QUIMICA SANGUINEADETERMINACION DE GLUCOSA
TOMA Y MANEJO DE LAS MUESTRASRecogida: 8 Horas de ayuno al momento de la extraccin de sangreSe reduce: Contaminacin bacteriana Gluclisis. tubos que contengan fluoruro de sodio. El suero o el plasma se debera separar de las clulas con la mayor brevedad posible Plasma: Utilizar heparina. Orina: se recomienda el uso de un conservante qumico tal como mertiolato (0,23 mmol/L) Almacenamiento: 4 horas a 30C en glucosa serica 24 horas a 4C largo plazo las muestras se deben colocaren envases sellados y congelarse a -10C.
FUNDAMENTO DE LA DETERMINACION:Reacciones enzimticas calorimtricas - METODO DE HEXOQUINASA
- METODO DE PEROXIDASA- 4 AMINO FENAZONA - FENOL
METODO DE HEXOQUINASAPREPARACIN DEL REACTIVO Reconstituya el reactivo con el volumen de agua destilada o desionizada indicado en la etiqueta de la botella. ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DE EL REACTIVO: Antes del uso: Cuando se almacena a 2-8C, el reactivo es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial y de la caja del kit. Reactivo reconstituido: Cuando se almacena bien cerrado a 2-8C, el reactivo es estable durante al menos 30 das. Indicios del deterioro del reactivo: Turbidez; Absorbancia del reactivo >0,2 (340 nm, paso de luz de 1 cm); y/o Imposibilidad de obtener los valores de control dentro del intervalo asignado.
METODO DE HEXOQUINASA En este procedimiento se utilizan filtrados libres de protenas preparados mediante la tcnica Somogyi utilizando precipitacin con ZnSO4 / BaSO4. Sin embargo, para uso de rutina en laboratorios el mtodo preferido es el suero o el plasma sin eliminacin de protenas COMPOSICIN DEL REACTIVO Ingredientes activos: Trietanolamina 20 mmol/L ATP 1,65 mmol/L NAD 1,06 mmol/L Hexoquinasa (levadura recombinante) >1500 U/L G-6-PDH (Leuconostoc recombinante) >1500 U/L pH 7,3 0,1 a 20C
Las series de reacciones implicadas en el sistema de ensayo son las siguientes:
Hexoquinasa 1. Glucosa + ATP > G-6-P + ADP
G-6-PDH2. G-6-P + NAD+ > 6-PG + NADH + H+
*La cantidad de NADH formado es proporcional a la concentracin de glucosa en la muestra, y se puede medir mediante el aumento de la absorbancia a 340 nm.
ESPECTOMETROLa cantidad de NADH formado es proporcional a la concentracin de glucosa en la muestra, y se puede medir mediante el aumento de la absorbancia a 340 nm.
PARMETROS DEL SISTEMA Temperatura 30/37C Longitud de onda primaria 340 nm (334 365nm) Longitud de onda secundaria 380 nm (380 410nm) Tipo de ensayo Punto final Direccin Incremento Muestra: Proporcin de reactivo 1:100 1:150 p.ej. Vol de muestra 3 L Vol de reactivo 300 L Tiempo de incubacin 180 segundos Lmites del blanco de reactivo Bajo 0,0 AU (340 nm, paso de luz de 1cm ) Alto 0,2 AU Linealidad Hasta 42 mmol/L (756 mg/dL) Sensibilidad 0,017A por mmol/L (340nm, paso de luz de 1cm) 0,001A por mg/dL
DETERMINACION DE GLUCOSACALCULOS:Glucosa = Absorbancia de desconocido x Valor del calibrador Absorbancia del calibradorAbsorbancia = e . l. c
donde e es una constante, l es el camino ptico (1 cm generalmente), y c es la concentracin.Graficando absorbancia vs concentracin SE obtiene la constante e. Luego, sabiendo dicha constante pods calcular cualquier concentracin incgnita midiendo su absorbancia con la frmula : Abs = e.l.c
CETERMINACION DE GLUCOSAEjemplo: Absorbancia del calibrador = 0,23 Absorbancia de desconocido = 0,10 Valor del calibrador = 13,1 mmol/L (236 mg/dL)
Glucosa = 0.10 x 13,1 = 5,7 mmol/L 0,23Glucosa = 0.10 x 236 = 103 mg/dL 0,23 *Conversin por unidad: mmol/L X 18 0 mg/ dL
LIMITACIONES:Hemoglobina: Evite el uso de muestras hemolizadas.
VALORES ESPERADOS:Suero: 3.89-5,83 mmol/L (70-105 mg/dL) CRITERIO DE LA OMS:
Bilirrubina: No se observa interferencia debida a la bilirrubina hasta 340 mol/L (20 mg/dL).
DIABETES En ayuno
PLASMA VENOSO 7.8mmol/L(140mg dL)
CAPILAR 7.8 mmol/L (140 mg/ dL)
Lipemia: No se observa interferencia debida a la lipemia, medida como triglicridos, hasta 5,6 mmol/L (500 mg/dL).
2 hrs despus de la carga de la glucosa
11.1mmol/ L (200 mg/dL)
12.2mmol/L(200 mg/dL)
TG ALTERADA
PLASMA VENOSO
CAPILAR
EN AYUNO
7.8 mmol/L(140mg/dL)
7.8mmol/L(140mg/ dL)
2 HRS DESPUES DE LA CARGA DE GLUCOSA
7.8-11.1 mmol/L(140200mg/dL)
8.9-12.2mmol/L ( 140mg/dL) (160-220mg/dL)
MEDICAMENTOS QUE ALTERAN: Acetazolamida (A) cido aminisaliclico (A) cido nalidxico (falso A) cido nicotnico (A) Amitriptilina (A) Alopurinol (D) Ciproheptadina (D) Clorotiazida (A) Clorpromazina (A) Clorpropamida (falsa D) Clortalidona (A) Epinefrina (falso A)
Eritromicina (D) Fenitona (A) Furosemida (A) Interferon (falso A) Levodopa (falsa D) Metildopa (falso A) Paracetamol (falsa D) Tetraciclina (falsa D) Vit-C (falsa D)
Patologias relacionadas:HIPERGLUCEMIAS Diabetes mellitus Enfermedades renales Feocromocitoma Hipertiroidismo Glucagonoma Pancreatitis aguda Sindrome de Cushing Tumores de pancreas
HIPOGLUCEMIA: Dietas excesivas Enfermedades hepaticas Enfermedad de Addison Exceso de insulina en diabeticos Hipotiroidismo Insulinoma 9
Otras situaciones (estrs, sueros, embarazo, medicamentos)
UREA2.5-6.4 mmol/L 15-38mg/dL
Constituyente nitrogenado no proteico
Se sintetiza en el hgado
Producto nitrogenado del desecho de protenas
IndicacionesCuando se sospecha de IRRefleja la capacidad del rion para excretar desechos metabolicos
Niveles altos de urea15-38mg/dL 2.5-6.4mmol/LABSORCION PROTEICA: CAMBIOS EN LA DIETA
CATABOLISMO DE PROTEINAS:QUEMADURAS
FUNCION RENAL: DIABETES HIPERTENSION
Valores disminuidosHemodilucin
Insuficiencia Heptica
Escaso significado clnico
FUNDAMENTO DEL METODOLos calculos se basan en el descubrimiento de Tiffany y col:UreasaUrea + H2O > 2NH3 + CO2
GLDHNH3 + -KG + NADH > L-Glutamato +NAD
* En presencia de glutamato deshidrogenasa (GLDH) y de dinucletido de nicotinamida adenina (NADH), el amoniaco se combina con -cetoglutarato (-KG) para producir L-glutamato. La reaccion se sigue midiendo a la disminucion de la absoorbancia 340 nm de NAD
COMPOSICIN DEL REACTIVO Ingredientes activos Concentracin -cetoglutarato 5,2 mmol/L NADH > 0,14 mmol/L Ureasa (Jack Bean) > 5600 U/L GLDH (Microorganismo) > 400 U/L Tampn Tris 70 mmol/L Tambin contiene estabilizantes y cargas no reactivos.
UREACALCULOS:Urea = Absor/min de desconocido x valor del calibrador Absor/min de calibrador Ejemplo: Absorbancia del calibrador = 0,06 Abs/min Absorbancia de desconocido = 0,12 Abs/min Valor del calibrador = 14,3 mmol/L de urea; Urea = 0.12 x 14,3 = 28,6 mmol/L 0.06 Urea = 0.12 x 40 = 80 mg/dL 0.06
UREALIMITACIONES:Hemoglobina: hasta 1000 mg/dL.Bilirrubina no conjugada: hasta 1000 mol/L (60 mg/dL). Bilirrubina conjugada: 1000 mol/L (60 mg/dL). Lipemia: triglicridos, hasta 22,6 mmol/L (2000 mg/dL). cido ascrbico: No se observa interferencia debida a la hemoglobina hasta 20mg/dL (1,14 mmol/L)
CREATININA
CREATININAES UN SUBPRODUCTO DE DESCOMPOSICION DEL COMPUESTO GENERADOR DE ENERGIA FOSFATO DE CREATINA PRINCIPAL FUNCION DE LA MASA MUSCULAR INDICACIONES: Evaluacin de la funcin renal (TFG)
Valores de referenciaEn sangre: Hombres: 0.7-1.4 mg/dL Mujeres: 0.6 -1.2 mg/dL En orina de 24 hrs: 500-2000 mg/dia
CREATININAHIPERCREATINEMIA: Glumorelonefritis Insuficiencia Renal Pielonefritis Deshidratacion Distrofia muscular
Metodologia;Determinacin colorimtrica por mtodos enzimticos de la creatinina, Creatinina amidohidrolasa Creatinina + H2O > Creatina Creatina amidinohidrolasa Creatina + H2O > Sarcosina + Urea Sarcosina oxidasa Sarcosina + H2O + O2 > Glicina + HCHO + H2O2 Peroxidasa 2H2O2 + 4-aminoantipirina + TOPS* > Tinte de quinonimina + 4H2O *Da lugar a un aumento de la absorbancia a 550 nm (530-570 nm) que es directamente proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra.
CREATININALIMITACIONES: Hemoglobina: No hay interferencia hasta 1000 mg/dL. Bilirrubina libre: No hay interferencia hasta 60 mg/dL (1030 mol/L). Bilirrubina conjugada: No hay interferencia hasta 33 mg/dL (560 mol/L). Lipemia: No hay interferencia hasta 1490 mg/dL (17 mmol/L). cido ascrbico: No hay interferencia hasta 82 mg/dL (4,5 mmol/L) b-Hidroxibutirato: No hay interferencia hasta 126 mg/dL (10 mmol/L). Cefalotina: No hay interferencia hasta 100 mg/dL (2,4 mmol/L).. Cefotaxima: No hay interferencia hasta 100 mg/dL (2,0 mmol/L). Acetoacetato: No hay interferencia hasta 108 mg/dL (10 mmol/L). Prolina: No hay interferencia hasta por 70 mg/dL (5,9 mmol/L)
BIBLIOGRAFIA Base de Datos del Medicamentos (BOT). Colegio Oficiales de Farmacuticos. Espaa. 2000.3 Diccionario de Especialidades Farmacuticas. Edicin 27, 1999. Colombia.4 Vademecum Internacional. Especialidades Farmacuticas y Biolgicas. Productos y Artculos de Parafarmacia. Mtodos de Diagnstico. Edicin 41, 2000. Espaa.5
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