UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIAFACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIACIENCIAS BASICAS BIOMEDICAS

PRCTICA DE Laboratorio 11

DETERMINACION DE LA PRESENCIA DE PROTEINAS.

OBJETIVOS

Determinar la presencia de protenas a travs de la valoracin cualitativa con el reactivo Biuret.

MATERIALES:

Tubos de ensayo1 Pipeta graduada de 5 ml1 Gradilla1 Pera de goma1 Pinzas de tubo1 Pipeta pasteurMecherosPlaca de calentamientoBao mara

Material a cargo del estudiante

Cinta de enmascararToallas absorbentesGuantesMarcadorGelatina sin saborClara de huevoGoteros

Reactivos: HCl0.1 MNaOH0.1 MHNO3BIURETNITRITO SODICO

Muestras problema: AlbminaCasenaGelatinaAminocidos (fenilalanina, triptfano, tirosina, glicina, lisina y alanina)

PROCEDIMIENTO

1. REACCION DE MILLON

Los compuestos que contienen un hidroxibenceno como radical reaccionan con el reactivo de Millon formando compuestos rojos. Los nicos aminocidos fenlicos son la tirosina, y sus derivados y solo ellos dan una reaccin positiva.

Tome 1 ml de muestra (aminocido) aada 5 gotas de del reactivo de MillonCaliente en un bao de agua hirviendo por 10 minutos.Deje enfriar a temperatura ambiente y agregue 5 gotas de nitrito sdico,

Positivo: si observa una coloracin rojo ladrillo.

2. PRUEBA DEL BIURET

El sulfato alcalino de cobre reacciona con compuestos que contienen dos o ms enlaces peptdicos dando un complejo de coloracin violeta, la intensidad del color obtenido es una medida del nmero de enlaces peptdicos presentes en la protena.

Tome 2 ml de muestra (agua, albmina, casena, gelatina) Agregue 5 gotas de reactivo BiuretMezclar vigorosamente y observar los colores formados.

Positivo: si observa una coloracin violeta.

PRUEBA DESNATURALIZACION POR CALOR Y p H EXTREMOS

Tome tres tubos de ensayo y coloque 5 ml de cada una de las muestras problemas (albmina, casena, gelatina) Agregar 1 ml de HCl1 ml de NaOH 1 ml de agua destilada.

Colquelos en el bao mara durante 10 minutos Deje enfriar a temperatura ambiente. Ajustar los tubos cido y alcalino hasta la neutralidad. Observar los cambios.

Tome tres tubos de ensayo y coloque 2 ml de cada una de las muestras problemaAgregar lentamente por las paredes 2 ml de HNO3 concentrado hasta que se formen dos capasMezclar cuidadosamente los dos lquidos y observar cambios.

CONSULTA:

Examinar el fundamento de la reaccin del Millon Cul es el fundamento de la prueba con Biuret?Cul es el comportamiento de las diferentes protenas sometidas a cambios de pH y calor?

NOTA:

Reporte los resultados en tablas para cada una de las pruebas. Recuerde que dentro de la discusin en el informe de laboratorio debe incluir el fundamento de cada una de las pruebas realizadas