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8/6/2019 alcides laboratorio

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PRACTICA DE LABORATORIO N 06

INTRODUCCIN

La familia enterobacterioceae(enterobacterias) est constituido por un gran grupo herogneo debastoncillos gran negativos cuyo hbitat natural es el tubo digestivo del hombre y los animales lafamilia incluye muchos gneros (por ejemplo echerichacoli, salmonella son patgenas para losanucturaantimales.lasenterobacterias son anaerobias facultativas,fermentan gran variedad decarbohidratos,poseen una estigena compleja producen Se ubican en el intestino de los animaleshay diferentes especies. Sonsaprofitas,por ejemplo Echerichacoli

Debemos seguir los siguientes pasos para obtener un buen diagnstico y dar una solucin. de laenfermedad.

COMO ADQUIRIR UNA MUESTRA.

1. tomar la muestra.

En condiciones aspticas. En envases estriles. Empleando barreras de proteccin.

2. llevar al laboratorio.

Realizando las siguientes tcnicas en el laboratorio una ellas es la tensin Gram y cultivobacteriano.

2.1. TensinGram.

Realizando la extensin, fijacin, coloracin, secado y observamoUtilizamoslossiguientesreactivos.

Cristal violeta. Lugol. Alcohol acetona.

2.2. Cultivo bacteriano.

El agar Mc Conkeyes un medio slido, diferencial y selectivo. Se usa para la discriminacin debacterias con capacidad de fermentar la lactosa (Lac+ Y LAC -).Composicin g/l:

Peptona 20.0: fuente de nitrgeno y carbono para las Lac -. Lactosa 10.0: fuente de carbono para las Lac +. Sales biliares 2.5: le confiere carcter selectivo, inhibiendo el crecimiento de Gram +. Cloruro sdico 5.0: para mantener la tonicidad del medio (evitar osmosis). Rojo neutro 0.05: indicador que va hacer que el medio v ire de coloracin. Si las

bacterias son Lac +, producirn cidos derivados de la fermentacin que darn al medio


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un aspecto rosceo; si por el contrario son Lac -, el medio se basificar por el uso de lapeptona y se tornar amarillo.

Cristal violeta 0.001: interfiere junto con las sales biliares en la selectividad del medio. Agar-agar 15.0: da consistencia al medio.

LACTOSA POSTIVA LACTOSA NEGATIVA

Se siembra cada una de stas lactas en lactosa en los tubos de ensayo

TSI: color rosado LIA: color violeta CITRATO: color verde

INTERPRETACIN DE LA PRACTICA N 6


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Aerobiopresencia de lactosa

Semiaerobico. Presencia de sacarosa

Anaerbico. Presencia de glucosa

RESULTADO DE LACTOSA POSITIVA

TSI-

Color inicial Rosado

Fondo rojoPico de flauta amarillolactosa (+) y sacarosa(-)

Presento ennegrecimiento en del medio (+) H2Szucares y la formacin de gas y de H2S. lafermentacin a

LIA-

COLOR INICIAL VIOLETA

EL resultado es de color superficie roja / fondo AMARILLO adem

s

se observa produccin de gas Y de H2S.


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CITRATO:

color azul tiene utilizado como fuente de carbono

si indica color verde alcalinidad(-)

si indica azul en acides (+)

TSI LIA CITRATO A/A +- + +

TSI LIA CITRATOK/K -- + -

AGAR MAC KONKEY

Se

divide

LACTOSA + LACTOSA -


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TSI Rojo Amarillo/Rojo Rojo/amarillo+-

A/A

- -

K/ K

- -

A/K

+ +

K/A

+ significa produccin de gas

- Significa produccin de acido

IDENTIFICACIN EL MICROORGANISMO

Bacteria Gram Positiva Bacteria Gram NegativaLactosa Positiva Lactosa NegativaTSI A/A +- TSI K/K - -LIA + LIA +CITRATO - CITRATO +

En el primer cuadrado se trata de echerichiacoli

En el segundo cuadrado se trata de salmonellaPREGUNTAS1. Realice un dibujo de una enterobacteria tpica mostrando los antgenos K(capsular),O(som

tico),F(fimbrial).H(flagela)e empleadas en la serotificacion

2. Cul es la naturaleza de los antgenos capsulares , cual es su funcin que cumplen durantela infeccin. La entero toxina es un componente de lipopolisacaridos de la pared celular de lasgramnegativos, cuando se libera, que com ponentes parecen y qu efectos tiene en el procesoinfeccioso?

Los antgenos k son externos relaciones con antgeno o sobre algunas de las entero bacteriasalgunas son polisacridos incluso los antgenosk de E coli otras son protenas. Los antgenos k


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pueden inferir en laaglutacin mediante o, y quiz se relaciones con la virguela Las klebsielasforman capsulas que consisten en polisacridos (antgeno k) que cubren a los antgenossomticos (o, antgenos H).

3. Las fimbrillas estn presentes en la mayora de las cepas E.colienterotoxigenicas, permitiendo la fijacin a la mucosa del intestino delgado y tracto urinario; cual es el efectopatolgico de la fuerte unin a dichas mucosas?

4. Que son las entero toxinas, vero toxinas y factor citotoxico neutralizante ,en que sediferencia la actividad de cada uno de ellas-

La informacin disponible indica que las enterotoxinas en los alimentos no son fciles de inactivar

por el calor y que, a mayor cantidad presente, se requerir de mayor temperatura para disminuir la

actividad de stas. Por ello, los tratamientos trmicos usuales aplicados a los alimentos, como la

pasterizacin y la coccin, no garantizan que se destruyan. En consecuencia, se ha intentado la

inactivacin de las enterotoxinas por otros medios y este artculo resea los puntos ms salientes

de las investigaciones actuales.Escherichia colienterohemorrgica o

verotoxignica (ECEH)

Artculo principal:Escherichia coli enterohemorrgica

Vase tambin: Toxina Shiga

La convencin internacional de nomenclatura de patgenos ha recomendado el uso de STEC

(Shiga Toxin Escherichia coli) para este grupo, debido a que estas bacterias producen una

toxina citotxica para clulas Vero de cultivo de similaridad estructural a la toxina producida

porShigella dysenteriae. Las STEC producen verotoxinas que actan en el colon. Sus

sntomas son: primero colitis hemorrgica, luego sndrome urmico hemoltico (lo anterior ms

infeccin del rin, posible entrada en coma y muerte), y por ltimo,prpura trombocitopnica

trombtica (lo de antes ms infeccin del sistema nervioso central). Esta cepa no fermenta

el sorbitol y posee unfago, donde se encuentran codificadas las verotoxinas, tambin llamadas

"Toxinas Shiga", no posee una fimbria formadora de mechones, en vez de esto posee una

fimbria polar larga que usa para adherencia.

5. La enterocolitis causada por salmonella puede afectar a la mayora de animales,

independiente de su edad, mencione cuales son los signos y sntomas que caracterizan a estaenfermedad?Los cerdos presentan una diarrea lquida amarillenta, inicialmente, que pasa a pastosa verdosa,raramente

puede presentar sangre. Este cuadro puede durar entre 3 y 7 das y el animal recuperado puedevolver a manifestarlos signos luego de 10 a 20 das. En cualquier caso, la prdida de peso inmediata y retardada,es una de las


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consecuencias mas importantes de prdidas econmicas y los animales permanecen comoportadores del agentehasta su envo a faena.Los hallazgos de necropsia mas importantes se encuentran en ciego y colon (tiflocolitis), aunqueel intestinodelgado puede estar afectado, se observan restos adherentes gris amarillentos sobre una

mucosa roja y lceras en6. La salmonelosis septicmica puede aparecer en todos los grupos de edad , siendo msfrecuente en terneros ,potro y cerdos de menos de cuatro meces . Cul es la caracterstica msresaltante que se observa en las orejas del cerdo infectados por salmonella cholerasicasy conqu enfermedadviral suele asociarse esta infeccin.

7. Cul es la especies de salmonella que frecuentemente se asocian a la salmonelosis enpollos?

CONCLUCIONES

Echerichia coli fermenta los tres carbohidratos lactosa, sacarosa, glucosa en el TSI

Produce gas y acido

En el citrato cuando la bacteria lo utiliza al citrato cambia de color de verde a azul, ycuando no lo utiliza mantiene su naturaleza

BIOGRAFA

Difco Manual, 9th Ed, (1953) pp. 166-168 (Table on p. 161.) Microbiologa / Thomas D. Brock, Michael T. Madigan Microbiologa / Michael J. Pelczar, Jr., RogerD. Reid

PRCTICA DE LABORATORIO N 08

TTULO:HONGOS: RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIN DE SU MORFOLOGA

INTRODUCCIN

Los hongos son organismos eucarioticos y de mayor tamao que las bacterias, se distinguen deotros eucariontes.

Son de nutricin hetertrofa, es decir depende de nutrientes orgnicos que son solubilizados por

sistemas enzimticos especficos y son absorbidos a travs de su pared celular y membranaplasmtica. Estos organismos pueden ser unicelulares (levaduras) o multicelulares (mohos).

Las levaduras son clulas de forma esfrica u oval, ampliamente distribuidas en la naturaleza.

El cuerpo o estructura vegetativa caractersticos de los hongos filamentosos (mohos) sedenomina talo, generalmente constituidos de hifas ramificadas que forman el micelio.

FUNDAMENTO TERICO:


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Hongos

Microorganismos eucariontes.

Aerobios obligados o facultativos.

Poseen ncleo, membrana nuclear, retculo endoplsmico, mitocondrias y aparatosecretor.

Secretan enzimas que descomponen gran variedad de sustratos orgnicos.

Conserva las caractersticas de las clulas eucariotas.

Pared celular rgida formada por polisacridos, polipptidos y quitina

Principal esterol de la membrana plasmtica: ergosterol

Son microorganismos eucariotas.

Pueden existir en dos formas morfolgicas : Hongos filamentosos (mohos) (crecimiento

en hifas) y Unicelulares (levaduras)

Ambas, alternan las dos morfologas anteriores de acuerdo a las condiciones

fisiolgicas.

Las hifas se encuentran formando

estructuras ramificadas conocidas como micelio (Griego mykes, hongo).

Las masas de micelio tienen la apariencia de fibras de algodn, puede ser Septado o

cenoctico


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Tipos de hifas encontradas en hongos

a. Cenocitica (aseptada) b. Septada con clulas uninucleadas

c. Septada con clulas multinucleadas

Las hifas que penetran al medio y absorben nutrientes son las hifas vegetativas.

Las hifas que se extienden por encima de la superficie del micelio y poseen las estructuras

reproductivas del moho son las Hifas areas.

Identificacin

El gnero y muchas veces la especie puede determinarse mediante el examen

microscpico de las morfologa de sus esporas reproductivas asexuales o conidios.

Levaduras: Clulas nicas en forma esfrica o elipsoide. Se reproducen por gemacin.

Algunas yemas se alargan y se desprenden, llegando a formar pseudohifas.

Reproduccin

a. Reproduccin Asexual

Representa el estado anamorfo del hongo

Se realiza mediante esporas asexuales o imperfectas:

a. Endospora : est en el interior del esporangio, el esporangio est en el extremo del

esporangiforo y las esporas se liberan al romperse el esporangios. Cada esporangio

puede contener 1 espora o muchas de ellas

b. Exosporas: Producidas en estructuras externas, frecuentes en Ascomycetes y es el nico

medio de reproduccin de los Deuteromycetes, constituye la base de identificacin de los


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hongos, pproducidos por gemacin o segmentacin, la estructura que las origina se

denomina conidiforo

Gua para la observacin microscpica:

MAC MACROCONIDIA


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I. OBJETIVOS

a. Reconocer las caractersticas morfolgicas de los hongos, considerando aspectos

microscpicos y macroscpicos.b. Conocer la utilidad y emplear la tcnica de microcultivos.c. Conocer la utilidad y emplear la tcnica de coloracin de hongos.

II. MATERIALES Y REACTIVOS

Muestra:. Muestra biolgica: cultivos de hongosambientales

Materiales:y Cmara hmeda para microcultivoestrilesy Asa micolgicay Mechero de alcoholy Varilla de coloraciny Pizetay Bistury pinzas

Reactivos/ Medios de cultivo:y Alcoholy Colorante Azul de metileno ofucsina

y Azul de algodn, Lactofenoly Hidrxido de potasio al 10% y 40%y Agar Sabouraud

Equipos:y Microscopio binocular ptico

III. METODOLOGA

PARA REALIZAR LAS SIGUIENTES OPERACIONES NO OLVIDE EL USO DE GUANTES YMASCARILLA.

MIC MICROCONIDIA

CLA CLAMIDOSPORA

ART ARTROSPORA

BLA BLASTOSPORA

LEV LEVADURA


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A.Cultivo de hongos ambientales

1. Para cultivar hongos ambientales se deber exponer una placa Petri con agarSabouraud al medio ambiente por 5 minutos.

2. Incubar a 23C o temperatura ambiente durante 7 das.

B. Microcultivos

1. Acondicionar la cmara hmeda estril para microcultivos, empleando agar Sabouraud.2. sembrar un inculo de cada una de las muestras problema, en las cmaras preparadas,

empleando el asa micolgica.3. Incubar a 25C por 3 a 5 das.

C. estudio de la morfologa celular de los hongos.

Observacin directa de microcultivos.

1. Observar directamente cada uno de los microcultivos directamente en el microscopio,empleando objetivos de 4x, 10x y 40x.

2. observar e identificar la morfologa microscpica.3. observar y clasificar el micelio de las colonias de hongos.

Coloracin1. Preparar montajes en fresco con azul de algodn, lactofenol o hidrxido de sodio a partir

de las muestras y microcultivos.2. Observar en el microscopio con objetivos de 4x, 10x y 40x.3. dibujar sus observaciones indicando la morfologa observada en cada caso, y el objetivo

con el que se observa.D. Estudio macroscpico de las colonias de los hongos.

1. observar y describir las caractersticas de las colonias de hongos cultivados.2. Esquematizar

IV. RESULTADOS:

Se ha tomado las muestras de los animales sospechosos de estos hongos que se han estudiosen clase.


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a)Preparacin de microcultivos.Cmara hmeda

Consiste en tener una placa petri en la cual se puso un ngulo de vidrio, una lamina portaobjetos con laminilla cubre objetos , a un costado algodn.

Agar sabouraud.Este agar no contiene inhibidores es selectivos para mohos tiene u PH 5-6

La actividad consisti en preparar medios de cultivos .utilizando agar sabouraud en la cual aestar en estado solido se procedi a disover para servir en las placas .Una ves servidas se dejo solidificar y luego realizar los cortes al mismo,utilizando una escapula

para colocar en las laminas que se utilizaron como cmaras humedas .Del mismo modo se sirvi en tubos de ensayo-

SEGUNDA PARTE


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Muestra: aspergillusClase: deuteromicetes

bjetivo: xrgano reproductor:

Pluricelular tabicado

Muestra: penecillumClase: deuteromicetebjetivo: x

rgano reproductor:

2.-rganos de fijacin rizoides

Muestra: rhizopusClase: cigomycetes

bjetivo: x

Estructuras fngicas de reproduccin asexual:


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1.Por gemacin: yemas 2 por fragmentacin de talo:astrosporaClamidosporas

2.Por esporulacin:a) Comediasunicelulares: microconidia b) Macroconidias pluricelulares

Esporangiosporas


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Morfologa de Hongos inferiores: observar e identificar cada una de las partes observadas en:

1. Aspergillus

Clase: deutomicetos

2. RhizopusClase: cygomicetos

3. Penicillium

Clase: deutomicetos


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CUESTIONARIO

1. Cmo actan los colorantes y reactivos empleados sobre la clula fngica?

2. Qu criterios tomara en cuenta para la identificacin de las levaduras?

3. Cules son los principales gneros que causan micosis superficiales en animalesdomsticos. Y qu manifestaciones presentan los animales que las padecen?

4. Cules son las principales micosis sistmicas en ganado vacuno, equino y porcino,describa brevemente y mencione el agente etiolgico de las mismas.

5. Qu son las micotoxinas, qu gneros las producen?

Las micotoxinas son compuestos ubicuos que difieren mucho en sus propiedades qumicas,biolgicas y toxicolgicas.La formacin de micotoxinas refleja que el moho ha alcanzado cierto grado de diferenciacinbioqumica, fisiolgica y a veces morfolgica. Se conocen unas 300 toxinas fngicas.Las micotoxinas son especficas. Cuanto ms compleja es la ruta biosinttica de estosmetabolitos secundarios ms restringido es el nmero de especies de hongos productores demicotoxinas.Las especies ms importantes que la producen son:

y Aspergillusy Aspergillus noniusy Penicilliumy Penicilliumroqueforti

6. Mediante un grfico explique el ciclo de reproduccin sexual y asexual de losBasidiomicetes y Deuteromicetes.


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Basidiomicetes

V. CONCLUSIONES

VI. BIBLIOGRAFA.


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