinos Palikaras, Nektarios Tavernarakis.

Crosstalk between apoptosis, necrosis and autophagy. Biochim Biophys Acta. 2013

Dec;1833(12):3448-59.

5. Rebecca C. Taylor, Sean P. Cullen and Seamus J. Martin. Apoptosis: controlled

demolition at the cellular level. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2008; 9 (231-241)

6. G Kroemer, L Galluzzi, P Vandenabeele, J Abrams, ES Alnemri, Baehrecke.

Classification of cell death: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell

Death 2009. Cell Death and Differentiation (2009) 16, 3–11.

7. Samira Goldar, Mahmoud Shekari Khaniani, Sima Mansoori Derakhshan, Behzad

Baradaran. Molecular Mechanisms of Apoptosis and Roles in Cancer Development and

Treatment. Asian Pac J Cancer Prev, 16 (6), 2129-2144.

- 18 -

8. Jayne Loughery, David Meek. Switching on p53: an essential role for protein

phosphorylation? BioDiscovery 2013; 8: 1

9. Chao Dai, Wei Gu. p53 post-translational modification: deregulated in tumorigenesis.

Trends Mol Med. 2010 November ; 16(11): 528–536.

10. Guohai Zhang, Yunfeng An, Xing Lu, Hui Zhong, Yanhong Zhu, Yiming Wu, et al. A

Novel Naphthalimide Compound restores p53 function in Non–Small–Cell Lung Cancer

by Reorganizing the Bak–Bcl-xl Complex and Triggering Transcriptional Regulation. J

Biol Chem. 2016 Feb 19;291(8):4211-25.

11. Caroline J. DeHart, Jasdave S. Chahal, S. J. Flint, David H. Perlman. Extensive Post-

translational Modification of Active and Inactivated Forms of Endogenous p53. Mol Cell

Proteomics. 2014 Jan; 13(1): 1–17.

12. Zhen Wang, Yi Sun. Targeting p53 for Novel Anticancer Therapy. Transl Oncol. 2010

Feb; 3(1): 1–12.

13. Abde M. Abukhdeir, Ben Ho Park. P21 and p27: roles in carcinogenesis and drug

resistance. Expert Rev Mol Med. 2008 Jul 1;10:e19.

14. Amaral, J.D., Xavier, J.M., Steer, C.J., Rodrigues, C.M., 2010. The role of p53 in

apoptosis. Discov. Med. 9, 145–152.

15. Seung-Wook Chi. Structural insights into the transcription-independent apoptotic pathway

of p53. BMB Rep. 2014; 47(3): 167-172.

16. Christophe Debena, Vanessa Deschoolmeestera, Filip Lardona, Christian Rolfoc, Patrick

Pauwelsa,baCenter. TP53 and MDM2 genetic alterations in non-small cell lung cancer:

Evaluating their prognostic and predictive value. Crit Rev Oncol Hematol. 2016

Mar;99:63-73.

17. Organización Mundial de la Salud. Cáncer. Ginebra: OMS; 2015. Nota descriptiva Nº297.

18. Kaleigh Fernald, Manabu Kurokawa. Evading apoptosis in cancer. Trends Cell Biol. 2013

December ; 23(12): 620–633.

19. Amjad Ali, Abdus Saboor Shah, Ayaz Ahmad. Gain-of-function of mutant p53: mutant

p53 enhances cancer progression by inhibiting KLF17 expression in invasive breast

carcinoma cells. Cancer Lett. 2014 Nov 1;354(1):87-96.

20. Mariana Fitarelli-Kiehl, Juliana Giacomazzi, Patricia Santos-Silva, Marcia Silveira

Graudenz, Edenir Inez Palmero, Rodrigo Augusto Depieri Michelli et al. The breast

cancer immunophenotype of TP53-p.R337H carriers is different from that observed

among other pathogenic TP53 mutation carriers. Fam Cancer. 2015 Jun;14(2):333-6.

21. 1 Lang GA, Iwakuma T, Suh YA, Liu G, Rao VA, Parant JM, Valentin-Vega YA, Terzian

T, Caldwell LC, Strong LC, El- Naggar AK, Lozano G. Gain of function of a p53 hot spot

mutation in a mouse model of Li-Fraumeni syndrome. Cell. 2004; 119:861–872.

22. Nataly Shtraizent, Hiroshi Matsui, Alla Polotskaia, Jill Bargonetti. Hot SpotMutation in

TP53 (R248Q) Causes Oncogenic Gain-of-Function Phenotypes in a Breast Cancer Cell

- 19 -

Line Derived from an African American Patient. Int. J. Environ. Res. Public Health 2015,

13, 22.

23. Catherine A. Vaughan, Rebecca Frum, Isabella Pearsall, Shilpa Singh, Brad Windle,

Andrew Yeudall et al. Allele specific gain-of-function activity of p53 mutants in lung

cancer cells. Biochem Biophys Res Commun. 2012 Nov 9;428(1):6-10.

24. Sociedad Española de Oncología Médica. Las Cifras del Cáncer en España 2016. Madrid:

(SEOM); 2016.

25. Georgina E. Menzies, Simon H. Reed, Andrea Brancale, Paul D. Lewis. Base damage,

local sequence context and TP53 mutation hotspots: a molecular dynamics study of

benzo[a]pyrene induced DNA distortion and mutability. Nucleic Acids Res. 2015 Oct 30;

43(19): 9133–9146.

26. Don L. Gibbons, Lauren A. Byers, Jonathan M. Kurie. Smoking, p53 Mutation, and Lung

Cancer. Mol Cancer Res. 2014 January ; 12(1): 3–13.

27. Yan Yu, Xiaofei Liu, Yuxuan Yang, Xiaodan Zhao, Jianjun Xue, Weixiao Zhang, Aimin

Yang. Effect of FHIT loss and p53 mutation on HPV-infected lung carcinoma

development. Oncol Lett. 2015 Jul;10(1):392-398

28. Sukki Choa, Min Jung Kimb, Yi Young Choib, Seung Soo Yoo, Won Kee Lee, Eun Jin

Lee. Associations between polymorphisms in DNA repair genes and TP53 mutations in

non-small cell lung cancer. Lung Cancer. 2011 Jul;73(1):25-31.

29. Breast Cancer Treatment–Health Professional Version (PDQ®). National Cancer Institute.

Actualizado: 2 febrero 2016; acceso: 11 mayo 2016. Disponible en:

http://www.cancer.gov/types/breast/hp/breast-treatment-pdq

30. Hudis CA, Gianni L. Triple-negative breast cancer: an unmet medical need. Oncologist.

2011; 16:1–11.

31. Igor Bado, Fotis Nikolos, Gayani Rajapaksa, Jan-Åke Gustafsson, Christoforos Thomas.

ERβ decreases the invasiveness of triple-negative breast cancer cells by regulating mutant

p53 oncogenic function. Oncotarget. 2016 Feb 10

32. Fangdong Guo, Hongshen Chen, Jian Chang, Lin Zhang. Mutation R273H confers p53 a

stimulating effect on the IGF-1R-AKT pathway via miR-30a suppression in breast cancer.

Biomed Pharmacother. 2016 Mar;78:335-41

33. Pooja Malhotra, Mumtaz Anwar. Neha Nanda, Rakesh Kochhar, Jai Dev Wig, Kim

Vaiphei, et al. Alterations in K-ras, APC and p53-multiple genetic pathway in colorectal

cancer among Indians. Tumor Biol. 2013; 34:1901–1911.

34. Chaar Ines, Ounissi Donia, Boughriba Rahma, Azza Ben Ammar, Amara Sameh, Taher

Khalfallah, et al. Implication of K-ras and p53 in colorectal cancer carcinogenesis in

Tunisian population cohort. Tumor Biol. 2014; 35:7163–7175.

35. Aruna S. Jaiswal, Satya Narayan. p53-dependent Transcriptional Regulation of the APC

Promoter in Colon Cancer Cells Treated with DNA Alkylating Agents. J Biol Chem. 2001

May; 276(21):18193-9.

- 20 -

36. Xiang Ling, Chao Xu, Chuandong Fan, Kai Zhong, Fengzhi Li, Xinjiang Wang. FL118

Induces p53-Dependent Senescence in Colorectal Cancer Cells by Promoting Degradation

of MdmX. Cancer Res. 2014 Dec 15; 74(24):7487-97

37. Gillian Smith, Francis A. Carey, Julie Beattie, Murray J. V. Wilkie, Tracy J. Lightfoot,

Jonathan Coxhead, et al. Mutations in APC, Kirsten-ras, and p53—alternative genetic

pathways to colorectal cancer. Proc Natl Acad Sci U S A. 2002 Jul 9;99(14):9433-8

38. Zhen Wang, Yi Sun. Targeting p53 for Novel Anticancer Therapy. Transl Oncol. 2010

Feb; 3(1): 1–12

39. Hailong Chen, Xingyuan Maa, Zhi Li, Qiaoyun Shi, Wenyun Zheng, Yang Liu, et al.

Functionalization of single-walled carbon nanotubes enables efficient intracellular

delivery of siRNA targeting MDM2 to inhibit breast cancer cells growth. Biomed

Pharmacother. 2012 Jul;66(5):334-8

40. Mingxiang Ye, Jin Zhang, Jiän Zhang, Qing Miao, Libo Yao, Jian Zhang. Curcumin

promotes apoptosis by activating the p53-miR-192-5p/215-XIAP pathway in non-small

cell lung cancer. Cancer Lett. 2015 Feb 1;357(1):196-205

41. Nastasia Wilfinger, Shane Austin, Barbara Scheiber-Mojdehkar, Walter Berger, Siegfried

Reipert, Monika Praschberger. Novel p53-dependent anticancer strategy by targeting iron

signaling and BNIP3L-induced mitophagy. Oncotarget. 2016 Jan 12;7(2):1242-61

42. Zhao-Tong Wang, Zhuo-Jia Chen, Guan-Min Jiang, Ying-Min Wu, Tao Liu, Yan-Mei Yi,

et al. Histone deacetylase inhibitors suppress mutant p53 transcription via HDAC8/YY1

signals in triple negative breast cancer cells. Cell Signal. 2016 ;28(5):506-15

43. Xingxing He, Xinjuan Kong, Junwei Yan, Jingjun Yan, Yunan Zhang, Qian Wu. CP-

31398 prevents the growth of p53-mutated colorectal cancer cells in vitro and in vivo.

Tumor Biol. (2015) 36:1437–1444

44. Xingxing He, Jiazhi Liao, Fang Liu, Junwei Yan, Jingjun Yan, Haitao Shang. Functional

repair of p53 mutation in colorectal cancer cells using trans-splicing. Oncotarget. 2015

Feb 10;6(4):2034-45.