Desarrollo de RT-PCR para diagnóstico de Dengue y
Chikungunya en México (DUPLEX).Dr. José Alberto Díaz Quiñonez
Director General Adjunto de InDREDirección General de Epidemiología
Subsecretaría de Prevención y Promoción de la Salud
Agenda
• Panorama Epidemiológico - Vigilancia Epidemiológica y Virológica de dengue en México (RNLSP)
• Algoritmo de dengue
• Técnicas diagnósticas para dengue
• qRT-PCR DUPLEX (Dengue/Chikungunya)
• Genotipificación (DENV Y CHIKV)
• Diagnóstico diferencial (ZIKA)
Panorama Epidemiológico de Dengue
http://www.epidemiologia.salud.gob.mx/doctos/panodengue/PANORAMAS_2015/Pano_dengue_sem_33_2015.pdf
Panorama Epidemiológico de Dengue
http://www.epidemiologia.salud.gob.mx/doctos/panodengue/PANORAMAS_2015/Pano_dengue_sem_33_2015.pdf
http://www.epidemiologia.salud.gob.mx/doctos/panodengue/PANORAMAS_2015/Pano_dengue_sem_33_2015.pdf
Panorama Epidemiológico de Dengue
Panorama Epidemiológico de Dengue
http://www.epidemiologia.salud.gob.mx/doctos/panodengue/PANORAMAS_2015/Pano_dengue_sem_33_2015.pdf
Panorama Epidemiológico de Dengue
http://www.epidemiologia.salud.gob.mx/doctos/panodengue/PANORAMAS_2015/Pano_dengue_sem_33_2015.pdf
-
+
http://www.epidemiologia.salud.gob.mx/doctos/panodengue/PANORAMAS_2015/Pano_dengue_sem_33_2015.pdf
Panorama Epidemiológico de Dengue
Vigilancia Virológica de Dengue Tipificación mediante RT-qPCR
http://www.epidemiologia.salud.gob.mx/doctos/panodengue/PANORAMAS_2015/Pano_dengue_sem_33_2015.pdf
AGS BC BCS
CAM
P
CHIS
CHIH
COAH CO
L
DF
DG
O
GTO
GRO
HG
O
JAL
MEX
MIC
H
MO
R
NA NL
OAX PU
E
QRO
QRO
O
SLP
SIN
SON
TAB
TAM
PS TLX
VER
YUC
ZAC0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
DenV-1DenV-2DenV-3DenV-4
Entidad Federativa
Núm
ero
de re
gist
ros
y m
uest
ras
Vigilancia Virológica de Dengue Tipificación mediante RT-qPCR
Coordinación de Vigilancia Epidemiológica por LaboratorioDirección de Diagnóstico y referencia / InDRE
Algoritmo de Diagnóstico por Laboratorio
DGE/InDRE
ELISA NS1
De 4 a 5 Días de Evolución
ELISA IgM
ELISA IgG
NO
SI
NEG
NEG
NEG
Para Vigilancia Virológica por RT-qPCR:
• Se deberán analizar el 10% de muestras positivas a NS1 de DNG
y el 100% de DG
Se confirma caso
Con base en definición de casoContinuar con Dx diferencial
FD: Chikungunya, ZIKA EFE´s FHD: Leptospirosis Ricketsiosis Fiebre amarilla ( en caso de viaje a zona endémica)
ELISA IgM
ELISA IgG
Se confirma caso
Se confirma caso
POS
POS
POS
POS
POS
Tiempo estándar de servicio 3 días de evolución
Muestras de 0-5 días de iniciada la fiebre
Muestras de ≥ 6 días de iniciada la fiebre
NEG
NEG
Capacidad metodológica Para Dengue
VIROLÓGICOSAISLAMIENTO VIRAL
Células C6/36
BHK21
Vero
INMUNOFLUORESCENCIA
MOLECULARES
RT- PCR punto final
RT- PCR tiempo real
Secuenciación
SEROLÓGICOSANTICUERPOS
IgMIgG
ANTÍGENO NS1MNT
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión Serología
13
RNLSP con capacidad de Vigilancia Molecular en dos plataformas
(CFX96 y 7500) - RT-qPCR
RNLSP con capacidad de Vigilancia Serológica(ELISA de captura)
Capacidad Instalada en la RNLSP
DGE/InDRE
Baja California y Tlaxcala no tienen
implementado el RT-qPCR. Aguascalientes (amarillo) esta
en fase de implementación por evidencia de circulación
vectorial
2004 2006 2012-12008 2013-1 2015-1
Panel exclusivo para serología (IgM e IgG)Envío anual
Panel exclusivo para serología (IgM, IgG)Envío semestral
Panel exclusivo para serología (IgM, IgG)Se incluye NS1
2012-2
Panel exclusivo para serología(PAN-SER-DEN) y BiologíaMolecular RT-qPCRpor separado(NAT-DEN)
Panel para Serología Algorítmico) y BiologíaMolecular RT-qPCRPor separado
Panel algorítmico (IgM, IgG, NS1 y
RT-qPCR)“SMART-DEN”
Panel algorítmico y diferencial
(IgM, IgG, NS1) yRT-qPCR
DENV Y CHIKV)“SMART-ARBO”
Panel de Evaluación Externa del Desempeño en la RNLSP
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión Serología
No. muestraDensidad óptica
real Unidades Interpretación Observaciones
1 Overflow Positivo IgM
2 Overflow Positivo IgM3 Overflow Positivo IgM4 Overflow Positivo IgG
5 0.161 2.8 Negativo IgM e IgG
6 Overflow Positivo IgG
7 0.115 2.0 Negativo IgM e IgG
8 Overflow Positivo IgG
9 Overflow Positivo IgM
10 0.123 2.1 Negativo IgM e IgG
2004 (únicamente serología ) 2012-2 “PAN-SER-DEN”(se incluye RT-qPCR y serología con NS1)
No. muestraDensidad óptica real Unidad
es Interpretación Observaciones
1 Overflow Positivo NS1 2 Overflow Positivo IgM3 Overflow Positivo IgG4 Overflow Positivo IgG, IGM5 0.161 2.8 Negativo IgM, IgG y NS16 Overflow Positivo NS17 0.115 2.0 Negativo IgM, IgG y NS18 Overflow Positivo IgM,NS19 Overflow Positivo IGM
10 0.123 2.1 Negativo IgM, IgG y NS1
Paneles de Evaluación Externa del DesempeñoPEED “SMART-ARBO” 2015-1
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión Serología
No. de muestra
Densidad Óptica LESP de
técnicas aplicadas
según algoritmo vigente
Unidades o valor indice
(si aplica según
técnica)Valor de
corte (calculado)
Factor de corrección empleado (si aplica)
Interpretación final del
resultado LESP
1NS1= 3.304 NA 0.615 NA
POSITIVO a NS1
IgM= IgG=
2NS1= 0.047 NA 0.615 NA
NEGATIVO a IgGIgM= 0.189 PANBIO 0.400 0.84
IgG= 0.137 PAMBIO 0.507 0.9
3NS1= 0.033 NA 0.615 NA
POSITIVO a IgMIgM= 3.203 PANBIO 0.400 0.84
IgG=
4NS1=
NEGATIVO a IgGIgM= 0.186 PANBIO 0.400 0.84
IgG= 0.140 PANBIO 0.507 0.9
5NS1=
POSITIVO a IgMIgM=3.245 PANBIO 0.400 0.84
IgG=
6NS1= 0.026 NA 0.615 NA
POSITIVO a IgMIgM= 3.203 PANBIO 0.400 0.84
IgG=
7NS1= 0.026 NA 0.615 NA
POSITIVO a IgMIgM= 3.222 PANBIO 0.400 0.84
IgG=
8NS1= 0.046 NA 0.615 NA
NEGATIVO IgGIgM= 0.169 PANBIO 0.400 0.84IgG=0.151 PANBIO 0.507 0.9
9NS1=
POSITIVO a IgMIgM= 3.236 PANBIO 0.400 0.84
IgG=
10NS1= 3.281 NA 0.615
POSITIVO a NS1
IgM= IgG=
11NS1= 0.042 NA 0.615 NA
NEGATIVO a IgG
IgM= IgG=0.143 PANBIO 0.507 0.9
12NS1= 0.026 NA 0.615 NA
POSITIVO a IgG
IgM= IgG=3.237 PANBIO 0.507 0.9
Número de
muestra "X" a
Valor de Cq inicial
Valor de Cq 10-1
Valor de Cq 10-2
Valor de Cq 10-3
Valor de Cq 10-4 Interpretació
n (serotipo identificado)
M1A - D1 19.39 22.49 26.16 29.41 34.26 DEN - 1M1A - D2 13.38 15.7 20.36 25.45 29.41 DEN - 2
M10A - D1 20.58 23.63 26.87 31.24 35.23 DEN - 1M10A - D2 14.28 17.65 21.33 23.28 27.68 DEN - 2
2013-1 Panel algorítmico (IgM, IgG, NS1 yRT-qPCR) “SMART-DEN”
Paneles de Evaluación Externa del DesempeñoPEED “SMART-ARBO” 2013-1
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión Serología
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión Serología
ESTADO:
BAJA CALIFORNIA SUR
(GRUPO 1)DICTAMINACIÓN
OBSERVACIONES
No. MUESTRA
1 Correcta Aplica el algoritmo. Negativo a NS1, realiza IgG negativo (que aplica hacerlo, según algoritmo).
2Incorrecta (determinación de IgM)
se resta 0.5 por no detectarla. Detecta IgG
Aplica algoritmo. Primera determinación negativa que en InDRE es positiva para IgM (BAJA DE 13.24). Confirma caso con IgG. Necesario checar lavados, tiempo de incubación y pipeteo.
3 Correcta Muestra rechazada por hemolisis.
4 Correcta Aplica el algoritmo. Negativo a NS1 y negativo a IgG en fase aguda.
5 Correcta Aplica algoritmo. Muestra NS1 positiva. Identifica DENV-1
6 Correcta Aplica algoritmo. Muestra NS1 positiva. Identifica DENV-4
7 Correcta Aplica algoritmo. Muestra negativa para IgM e IgG en fase convaleciente.
8 Correcta Aplica algoritmo. Negativa a NS1 y positiva a IgG.
9 Correcta Aplica el algoritmo. Negativo a NS1 y negativo a IgG en fase aguda.
10 Correcta Aplica algoritmo diferencial, negativo a dengue pasa a CHIK.
CALIFICACION Serología10.0
CALIFICACION Molecular10.0
CALIFICACIÓN FINAL 10.0Necesario checar pipeteo y lavado en muestras positivas bajas podemos identificar falsos negativos. No incluye proceso con muestras de rutina en PCR porque indica que se puede contaminar. Gráficos muy acostados poco definidos y con baja UFR. Checar en corto las sondas de DENV-1 y el protocolo.
PENDIENTE COEFICIENTE r2
-2.79027027 0.970818909
PENDIENTE COEFICIENTE r2
-2.841891892 0.96806097
Muestra 1
Muestra 9
NOTA: Se recomienda mantener la calidad en el pipeteo, esta es excelente. Se recomienda que la pendiente tenga un valor de -3.3 que corresponde a eficiencia de Reacción (E) del 100% . El Coeficiente r2 se recomienda que tenga un valor de 0.999.. que representa una linealidad muy considerable. Usted obtuvo una E= 84.55 % para DENV-1 y de 86.06% para DENV-4. Eficiencias de reacción bajas favorecen sensibilidad analítica baja promoviendo falso negativos. Eficiencias de reacción por encima del 100% favorecen falsos positivos.
Paneles de Evaluación Externa del DesempeñoPEED “SMART-ARBO” 2015-1
ESTADO:
MORELOS (GRUPO 2) DICTAMINACIÓNOBSERVACIONES
1 Correcta Aplica el algoritmo. Negativo a NS1, realiza IgG negativo (que aplica hacerlo, según algoritmo).
2Incorrecta (determinación de IgM)
se resta 0.5 por no detectarla. Detecta IgG
Aplica algoritmo. Primera determinación negativa que en InDRE es positiva para IgM (BAJA DE 13.24). Confirma caso con IgG. Necesario checar lavados, tiempo de incubación y pipeteo.
3 Correcta Muestra rechazada por hemolisis.
4 Correcta Aplica el algoritmo. Negativo a NS1 y negativo a IgG en fase aguda.
5 Correcta Aplica algoritmo. Muestra NS1 positiva. Identifica DENV-1
6 Correcta Aplica algoritmo. Muestra NS1 positiva. Identifica DENV-4
7 Correcta Aplica algoritmo. Muestra negativa para IgM e IgG en fase convaleciente.
8 Correcta Aplica algoritmo. Negativa a NS1 y positiva a IgG.
9 Correcta Aplica el algoritmo. Negativo a NS1 y negativo a IgG en fase aguda.
10 Correcta Aplica algoritmo diferencial, negativo a dengue pasa a CHIK. Detecta por RT-PCR positivo a CHIK.
CALIFICACION Serología9.5
CALIFICACION Molecular10
CALIFICACIÓN FINAL 9.5Necesario checar pipeteo y lavado en muestras positivas bajas podemos identificar falsos negativos. Incluye muestras en procesos de rutina. Muestras
positivas a dengue pasa el porcentaje a chikungnya para identificar coinfecciones. Maneja las detecciones de dengue en 7500 y de CHIKV en CFX96. Realiza diluciones a todas las muestras positivas por PCR. Envía formatos de corridas.
PENDIENTE COEFICIENTE r2
-2.759594595 0.935188939
PENDIENTE COEFICIENTE r2
-2.815135135 0.956266137
Muestra 5
Muestra 10
Paneles de Evaluación Externa del DesempeñoPEED “SMART- ARBO” 2015-1
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión Serología
100% de concordancia en Biología Molecular (RT-qPCR) y Serología (MAC ELISA)
Paneles de Evaluación Externa del Desempeño Internacional - CDC
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión Serología
• Análisis serológico MAC ELISA, ELISA Comercial InBIOS• Análisis Molecular qRT-PCR y qRT-PCR “DUPLEX”
Próximo envío de resultados el 4 de septiembre
Paneles de Evaluación Externa del Desempeño Internacional - ENIVD
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión Serología
DENV-1
Americano /africano
Pacifico Sur
Asiático
DENV-2
Cosmopolita
Asiático
América/Asia
Genotipificación de DENV
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
DENV-3 DENV-4
Genotipo III
Genotipo II
Genotipo IV
Genotipo I
Genotipo II
Genotipificación de DENV
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Distribución de Genotipos
JaliscoDENV-2
Asiático-Americano
MorelosDENV-2
Asiático-Americano
Nuevo LeónDENV-4GEN-II
TabascoDENV-4GEN-II
TabascoDENV-1Asiático
Quintana RooDENV-3GEN-III
VeracruzDENV-1Asiático
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
CRONOLOGÍA DEL INGRESO DE LOS CUATRO SEROTIPOS DEL VIRUS DENGUE EN MÉXICO
2014
DENV-2ASIATICO/AMERICANO
DENV-4GEN-II
DENV-3GEN-III
DG
DG ??
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Asiático
East/Central/South African (ECSA)
West African
EU703760.1 Malaysia 2006 HM045797.1 Indonesia 1985
HM045789.1 Thailand 1988 HM045814.1 Thailand 1975
FJ807897.1 Indonesia 2007 HM045808.1 Thailand 1978
EU703759.1 Malaysia 2006 HM045791.1 Indonesia 1983 HM045790.1 Philippines 1985 MEX Jalisco 2014 - Cultivo KJ451622.1 YAP 2013
KJ451624.1 British Virgin Islands 2014 KC488650.1 Philippines 2012 KF318729.1 China Zhejiang 2012 MEX Coahuila 2014 - Cultivo MEX Chiapas 2014 - Muestra
HM045796.1 Thailand 1995 HE806461.1 New Caledonia:2011
HM045810.1 Thailand 1958 HM045803.1 India 1963 HM045813.1 India 1963 HM045788.1 India 1973
HM045809.1 DR Congo 1960 HM045784.1 Central African Republic 1984
HM045812.1 Uganda 1982 HM045822.1 Central African Republic 1978 HM045823.1 Angola 1962
JF274082.1 India 2006 EU244823.2 Italy 2007
GU189061.1 Sri Lanka 2006 HQ456251.1 Comoros 2005
FJ445510.2 Singapore 2008 AF490259.3 Tanzania 1953
HM045786.1 Nigeria 1974 HM045818.1 Ivory Coast 1981
AY726732.1 Senegal 198390100
82
99
67
95
97
66
73
62
0.02
Genotipificación de CHIKV
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Protocolo dúplex DENV/CHIKV
• Una mezcla de reacción
• Mismo protocolo de amplificación para ambos virus
• Se identifican simultáneamente co-infecciones con DENV(serotipo)/CHIKV
• Optimización de reactivos (enzima) e insumos
• Aplicado a muestras de humanos y moscos.
Protocolo de Amplificación Curvas de Amplificación
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
CHIKV DENV1, 2, 3, 4 CHIKV/DENV1, 2, 3, 4
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Protocolo dúplex DENV/CHIKV
CHIKV DENV1/CHIKV DENV2/CHIKV
DENV3/CHIKV DENV4/CHIKV NEGATIVO
Inclusión del RP(control interno) en la reacción de RT-qPCR para detección de Virus Chikungunya
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
CHIKV RP
CHIKV-RP CHIKV-RP
Escala lineal
Escala logarítmica
Kit RT-qPCR Dengue - CDC
Implementación a toda la RNLSP
• Primer envío por CDC Atlanta, en septiembre• Capacitación a la RNLSP a finales del 2015
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Validado en InDRE para uso en dos plataformas de amplificación (Applied 7500 y CFX96)
Kit RT-qPCR Dengue - CDC
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Cuatro serotipos y RP RP DENV-1
DENV-2 DENV-3 DENV-4
Applied 7500
Validado en InDRE para uso en dos plataformas de amplificación (Applied 7500 y CFX96)
Kit RT-qPCR Dengue - CDC
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
CFX96
DENV-2DENV-1
DENV-3 DENV-4
ENTOMOLÓGICA
VIROLÓGICA
Vigilancia Entomo-virologica
El éxito y los resultados provienen del trabajo en Conjunto y multidisciplinario
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Biol.
Serotipos identificados: DENV-1 y DENV-2
2012.- Detección de DENV-4 en moscos antes de que se detectaran los casos en humanos
2013.- Detección de DENV-4 en humanos
Aislamiento viral Detección de antígeno NS1 Detección molecular
GUERRERO
Vigilancia Entomo-virologica
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión Serología
Biol.
MORELOS
Jojutla
Axochiapan
Tepalcingo
Yautepec
Temixco
Tlaquiltenango
A
F
E
B
D
C
Estado de México
Distrito Federal
Estado de México
GuerreroPuebla
DENV-1 mosquitos coincide con el
identificado en humanos: Detectado periodo baja actividad de Dengue.En 2103 detección de
DENV-2
JALISCO
C
B
Sinaloa
Nayarit
Zacatecas
Aguascalientes
Colima
Michoacán
A
DENV-2 circulando en humanos.DENV-4 serotipo no identificado en humanos.DETECTADOS ANTICIPADAMENTEDetección de Transmisión transovarica!!
Municipio EspecieSerotipo
identificadopor RT-qPCR
Jojutla A. aegypti♀ DENV-1
Jojutla A. aegypti♀ DENV-1
Municipio
No. De grupo
Serotipo identificado por RT-PCR Fourplex en
tiempo real
Puerto Vallarta
16 DENV-2
3 DENV-2/DENV-4
2 DENV-4
QUINTANA ROO
Quintana Roo
Cozumel
DETECTADOS DURANTE UN BROTE.DENV-2: detectado en humanos.DENV-1: no identificado en humanos.
Localidad de captura.
Serotipo identificadopor RT-PCR Fourplex en tiempo real
Col. Repobladores DENV-2Col. Emiliano Zapata DENV-1/DENV-2Col. Emiliano Zapata DENV-1
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Vigilancia Entomo-virologica
Año ESTADO NO. DE GRUPOS RESULTADO
2014
Chiapas 36 10 POSITIVOS A CHIK
Durango 1 NEGATIVO
Guanajuato 1 NEGATIVO
Guerrero 8 8 POSITIVOS A CHIK
Jalisco 43 NEGATIVO
Michoacán 33 NEGATIVO
Morelos 8 3 NEGATIVOS, 4 DENV-1, 1 DENV-4
Nuevo León 3 NEGATIVO
Tamaulipas 22 NEGATIVO
Veracruz 10 NEGATIVO
TOTAL 165
CHIKUNGUNYAESTADO LOCALIDAD MUNICIPIO RESULTADOChiapas Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Positivo Chiapas Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Positivo Chiapas Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Positivo Chiapas Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Positivo Chiapas La Libertad Suchiate Positivo Chiapas La Libertad Suchiate Positivo Chiapas Rayón Suchiate Positivo Chiapas Rayón Suchiate PositivoChiapas Rayón Suchiate PositivoChiapas La Libertad Tuxtla Chico Positivo
CHIKUNGUNYAESTADO LOCALIDAD RESULTADOGuerrero Vicente Guerrero Positivo (29.30)Guerrero Vista Hermosa Positivo (26.84)Guerrero Niños Héroes Positivo (27.68)Guerrero Libertad Positivo (21.66)Guerrero Juchitán Positivo (33.90)Guerrero Sin dato Positivo (17.37)Guerrero Sin dato Positivo (34.60)Guerrero Sin dato Positivo (18.05)
Resultados de la vigilancia entomo-virológica 2014
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorragicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
AÑO ESTADO NO. DE GRUPOS RESULTADO
2015
Chiapas 28 22 NEGATIVO Y 6 POSITIVOS
MorelosAmacuzac (Teacalco)
41 1 POSITIVO A DENV-1
Tabasco 5 NEGATIVO
Veracruz 1 NEGATIVO
Guerrero 17 14 POSITIVOS CHIK, 3 NEGATIVOS
TOTAL 92
Necesario intensificar la vigilancia entomo
virologica
Aprovechar la ventaja de esta vigilancia.
Búsqueda anticipaday preventiva
ZIKA
Resultados de la vigilancia entomo-virológica 2015
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Evaluaciones para biología molecular y serología
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión Serología
Evaluaciones para biología molecular y serología
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión Serología
Diagnóstico diferencialRT-PCR y RT-qPCR SYBR Green - ZIKA
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Ante la ausencia de sondas especifica:Identificación de especificidad mediante experimento de “High Resolution Melting” (HRM)
Control Positivo
Curvas de Disociación(Control Negativo)
Curvas de Disociación(Control positivo)
Curvas de disociación del Control positivo)
Curvas de disociacióndel control Negativo
Curvas del Control positivo) Curvas del
Control negativo)
Curvas del Control positivo
(Duplicado)
Curvas del Control positivo
(Duplicado)
Escala logarítmica
Escala lineal
Control Negativo
Laboratorio certificado y Acreditado Por algoritmo de diagnóstico
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrollDivisión Serología o
Certificación ISO 9001:2008
Acreditación ISO 15189, por la Entidad Mexicana de Acreditación (EMA)
Detección de Antígeno NS1Detección de anticuerpos IgM (ELISA de captura)Detección de Anticuerpos IgG (ELISA de captura)Detección de RNA de virus dengue mediante RT-qPR “Multiplex”Detección de RNA de virus dengue mediante RT-qPCR “Fourplex”
DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y desarrolloDivisión de serología
QFB. Alma Núñez LeónQFP. Rosalba Pérez MezaQFB. Yanelli Adriana Torres OlmosQFB. Claudia Rosales JiménezT.L. Adela Monserrat Aparicio AntonioApoyo Admvo. Rosa María Herrera BautistaM. en C. María de la Luz Torres RodríguezM. En C. Mauricio Vázquez Pichardo
Laboratorio de Arbovirus y virus hemorrágicos