7.1EXTRACCIÓN DE COMPUESTOS 7.1.1...

58

7. RESULTADOS

7.1 EXTRACCIÓN DE COMPUESTOS

7.1.1 EXTRACCIÓN CON ETANOL Tabla 3. Primera extracción etanólica

PLANTA FILTRADO

RECUPERADO (ml)

EXTRACTO RECUPERADO

(grs.)

CARACTERISTICAS DEL EXTRACTO RECUPERADO

Árnica 170 1.4 viscoso, color rojo-ámbar

Gordolobo 125 0.6 viscoso, color ámbar

Pasiflora 164.5 0.4 viscoso, color verde

Romero 140 2.4 viscoso, olor fuerte alcanforado

Ruda 138 0.7

Tabla 4. Segunda extracción etanólica

PARTE DE LA PLANTA

FILTRADO RECUPERADO

(ml)

EXTRACTO RECUPERADO

(ml)

Flor de árnica 123 0.9

Flor de Gordolobo

131 0.9

Tronco, tallos hojas y guías

de de Pasiflora

156 0.8

Tronco de pasiflora

154 1.0

Tallo de pasiflora

158 1.2

Hojas de Romero

152 1.6

59

Tabla 4. Segunda extracción etanólica (cont.)

PARTE DE LA PLANTA

FILTRADO RECUPERADO

(ml)

EXTRACTO RECUPERADO

(ml) Flor y tallo de

Ruda 142 1.3

Flor de ruda 143 0.9

Tallo de ruda 151 1.4

7.1.2 EXTRACCIÓN CON HEXANO Tabla 5. Extracción con hexano

PLANTA FILTRADO

RECUPERADO (ml)

EXTRACTO RECUPERADO

(grs.)

CARACTERISTICAS DEL EXTRACTO RECUPERADO

Árnica 156 0.3 viscoso

Gordolobo 280 0.5 viscoso

Pasiflora 137 0.3 viscoso

Romero 125 0.6 viscoso, olor fuerte alcanforado

Ruda 143 0.8

60

7.2 PRUEBAS PRELIMINARES FITOQUÍMICAS.

Al realizar las pruebas preliminares fitoquímicas en el extracto etanólico de:

Árnica (H. inuloides). Se comprobó la existencia de los siguientes metabolitos

secundarios: Cumarinas, flavonoides, taninos y triterpenos.

Gordolobo (G. oxyphyllum). Se comprobó la existencia de los siguientes

metabolitos secundarios: Flavonoides. Además se detectó la presencia de taninos.

Pasiflora (P. incarnata): Se comprobó la presencia de los siguientes metabolitos

secundarios: Alcaloides, flavonoides.

Romero (R. officinalis). Se comprobó la presencia de los siguientes metabolitos

secundarios: Flavonoides, saponinas, taninos y triterpenos.

Ruda (R. graveolens). Se comprobó la presencia de los siguientes metabolitos

secundarios: Alcaloides, cumarinas, flavonoides y taninos.

61

Estos resultados se muestran en las Tablas 6 al 14, que muestran los resultados

comparativos entre los resultados obtenidos experimentalmente (Pruebas fitoquímicas

preeliminares) y los reportados por la bibliografía.

Tabla 6. Flor de Árnica (H. inuloides)

METABOLITO EXPERIMENTAL BIBLIOGRAFÍA*

ANTRAQUINONAS Negativo No reportado

ALCALOIDES Negativo No reportado

CUMARINAS Positivo Positivo

FLAVONOIDES Positivo (Shinoda, Pew’s) Positivo

GLUCÓSIDOS CARDIOTÓNICOS Y

LACTONAS SESQUITERPÉNICAS

Positivo No Reportado

GLUCÓSIDOS

CIANOGENÉTICOS Negativo No reportado

SAPONINAS Negativo No reportado

TANINOS Positivo (Cloruro férrico, gelatina) Positivo

TRITERPENOS Positivo Positivo

*Argueta, 1994; Delgado, 2001; Kubo, 1996

62

Tabla 7. Flor de Gordolobo (G. oxyphyllum)



ALCALOIDES Negativo No reportado

CUMARINAS Dudoso No reportado

FLAVONOIDES Positiva Positiva

GLUCÓSIDOS CARDIOTÓNICOS Y LACTONAS SESQUITERPÉNICAS

Negativo No reportado

GLUCÓSIDOS Negativo No reportado


TANINOS Positivo No reportado

TRITERPENOS Negativo No reportado

*Villa-Gómez-Ibarra, 2001

Tabla 8. Tronco, tallos, hojas y guías de Pasiflora (P. incarnata)



ALCALOIDES Positivo (Web, Cain y col.) Positivo (Alcaloides indólicos)

CUMARINAS Negativo Positivo

FLAVONOIDES Positivo Positivo

GLUCÓSIDOS CARDIOTÓNICOS Y LACTONAS SESQUITERPÉNICAS Positivo No reportado

GLUCÓSIDOS CIANOGENÉTICOS Negativo Positivo

SAPONINAS Positivo No reportado


TRITERPENOS Positivo No reportado *Duke, 1992

63

Tabla 9. Tallo de Pasiflora (P. incarnata)



ALCALOIDES Positivo (Cain y Webb) No reportado

CUMARINAS Negativo No reportado

FLAVONOIDES Positivo No reportado



Positivo No reportado

GLUCÓSIDOS CIANOGENÉTICOS Negativo No reportado



TRITERPENOS Positivo No reportado

*Duke, 1992.

Tabla 10. Tronco de Pasiflora (P. incarnata)



ALCALOIDES Positivo No reportado


FLAVONOIDES Positivo (Pew’s) No reportado

GLUCÓSIDOS CARDIOTÓNICOS Y LACTONAS SESQUITERPÉNICAS Positivo (Baljet, Legal) No reportado

GLUCÓSIDOS CIANOGENÉTICOS Negativo No reportado




* Duke, 1992.

64

Tabla 11. Romero (R. officinalis)



ALCALOIDES Positivo No reportado

CUMARINAS Positivo No reportado





GLUCÓSIDOS CIANOGENÉTICOS


SAPONINAS Positivo Positivo

TANINOS Positivo Positivo

TRITERPENOS Positivo Positivo

*Duke, 1992.

Tabla 12. Flores y tallo de Ruda (R. graveolens)



ALCALOIDES Positivo (Webb, Cain y col.) Positivo

CUMARINAS Positivo Positivo (Derivados de cumarinas)




Positivo (Baljet) No reportado




TANINOS Positivo (Gelatina) Positivo


*Duke, 1992.

65

Tabla 13. Flor de Ruda (R. graveolens)



ALCALOIDES Positivo (Webb, Cain y col.) No reportado









TANINOS


* Duke, 1992.

Tabla 14. Tallo de Ruda (R. graveolens)

METABOLITO EXPERIMENTAL BIBLIOGRAFÍA


ALCALOIDES Positivo (Webb, Cain y col.) No reportado









TANINOS Negativo No reportado


*Duke, 1992.

66

7.3 ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA

Árnica (H. inuloides) Los diferentes extractos acuosos, etanólico disuelto en etanol, etanólico disuelto

en agua, hexánico y mezcla de extractos de H. inuloides (Árnica) no mostraron

actividad sobre las 33 cepas de Pseudomonas, E. coli, S. typhimurium y S. flexneri,

excepto los extractos etanólicos disueltos en etanol, hexánico y la mezcla sobre S.

aureus, en el siguiente orden: hexánico > extracto etanólico disuelto en etanol = mezcla

de extractos de H. inuloides, como se muestra en la Figura 13 (ver Tabla 15) y se

aprecia en las Figuras 17 a 21.

Figura 13. Sensibilidad a extractos de Flor de Árnica.

Control= sln salina, etanol, hexano, mezcla de los tres anteriores.

Gordolobo (G. oxyphyllum)

Los diferentes extractos acuosos, etanólico disuelto en etanol, etanólico disuelto

en agua, hexánico y mezcla de extractos de G. oxyphyllum (Gordolobo) no mostraron

actividad sobre las 33 cepas de Pseudomonas, E. coli, S. typhimurium y S. flexneri; sin

embargo, los extractos etanólicos disueltos en etanol, etanólico en agua, hexánico y la

mezcla si mostraron actividad sobre S. aureus en el siguiente orden: extracto

etanólico en etanol > hexánico > mezcla de extractos de G. oxyphyllum > etanólico en

MezclaEtanólico en

etanol

Hexánico

6

7

8

9

C ont ro l A cuoso s Et anó licoen et ano l

Et anó licoen ag ua

Hexánico M ezcla

Dia

met

ro d

e in

hibi

ción

(mm

)

67

agua como se muestra en la Figura 14 (ver Tabla 16) y se aprecia en las Figuras 17 a

21.

Figura 14. Sensibilidad a extractos de Flor de Gordolobo

Control = sln salina, etanol, hexano, mezcla de los tres anteriores.

Pasiflora (P. incarnata)

Los diferentes extractos obtenidos: acuosos, etanólico disuelto en etanol,

etanólico disuelto en agua, hexánico y mezcla de extractos de P. incarnata (Pasiflora)

no mostraron actividad sobre las 33 cepas de Pseudomonas, E. coli, S. typhimurium, S.

flexneri y S. aureus .

Romero (R. officinalis)

Los extractos acuosos, etanólico disuelto en etanol, etanólico disuelto en agua,

hexánico y mezcla de extractos de R. officinalis (Romero) no mostraron actividad sobre

las 33 cepas de Pseudomonas, E. coli, S. typhimurium y S. flexneri; sin embargo, los

extractos etanólicos disueltos en etanol, hexánico y la mezcla de extractos de R.

officinalis si mostraron actividad sobre S. aureus como se muestra en la Figura 15 (ver

Tabla 17), y se aprecia en las figuras 17, 19 y 21, en el siguiente orden: extracto

etanólico en etanol > hexánico > mezcla de extractos de R. officinalis.

Etanólico en etanol

Etanólico en agua

Hexánico

Mezcla

5

7

9

11

13

15

Cont r ol Ac uosos Et a nól i c o e ne t a nol

Et a nól i c o e na gua

H e x á ni c o M e z c l a

68

Figura 15. Sensibilidad a extractos de Romero

Control = sln salina, etanol, hexano, mezcla de los tres anteriores.

Ruda (R. graveolens)

Los extractos acuosos, etanólico disuelto en etanol, etanólico disuelto en agua,

hexánico y mezcla de extractos de R. graveolens (Ruda) no mostraron actividad sobre

las 33 cepas de Pseudomonas, E. coli, S. typhimurium y S. flexneri; sin embargo, los

extractos etanólico disuelto en etanol y etanólico disuelto en agua si mostraron

actividad sobre S. aureus como se muestra en la Figura 16 (ver Tabla 18) , y se aprecia

en las figuras 17 y 18, en el siguiente orden: extracto etanólico en etanol > extracto

etanólico disuelto en agua.

Figura 16. Sensibilidad a extractos de Ruda

Control Acuosos


MezclaHexánico

Etanólico en agua

02468

10121416

C ont ro l A cuo so s Et anó licoen et ano l

Et anó licoen agua

Hexánico M ezcla

Diá

met

ro d

e in

hibi

ción

(mm

)


Etanólico en agua

6

7

8

9

10

11

C o nt ro l A cuo so s Et anó licoen et ano l

Et anó licoen ag ua

Hexánico M ezcla

Diá

met

ro d

e in

hibi

ción

(mm

)

Con

trol =

sln

salin

a, e

tano

l, he

xano

, m

ezcl

a de

los t

res a

nter

iore

s.

69

Figura 17 Extracto etanólico disuelto en etanol de A= Árnica, G=Gordolobo, •R = Romero y R = Ruda sobre S. aureus. (1= Vista anterior y 2= Vista posterior de la placa).

Figura 18. Extracto etanólico disuelto en agua estéril de A = Árnica, G= Gordolobo, P =Pasiflora y R = Ruda sobre S. aureus (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

R G

P

A

A

R

•R

G

1 2

1 2

70

Figura 19. Extracto hexánico de A = Árnica, G= Gordolobo, P= Pasiflora, •R = Romero y R = Ruda sobre S. aureus (1= Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

Figura 20. Extracto etanólico disuelto en etanol y extracto hexánico de A = Árnica, G= Gordolobo, •R = Romero y R = Ruda sobre S. aureus. Se observa mayor actividad en los extractos etanólicos.

H

A

•R R

P

G

Árnica

Gordolobo

Romero

Ruda

1 2

71

Figura 21. Mezcla de extractos de cada planta (etanol + hexano + agua) C = Control, A = Árnica, G= Gordolobo, P = Pasiflora*. •R = Romero y R= Ruda sobre S aureus. *Se observa contaminación, al repetirse es negativo (1 = Vista anterior y 2= Vista posterior de la placa).

7.3.1 MEZCLA DE EXTRACTOS ETANÓLICOS Y HEXÁNICOS

ENTRE PLANTAS

Se realizaron mezclas entre las diluciones de los extractos etanólicos de las plantas

y entre las diluciones de los extractos hexánicos, estas mezclas fueron en relación

50%-50%, 20%-80% y 80%-20%, y sólo se probaron sobre las siguientes cepas:

a) S. aureus (84)

b) P. fluorescens 61(30)

c) E. coli (46) (Ver Tabla 1)

Se observó que las cepas de P. fluorescens y E. coli son resistentes a la mezcla de

extractos etanólicos, mientras que S. aureus es sensible en grado variable, como lo

muestra la Figura 22 (ver Tabla 19).

C

A

•R

R

G

P*

*

1 2

72

Figura 22. Sensibilidad a mezclas de extractos etanólicos entre plantas

A-G = Flor de Árnica – Gordolobo, A-•R = Flor de Árnica – Romero, A-R = Flor de Árnica –

Ruda, G-•R = Gordolobo – Romero, G-R = Gordolobo – Ruda, •R-R = RomeroRuda

E= Discos impregnados y secos que fueron esterilizados en autoclave.

Para la mezcla de extractos hexánicos se observó que las cepas de P. flexneri y E.

coli son sensible a ciertas mezclas y concentraciones, mientras que S. aureus es

sensible a la mayoría de ellas como se muestra en la Figura 23 (ver Tabla 20) y se

aprecia en las Figuras 30 a 35.

5

7

9

11

13

A-G A-·R A-R G- ·R G-R ·R – R

Mezclas

Diá

met

ro d

e in

hibi

ción

(mm

)

50%-50% 50%-50%E 20%-80%20%-80%E 80%-20% 80%-20%E

73

Figura 23. Sensibilidad a mezclas de extractos hexánicos entre plantas.

591317212529

A-G

A-·R

A-R

G- ·

RG

-R·R

– R

A-R

G-R

·R –

RA-

RG

-R·R

– R

S. a

ureu

sP.

fluo

resc

ens

E. c

oli

Diámetro de inhibición (mm)

50%

-50%

20%

-80%

80%

-20%

A-G

=

Flo

r de

Árn

ica

– G

ordo

lobo

, A-•

R =

Flo

r de

Árn

ica

– R

omer

o, A

-R

= Fl

or d

e

Árn

ica

– R

uda,

G

-•R

=

Gor

dolo

bo –

Rom

ero,

G-R

= G

ordo

lobo

– R

uda,

•R

-R

=

Rom

eroR

uda

74

Figura 24 . Mezcla de extractos etanólicos entre las plantas, relación 50%-50% de A-G = Árnica-Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo- Romero, G-R= Gordolobo-Ruda y •R-R= Romero-Ruda sobre S. aureus (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

Figura 25. Mezcla de extractos etanólicos estériles de diferentes plantas, relación 50%-50%, A-G = Árnica- Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo- Romero, G-R= Gordolobo-Ruda, •R-R= Romero-Ruda sobre S. aureus (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

A-G

A-•R

A-R

G -•R

G-R

R-•R

A-G

A-•R

A-R

G -•R

G-R

R-•R

1 2

1 2

75

Figura 26. Mezclas de extractos etanólicos entre las plantas, relación 20-80%, de A-G = Árnica- Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo-Romero, G-R= Gordolobo-Ruda, •R-R= Romero-Ruda sobre S. aureus (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

Figura 27. Mezclas de extractos etanólicos entre las plantas, relación 20-80%, A-G = Árnica- Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo- Romero, G-R= Gordolobo-Ruda, •R-R= Romero-Ruda sobre S. aureus.

A-G A-•R

A-R

G -•R

G-R

R-•R

1 2

76

Figura 28. Mezclas de extractos etanólicos entre plantas, relación 80-20%, de A-G = Árnica- Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo-Romero, G-R= Gordolobo-Ruda, •R-R= Romero-Ruda sobre S. aureus (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

Figura 29. Mezclas de extractos etanólicos entre las plantas, relación 80%-20%, de A-G = Árnica-Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo- Romero, G-R= Gordolobo-Ruda, •R-R= Romero-Ruda sobre S. aureus (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

A-G

A-•R

A-R

G -•R

G-R

R-•R

A-G

A-•R

A-R G -•R

G-R

R-•R

1 2

1 2

77

Figura 30. Mezclas de extractos hexánicos entre plantas, relación 50%-50%, A-G = Árnica- Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo-Romero, G-R= Gordolobo-Ruda, •R-R= Romero-Ruda sobre S. aureus (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

Figura 31. Mezclas de extractos hexánicos entre plantas, relación 50%-50%, A-G = Árnica- Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo- Romero, G-R= Gordolobo-Ruda y •R-R= Romero-Ruda sobre P. fluorescens 61(30) (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

A-G A-•R

A-R

G -•R G-R

R-•R

A-G

A-•R A-R

G -•R G-R

R-•R

1 2

1 2

78

Figura 32. Mezcla de extractos hexánicos entre plantas, relación 50-50%, A-G = Árnica- Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo- Romero, G-R= Gordolobo-Ruda y •R-R= Romero-Ruda sobre E. coli (46) (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

Figura 33. Mezcla de extractos hexánicos entre las plantas, relación 20-80%, de A-G = Árnica- Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo- Romero, G-R= Gordolobo-Ruda y •R-R= Romero-Ruda sobre S. aureus (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

A-G

A-•R

A-R G -•R G-R

R-•R

A-G

A-•R A-R

R-•R

1 2

1 2

79

Figura 34. Mezclas de extractos hexánicos entre plantas, relación 80-20%, A-G = Árnica- Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo-Romero, G-R= Gordolobo-Ruda y •R-R= Romero-Ruda sobre S. aureus (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

Figura 35. Mezclas de extractos hexánicos entre plantas, relación 80-20% y 20-80% A-G = Árnica- Gordolobo, A-•R = Árnica-Romero, A-R= Árnica-Ruda, G-•R= Gordolobo- Romero, G-R= Gordolobo-Ruda y •R-R= Romero-Ruda sobre S. aureus (1 = Vista anterior y 2 = Vista posterior de la placa).

A-G

A-•R

A-R

G-•R

•R -R

•R -R G-R

G-R

20%-80%

80%

-20%

1 2

1 2

80

7.4 FORMA FARMACÉUTICA

Se derritieron en Baño María, 2.30 grs. de Ácido esteárico y 1 ml de Aceite de

Oliva (fase oleosa). Por otra parte, se calentaron en Baño María, 30 ml de agua y se

añadió 6.40 ml de Etilenglicol y 0.320 ml de Trietanolamina (fase acuosa), cuando

ambas fases alcanzaron 70°C se incorporaron y se agitó vigorosamente la mezcla.

Posteriormente, se dejó enfriar hasta alcanzar 45 ºC, a esta temperatura se agregó la

mezcla de los extracto etanólico Gordolobo-Romero en una relación 50%-50%. A esta

temperatura se impregnaron discos de papel filtro No. 4 estériles con 10 µl de la loción.

También se probó diluyendo 0.1 grs. extracto etanólico de Gordolobo y Romero en

900µl de Aceite Mineral (filtrado en acrodiscos de 45 µm de poro) mineral

respectivamente. Se filtró en acrodisco y se elaboró la mezcla 1:1 de Gordolobo-

Romero en Aceite Mineral, actuando este como vehículo.

La prueba de actividad antimicrobiana de la forma farmacéutica se realizó

utilizando las cepas P. fluorescens 60(31), E. coli y S. aureus (ver tabla 1) siendo

positivas sólo para S. aureus. Las Figuras 36 (ver Tabla 21) a 40 muestra los resultados

obtenidos:

Figura 36. Sensibilidad a la Forma farmacéutica

0

5

10

15

20

Loción Aceite mineralForma farmacéutica

Diá

met

ro d

e in

hibi

ción

(m

m) Disco

Pozo

81

Figura 37. Mezcla de extracto etanólico disuelto en etanol (50%-50%) de Gordolobo-Romero en una loción como vehículo, probada por pozo y disco, sobre S. aureus .

Figura 38. Mezcla de extracto etanólico disuelto en etanol (50%-50%) de Gordolobo-Romero en aceite mineral como vehículo, probada por pozo y disco, sobre S aureus (84).

LOCIÓN

DISC

O

POZO

CONTROL

POZO

DISC

O

82

Figura 39. Mezcla de extracto etanólico disuelto en etanol (50%-

50%) de Gordolobo-Romero, en aceite mineral como vehículo (izq.),

y aceite mineral como control, sobre S aureus (84), probado por pozo

.

Figura 40. Mezcla de extracto etanólico disuelto en etanol (50%-

50%) de Gordolobo-Romero, en aceite mineral como vehículo (izq.),

y aceite mineral como control, sobre S aureus (84).Probado por

disco.

7.1EXTRACCIÓN DE COMPUESTOS 7.1.1...

Documents

Transcript of 7.1EXTRACCIÓN DE COMPUESTOS 7.1.1...