UNA INTRODUCCIÓN A LA

INGENIERÍA GENÉTICA

Direcciones de interés:

• http://www.chimie-sup.fr/OGM.htm

• Es una página en francés muy buena sobre OGM.

• http://www.jenabioscience.com/

• Empresa que vende todo tipo de enzimas.

• http://www.juntadeandalucia.es/averroes/recursos_informaticos/concurso2000/3prem

io/viginsercion.html

• Muy interesante: sencilla y con buenos esquemas sobre inserción de ADN en células

Enzima de restricción EcoRI

Cómo se unen dos fragmentos da ADN

cortados por la misma enzima de restricción

Cómo se unen dos fragmentos da ADN

cortados por la misma enzima de restricción

Cuatro ejemplos de enzimas de

restricción

CLONACIÓN DE UN GEN

EN UNA BACTERIA Y

EMPLEANDO UN

PLÁSMIDO COMO VECTOR

ADN RECOMBINANTE

CLONACIÓN DE UN GEN EN UNA BACTERIA Y EMPLEANDO UN

PLÁSMIDO COMO VECTOR

Algunos ejemplos de enzimas de restricción

Vector de ADN: Virus

Esquema de un virus

bacteriófago: es un vector

muy eficaz puesto que de

forma natural los virus inyectan

su material genético en células

Infección de una bacteria por un

bacteriófago

Vector: Cósmido

Plásmido

Pertenecientes al fago

Gel de agarosa: matriz o soporte

de la electroforesis

La agarosa es un polisacárido que se extrae

de ciertas algas. Está compuesto por un

disacárido, la agarobiosa que se repite en

largas cadenas.

(En realidad la agarosa es una parte de un

polisacárido más complejo llamado agar-agar

que se emplea habitualmente como medio de

cultivo bacteriano).

La agarosa se

disuelve en agua

caliente y al enfriarse

se transforma en un

gel (parece gelatina)

Electroforesis: autorradiografía

• Placa fotográfica revelada: las manchas claras sobre fondo oscuro corresponden a los diferentes fragmentos de ADN.

• En este caso, se han separado fragmentos de 5 muestras diferentes.

Este método ya ha quedado

anticuado

Dispositivo para realizar la

electroforesis en gel El dispositivo consta de:

Una bandeja donde se verterá

el gel en estado líquido.

Un transformador que

suministra corriente eléctrica

continua.

Un peine que permitirá

excavar uno pocillos en el gel

donde se depositarán los

fragmentos de ADN a separar

en disolución

Este instrumento es una

micropipeta automática:

permite manejar cantidades

de líquido minúsculas con

gran precisión

VECTORES DE ADN NO

BIOLÓGICOS

Electroporación

Microinyección

Microproyectiles • Se denomina biolística o

biobalística a la introducción de DNA en células mediante la aceleración (disparo) de proyectiles de muy pequeño tamaño (microproyectiles).

• Generalmente los microproyectiles tienen alredededor de una micra (10-6 m) de diámetro, y son de un material inerte (oro o tungsteno).

• Los microproyectiles se pueden recubrir de DNA, y se pueden acelerar mediante pólvora, una descarga eléctrica, o utilizando gases a presión (por ejemplo helio comprimido). De esta forma se puede introducir DNA en prácticamente cualquier tejido de cualquier especie vegetal.

Este método se emplea para

obtener plantas transgénicas

PCR

Reacción

en Cadena de

la Polimerasa

Termociclador

• Un termociclador es

básicamente un

calentador que dispone

de un control automático

de ascenso y descenso

de temperatura y un

temporizador. Dentro, en

un recipiente, tiene lugar

la Reacción en

Cadena de la

Polimerasa

Secuenciación: método de Sanger

Secuenciación: método de Sanger

Ejemplo de fragmentos

que pueden formarse en

el recipiente con ddATP a

partir de la siguiente

secuencia:

5’-CTGACTTCGACAA-3’

ddAGCTGTT

ddAAGCTGTT

ddACTGAAGCTGTT

DIDESOXINUCLEÓTIDOS

MATERIAL NECESARIO PARA LA

SECUENCIACIÓN:

•FRAGMENTO DE ADN DE CADENA

SENCILLA PARA SECUENCIAR

•DIDESOXINUCLEÓTIDOS

TRIFOSFORILADOS MARCADOS

•ADN POLIMERASA

•CEBADORES

Secuenciación: método de Sanger

Secuenciación: método de Sanger

Secuenciación: método de Sanger

Secuenciación automática: método

de Sanger modificado

Secuencia de un ADN tal y como la muestra

un secuenciador automático

Máquina de secuenciación

automática de ADN

Cómo funciona un biochip

Biochip con marcadores fluorescentes

Biochip

Fluorocromos • Un fluorocromo es un componente de una molécula que hace que

ésta sea fluorescente. Este grupo funcional de la molécula es capaz de absorber energía de una longitud de onda específica y de emitirla en otra determinada de mayor longitud de onda (es decir, con menor energía). La cantidad de energía emitida y su longitud de onda dependen del propio fluorócromocomo.

• Habitualmente, los fluorocromos absorben energía de tipo ultravioleta y emiten en el rango de la luz visible.

• Hoy en día se conocen muchos tipos de fluorocromos de diferentes colores.

• Esta tecnología es particularmente importante en el campo de la bioquímica para el estudio de proteínas y en el análisis de ADN.

• Los fluorcromos se adosan a otras moléculas y sirven como marcadores de éstas.