Post on 08-Mar-2016
description
TEMA: TINCIONES ESPECIALES EN
HISTOQUMICAS
ELABORADO POR:
ALLAUCA VIVIANA COLLAGUAZO GABRIELA DE LA TORRE KATHERINE MARTINEZ NATALY
UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE LABORATORIO CLINICO E
HISTOPATOLOGICO
Tercer Semestre
INTRODUCCIN
COLORACIN
Es el proceso mediante el cual un cuerpo es tenido por una sustancia colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente
utilizado al preparar la solucin colorante.
Tipos de coloraciones:
Ortocromticos : Los tejidos adquieren un color igual a de la solucin colorante empleada.
Metacromticos: una sustancia o un componente se t ie con un color diferente al del colorante empleado.
HEMATOXILINA:
ncleos y regiones acidas.
EOSINA: regione
s bsicas
y colge
no
TINCIONES
ARGENTICAS: Fibras
ret iculares
HEMATOXILINA
FERRICO : Msculos, erit rocitos.
ACIDO PERYODICO DE SCHIFF: molculas ricas en carbohidratos y glucgeno.
COLORANTES DE
WRIGHT Y GIEMSA:
erit rocitos, ncleos de leucocitos. citoplasma
de los monocitos y linfocitos
TRICOMICA DE
MASSON:
ncleos, querat ina, musculo y
citoplasma
COLORANTES Y REACCIN HISTOLGICAS COMUNES
La histoqumica es la aplicacin de las reacciones qumicas y bioqumicas en la tcnica histolgica, con el fin de localizar y determinar de manera cientfica ciertas sustancias o elemento presentes en los tejidos dando un color caracterstico.
La tincin de hematoxilina y eosina (HE) se utiliza rutinariamente en histopatologa para analizar diferentes tejidos del organismo, incluyendo cortes de piel. Sin embargo, esta tcnica no permite apreciar elementos como fibras elsticas o mastocitos, ni diferencia entre pigmento melnico y hemosiderina, de modo que obliga a recurrir a tinciones secundarias o especiales
Durante el procesamiento del tejido previo a la reaccin histoqumica, como la fijacin o la inclusin, hay que evitar daar a la molcula que queremos detectar porque de otra manera resultara en falsos negativos, es decir, no tener tincin cuando en realidad la molcula de inters s est presente en el tejido, aunque deteriorada.
TCNICA DEL PAS (cido Perydico Schiff)
La tcnica de PAS se ut iliza en los preparados para microscopa ptica, permit iendo la t incin de componentes celulares que contienen hidratos de carbono, por ejemplo algunas membranas celulares, clulas caliciformes en la mucosa del intest ino, fibras ret iculares que estn rodeados por hidratos de carbono, etc.
La tcnica de Schiff, es una tincin que se usa comnmente en Histoqumica. Utiliza PAS, cido perydico de Schiff, es un colorante incoloro pero que se torna rojo estable al contacto con los grupos aldehdos.
TCNICA DE TINCIN:
Desparafinar e hidratar
(xilol y decrecientes
alcoholes)
cido perydico
0.5 % 5 min.
Lavar en agua .
Reactivo de Schiff 15- 30
min.
Aclarar en 3 baos de
agua sulfurosa 2 min. Cada
uno.
Lavar en agua
corriente.
Deshidratar, aclarar y montaje.
TINCIN DE GRAM MODIFICADA BROWN- BRENN
Es un tipo de tincin que se utiliza para demostrar gram-
negativas y gram-positivos en el tejido
Cristal Violeta al 1%
Lugol Acetona Fucsina
bsica al 0,25 cido Pcrico
Acetona
TCNICA:
Desparafinar e hidratar al agua dest ilada
Tincin de Cristal Violeta por 1 minuto
Lavar en agua corriente
Aplicar lugol por 1 minuto
Lavar agua corriente
Decolorar con alcohol-Acetona (saca el
exceso del colorante Cristal Violeta)
Lavar en agua corriente
Tincin con Fucsina bsica durante 3
minutos.
Lavar en agua corriente, y secar levemente la
muestra.
Pasar rpidamente por 2 baos de acetona.
Pasar a la mezcla de cido Pcrico solucin
acetona al 0,1% hasta que aparezca un color rosado-amarillo en la
muestra.
Pasar por 2 cambios de acetona
RESULTADOS
Bacterias Gram positivas : azul Bacterias Gram negativas: rojo
Ncleos: rojo Fondo: Amarillo
TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN
es una tcnica de t incin diferencial rpida y
econmica, usada para la identificacin de bacterias cido-alcohol resistentes
(BAAR) en cortes de tejido en parafina.
Fucsina fenicada:
0,5 g .fucsina bsica
50 ml agua dest ilada
5 ml etanol absoluto
28,5 g.. cristales de fenol derret idos
Alcohol cido 1%:
Acido Clorhdrico1ml.
Alcohol ABS99ml.
Hematoxilina
Acido peridico al 5 %
Tcnica: Desparafinar e
hidratar los cortes
cido peridico 5%, 10 min
Lavar con agua destilada
Fucsina fenicada, 15 min
Decolorar en alcohol cido al
50%
Lavar con agua destilada
Hematoxilina, 10 min
Carbonato de litio, azulamiento
Deshidratar, aclarar y montar preparaciones
Resultados BAAR: rojo.
Ncleos: azul semiamarillo.
TCNICA DE GRIMELIUS
Se utilizan principalmente para la identificacin de las clulas neuroendocrinas y
sus tumores, tambin para la demostracin de fibras de
reticulina, melanina y calcio.
Impregnacin:
Solucin de Plata 1%: Nitrato de Plata al 1%...4ml.
Buffer de Acetato (0.2mol)10ml. Agua Bidestilada86ml.
Reduccin:
Solucin de Hidroquinona. Hidroquinona1gr.
Sulfato de Sodio5gr.
Agua Bidestilada100ml.
Tcnica: 1.-Desparafinar
hidratar.
2.-Solucin de Plata 58
a 60C3Hrs.
3.-Lavar en Agua.
4.-Solucin de Hidroquinona
40 a 45C1:30Hrs.
5.-Lavar en Agua.
6.-Deshidratar, Aclarar y Montar.
Resultados:
Grnulos Argirofilos (formaciones de proteina ) pardo,
Dorado o Negros..
TECNICA DEL ROJO CONGO
Es considerada como la tcnica ms fiable y prctica
para detectar amiloide y tambin se usa para teir
preparaciones microscpicas, especialmente en t inciones
para el citoplasma y los erit rocitos
Resultados:
El amiloide se t ie en rojo claro, y brilla con luz
polarizada.
Tcnica: 1.- Cortes por
congelacin 10 micras.
2.- Colocarlos en solucin de Rojo congo al 1% en agua,- 30 min.
3.- Poner en carbonato de Litio (a saturacin en agua)-
--15 seg.
4.- Lavar en alcohol de 80, hasta que no
arrastre mas colorante.
5.- Lavar en agua corriente 15 min.
6.- Teir con hematoxilina.
7.- Lavar en agua, deshidratar, aclarar
y montar.
TINCIN DE GOMORI
Tinciones de
retculo
Demuestran tanto las fibras
reticulares como material de la
membrana basal.
Consisten en fibras muy finas de colgeno tipo
III, muy extendidas en el tejido conectivo.
Las membranas basales se compone principalmente de colgeno tipo IV y
laminina.
Distinguir neoplasias epiteliales de no
epiteliales, diversas neoplasias
mesenquimales de otras, y carcinoma in
situ.
Se trata de una tcnica de impregnacin argntica que utiliza como base fuerte el
hidrxido potsico y como agente reductor el formol.
1- Fijacin: formalina al 10%.
2- Cortes: en parafina, congelacin o en celoidina. 2 - 4
TCNICA
XILENO: 2x10min ALCOHOL AL 100%: 2x5min
ALCOHOL AL 96%: 2x5min
LAVAR CON AGUA CORRIENTE
PERMANGANATO POTASICO AL 1%:
2min
AGUA DESTILADA: 5min
ACIDO OXALICO AL 5%: Hasta que
se decolore
LAVAR CON AGUA DESTILADA
ALUMBRE FERRICO AMONIO AL 2%:
2min
AGUA DESTILADA: 5min
SOLUCION DE PLATA
AMONIACAL: 3min
LAVAR CON AGUA DESTILADA
RAPIDAMENTE
FORMOL AL 10%: 3min
LAVAR CON AGUA
DESTILADA
CLORURO DE ORO AL 1/500:
10min
LAVAR CON AGUA
DESTILADA
HIPOSULFITO SODICO AL
5%: 1min
LAVAR CON AGUA
DESTILADA
PASAR POR AGUA
CORRIENTE
ALCOHOL AL 96%: 2x5min
ALCOHOL AL 100%: 2x5min
XILENO Y MONTAR
RESULTADOS:
Fibras reticulares
Negro
Fibras colgenas
Amarillento
Tincin tricrmica de Masson
Se utilizan en combinacin con varios colorantes aninicos
NCLEO CITOPLASMA
Evaluacin del tipo y cantidad
de material extracelular
COLGENO
COMPONENTES:
Etanol de 50, 70, 80, 90,
96 y 100
Xileno
Hematoxilina frrica
de Weigert
Fucsina escarlata
Verde luz
Acido fosfomolidb
ico al 5%
Agua destilada
Agua corriente
TCNICA
2x10 min en xileno para desparafinar
2x10 min en etanol
100
10 min en etanol
96
10 min en etanol
80
10 min en etanol
50
5 min en agua
destilada
5 min en Hematoxilina
frrica de Weigert (10 min si el
colorante lleva ms de 5 das hecho)
5 min en agua corriente para diferenciacin.
3 min lavado en agua destilada
5 min en fucsina-
escarlata.
2 min lavado en
agua destilada
15 min en cido
fosfomolbdico al 5% en
agua destilada.
10 min en verde luz al 2 % (puede ser sustituido por
azul de anilina).
Unos segundos en
agua destilada.
3 min de diferenciacin
con cido actico al 1% en agua destilada
Deshidratado rpido, unos segundos, en
etanol de graduacin
creciente: 80, 96 y 100
2x10 min en xileno
Montaje
RESULTADOS: Colgeno: verde
azulado.
Msculo: rojo,
marrn.
Citoplasma: rosado.
Ncleos: negro.
Citoplasma: rosado.
TINCIONES PARA MUCINA
La mucina es el trmino tradicional utilizado para un gran grupo de macromolculas que contienen un grupo
acido, que se divide en dos categoras principales:
Glicoprotenas: unido a la membrana o secretada
compuestos por :
Un grupo de protenas
Un cido silico que contiene
restos de carbohidratos
Glicosaminoglicanos del estroma que
contienen:
Acido hialurnico que
puede ser tambin
sulfatado.
AZUL DE ALCIANO
AZUL DE ALCIANO
El Alcian Blue es un colorante soluble en agua que deriva de su color azul del
cobre en las molculas.
Es un tinte bsico y por lo tanto tiene
una afinidad por los tejidos que
contienen grupos aninicos tales como mucinas con cido y otros carbohidratos
cidos.
Hay diferentes tipos de PH que colorean
selectivamente diferentes tipos de mucinas cidas. El Alcian Blue puede ser combinado con la tcnica de PAS para demostracin
de mucinas neutrales y cidas.
PREPARACIN
AZUL DE ALCIANO
Agua Destilada :
97 CC
cido Actico
Glaciar: 3 CC
Alcian Blue: 1g
PROCEDMIENTO:
Fijacin en alcohol 96
lavado en agua corriente
Pasar por cido al 1% durante 5
Min
Solucin de Alcian Blue
(filtrado) durante 30 min
Lavado en agua corriente
Teir con Hematoxilina durante 1 min
Lavado en agua corriente durante
1 min
Deshidratar (Alcohol 96 , 100 , 100/
Aclaramiento : Xilol1
Aclaramiento : Xilol2
Montar con blsamo.
NCLEOS
AZULES
MUCINA
S
TINCIN DE GIEMSA
Tcnica muy til para la demostracin de
varios elementos hematolinfoides (incluyendo mastocitos) y microorganismos.
El colorante de Giemsa tambin da excelentes resultados para la
tincin rutinaria de frotes sanguneos.
Debe fijarse primero la muestra con
metanol absoluto por un tiempo mnimo de
tres minutos
Tiempo de coloracin podr ser
de 10 o 20 minutos
El colorante en solucin nunca
se utiliza de manera directa
solucin amortiguadora en una proporcin de
1:10 o 1:20
PREPARACIN
GIEMSA
Metanol: 250 ml
Glicerina caliente : 2.50 ml
Polvo de Giemsa azur
E.M: 3.8 gr
PROCEDMIENTO: (extendidos
citolgicos) Llevar al agua los cortes
histolgicos
Coloca el reactivo de giemsa azur por 4-5
minutos dependiendo de la caducidad del
reactivo.
Lavar en agua corriente Secar al ambiente
Colocar en xilol por unos segundos
Montar
Ncleos
color
violeta
Citoplas
ma color
azul
TINCIN PARA FIBRAS
ELSTICAS Las tcnicas tipo Weiger son bastantes especficas para la
elastina, y son consideradas por muchos como el mtodo de eleccin para la demostracin de estas fibras
extracelulares.
Sim embargo la tincin de Gieson Verthoeff-van (VVG) es la ms
popular porque es rpida
Ambas tcnicas se suelen establecer
en el contexto tricrmico.
Ncleos celulares se tien de marrn
a negro
Se esbozan las fibras elsticas con un fuerte color negro.
El colgeno de rosa a rojo y el musculo y el citoplasma de
amarilla.
PREPARACIN
Hematoxilina alcohlica
Hematoxilina ------------------------------------10 gr.
Alcohol96 -------------------------------------100 ml
Cloruro frrico al 10 %:
Cloruro frrico ----------------------------------10 gr.
Agua destilada ----------------------------------100 ml
Yoduro potsico al 10
%:
Yoduro potsico --------------------------------10 gr.
Agua destilada ----------------------------------100 ml
Solucin de Picrofucsina
Fucsina cida al 1 % ----------------------------1.3 ml
-cido pcrico a saturacin ---------------------- 9.7 ml
PROCEDMIENTO
Hidratar
Hematoxilina de Verhieff por
30 minutos
Lavar Cloruro
frrico al 1% una pasada
Picrofucsina una pasada
Deshidratar con alcohol al
50%
Aclarar con xilol
Montar
Colgeno Citoplasma