TECNOLOGIA DE ADN RECOMBINANTE

Teoría cromosómica de la herencia: Morgan y col. (1933) ADN es la molécula que transporta la información genética (1944) Descubrimiento de la estructura del ADN y el código genético (1953)Desarrollo y aplicación de la tecnología del ADN recombinante (Arber ycol., 1978):- Aislar secuencias de ADN: secuencia, evolución, función...- Clonación- Genotecas- Terapias génicas- Transferencia de genes entre especies- Biotecnología

HITOS HISTÓRICOS

PROCESO GENERAL EN LA CONSTRUCCIÓN DE ADN RECOMBINANTE

Todo se puede resumir en:“Cortar-pegar-copiar”

PROCESO GENERAL EN LA CONSTRUCCIÓN DE ADN RECOMBINANTE

PROCESO GENERAL EN LA CONSTRUCCIÓN DE ADN RECOMBINANTE

1.- Digestión del ADN- Enziimas de restricción:: Arber,, Smith y Nathans: Nobelen 1978- Utilizan las bacterias para cortar ADN foráneo- Cortan en unas secuencias del ADN: dianas de restricción- Tiipo III:: reconocen la diana y cortan en ese punto

PROCESO GENERAL EN LA CONSTRUCCIÓN DE ADN RECOMBINANTE

PROCESO GENERAL EN LA CONSTRUCCIÓN DE ADN RECOMBINANTE

PROCESO GENERAL EN LA CONSTRUCCIÓN DE ADN RECOMBINANTE

PROCESO GENERAL EN LA CONSTRUCCIÓN DE ADN RECOMBINANTE

VECTORES DE CLONACIÓN

VECTORES DE CLONACIÓN

Fago H: es un virus bacteriofago, cuya región central del genoma es prescindible y se puede sustituir por un inserto de ADN que queramos clonar (10-15 kb). Se forma un multímero que luego se utiliza para rellenar cápsidas del fago mediante empaquetamiento in vitro.

VECTORES DE CLONACIÓN

Cósmidos: son vectores híbridos entre el fago H y un plásmido. Se pueden replicar en una bacteria o empaquetarse como un fago. Permite clonar insertos de hasta 45 kb. Se deleciona casi todo el ADN del H y se deja sólo las secuencias que actúan como señales de empaquetamiento (cos). Casi todo se rellena con el inserto que queremos clonar.

BIBLIOTECAS DE GENES: GENOTECAS

BIBLIOTECAS DE GENES: GENOTECAS

BIBLIOTECAS DE GENES: GENOTECAS

BIBLIOTECAS DE GENES: GENOTECAS

IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIAS CLONADAS

IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIAS CLONADAS

IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIAS CLONADAS

TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE LAS SECUENCIAS CLONADAS

TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE LAS SECUENCIAS CLONADAS

TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE LAS SECUENCIAS CLONADAS

TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE LAS SECUENCIAS CLONADAS

TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE LAS SECUENCIAS CLONADAS

TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE LAS SECUENCIAS CLONADAS

TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE LAS SECUENCIAS CLONADAS

TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE LAS SECUENCIAS CLONADAS

Perlitas microscópicas de oro o tungsteno se recubren del ADN con el gen deseado, y se disparan a gran velocidad con una pistola especial. Las células en la línea directa del proyectil pueden morir, pero a su alrededor muchas células captan el ADN sin daños.

ADN RECOMBINANTE MEDIADO POR ABROBACTERIUM TUMEFASCIENS

ELECTROPORACION

La electroporación es una técnica que se basa en la aplicación de un elevado voltaje a las células durante un periodo de tiempo muy corto. Durante ese tiempo las células despolarizan sus membranas y se forman pequeños orificios por los que penetran las moléculas (proteínas, DNA,…) que se encuentran alrededor. Pasada la despolarización muchas células sufren daños irreparables y mueren (en muchos casos más del 90%) pero algunas (5 al 10% habitualmente) se recuperan y han incorporado las moléculas deseadas.

MICRO INYECCION

La micro inyección es una tecnología que permite la introducción mecánica de soluciones en el interior de la célula mediante una micro pipeta que se controla con la ayuda de un micro manipulador bajo un microscopio. Es una técnica muy sensible, que requiere una gran especialización del personal que la realiza y un equipo delicado, sofisticado y costoso.Los instrumentos modernos de micro inyección permiten realizar algunas decenas de inyecciones por hora de trabajo. Es por ello un sistema tedioso que permite manipular pocas docenas o escasos cientos de células con un gran trabajo.