AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE CAMPYLOBACTER Y HELICOBACTER

PYLORI

REALIZADO POR:ALVAREZ OVIEDO. Gabriela

MAMANI COTA, WilliamMARROQUIN ESCALANTE, Nadia

TARMEÑO TORRES, Angel

INTRODUCCIÓN

Hasta hace poco tiempo solo era posible conocer la etiología de las enfermedades diarreicas en un porcentaje relativamente bajo.

En los últimos años, se incluyó dentro del espectro de agentes microbianos a “nuevos enteropatógenos” como son los Rotavirus, Criptosporidium, Aeromonas y las especies termófilas de Campylobacter.

CAMPYLOBACTER

Los miembros de este género son típicamente bacterias Gram negativas, que no forman esporas, con forma de S o espiral

Con flagelos polares en uno o a ambos extremos, lo que le da una movilidad característica (sacacorchos)

Son microaerófilas (requiere oxígeno pero a más bajas concentraciones de las encontradas en la atmósfera)

Algunas pueden crecer también aeróbicamente o anaeróbicamente.

No fermentan ni oxidan los carbohidratos.Son causa principal de enfermedades

intestinales bacterianas en humanos

Algunas especies, particularmente C. jejuni, C. coli y C. lari, son termófilas, y crecen óptimamente a 42°C.

La fuente de infección por C.jejuni/coli en humanos es la manipulación y/o el consumo de carne contaminada, especialmente carne de aves de corral. Sin embargo, el contacto con animales domésticos y con ganado, el consumo de agua contaminada o de leche cruda

IDENTIFICACIÓN DEL AGENTE

Se recolectan muestras fecales o intestinales (ciego) de aves de corral, de mamíferos productores de carne y animales domésticos. En el matadero, se recogen muestras de piel o de carne.

Los campilobacters son organismos bastante difíciles de cultivar.

RECOGIDA DE MUESTRAS

Aves de corral: C. jejuni (65-95%). Ganado vacuno y ovejas: El ganado vacuno y

las ovejas son colonizados fundamentalmente por C. jejuni, C. coli, C. hyointestinalis y C. fetus.

Cerdos: C. coli. Perros y gatos: Los perros y los gatos se

encuentran colonizados frecuentemente por C. upsaliensis (perros) y C. helveticus (gatos).

Órganos internos (corazón, bazo, hígado o contenidos estomacales): Los órganos se extraen post-mortem en condiciones asépticas y se envían al laboratorio el mismo día.

TRANSPORTE Y TRATAMIENTO DE MUESTRAS

Son muy sensibles a la deshidratación, oxígeno atmosférico, luz solar y temperatura elevada.

no deben transportarse como frotis secos, ya que los campilobacters se secarían y morirían rápidamente.

Se deben evitar temperaturas altas (>20°C), temperaturas bajas (<0°C)

El Amies, un agar simple o un medio con base de carbón vegetal sirve como medio de transporte ya que su función no es el crecimiento de Campylobacter sino proteger a las muestras de la sequedad y de los efectos tóxicos del oxígeno.

AISLAMIENTO DE CAMPYLOBACTER

Medios selectivos para aislamiento ◦Se utilizan cefalosporinas (generalmente

cefoperazona), a veces en combinación con otros antibióticos (por ejemplo vancomicina, trimetroprim). Se utiliza cicloheximida (actidiona) y más a menudo anfotericina B para inhibir a las levaduras y a los hongos.

◦Los medios selectivos se pueden dividir en dos grupos fundamentales: medios que contienen sangre y medios que contienen carbón que sirven para eliminar los derivados tóxicos del oxígeno.

Ejemplos de caldos de enriquecimiento selectivos: ◦ Caldo Bolton ◦ Caldo Preston ◦ Caldo Exeter

Ejemplos de medios sólidos selectivos con sangre: ◦ Agar Preston ◦ Agar Skirrow ◦ Agar Butzler ◦ Campy-cefex

Ejemplos de medios sólidos con base de carbón ◦ mCCDA (agar modificado con deoxicolate, cefoperazona

y carbón), versión ligeramente modificada de la CCDA descrita originalmente).

◦ Agar Karmali o CSM (medio de carbón selectivo)◦ Agar CAT (cefoperazona, anfotericina y teicoplanina),

facilitador del crecimiento de C. upsaliensis.

Filtración pasiva

El método se basa en la separación de Campylobacter del resto de la flora microbiana presente en las heces, de esta manera se obtiene un cultivo selectivo, situación que reemplaza a la adición de antibióticos.

Identificación:

Se puede confirmar con prueba de catalasa y oxidasa (positivas).

Tinción GRAM de las colonias sirve de ayuda.

24 a 48 horas en A. sangre: espiraladas curvas, en alas de gaviota, en S, alargadas.

Cultivos viejos: formas cocoides.

IDENTIFICACIÓN DE CAMPYLOBACTER A NIVEL DE ESPECIE

Entre las especies de Campylobacter spp. que crecen a 42°C, las que se encuentran más frecuentemente en muestras de origen animal son C. jejuni y C. coli.

C. jejuni se puede diferenciar de otras especies de Campylobacter sobre la base de la hidrólisis de hipurato (es un compuesto orgánico aromático que puede ser hidrolizado enzimáticamente originando benzoato y glicina) ya que es la única especie que da positiva a hipurato.

Detección de actividad catalasa:

Colocar una colonia sospechosa sobre un porta de vidrio. Poner una gota de H202 al 3% sobre el material bacteriano. Examinar inmediatamente la producción de gas, lo que indica actividad catalasa. La prueba es positiva si aparecen burbujas de gas en 30 segundos.

OTRAS DETECCIONES

DETECCIÓN MOLECULAR DE CAMPYLOBACTER◦Se han presentado previamente en la literatura

métodos basados en PCR para la detección de Campylobacter en muestras de heces animales y en muestras de carne enriquecida.

PRUEBAS BASADAS EN LA CAPTURA DEL ANTÍGENO◦Existen varios enzimoinmunoensayos

disponibles comercialmente para la detección de Campylobacter en muestras de deposiciones animales.

HELICOBACTER PYLORI

H. pylori es un microorganismo Gram negativo, curvo, mide aproximadamente 3.5 x 0.5 mm, Posee múltiples flagelos en uno de sus polos y es activamente móvil, es microaerofílico y coloniza la capa de moco que cubre el epitelio gástrico.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE HELYCBACTER PILORY

Modo de infección de H. pylori:◦H. pylori penetra la capa mucosa del estómago

y se adhiere a la superficie de la capa mucosa epitelial gástrica.

◦Produce amoníaco a partir de la urea, para neutralizar el ácido gástrico.

◦Migración y proliferación de H. pylori al foco de infección.

◦Se desarrolla la ulceración gástrica con destrucción de la mucosa, inflamación y muerte de las células mucosas.

Ureasa rápida:

Se produce hidrólisis de la urea provocando liberación de CO2 y NH4, por lo tanto aumento del pH, lo que manifiesta por un cambio en el color de un indicador ácido-base.

pruebas comerciales : CLOtest, PyloriTek y Hpfast, tienen alta sensibilidad y especificidad y un tiempo de lectura corto, que puede ser desde un minuto a 24 horas .

CULTIVO

La muestra para el estudio bacteriológico es una biopsia que debe ser macerada.

Agar sangre sin antimicrobianos y las placas se incuban en microaerobiosis por 5 días a 35°C.

A los cinco días de incubación en una muestra positiva se obtienen colonias de aproximadamente 1mm de diámetro, claras, transparentes, brillantes y convexas, que a la tinción de Gram muestran bacilos curvos Gram negativos, que son ureasa, catalasa y oxidasa positivos.

Detección microscópica de la bacteria

Puede realizarse en biopsia o en cortes histológicos, en ambos casos con tinciones como Gram, HE, impregnaciones argénticas y recientemente se ha utilizado con mucho éxito la coloración con azul de toluidina.

Métodos no invasivos:

Metodos De Diagnostico Serologico

GRACIAS