REPUBLICA DE COLOMBIA

DCP-2500

TODOS POR UN NUEVOPAIS

® MININTERIOR

MINISTERIO DEL INTERIOR

CERTIFICACIÓN NÚMERO 52 DE 24 MAY 2016

"Sobre la presencia o no de comunidades étnicas en las zonas de proyectos, obras o actividades a realizarse".

EL DIRECTOR DE CONSULTA PREVIA

En ejercicio de las facultades legales y reglamentarias en especial, las conferidas en el artículo 16 del numeral 5 del Decreto 2893 de 2011 y la Resolución 1928 del 2 de

diciembre de 2013 y,

CONSIDERANDO:

Que se recibió en el Ministerio del Interior el día 06 de mayo de 2016, el oficio con radicado externo EXTMII6-0021374, por medio del cual el señor FELIO JESUS BELLO GARCIA, en calidad de Docente e Investigador de la Universidad Antonio Nariño solicita se expida certificación de presencia o no de comunidades étnicas en el área del proyecto: "AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN ANTIBACTERIAL DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIALES (DEFENSINAS), DERIVADAS DE LARVAS DE LA MOSCA SARCONESIOPSIS MAGELLÁNICA (DIPTERA: CALLIPHORIDAE", localizado en jurisdicción del Distrito Capital de Bogotá, en el departamento Cundinamarca, identificado con las siguientes coordenadas:

1'1$71 » NORTE 1004191576ff 1001831,71489 1 19 8 56

Fuente: Suministrada por el solicitante; radicado externo EXTMII6-0021374 del 06 de mayo de 2016.

Que en la solicitud se anexaron los siguientes documentos técnicos: i) solicitud formal ante la Dirección de Consulta Previa, ii) cuadro de coordenadas, donde se va a ejecutar el proyecto denominado: "AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN ANTIBACTERIAL DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIALES (DEFENSINAS), DERIVADAS DE LARVAS DE LA MOSCA SARCONESIOPSIS MAGELLÁNICA (DIPTERA: CALLIPHORIDAE", localizado en jurisdicción del Distrito Capital de Bogotá, en el departamento Cundinamarca.

Que en un análisis inicial la Dirección de Consulta Previa, procedió a revisar en las bases de datos conforme a las coordenadas presentadas por el solicitante para el proyecto: "AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN ANTIBACTERIAL DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIALES (DEFENSINAS), DERIVADAS DE LARVAS DE LA MOSCA SARCONESIOPSIS MAGELLÁNICA (DIPTERA: CALLIPHORIDAE" ,localizado en jurisdicción del Distrito Capital de Bogotá, en el departamento Cundinamarca. Este análisis tuvo como objeto constatar la presencia o registro de comunidades étnicas que

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pudieran resultar afectadas. Las bases de datos consultadas fueron: i) Base cartográfica de resguardos indígenas constituidos (Incoder - Igac 2015), ii) Base cartográfica de Consejos Comunitarios constituidos (Incoder 2015), iii) Base de datos de la Dirección de Asuntos Indígenas, Minorías Étnicas y Rom (Mininterior 2015), iv) Base de datos de la Dirección de Comunidades Negras, Afrocolombianas, Raizales y Palenqueras (Mininterior 2015), v) Base de datos de Consulta Previa (Mininterior 2015).

Que con base en la información aportada y recogida se elaboró el informe técnico el día 23 de mayo del 2016, en el cual se estableció lo siguiente:

"Se digitalizo en la base de datos de la Dirección de Consulta Previa las coordenadas del

área aportada por el solicitante fueron presentadas en coordenadas Planas Origen Centro, Datum Magna, para el proyecto "AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN ANTIBACTERIAL DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIALES (DEFENSINAS), DERIVADAS DE LARVAS DE LA MOSCA SARCONESIOPS1S MAGELLÁNICA (DIPTERA: CALLIPHORIDAE)""

Para el ejercicio de análisis cartográfico se utilizó la cartografía básica y temática IGAC 2015, lo que permitió constatar que el proyecto se localiza en jurisdicción del Distrito

Capital de BOGOTA D.C, departamento de CUNDINAMARCA, por lo tanto es posible continuar con el trámite de la solicitud.

ACTIVIDADES:

Captura de especlrnenes adultos de Sarconeslopsis magellarrica. Se efectuarán capturas de termes adultas de esta mosca en Bogotá (Localidad Usaquén, Cementerio Jardines de Paz, Coordenadas 4"46'52"le 74"02'10"0 J 1001831,71489, 1020435,58969) y Localidad

Santa fe, Parque Nacional Enrique Olaya Herrera, Coordenadas 437'22"N 74'03'40'0/1001831,11489: 1002930,38356). Porciones de 6 lbs de hígado de cerdo se emplearán corno cebo para atraer a los insectos adultos, los cuales serán recolectados cuidadosamente con jamas entomológica y almacenados vivos en frascos de vidrio para luego ser transportados en una nevera de icopor al insectario que se establecerá en la Universidad Antonio Mariño, sede Circunvalar. La recolección de los insectos se realizará en horas de la mariana, periódicamente, durante tres semanas continuas y con esta intensidad se programarán 4 muestreos en el año. dos en los meses secos y des al final del período de lluvia. La identificación taxonómica del material recolectado en campo, se realizaré con base

en las Claves taxonómicas de Manees & Peris. Los insectos adultos de la especie seleccionada serán depositados en jaulas Gerberg de 45x45x45 cros. Para la continuidad del ciclo de vida, a partir de las formas adultas, se utilizará el proeedineento descrito por Pinillo et al_ (2013) Se estabrecerá y mantendrá una colonia permanente de la mosca indicada. Extracción de las ES larvales de S. magellanica. Las ES serán colectadas de larvas cle tercer estadio, do MOMIO con el procedimiento descrito por Van dar Pías et al. (40) Aproximadamente 300 larvas, por cada experimento, serán desinfectadas, colocándolas en un tubo de centrifuga falcon de 15 mL y a continuación se someterán a lavados con solución de hipociorito de sodio al 0.5%, con agitación continua durante 5 minutos, luego se pasarán por formaidehido al 5% durante otros 5 min. Finalmente, se lavarán tres veces con agua estéril con antibiótico al 1% (Penicilina y Estreptomicina) por 3 minutos. Para potenciar la respuesta inmune de tes larvas, previo a la extracción de las LS (13.14), estas serán incubadas por tina hora, en una suspensión bacteriana (0D595-0,5) de P. aeruginosa, S aureus y S epidermidis Luego serán sumergidas en 2 ml de PBS y se Incubarán a 25re por 1 hura El PEIS con las ES larvales será removido y centrifugado por 10 minutos a 1250 g. Posteriormente será liofilizado para, en esta forma conservarlo congelado a -70oC hasta se utilización. En otros expenmentos paralelos, se omitirá et paso de pre-tratamintos de las larvas con las bacterias seleccionadas, con el fin de comparar los resultados de los péptidos obtenidos con y sin preeratamientos con bacterias. De igual forme, se dará continuidad a la utilización de ambas clases de larvas de III estadio (con y sin pre-tratamiento con oacte das) en las técnicas que describimos a continuación. Extracción de cuerpos grasos de S. magellanica.

Para la extracción de los cuerpos grasos, en cada experimento, 300 larvas, tomadas por separado con y sin pretratamiento, serán congeladas en nitrógeno líquido por los, lo que permitirá inmovilizarlas para posteriormente realizar la dieccción de los cuerpos grasos, con ayuda de pinzas y alfileres entomológicos, colocadas en solución tampón fosfato salino (PBS) Los cuerpos grasos extraídos se almacenarán en tubos Falcon de 15 rrit enfriados en hielo, luego, se homogenizarán en un mortero y el extracto obtenido. se centrifugará a 3.1393 q a 4 'C durante 50 min. Luego se filtrarán a través de una membrana 0,22 p (33mm MILLEXI) y el producto será linfilizado y almacenado a - 20"C para posteriormente purificar tos pes:decida a utilizar en la evaluación de la actividad antibacteriana. Extracción de hemolinfa de S. mageflanica Para cada experimento, se tornarán 300 larvas (con y sin ere-tratamiento) previamente congeladas mediante el procedimiento anterior, se les removerá la parte anterior (piezas bucales) y se colectará la hernolinfa sobre una caja Petri que a su vez se mantendrá en frio (gel refrigerante), luego será almacenada en tubos Eppendorf de 2 mt colocados sobre hielo e inmediatamente se centrifugarán a 4.696 g con temperatura de 4 "C durante 40 min., con la finalidad de separar las células y poder colectar el plasma, que corresponderá a un sobrenadarte transparente, el cual será extraído con una micropipeta y se filtrará igualmente con una membrana 0,22 p (33mm MILLEX01), el producto será linfliizado para finalmente almacenarlo e - 20"C. (41). Método general para al aislamiento, extracción, purificación y laioensayos de peptidos ardirnicroblanos.

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A partir de las fracciones obtenidas por ultrafiltración, se evaivará le acción anbleacterial de los productos derivados de muestras de cuerpos grasos, de hemolinfa y de las ES larvales. Luego, se seleccionaran fracciones y se separarán sus compuestos por diferentes procedimientos usando cromatograf fa de fase líquida de alta eficiencia (HPIC), para un posterior análisis por espectrometrie de masas y la correspondiente caracterización por secuenciacion de Riman Posteriormente, al ser caracterizados los péaticlos que presenten acción anlibacteriana, se sintetizarán mediante el procedimiento de síntesis de pegados en fase sólida Fmoc y se evaluará su acción con bioensayos frente a las bacterias Gram-positivas y Grarn- negativas, Extracción y Purificación de Poptidos Los productos obtenidos luego de fa extracción (hemolinfa, ES y cuerpos grasos) serán homogenizados, por separado, en 1.5 ml de ácido acético 2 M suplementado con aprotinina (20 mg/mf) apeno inhibidor de proteasas utilizando un Triturador de tejidos Nunca Una segunda hornogenización se realizará en un balo de agua hielo, mediante sonicación a potencia media (Branson Ultrasons Annemasse, France), la extracción se llevara a cabo en un período de 30 min a 4 'C con agitación suave. El sobeenadante obtenido por centrifugacion a 13,800 g durante 30 min a 6 nC, será cargado en un cartucho Sep-Pak C18 y equilibrado en agua acidificada (TFA 0,05%). Luego del lavado con esta misma solución, se llevarán a cabo 3 eluciones con acetonitrilo al 5, 40 y 00% (AChlaTFA 0,05%). La fracción de 40% Sep-Pak se concentrara en una centrifuga al vacío y será reconstituida con agua Mal-a (Millipore TM ) y sometida a fase reversa C18 en una columna Júpiter C18 equilibrada en agua con ácido trifluoracetico 0.05%, La muestra será purificada usando gradientes de acetoretnicaaguaJO .05% ácido trifluoracelico de 2-B0% acetonitrilo por 60 min a una tasa de flujo 1.b mUmin La absorbancia Ultravioleta será monitoreada a 225 nm, Las fracciones de los picos de elución serán colectadas manualmente y secados al vado (Speed-Vac Savant) y posteriormente utilizadas en los ensayos de actividad antibacterial y para la determinacion de la secuencia do aminoácidos. Selección de cepas bacterianas. Se trabajaran cepas ATCC previamente caracterizadas, correspondientes a las especies Sihapylococcus aureus, S, epiderrardis y Pseudornonas aeruginosa. Estas se mantendrán en caldo Muller-lainten hasta su uso, previa activación de las mismas por incubación a 37"C durante 18 horas, Cuando las cepas bacterianas se encuentren en fase exponencial, serán cuantificadas haciendo uso de un lector de ELISA a 0.2 densidades ópticas (DO), Para la verificación de la pureza de las mismas se realizaron sierribrae en agar sangre y se incubarán toda la noche hasta su tectura Se estandanzarán curvas de crecimiento, luego se determinará la concentración mínima inhibitoria (CMI) por difusión en agar y turbidimetria Además, se determinaran las UFC con la CMI y se efectuará la evaluación crtotóxica de los pepticios en la linea celular de fibroblastos IARC5, Finalmente, se desarrollará la comparación de les papados aislados de S. magellaniaca con los referenciados en la base de datos de papados antimicrobiales obtenidos de L. sericata Análisis estadístico. La base de datos se construirá en Excel Version 2007, la depuración y procesamiento de los datos se realizará en el programa SPSS, Version 20.0 y State Version 11.1, Las pruebas estadísticas se evaluarán a un nivel de significancia al 5% (p<0,05). Todos los datos cuantitativos se analizarán inicialmente con estadística descriptiva y luego se establecerá normalidad mediante la prueba de Shapire-Wilks (o 0,05). Para determinar si los tratamientos por actividad antibacterial presentan diferencias, se aplicará estadística no parametrica con una regresión logística ordenada en el programa State 11.1.

Como resultado de la consulta de las bases de datos (espacial y no espacial) para Consulta de la Dirección de Asuntos Indígenas, Minorías y Rom y del análisis cartográfico

realizado a partir del cruce de dicha información con el área del proyecto:

"AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN ANTIBACTERIAL DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIALES (DEFENSINAS), DERIVADAS DE LARVAS DE LA MOSCA SARCONESIOPS1S MAGELLÁNICA (DIPTERA: CALLIPHORIDAE)", se

evidenció que el proyecto de la referencia no se traslapa con comunidades étnicas

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DE 2 MAY 2016

De acuerdo con lo anterior. se establece que no se registra presencia de comunidades étnicas en el área del proyecto "AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN ANTIBACTERIAL DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIALES (DEFENSINAS), DERIVADAS DE LARVAS DE LA MOSCA SARCONESIOPSIS MAGALLÁNICA (DIPTERA: CALLIPHORIDAE)".

En mérito de lo anteriormente expuesto, esta Dirección,

CERTIFICA:

PRIMERO. Que no se registra presencia de comunidades Indígenas. Minorías y Rom. en el área del proyecto: "AISLAMIENTO. CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN ANTIBACTERIAL DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIALES (DEFENSINAS). DERIVADAS DE LARVAS DE LA MOSCA SARCONESIOPSIS MAGELLÁNICA (DIPTERA: CALLIPHORIDAE", localizado en jurisdicción del Distrito Capital de Bogotá, en el departamento Cundinamarca, identificado con las siguientes coordenadas:

=ESTE !-.1 'IN:ARTE-71 150459157E8T 10204355/169

— . . ...,i1)0183111.1489 M93138356

Fuente: Suministrada por el solicitante: radicado externo EXTMII6-0021374 del 06 de mayo de 2016.

SEGUNDO. Que no se registra presencia de comunidades Negras, Afrocolombianas, Raizales y Palenqueras, en el área del proyecto: "AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN ANTIBACTERIAL DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIALES (DEFENSINAS), DERIVADAS DE LARVAS DE LA MOSCA SARCONESIOPSIS MAGELLÁNICA (DIPTERA: CALLIPHORIDAE", localizado en jurisdicción del Distrito Capital de Bogotá. en el departamento Cundinamarca, identificado con las siguientes coordenadas:

eS TE 1004593151687 102043158969 s. 1001831,11489 100293a13E356

Fuente: Suministrada por el solicitante: radicado externo EXTMI16-0021374 del 06 de mayo de 2016.

TERCERO. Que la información sobre la cual se expide la presente certificación aplica específicamente para las coordenadas y las características técnicas relacionadas y entregadas por el solicitante, a través del oficio con radicado externo EXTMI16-0021374 del 06 de mayo del 2016. para el proyecto: "AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN ANTIBACTERIAL DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIALES (DEFENSINAS), DERIVADAS DE LARVAS DE LA MOSCA SARCONESIOPSIS MAGELLÁNICA (DIPTERA: CALLIPHORIDAE". localizado en jurisdicción del Distrito Capital de Bogotá, en el departamento Cundinamarca, identificado con las siguientes coordenadas:

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LX r. ESTE V =NbTE-1 1004593057687 102043505"169 rt ITMaiii~~ - —

1001 831011489 1 0112 9 30jiii6'. ••••••••TR •

Fuente: Suministrada por el solicitante; radicado externo EXTMII6-0021374 del 06 de mayo de 2016.

CUARTO. Contra el presente acto administrativo procede el recurso de reposición, el cual deberá interponerse por escrito en la diligencia de notificación personal, o dentro de los diez (10) días siguientes a ella, o a la notificación por aviso, ante esta Dirección, de conformidad con lo establecido en el artículo 76 de la Ley 1437 de 2011 (Código de Procedimiento Administrativo y de lo Contencioso Administrativo).

COMUNÍQUESE Y NOTIFÍQUESE

ÁLVARO EC VERRY LOND011. O Director e Consulta Previa

ely, Elaboró: Stella Mejía Ducanddt' Revisado: Elena Ramírez Ceballos. Aprobó: Luis Fernando Mora. Líd Área de Certificac nes

T.R.D. 2500.09.06

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