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ACTUALIZACION EN RESISTENCIA
BACTERIANA Y NORMAS CLSI 2010
Bases moleculares de la resistencia Bases moleculares de la resistencia a antibia antibi óóticos en bacterias ticos en bacterias
Gram positivas Gram positivas Javier Escobar PJavier Escobar P éérezrezLaboratorio de GenLaboratorio de Gen éética Molecular Bacteriana (LGMB)tica Molecular Bacteriana (LGMB)Universidad El BosqueUniversidad El Bosque
Correo: Correo: labgenmolecular@unbosque.edu.colabgenmolecular@unbosque.edu.cojaviesco21@yahoo.comjaviesco21@yahoo.com
Identificación y determinación susceptibilidad
Confirmación fenotípica
Confirmación genotípica
(identificación y susceptibilidad)
Lab. Clínico hospitales
Lab. Referencia
(bases moleculares)
retroalimentaciretroalimentaci óónn
Proceso de determinación de la
Resistencia Bacteriana
OBJETIVO
Dar a conocer y explicar las bases moleculares de los mecanismos de resistencia a los
principales antibióticos en bacterias Gram positivas.
Proporcionar conocimiento para el entendimiento de los procesos experimentales para la determinación de la resistencia en
bacterias (+)
Staphylococcus spp.
Tomado de: http://info-bashkirbeehoney.com/img/bakteriziditat/Staphylococcus-aureus.jpg
NOCIONES GENERALES:
Envoltura celular bacteriana
Chambers and DeLeo, 2009. nature review microbiology
Resistencia en Staphylocuccus aureus
Resistencia a penicilinas en S. aureus:
Lowy F. J Clin Invest. 2003; 111(9):1265
MSSAMSSA MRSAMRSA
Proteína PBP2a
8 tipos
Resistencia a B-lactámicos en S. aureus:
ATENCIÓN!!!!!!!YA HAY B-LACTÁMICOS
ANTI-MRSA
ceftobiprole
B-lactámicos anti-MRSA:
Tomado de : journals.prous.com/journals/servlet/xmlxsl/pk...
Identificación Molecularde SARM
16smecAnuc
Aislamientos MRSAMSSA-
Amplificación del gen coa (coagulasa)O del gen tuf para SCoN
Recordar: 80% de mecA en SCoN
• Personas hospitalizadas
• SCCmec I-II-III-VIII
• Multirresistencia
• infecciones diversas
• Poca virulencia
Diseminación de SARM-AC
• Personas en la comunidad
• SCCmec IV-V-VI-VII
• Multisensible???
• infecciones SSTI,
neumonia, septicemia.
• MAYOR VIRULENCIAMAYOR VIRULENCIA
SARM-AH SARM-AC
Epidemiologia SARM-AC
DeLeo et al, 2010, seminar DOI:10.1016/S0140-6736(09)61999-1
Identificación Molecularde SARM-AC
lukSF
seo
sek
seqsem
PCR múltiple de enterotoxinas q, k, PVL, o y m
USA CH N H1 H2 C1 C2 C3 H3 H4 C4 C5 C6 H5 C7
0%
20%
40%
60%
80%
100%
ica clfA/B fib fnbA/B eta PVL egc sek seq etb sed y sej
% d
e A
isla
mie
nto
s
SARM-AH n=184 SARM-AC n=86
Factores de virulencia en SARM en Colombia
MP gk(-)ac(-) ST8 ST5 ST8 ST5 ST8 ST5
HinfI CaiI
332pb
249pb
87pb
323pb
557pb
129pb
428pb 390pb
167pb
500pb
400pb
300pb
200pb
100pb
HhaI
Polimorfismo genes constitutivos
Cepas control: ST8: USA300 - ST5:Clon chileno
arcc gmk
CaiI
ST8 ST5
HhaI
ST8 ST5ST8 ST5
HinfI
Resistencia heterogénea y resistencia de “borderline”
MIC =4ug/mL
mecA positivos mecA negativos
Sobreexpresión de B-lactamasa
Mutaciones en PBPs constitutivas
Meticilinasa??
Resistencia a Vancomicina
Introducción de Daptomicina
Enterococcus spp.
Tomado de: funbactvirus.wordpress.com/2009/01/27/
Glicopéptidos
• 1960s introducidos en práctica clínica
• 1980s gran utilización (MRSA)
• Tratamiento de patógenos gram +
• Producidos por diferentes especies de
Actinomycetes
• 200 glicopéptidos: vancomicina y
teicoplanina
Enterococcus spp. resistente a
vancomicina VRE ó GRE
0
5
10
15
20
25
30
1989
1990
1991
1992
1993
1994
1995
1996
1997
1998
1999
2000
% R
esis
tenc
iaPacientes de unidades de atención general
Pacientes de unidades de cuidados intensivos
Fuente: National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System� Enlace a: NNIS Online at CDC
Síntesis peptidoglicano (PG)
Bases moleculares de la resistencia a glicopeptidos
Enterococcus spp
� Ligasa alternativa que una D-Ala+ D-
Lactato.
� Actividad carboxipeptidasa que clive los
terminales D-Ala-D-Ala.
� Deshidrogenasa para obtener D-lactato a
partir del piruvato.
� Sistema regulador de dos componentes.
Estructura del complejo glicopéptido:
peptidil D-Ala-D-AlaUnión de Vancomicina a su blanco molecular
D-Ala-D-Lactato
Sensible Resistente
Genotipos de resistencia a glicopéptidos
VRE Fenotipos
Identificación Molecularde VRE
E. Faecalis
E. faeciumVan A
Amplificación del gen ddl (ligasas D-ala-D-ala)Genes van A, B, C
Aislamientos
Bases moleculares de la resistencia a glicopéptidos en
Staphylococcus spp
VRSA
Semejante a Enterococcus spp.(adquisición genes van)
VISA
Diferente a Enterococcus spp.
Biosíntesis de pared y rutas metabólicas alteradas
� Aumentado el turnover de pared� Engrosamiento de la pared� Reducido entrecruzamiento del PG Muropépidos no amidados (L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala-D-Ala)� Mayor cantidad de PBP2 y PBP2a� Aumentado el pool citoplasmático de monómeros
Resistencia a glicopéptidos VISA
The Journal of Clinical Investigation | May 2003 | Volume 111 | Number 9
Mecanismo de resistencia en VISA: Trampas de afinidad??
The Journal of Clinical Investigation | May 2003 | Volume 111 | Number 9
Sensible
Resistente
Resistencia heterogénea a
vancomicina hVISA
MIC ≥ 8ug/mL
Kim et al, J Clin Microbiol 2000.
Perfiles de análisis poblacional (PAP)
Kim et al, J Clin Microbiol 2000.
Daptomicina (lipopeptido)
Tomado de : journals.prous.com/journals/servlet/xmlxsl/pk...
Modo de acción Daptomicina
Cambio de polaridad de la membrana
+ - + - + + +
+ - + - + + +
Ca2+
Inhibición de procesos básicos celulares
Puede haber resistencia cruzada con Vancomicina
Resistencia inducible a Daptomicina
Friedman et al, AAC, 2006
Alteraciones en los genes Mprf, YycG y RpoA y B
Resistencia a Daptomicina
MUCHAS GRACIASMUCHAS GRACIASMUCHAS GRACIASMUCHAS GRACIAS