Post on 25-Jul-2022
Evaluación de un nuevo sistema de
detección inmunohistoquímica aplicado
al diagnóstico de la patología linfoide
Sergio Serrano Hospital del Mar-IMIM UAB
• Información clínica
• Información histológica
• Información inmunohistoquímica
• Información molecular y citogenética
• Recapitulación y diagnóstico
Diagnóstico en patología linfoide
CCND1 CD38
++ ++
Técnicas moleculares
Histología: H/E
Inmunohistoquímica
Citogenética
Información clínica
Diagnóstico Pronóstico Predicción
+++
+++
++
++
+++
+
+++
+++
++
+++
+
Inmunohistoquímica
• Técnica
• Interpretación
Inmunohistoquímica: Técnica
• Fijación
• Recuperación antigénica
• Reacción antígeno-anticuerpo primario
• Detección de la reacción
Inmunohistoquímica: Técnica
• Fijación
• Recuperación antigénica
• Reacción antígeno-anticuerpo primario
• Detección de la reacción
1966 Anticuerpos conjugados a peroxidasa
1979 Métodos avidina-biotina-peroxidasa
1993 Polímeros conjugados con Ac. y peroxidasa
Ac. primario
H2O2
DAB 1966
O2
PR Peroxidasa
Ac. primario
B
1979
Biotina
Ac. primario
B A
1979
Avidina
Ac. primario
PR
PR
PR
B
B
B
B
A
1979
H2O2
DAB
O2
Dextrano
H2O2
DAB
Ac. primarios
1993
O2
Ac. secundarios
Ac. primario
PR
PR
PR PR
PR
PR
H2O2
DAB
Dextrano
O2
Ac. primario
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
Ac. secundario
Ac. Terciarios
H2O2
DAB Dextrano
O2
CD10
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
H2O2
DAB
Ac. primario
Ac. sec. conjugado con HQ
Ac. ter. conjugado con PR
2011
O2
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
IgG Cabra anti Conejo
IgG Cabra anti Ratón
IgM Cabra anti Ratón
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
H2O2
DAB
Ac. primario
Ac. sec. conjugado con HQ
Ac. ter. conjugado con PR
2011
O2
Hapteno es una molécula de pequeño peso molecular que solo es inmunógena cuando se une a una molécula transportadora de gran tamaño como una proteina
3-hidroxi-2-quinoxalincarbamida
(Hidroxiquinoxalina)
PM: 175 O
NH2 N
N OH .
.
.
.
. .
.
.
.
Haptenos
•Los de origen sintético como la hidroxiquinoxalina no se detectan en mamíferos
•Los Ac. dirigidos contra ellos no han de proceder de una especie diferente de la del Ac. marcado
•La conjugación a un Ac. apenas reduce la actividad de este último.
•Una molécula de Ig. puede conjugarse a múltiples haptenos
•Conjugados a la tiramida permiten amplificar la señal con poca tinción de fondo
Ac. primario
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
Ac. secundario
Ac. terciarios
H2O2
DAB
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
PR
Ac. primario
Ac. sec. conjugado con HQ
Ac. ter. conjugado con PR PR
Dextrano
O2
H2O2
DAB
O2
1 amígdala y 12 linfomas
21 antígenos
2 sistemas de detección:
273 secciones
273 secciones
1 amígdala y 12 linfomas
21 anticuerpos
2 sistemas de detección:
273 secciones
273 secciones
PAX5, CD79a, CD19, CD20, CD23, CD10, BCL6,
OCT2, MUM1, CD138
CD7, CD5, CD3, CD4, CD8, CD56
CD45RB, CD15, CD30, BCL2, Ciclina D1
Antígenos estudiados
La expresión de cada antígeno se estudió el mismo día con ambos métodos y en secciones histológicas que se habían realizado de manera simultánea
La valoración fue efectuada por dos observadores
Se valoraron parámetros cuantitativos y cualitativos
Evaluación cuantitativa
• Intensidad de la señal Intensa: +3
Moderada: .+2
Débil: +1
Muy débil: +0.5
Negativa: +0
Evaluación cualitativa
• Calidad de la señal
Bien definida: .+1
Granular o grumosa: ..-1
• Tinción de fondo
Debil: …-0.5
Intensa: .-1
• Reacción cruzada: .-1
Detección basada en polímeros
Gana: .3/13 casos
Empata: ..2/13 casos
Pierde: 8/13 casos
Detección basada en haptenos (OptiView®)
Gana: 8/13 casos
Empata: 2/13 casos
Pierde: 3/13 casos
Resultados de la evaluación cuantitativa
Detección basada en polímeros
Gana: .0/13 casos
Empata: ..0/13 casos
Pierde: 13/13 casos
Detección basada en haptenos (OptiView®)
Gana: 13/13 casos
Empata: 0/13 casos
Pierde: 0/13 casos
Resultados de la evaluación cualitativa
CD30: Polímero CD30: Optiview®
MUM1: Polímero MUM1: Optiview®
BCL6 : Polímero BCL6 : Optiview®
CD5 Polímero CD5: Optiview®
CD5 Polímero CD5: Optiview®
Haptenos
•Los de origen sintético como la hidroxiquinoxalina no se detectan en mamíferos
•Los Ac. dirigidos contra ellos no han de proceder de una especie diferente de la del Ac. marcado
•La conjugación a un Ac. apenas reduce la actividad de este último.
•Una molecula de Ig. puede conjugarse a múltiples haptenos
•Conjugados a la tiramida permiten amplificar la señal con poca tinción de fondo
R
Tiramida
PM:164
HO
N
O
.
.
.
.
.
.
.
.
Mod Pathol 2003;16(2):161-165
Tiramida-Hidroxiquinoxalina (OptiView®)
HO
N
O
.
.
.
O
NH2 N
N OH .
.
.
.
.
.
.
.
.
. . .
OH
N
O
HO
+
Peroxidasa
OH Proteina Cadenas laterales de tirosina
Proteina
H2O2
O2
N
O
HO Tiramida Hidroxiquinoxalina
Hidroxiquinoxalina
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
TM
HQ
TM HQ
TM
HQ
TM
H2O2
H2O2
H2O2
H2O2
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
H2O2
H2O2 H2O2
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
HQ
DAB
H2O2 O2
MALD1 MCL
0
20
40
60
80
100
CD38
MALD1 MCL
0
20
40
60
80
100
CD38
% C
D3
8
po
sit
ive
ce
lls
MALD1 MCL
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
MALD1 MCL
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
CD
38
mR
NA
ex
pre
ss
ion
CD38 expression in MCL
CD38 CD38