Bioquímica y Biología Molecular -...

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Facultad de Medicina

“Don Santiago Ramón y Cajal”

Manual de Laboratorio y Casos Clínicos

Bioquímica y

Biología Molecular

Coordinación de Bioquímica

Santa Fe, D. F. Agosto 2013.

Dr. Enrique Miranda Peralta.

Dra. Georgina Medina Vázquez.

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UNIVERSIDAD WESTHILL

M. en Educación e Ing. José María Rioboó Martin Rector

Dr. Julio César Gómez Fernández

Vicerrector

FACULTAD DE MEDICINA "Dn. Santiago Ramón Y Cajal"

Dr. Humberto Galicia Negrete

Director

Dra. Marcela López Cabrera Directora Técnica

Dr. Enrique Miranda Peralta

Coordinador Académico de Ciclos Básicos

Dr. Cesar Reyes Salcedo Sub-Coordinador Académico de Ciclos Básicos Santa Fé

Dr. Gerardo Casanova Román

Coordinador Académico de Ciclos Clínicos

Dr. Pedro Martín Hernández Quiróz Coordinador de Evaluación

Lic. Laura Rosales Romero

Directora del Departamento de Finanzas

COORDINACIÓN DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR

Dra. Georgina Medina Vázquez

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ÍNDICE MISIÓN 4

VISIÓN 5

OBLIGACIONES DE LOS PROFESORES Y DE LOS ALUMNOS 6

PRÁCTICAS DE LABORATORIO 7

VALORES DE REFERENCIA EN SANGRE PARA METABOLITOS DE USO CLÍNICO 37

CASOS CLÍNICOS 38

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MISIÓN “LA UNIVERSIDAD WESTHILL BUSCA PROVEER A SUS ALUMNOS DE HABILIDADES Y DESTREZAS PROPIAS DE SUS PROFESIONES Y EN COMPLEMENTO CON UNA FORMACIÓN INTEGRAL EN VALORES UNIVERSALES, PODRÁN SER AGENTES DE CAMBIO CON RESPONSABILIDAD SOCIAL QUE SEAN SENSIBLES A LOS RECURSOS Y DESARROLLO SOSTENIBLE A NIVEL GLOBAL”

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VISIÓN

“SER UNA INSTITUCIÓN QUE APOYE EL PROCESO EDUCATIVO RESPETANDO LAS CONDICIONES DE GÉNERO Y CREENCIAS DE SUS INTEGRANTES VIGILANDO QUE SE CUMPLAN LOS DERECHOS Y OBLIGACIONES DE TODOS. SER RECONOCIDA POR LA CALIDAD DE SU DOCENCIA Y DE SUS PROGRAMAS ACADÉMICOS; CON PROCESOS CONTÍNUOS DE EVALUACIÓN INSTITUCIONAL Y ACREDITACIÓN ACADÈMICA, NACIONAL E INTERNACIONAL”

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OBLIGACIONES DE LOS PROFESORES Y LOS ALUMNOS

Profesores

El profesor de Bioquímica y Biología Molecular:

a. Impartirá sus clases teóricas y/o prácticas con puntualidad, de acuerdo al horario que se le haya asignado, en el calendario escolar correspondiente.

b. Impartirá su enseñanza y calificará los conocimientos de sus estudiantes sin hacer ninguna distinción entre ellos. Para llevar a cabo esta evaluación tomará en cuenta aspectos como la asistencia, la participación en clase y el avance en conocimientos de teoría y laboratorio, que el alumno demuestre.

c. Cumplirá con el programa de la asignatura de Bioquímica y Biología Molecular aprobado por el Consejo Técnico de la Escuela, el cual será dado a conocer a sus alumnos desde el primer día de clases, al igual que la bibliografía a utilizar durante el curso.

d. Realizara los exámenes departamentales de acuerdo a las fechas indicadas en la planeación global del curso, y al finalizar estos exámenes realizará la retroalimentación correspondiente a cada examen a sus estudiantes.

e. Se abstendrá de impartir clases particulares remuneradas o no a sus propios alumnos.

Alumnos

Los alumnos de la asignatura de Bioquímica y Biología Molecular:

a. Deberán cumplir con el 80% de asistencias al curso teórico y al laboratorio y aprobar este último para tener derecho a la calificación final.

b. Deberán presentar los exámenes, tareas y trabajos que el profesor considere indispensables para tener derecho a calificación final (Juicio del Profesor).

c. Deberán utilizar el Manual de laboratorio para leer previamente la práctica y durante el desarrollo de ésta en el laboratorio.

d. No podrán realizar la práctica del laboratorio si no traen el manual correspondiente y una bata blanca.

e. Se abstendrán de introducir alimentos a las aulas y/o laboratorios de enseñanza.

f. Deberán portar el uniforme (blanco) dentro del aula y en el laboratorio.

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PRÁCTICAS DE LABORATORIO

Práctica 1.

“Preparación de Solución Fisiológica y su Efecto Sobre los Eritrocitos”

Introducción.

(Los alumnos buscarán información sobre:

1.- Preparación de soluciones fisiológicas.

2.- Efecto de soluciones Hipo-, Iso- e Hipertónicas sobre las células.

Con esta información escribirán la introducción del reporte de la práctica)

Planteamiento del problema y justificación.

La pregunta de investigación es:

¿Cuál es el efecto de soluciones Hipotónicas, Isotónicas e Hipertónicas sobre las células?

(Los alumnos deberán poner esta pregunta en esta sección de su reporte y agregar una explicación de el porque es importante para el médico saber esto)

Hipótesis.

(Deberán poner que es lo que esperan que suceda en relación a la pregunta de investigación)

Competencias.

• Los alumnos reconocerán la importancia de las soluciones fisiológicas.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de preparar una solución fisiológica.

• Los alumnos fomentarán la destreza de toma de muestra sanguínea.

Estrategia Experimental.

Material.

Por Equipo:

• 3 vasos de precipitado de 10 ml.

• 1 pipeta de 1 ml.



• Espátula.

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• Pizeta con agua destilada.

• 1 jeringa estéril de 5 ml.

• 1 ligadura de 40 cm.

• Torundas de algodón empapadas de alcohol al 70%.

• 3 portaobjetos

• 3 cubreobjetos

Reactivos.

• 0.9g de Cloruro de Sodio (NaCl).

• 5 ml de sangre

Equipo.

• Balanza granataria.

• Un microscopio.

Método.

1. Hacer los cálculos y Preparar 20 ml de una solución de NaCl a 4.5% (etiquetar como solución 1).

2. Hacer los cálculos y a partir de la solución anterior, preparar 20 ml a 0.9% (solución 2) y 20 ml a 0.045% (solución 3).

3. Colocar en tres tubos de ensayo (etiquetados con 1, 2 y 3) 1 ml de las diferentes soluciones de cloruro de sodio preparadas en los puntos 1 y 2.

4. Obtener 5 ml. de sangre de un voluntario del equipo. Dejar reposar por 5 minutos con la punta de la jeringa dirigida hacia abajo.

5. Colocar con la ayuda de unapipeta pasteur(dejando caer lentamente por las paredes del tubo) 2 gotas de sangre. Mezclar con cuidado y dejar reposar 5 minutos a temperatura ambiente. Valorar el grado de hemólisis que sufren los eritrocitos cuando se ponen en contacto con las diferentes soluciones.

6. De las 3 soluciones preparadas tomar una gota de cada una y por separado colocarlas en un porta-objetos, colocar un cubre-objetos y observarlas al microscopio, para valorar el efecto de los eritrocitos.

Resultados.

• Expresar en forma ordenada, cada uno de los cálculos realizados para la preparación de las soluciones.

• Deducir el movimiento o no del solvente cuando se ponen en contacto eritrocitos con soluciones hipo, hiper e isoosmóticas.

Responder las siguientes preguntas:

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• Buscar las composiciones de las siguientes soluciones: Hartman, Ringer y Darrow.

Conclusión.

(Escribir una conclusión en su reporte)

Referencias.

(Escribir la bibliografía consultada)

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Práctica 2. "Regulación del equilibrio ácido base después del ejercicio muscular intenso"

Introducción.


1. El pH fisiológico en sangre y orina.

2. La generación de CO2 y su conversión en H2CO3 y la generación de ácido láctico durante el ejercicio intenso.

3. Uso y efecto sistémico del Bicarbonato de Sodio como antiácido.

4. El papel del riñón y del pulmón en la regulación del pH.




¿Cuál es el efecto del ejercicio muscular intenso sobre el pH y sobre su regulación por el riñón?

(Los alumnos deberán poner esta pregunta en esta sección de su reporte y agregar una explicación del porque es importante para el médico saber esto)

Hipótesis.


Competencias.

• Los alumnos reconocerán la importancia del riñón y del pulmón en la regulación del pH.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de medición del pH.


Material.

Por Equipo:

• 10 vasos de precipitado de 100 ml.

• Pizeta con agua destilada.

Reactivos.

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• Orina

Equipo.

• Potenciómetro.

Método.

1. Dos alumnos por equipo desayunarán o comerán normalmente (evitar ingestión de jugos ácidos)

2. Tomar 250 ml de agua una hora antes de la clase práctica. Vaciar la vejiga y descartar esa orina.

3. Tomar 250 ml de agua justo antes de la clase práctica.

4. Orinar en un vaso de precipitado de 100 ml.

5. Determinar inmediatamente el pH de la orina.

6. Uno de los alumnos Ingerirá 250 ml de agua y realizará ejercicio muscular intenso, como subir y bajar varias veces las escaleras de tres o cuatro pisos u otro ejercicio sugerido por el profesor. El otro alumno tomará 250 ml de agua con 7.5 g de bicarbonato de sodio disuelto y NO hará ejercicio, se mantendrá en reposo.

7. Para ambos sujetos obtener muestras de orina cada 15 minutos, siguiendo los pasos 4, hasta completar por lo menos cinco muestras.

8. A cada muestra se le determinará el pH inmediatamente después de haber sido obtenida ya que con el tiempo el pH tiende a aumentar debido a la pérdida de dióxido de carbono y a que el crecimiento bacteriano produce amoniaco a partir de la urea.

Resultados.

• Una vez obtenido el valor del pH para cada una de las 5 muestras de orina, tabular los resultados de pH contra tiempo.

X

Tiempo

Y

pH

12

12

• Trazar una gráfica de pH (eje de las ordenadas –Y-) contra tiempo (eje de las abscisas –X-).

• Interpretar los resultados y discutirlos en grupo.


• ¿Por qué es importante que se mantenga constante, dentro de ciertos límites, el pH en el organismo?

• ¿Cuáles son las fuentes de iones H+ en el organismo?

• ¿Cuáles son los sistemas reguladores que facilitan la eliminación del H+ producido en el organismo con el fin de mantener constante el pH sanguíneo?

• ¿Cuáles son las reacciones de formación del ácido carbónico (H2CO3) a partir de CO2 y H2O, y de su disociación para formar el ion bicarbonato? Escríbalas.

Conclusión.


Referencias.


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Práctica 3.

“Cromatografía de un aminoácido”

Introducción.


1. Separación e identificación de proteínas y aminoácidos por cromatografía.




¿Cuáles son los aminoácidos que contiene la mezcla?


Hipótesis.


Competencias.

• Los alumnos reconocerán la importancia de conocer e identificar las sustancias que integran a nuestro cuerpo.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de identificar una molécula.


Material.

Por Equipo:

• 1 cromatofolio de aprox. 7 x 10 cm.

• 6 capilares.

• Regla, lápiz y cinta adhesiva.

• Solución de butanol-ácido acético-agua.

• Ac. Aspártico, Ácido glutámico, Glicina, Arginina, Serina y Leucina 0.01 M.

• Mezcla de aminoácidos.

• 1 cámara cromatográfica (recipiente de vidrio con tapón).

Reactivos.

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• Solución de ninhidrina en atomizador.

Equipo.

• Parrilla

Método.

1. Trazar con lápiz una línea recta a 2 cm. del borde inferior del cromatofolio, que estará en contacto con el solvente.

2. Con lápiz y sobre la línea recta hacer marcas con una distancia de separación de 1 cm. (dejar los márgenes laterales de 0.5 cm. de ancho sin aplicar muestras en esas regiones).

3. Anotar en qué orden se van a colocar cada aminoácido y la mezcla de éstos para su identificación posterior.

4. Colocar con un capilar, una gota de cada aminoácido y de la mezcla, procurando que el diámetro de la gota sea de 0.5 cm. aproximadamente.

5. Dejar secar perfectamente las muestras.

6. Introducir la placa (con las muestras en la parte inferior) en la cámara de cromatografía, previamente preparada. La mezcla butanol:acético:agua sólo debe mojar el extremo de la placa por debajo de la marca de origen.

7. Observar con cuidado el avance del solvente y aproximadamente a unos 2 cm. antes de que llegue al borde superior retirar el cromatograma. Secarlo sobre la parrilla a calor muy suave.

8. Ponerse guantes y rociar muy finamente la ninhidrina, usando el atomizador, sin permitir que se escurra.Calentar el cromatograma nuevamente hasta que aparezcan manchas de color violeta que indican la posición de los aminoácidos que han “corrido” sobre la placa.

9. Con ayuda de una regla identificar los aminoácidos de la mezcla.

Resultados.

• Identificar los aminoácidos componentes de la mezcla problema.


• ¿Cuáles son las técnicas más comunes de cromatografía y su fundamento?

Conclusión.


Referencias.


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Práctica 4.

“Reacción de la Amilasa Salival” Introducción.


1. Efecto de la fiebre sobre las reacciones enzimáticas.

2. Reacción de la amilasa salival.




¿Cuál es el efecto de la elevación de la temperatura sobre la reacción de la enzima amilasa salival?


Hipótesis.


Competencias.

• Los alumnos reconocerán la importancia del mantenimiento de la temperatura corporal fisiológica.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de evaluar el funcionamiento de una enzima.


Material.

Por Equipo:

• 20 tubos de ensaye de 12 x 75 mm.

• Micropipeta de 200 a 1000 microlitros.

• Pipeta de 5 ml.

• Gradilla para tubos de ensaye.

• Vaso de precipitados.

Reactivos.

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• Lugol.

1 gr de yodo + 2gr de yoduro de potasio disueltos en 300 ml de agua destilada y filtrados.

• Sustrato:

Suspensión de almidón

50 mg/ml

25 mg/ml

10 mg/ml

8 mg/ml

5 mg/ml

2 mg/ml

1 mg/ml

0.5 mg/ml

0.2 mg/ml

Equipo.

• Espectrofotómetro

• Celdas para Espectrofotómetro

• Baño de temperatura constante

• Termómetro

• Cronometro

Método.

1. Colocar agua en ebullición en un vaso de precipitados.

2. El alumno que aportara la muestra de saliva no deberá consumir alimentos al menos dos horas antes de la práctica.

3. Numerar los tubos de ensaye.

4. Obtener por cada equipo 5.0 ml de saliva y colocarla en un frasco.

5. De estos 5.0 ml tomar 1.5 ml de saliva. Los 3.5 ml restantes se dejan y se utilizaran para los tubos 11-19.

6. Colocarla en un tubo de ensaye y calentar en baño maría durante 5 min, esta muestra se utilizara para los tubos 1 a 10.

7. Preparar los tubos de ensaye de acuerdo a la tabla que se presenta a continuación.

TUBO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19

Substrato .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1

17

17

Ml saliva calentada

- .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 - - - - - - - -

Ml saliva sin calentar

- - - - - - - - - - .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1 .1

INCUBAR A 37° DURANTE 2 MINUTOS

Lugol (ml) .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3 .3

Agua ADICIONAR 2.5 ml.

Las concentraciones de sustrato son las siguientes:

TUBO 2 3 4 5 6 7 8 9 10

CONCEN

Mg/ml

.2 .5 1 2 5 8 10 25 50

TUBO 11 12 13 14 15 16 17 18 19

CONCEN

Mg/ml

.2 .5 1 2 5 8 10 25 50

8. Leer la absorbancia de cada tubo en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 660 nm utilizando como blanco el tubo 1.

Resultados.

• Tabular los valores de concentración de sustrato y de absorbancia:

X

Concentración de sustrato

Y

absorbancia

18

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• Graficar la absorbancia (eje de las ordenadas –Y-) contra la concentración de sustrato (eje de las abscisas –X-). Utilizar un diferente color de línea para los valores de la saliva calentada y para la sin calentar.


• ¿Cuál es la reacción que cataliza la amilasa?

• ¿Cuál es la importancia de la amilasa como componente de la saliva?

• ¿Para qué se calienta parte de muestra de saliva?

Conclusión.


Referencias.


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Práctica 5.

"Metabolismo de carbohidratos: Curva de absorción de glucosa”

Introducción.


1. El nivel normal de glucosa en sangre en ayuno.

2. El nivel de glucosa postprandial.

3. El papel de la insulina y el glucagón en la regulación de la glucemia

4. Contenido de carbohdratos en los distintos alimentos.




¿Cuáles son los niveles de glucosa a través del tiempo después de la ingesta de un alimento azucarado?


Hipótesis.


Competencias.

• Los alumnos reconocerán la importancia del páncreas, la insulina y el glucagón en la regulación de glucemia.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de la determinación de los niveles de glucosa sanguínea.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de la realización e interpretación de una curva de tolerancia a la glucosa.


Material.

Por Equipo:

• Torundas de algodón empapadas con alcohol al 70%.

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• Lancetas estériles.

Reactivos.

• Tiras para glucómetro.

• 250 ml de algún alimento líquido (jugo, té, leche, etc.) al que se le deben adicionar 4 cucharadas de azúcar o alguna dieta que el profesor o los alumnos sugieran como refrescos de Cola, refrescos Light, pan blanco, galletas o frutas con miel, para evaluar el impacto de estos alimentos sobre la glucemia.

Equipo.

• Glucómetro

Método.

1. Un alumno voluntario por equipo acudirá a la práctica con un ayuno de por lo menos 3 hrs.

2. Se limpiará la yema de un dedo con una torunda empapada de alcohol y se obtendrá una gota de sangre con ayuda de una lanceta estéril.

3. Se determinará el nivel de glucosa con ayuda del Glucómetro. Esta determinación corresponde al tiempo cero.

4. El alumno ingerirá el alimento azucarado.

5. Se determinará nuevamente el nivel de glucosa en sangre a los 30, 60 y 90 minutos de haber ingerido el alimento.

Resultados.

• Una vez obtenido el valor delaglucosa, tabular los resultados contra tiempo.

X

Tiempo

Y

Concentración de glucosa

(mg/dL)

• Trazar una gráfica de concentración de glucosa (eje de las ordenadas –Y-) contra tiempo (eje de las abscisas –X-)


21

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• ¿Cuáles son los valores normales de glucemia en ayunas y posprandial?

• ¿Cuáles son las principales hormonas que intervienen en el metabolismo de la glucosa?

Conclusión.


Referencias.


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Práctica 6.

"Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de los inhibidores de la cadena de transporte de electrones y de los desacoplantes"

Introducción.


1. La glucólisis, el ciclo de Krebs, la cadena respiratoria y la fosforilación oxidativa.

2. Como actúan los inhibidores de la cadena respiratoria.




¿Cuál es el efecto del dinitrofenol y de la azida de sodio sobre el bombeo de protones en las levaduras?


Hipótesis.


Competencias.

• Los alumnos reconocerán la peligrosidad de los venenos que inhiben o desacoplan la cadena respiratoria y la fosforilaciónoxidatíva.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de evaluar el efecto de un veneno.


Material.

Por Equipo:

• Tres vasos de precipitado de 100 ml.

• 2 Pipeta de 5 ml.

• 1 probeta de 50 ml

• 1 agitador de vidrio

• 1 Pizeta.

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Reactivos.

• Levadura (Saccharomycescerevisiae) 200 mg/mL.

• Solución de glucosa al 10 %

• Solución de dinitrofenol 40 mmol/l en etanol.

• Solución de azida de sodio 400 mmol/l.

• Agua destilada

Equipo.

• Potenciómetro

Método.

Experimento 1 (control)

1. Diluir 5 ml de la levadura en un volumen final de 40 ml de agua destilada.

2. Determinar el pH de la solución y repetir la medición dos veces más con intervalos de 3 minutos para obtener la línea basal.

3. Adicionar 5 ml de glucosa al 10%, agitar y medir el pH.

4. Determinar el pH de la solución cada 5 minutos cuatro veces, y luego cada 10 minutos dos veces más.

Experimento 2 (dinitrofenol)


2. Añadir 8 gotas (0.2 ml) de la solución de dinitrofenol 40 mmol/l, concentración final de 200 µmol/l. Agitar con cuidado.


4. Esperar 5 minutos.

5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.

Experimento 3 (azida de sodio)


2. Añadir 12 gotas (0.5 ml) de la solución de azida de sodio 400 mmol/l, concentración final de 5 mmol/l. Agitar con cuidado.


4. Esperar 5 minutos.

5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.

Resultados.

• Para cada uno de los experimentos, una vez obtenidoslos valores depH, tabular los resultados contra tiempo.

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24

Control

X

Tiempo

Y

pH

Dinitrofenol

X

Tiempo

Y

pH

Azida de Sodio

X

Tiempo

Y

pH

25

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• Trazar una gráfica de cada uno de los experimentos, utilizando los valores de las lecturas de pH (eje de las ordenadas –Y-) contra tiempo (eje de las abscisas –X-). Utilizar un diferente color de línea para cada uno de los experimentos.



• ¿Cuáles son los inhibidores de la cadena respiratoria de los complejos I, II III y IV? Describa su efecto sobre el consumo de O2 y la síntesis del ATP?

• ¿Cuál es el mecanismo por medio del cual los protonóforos desacoplan la fosforilación oxidativa? Describa su efecto sobre el consumo de O2 y la síntesis del ATP?

Conclusión.


Referencias.


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Práctica 7.

"Determinación de lípidos y lipoproteínas plasmáticas"

Introducción.


1. Los niveles elevados de colesterol, LDL, su relación con la formación de ateromas y el riesgo de infarto al miocardio.

2. Los niveles normales de triglicéridos, colesterol y LDLs.




¿Cuál es el nivel de triglicéridos, colesterol y LDLs en la sangre de un estudiante de medicina?


Hipótesis.


Competencias.

• Los alumnos reconocerán la importancia de mantener niveles normales de triglicéridos, colesterol y LDLs en el cuerpo.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de la determinación de los niveles de triglicéridos, colesterol y LDLs en la sangre.


Material.

Por Equipo:


• Ligadura de 40 cm.

• Jeringa de 5 ml.

• 2 tubos de centrífuga.

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• Gradilla con 10 tubos de ensayo

• 2 Pipetas de 1 ml y 2 de 5 ml.

• 1 pipeta Pasteur con bulbo

• 3 celdas para espectrofotómetro

• Micropipetas de 20, 200 y 1000 µl.

Reactivos.

• Kit para colesterol.

• Kit para TG.

• Kit para LDL.

Equipo.

• Vortex.

• Espectrofotómetro.

• Centrífuga clínica.

Método.

1. Obtener 5 ml. de sangre de un voluntario y vaciar lentamente sobre las paredes del tubo de centrífuga, dejar reposar unos 10 min. y eliminar el coágulo formado.

2. Centrifugar a 2500 rpm durante 10 minutos y extraer enseguida con mucho cuidado el suero con una pipeta Pasteur, pasándolo a un tubo de ensaye limpio.

3. Para determinar los Triglicéridos (TG) utilizar las instrucciones del Kit.

4. Para la determinación de colesterolutilizar las instrucciones del Kit.

5. Para la determinación de LDL utilizar las instrucciones del Kit.

Resultados.

• Una vez obtenidoslos valores, comparar contra los rangos normales.



• ¿Cuáles son los valores normales de triglicéridos, colesterol, LDL y HDL en sangre?

• ¿Qué es el síndrome metabólico?

• ¿Qué es el hígado graso?

Conclusión.


Referencias.


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Práctica 8.

“Determinación de las transaminasas glutámico pirúvica sérica (TGP) y glutámico oxaloacética sérica (TGO)”

Introducción.


1. El efecto de las infecciones virales, el alcohol y los fármacos sobre la toxicidad hepática.

2. Los niveles normales de TGP y TGO.




¿Cuál es el nivel de TGP y TGO en la sangre de un estudiante de medicina?


Hipótesis.


Competencias.

• Los alumnos reconocerán la importancia de mantener niveles normales de transaminasas en el cuerpo.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de la determinación de los niveles de transaminasas en la sangre.


Material.

Por Equipo:




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Reactivos.

• Kit para la determinación de TGO.

• Kit para la determinación de TGP.

Equipo.

• Vortex

• Espectrofotómetro

• Baño María a 37ºC y termómetro.


Método.



3. Para determinar los niveles de TGP utilizar las instrucciones del Kit.

4. Para la determinación de TGOutilizar las instrucciones del Kit.

Resultados.




• ¿Cuáles son los valores normales de TGP y TGO?

• ¿Qué es la hepatitis?

• ¿Qué es la cirrosis hepática?

Conclusión.


Referencias.


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Práctica 9.

“Determinación de urea y creatinina séricas”

Introducción.


1. Como se elimina el nitrógeno en el cuerpo humano.

2. Los niveles normales de urea en sangre.




¿Cuál es el nivel de urea en la sangre de un estudiante de medicina?


Hipótesis.


Competencias.

• Los alumnos reconocerán la importancia de mantener niveles normales de urea en el cuerpo.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de la determinación de los niveles de urea en la sangre.


Material.

Por Equipo:







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31




Reactivos.

• Kit para la determinación de urea.

• Kit para la determinación de creatinina.

Equipo.

• Vortex.




Método.



3. Para determinar los niveles de urea utilizar las instrucciones del Kit.

4. Para la determinación de creatinina utilizar las instrucciones del Kit.

Resultados.

• Una vez obtenidos los valores, comparar contra los rangos normales.



• ¿Cuáles son los valores normales de urea y creatinina en sangre?

• ¿Cuál es el órgano que está fallando si el nivel de urea en sangre está por debajo del rango normal?

• ¿Cuál es el órgano que está fallando si el nivel de urea en sangre está por arriba del rango normal?

Conclusión.


Referencias.


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32

Práctica 10.

“Determinación de ácido úrico”

Introducción.


1. El catabolismo de las purinas.

2. Los niveles normales de ácido úrico en sangre.




¿Cuál es el nivel de ácido úrico en la sangre de un estudiante de medicina?


Hipótesis.


Competencias.

• Los alumnos reconocerán la importancia de mantener niveles normales de ácido úrico en el cuerpo.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de la determinación de los niveles de ácido úrico en la sangre.


Material.

Por Equipo:







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33




Reactivos.

• Kit para la determinación de ácido úrico.

Equipo.

• Vortex.




Método.



3. Para determinar los niveles de ácido úrico utilizar las instrucciones del Kit.

Resultados.




• ¿Cuáles son los valores normales de ácido úrico en sangre?

• ¿Qué es la gota?

• ¿Cómo actúa el alopurinol?

• ¿Cuáles alimentos se deben evitar si se tiene elevado el nivel de ácido úrico?

Conclusión.


Referencias.


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34

Práctica 11.

“Aislamiento de DNA y su visualización en placa de agarosa”

Introducción.


1. El material genético.

2. El bromuro de etidio.




¿Es posible hacer evidente y visualizar el ADN de un estudiante de medicina?


Hipótesis.


Competencias.

• Los alumnos reconocerán que efectivamente el ADN existe.

• Los alumnos adquirirán la habilidad de la visualización del material genético.


Material.

Por Equipo:





• 2 Pipetas de 1 ml

• 3 Pipetas de 10 ml.

• Pipeta Pasteur con bulbo o micropipeta de 1000μL con punta recortada.

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• Vaso de precipitado de 50 ml.

• Dos microtubos de 1.5 ml.


• Guantes desechables

Reactivos.

• EDTA 0.5 M

• SDS al 0.1 %

• NaCl 0.1 M

• Etanol frío

• Cajas de Petri (p100) conteniendo agarosa al 1% con bromuro de etidio a 0.5 ug/ml.

• Bromuro de etidio 5 ug/ml.

• Solución amortiguadora de Tris – Boratos- EDTA (TBE).

Equipo.


• Lampara de luz UV de onda corta.

• Googles protectores contra luz UV.

Método.

1. Preparar la agarosa: disolver la agarosa en amortiguador TBE en ebullición; esperar a que la temperatura descienda a 40 – 50 ºC aproximadamentey adicionar el bromuro de etidio a una concentración final de 0.5 ug/ml. Vaciar la mezcla sobre las cajas petriP100 y esperar a que gelifique. Guardarlas en el refrigerador. Nota: el Bromuro de Etidio es toxico, por lo que el manejo del gel que lo contiene debe hacerse con guantes.

2. Obtener 5 ml. de sangre de un voluntario

3. Vaciarla lentamente sobre las paredes de un tubo de centrífuga de 15 ml, que contenga unas 2 gotas de EDTA y mezclar suavemente por aproximadamente dos minutos.

4. Centrifugar a 2500 rpm durante 10 minutos y extraer enseguida con mucho cuidado la capa superior de glóbulos blancos.

5. Colocar estos glóbulos blancos en un tubo de centrífuga y agregar 10 ml de SDS al 0.1 %.

6. Agitar constantemente durante 10 minutos.

7. Centrifugar la mezcla durante 10 minutos a 3,000 rpm.

8. Desechar el sobrenadante

9. Agregar al sedimento 10 ml de SDS al 0.1 %.

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10. Agitar suavemente durante 10 minutos y pasar a un vaso de precipitado de 50 ml.

11. Agregar 10 ml de NaCl 0.1 M y dejar reposar unos 3 minutos.

12. Agregar 10 ml de etanol frío.

13. Observar los filamentos de DNA (si no se alcanzan a ver a simple vista, agite suavemente el vaso).

14. Colectar el DNA con una micropipeta de 1000 uL y colocarlo en un microtubo.

15. Centrifugar a 3,000 rpm. durante 10 min. y desechar el sobrenadante.

16. Resuspender el ADN en 100 ul de agua.

17. Colocar 20 uL de ADN sobre una placa de agarosa conteniendo bromuro de etidio.

18. Dejar absorber durante 30 min.

19. Observar la posición de las gotas en el gel con una lámpara de luz UV. Tener cuidado de realizar las observaciones con los lentes protectores ya que la luz UV puede dañar la retina.

Resultados.

• Tomar una foto al ADN.


• ¿Por qué es peligroso el bromuro de etidio?

Conclusión.


Referencias.


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VALORES DE REFERENCIA EN SANGRE PARA METABOLITOS DE USO CLÍNICO Sustancias inorgánicas Amoniaco 12-55 μmol/L Bicarbonato 22 – 26 meq/L Calcio 8.5 – 10.5 meq/L Cloruro 100-200 meq/L Magnesio 1.5 – 2 meq/L pCO2 35 – 45 mmHg pO2 75 – 100 mmHg Potasio 3.5 – 5 meq/L Sodio 135 – 145 meq/L Moléculas orgánicas Lactato 0.5 – 2.2 meq/L Ácido úrico 3 – 7 mg/dL Bilirrubina total * 0.3-1.2 mg/dL Directa* 0 – 0.3 mg/dL Indirecta* 0- 2 mg/dL Creatinina* 0.7 – 1.3 mg/dL Creatina 0.7 a 1.3 mg/dL Glucosa* 70 – 105 mg/dL Lípidos totales 450 – 1000 mg/dL Ácidos grasos totales 190 – 420 mg/dL Colesterol deseable < 200 mg/dL Colesterol HDL como Factor de riesgo < 35 mg/dL Colesterol LDL Deseable <130 mg/dL Triacilgliceroles 40 – 150 mg/dL BUN (Nitrógeno ureico en sangre)* 06-20 mg/dL

Proteínas Proteínas Totales* 6.4 – 8.3 g/dL Albúmina* 3.4 – 5 g/dL Globulina* 2.3-3.8 5 g/dL Relación albúmina/globulina* 1.5-2.5 Enzimas Alanina amino trasferasa

ALT (TGP)* 13-40 U/L Aspartato amino trasferasa

AST (TGO)* 15-48 U/L Amilasa * 27-102 U/L Creatina cinasa (CK) 40 – 150 U/L Fosfatasa ácida 0.1 – 0.63 U/L Fosfatasa alcalina* 53-128 U/L Lactato deshidrogenasa* 230-460 U/L Lipasa < 2 U/L PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS Osmolaridad 280 – 310 mOsmol/L pH 7.35 – 7.45 Volemia 5 a 9 % del peso corporal Referencia: * Valores de referencia actualizados a junio de 2013 del Instituto Mexicano del Seguro Social (IMSS). Devlin, Thomas M., Bioquímica, libro de texto con aplicaciones clínicas, 4ª ed. Ed. Reverté.

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CASOS CLÍNICOS

CASO CLÍNICO 1 DESHIDRATACIÓN Paciente sexo femenino de 73 años de edad, domiciliada en un geriátrico, portadora de demencia severa, síndrome de inmovilidad e incontinencia fecal y urinaria, que fue internada en nuestro hospital a raíz de infección respiratoria en el contexto de antecedente reciente de escaso acceso al agua, hipotensión, sequedad de boca y axilas, hipernatremia, y falla renal aguda. Se le realizó una BH, QS y EGO. Su glucemia era normal. La paciente carecía de medicaciones crónicas y estaba siendo alimentada por sonda enteral. Inicialmente fue tratada con antibióticos (ampicilina + sulbactam) y solución fisiológica endovenosa hasta ser compensada hemodinámicamente, y luego se continuó su hidratación sumando agua a su esquema de alimentación enteral. El tratamiento fue exitoso y la paciente pudo ser dada de alta a los 6 días de su internación (Tabla 1). TABLA 1: Laboratorios del Caso 1 Natremia (mEq/L) 173 Uremia (mg/dL) 174 Creatininemia (mg/dL) 3.1 Glucosa (mg/dL) 98 DISCUSIÓN Musso y col. presentan una paciente anciana con demencia que era dependiente de otros para la ingesta de agua, y desarrollo deshidratación severa con hipernatremia. Es importante al recibir un paciente solicitar los tres estudios de rutina: BH (Biometría hemática), QS (Química sanguínea) y el EGO (examen general de orina). Hay que considerar que el porcentaje de agua en el cuerpo humano es de aproximadamente un 70%. Cuando ocurre un descenso importante en ese porcentaje (deshidratación) ocurre en primer lugar HIPOTENSIÓN, que de persistir puede llegar a un choque hipovolémico. Es importante revisar en la Química sanguínea la concentración de otros iones como el potasio, que podría llevar a hipercalemia. Dr. Enrique Miranda Peralta

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CASO CLÍNICO 2 Oclusión intestinal. Acidosis metabólica. Deshidratación grave (Facultad de Medicina – UNAM) Se trata de un paciente masculino de 35 años de edad quien acude al servicio de urgencias de un Hospital por presentar dolor abdominal intenso acompañado de vómitos frecuentes y abundantes de contenido intestinal. El paciente presenta un cuadro de deshidratación importante. A la exploración física se obtuvieron los siguientes datos: Tensión arterial (TA): 80/50 mmHg Frecuencia cardiaca (Fc): 120/min Frecuencia respiratoria (Fr): 32/min Temperatura (T): 36o C Los estudios de laboratorio mostraron lo siguiente: Electrolitos séricos: Na+= 128 mEq/l K+= 2.8 mEq/l Cl–= 100 mEq/l Gasometría arterial: CO2t = 12 pH = 7.29 pCO2= 24 mmHg pO2= 95 mmHg HCO3- = 11.2 mmol/l EB (exceso de base) = 20 Química sanguínea: Glucosa = 5.2 mmol/l (95 mg/dl) BUN = 15 mmol/l El tratamiento consistió, primero, en el restablecimiento del balance de líquidos con solución salina a 0.9%, electrólitos (reposición de K+) y cirugía. Preguntas de bioquímica 1. Evaluar el estado ácido-base del paciente; tomar en cuenta los valores de pH y presión parcial de bióxido de carbono (pCO2), el valor de bicarbonato plasmático (HCO3–), etcétera. 2. ¿Es normal el estado ácido-base del paciente? ¿Qué tipo de desequilibrio presenta? ¿Cuál podría ser la causa de ese desequilibrio? 3. ¿Qué relación existe entre el metabolismo de los electrolitos y el agua y entre los trastornos ácido-base y los electrolitos? 4. ¿Qué tipos de alteraciones de líquidos y electrolitos corporales existen?

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5. Calcule la osmolaridad sérica (tome en cuenta la concentración de las sustancias que mayormente contribuyen a establecerla) como aparecen en las pags. 98 y 113. 6. ¿Cuáles son los signos de deshidratación? 7. ¿Qué terapéutica recomendaría a este paciente para equilibrar sus líquidos y electrolitos? Conceptos y áreas de aprendizaje 1. Propiedades fisicoquímicas del agua. 2. Concepto de pH. 3. Explicar el significado de las variaciones de los valores normales de pH y de la composición electrolítica de la sangre. 4. Sistemas amortiguadores del plasma, líquido intersticial y células. La aplicación de la ecuación de Henderson y Hasselbalch al cálculo del pH y de la concentración de bióxido de carbono y bicarbonato. 5. Equilibrio ácido-base y su mantenimiento. 6. Equilibrio hidroelectrolítico y su mantenimiento. REFERENCIAS 1. Harrison. Principios de medicina interna. 15a. ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana Editores; 2001; cap: Líquidos y electrólitos y Obstrucción intestinal aguda. p. 184. 2. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas. 4a. ed. Barcelona: Editorial Reverté; 2004. 3. Montgomery R. Bioquímica: Casos y texto. 6a. ed. Barcelona: Editorial Harcourt-Brace, 1998; cap. 4. 4. Laguna J, Piña E. Bioquímica de Laguna. 5a.ed. México: Editorial El Manual Moderno; 2002: 41-76. 5. Villazón SA, Cárdenas CO,Villazón DO, Sierra UA. Fluidos y electrólitos. México: JGH Editores; 2000.

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CASO CLÍNICO 3 CETOACIDOSIS DIABÉTICA Se recibe en el Servicio de Urgencias paciente femenina de 31 años, cuadro de cuatro semanas de evolución, con poliuria, polidipsia y polifagia. Presenta respiración de Kussmaul, alteraciones de la conciencia y deshidratación +++. Se le ordenan Química sanguínea y Gasometría. Resultados: Glucemia (mg/dL) 237 pH arterial 7.23 Cuerpos cetónicos (mmol/L) 3.7 HCO3

- (bicarbonato) (mEq/L) 6.4 pCO2 (mm Hg) 15.5 Tratamiento: Se administró bicarbonato e insulina (0.1 U/Kg/hr). También se administró Solución Fisiológica.

1. Que es la poliuria? 2. Que es la polidipsia? 3. Que es la polifagia? 4. Que es la respiración de Kussmaul? 5. Cual es el valor normal de Glucosa? 6. Cual es el pH normal? 7. Cual es la concentración de cuerpos cetónicos normal? 8. Cual es la concentración de bicarbonato normal? 9. Cual es la presión arterial de CO2 normal? 10. Cual es el mecanismo de acción del bicarbonato, la insulina y la solución fisiológica?

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CASO CLÍNICO 4 ESCORBUTO. Lactante del sexo masculino de un año y 10 meses de edad, originario y residente del Distrito Federal. Alimentación insuficiente y basada principalmente en pan, tortillas y frijoles. Padecimiento de tres meses de evolución con pérdida de peso, irritabilidad, lesiones dérmicas diseminadas, petequias y equimosis, y sangrado de encías. Debilidad de ocho días de evolución. Nivel sérico de ácido ascórbico bajo.

La flecha señala levantamiento del periostio por hemorragia subperiostica. Con los datos se elaboró el diagnostico de escorbuto Tratamiento: Vitamina C (oral) 200 mg cada 24 hr. Discusión: Recordar que la proteína más abundante del cuerpo es la COLAGENA, la cual es producida por lo fibroblastos. Para la síntesis de esta proteína se necesita el aminoácido 4-HIDROXIPROLINA, pero el ACIDO ASCÓRBICO (VITAMINA C) se necesita para convertir la prolina en 4-hidroxiprolina. La colagena se requiere para la adecuada formación de capilares, huesos, etc. por lo que la síntesis deficiente de colagena conlleva a fragilidad capilar y por ende a HEMORRAGIAS. Las petequias y equimosis son pequeños moretones producidos por hemorragias.

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CASO CLÍNICO 5 ENFERMEDAD DE MC ARDLE. Se presentan a la consulta 4 hermanos: varón de 16 años, mujer de 15, y varones de 11 y 5 años; con dolor, calambres y coluria por rabdomiolisis y mioglobinuria después del ejercicio. En uno de los casos la mioglobinuria ya causó un fallo renal agudo. El diagnóstico se establece al realizar una biopsia de tejido muscular, observándose elevación en el contenido de glucógeno y reducción en la actividad de la enzima Miofosforilasa (GLUCÓGENO FOSFORILASA MUSCULAR). El gen que codifica para esta enzima ha sido clonado y localizado en el cromosoma 11. La enfermedad se hereda de forma autosómica recesiva y es frecuente en matrimonios consanguíneos. La deficiencia de Miofosforilasa o enfermedad de McArdle es una entidad rara. Bioquímica: En la Glucogenosis tipo V o enfermedad de McArdle, al existir un déficit de Miofosforilasa se bloquea la degradación de glucógeno muscular hacia glucosa-1-fosfato. El rasgo clínico mas característico es la limitación para desarrollar ejercicio físico por la aparición de calambres musculares. La prevención y el tratamiento se basan en:

a) Reducción de la actividad física.

b) Ingestión de glucosa previa al ejercicio.

c) Dieta hiperprotéica para mejorar la resistencia y funcionalidad muscular.

d) En la fase aguda de la rabdomiolisis se aplicará una hidratación enérgica, alcalinización de la orina y de ser necesario hemodiálisis.

López A. y Cols. Enfermedad de McArdle: descripción de cuatro hermanos con déficit de miofosforilasa. Anales de Medicina Interna 2001; 18:136-138.

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CASO CLÍNICO 6

ENFERMEDAD DE VON GIERKE (GLUCOGENOSIS TIPO 1)

Paciente masculino de 22 años de edad, procedente de una familia funcional, soltero, producto de un embarazo deseado y parto eutócico, a término e intrahospitalario. A los 2 meses de nacido tiene su primer ingreso en el Hospital Infantil por sepsis generalizada, anemia, íleo paralítico y acidosis metabólica. Al examen físico se detectó hepatomegalia de 2-3 cm. En los exámenes complementarios se encontró hipoglucemia (72 mg/dL) y anemia (Hb: 82g/L). Se corrobora el diagnóstico de Enfermedad de Von Gierke, glucogenosis de tipo I, detectándose falla de la enzima Glucosa -6-fosfatasa.

Ha tenido múltiples ingresos por sepsis a diferentes niveles, crisis hipoglucémicas, crisis agudas de asma bronquial y acidosis metabólica. Se le diagnostica además gota, blefaritis aguda, atrofia testicular con criptorquidia bilateral y testículos retráctiles, por lo que se realiza orquidopexia bilateral. A los 16 años de edad se le diagnostica un tumor abdominal por lo que es intervenido quirúrgicamente y se le realiza colostomía con cierre exitoso un año después. Presenta baja talla (135, 5 cm.) (ver figuras)

COMENTARIO

El objetivo del siguiente tratamiento es evitar los bajos niveles de azúcar en sangre. Es necesaria la alimentación frecuente durante el día, especialmente con alimentos que contengan carbohidratos (almidones). Los niños mayores y los adultos pueden tomar maicena por vía oral, lo cual disminuye las necesidades de glucosa. El pronóstico ha mejorado con el desarrollo del tratamiento, influye así en el crecimiento, la pubertad y la calidad de vida.

Los pacientes identificados y cuidadosamente tratados a temprana edad disminuyen las complicaciones potencialmente mortales y pueden llegar hasta la edad adulta.

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CASO CLÍNICO 7 Hipoglucemia secundaria a intoxicación alcohólica Se trata de un paciente de 58 años, alcohólico crónico, cuyos familiares relatan que ha ingerido una gran cantidad de alcohol en los dos últimos días con un consumo muy escaso de alimentos. Inició su padecimiento con náusea, vómito, mareo, sudación, cefalea, visión borrosa y confusión; presentó, en una sola ocasión, una convulsión, por lo que es llevado al servicio de urgencias. A la exploración se encuentra semiconsciente con aliento alcohólico e hipotermia. Se procede a un lavado gástrico para remover el alcohol aún no absorbido; se mantienen permeables las vías respiratorias; se instala oxígenoterapia y se le administra solución glucosada por vía endovenosa. Los resultados de laboratorio muestran: Alcohol 300 mg/dl Glucosa 2.0 mmol/l Lactato 9.0 mmol/l pH 7.2 Preguntas de bioquímica 1. ¿Cuáles son los síntomas de la hipoglucemia? 2. ¿De qué forma el etanol produce acidosis láctica e hipoglucemia? 3. ¿Cómo se encuentra la relación intracelular de NADH/NAD+? 4. ¿Qué procesos metabólicos se favorecen con los niveles altos de NADH? 5. El alcoholismo es la base de muchas deficiencias vitamínicas. ¿Qué implicaciones metabólicas tienen estas deficiencias (Complejo B)? Conceptos y áreas de aprendizaje 1. Hipoglucemia. Regulación de la glucemia. 2. Acidosis láctica. 3. Metabolismo de carbohidratos. 4. Trastornos del metabolismo de vitaminas. 5. Metabolismo del etanol. REFERENCIAS 1. Murray KR, Granner DK, Mayes PA, Rodwell VW. Bioquímica de Harper. 16a. ed. México: Editorial El Manual Moderno; 2004. p. 980-981 2. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas. 4a. ed. Barcelona: Editorial Reverté; 2004. 3. Harrison. Principios de medicina interna. 15a. ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana Editores; 2001. Capítulos: Acidosis láctica, hipoglucemia, alcohol y alcoholismo, deficiencia y exceso de vitaminas. 4. Academia Nacional de Medicina. Tratado de medicina interna. 2a. ed. México: Editorial El Manual Moderno; 1994. Capítulos: Acidosis láctica e intoxicación aguda por alcohol etílico. Tomado de: Cea Alicia. Manual de Prácticas de Laboratorio. Coordinación de Enseñanza del Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina UNAM 2011; 88.

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CASO CLÍNICO 8 HIPERCOLESTEROLEMIA Paciente femenina de 46 años con antecedentes familiares de madre y abuela que padecieron cardiopatía coronaria precoz. En sus antecedentes personales, la paciente refería historia de enfermedad reumática en su juventud y menopausia reciente. No fuma ni bebe alcohol, tiene una vida activa, aunque sin actividad física programada y presenta un consumo elevado de grasas saturadas. En el examen físico realizado en la consulta externa, muestra un índice de masa corporal de 27 kg/m2, una presión arterial de 139/80 mm Hg. Examen cardiaco normal. Xantomas en los tendones extensores de las manos y en los tendones de Aquiles. El examen de fondo de ojo refleja una esclerosis leve de los vasos retinianos. En los exámenes de laboratorio muestra una glicemia de ayuno de 85 mg/dL, colesterol de 524 mg/dL y triglicéridos de 116 mg/dL. El resto de las pruebas hepáticas y renales son normales. El ultrasonido Doppler revelo ateromatosis no estenosante de ambas arterias carótidas internas y de las arterias subclavias. Se obtuvo una muestra de ADN leucocitario para análisis molecular (mediante microarreglos) del gen rLDL5, detectándose la mutación 1705 +1 G>A. Tratamiento: Inicia con Colesteramina, régimen dietético hipocalórico y reducción del consumo de colesterol y grasas saturadas, e incremento del consumo de poli-insaturadas, obteniéndose un efecto hipocolesterolemiante muy discreto. Posteriormente se inicia terapia con estatinas, lográndose normalizar los niveles de colesterol después de unos años.

Rev Méd Chile 2007; 135: 216-220

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CASO CLÍNICO 9 SÍNDROME DE LESCH NYHAN.

Varón de 19 años de edad, de raza mestiza, que acude a la consulta por secuela de fractura en cadera derecha e hiperuricemia.

En los antecedentes familiares es hijo de padres fenotípicamente sanos, no consanguíneos; tuvo 2 hermanos con el mismo síndrome (fallecidos), y 2 hermanas fenotípicamente sanas.

En sus antecedentes personales, nació en parto eutócico, a término y sin complicaciones. En los primeros meses de vida empieza a presentar trastorno de la conciencia sin causa aparente, se documenta retraso en el desarrollo psicomotriz, pudiendo caminar a los 18 meses y hablar a los 2 años. A esta edad comienza a autolesionarse, produciéndose un año después, automutilación del segundo dedo de ambas manos. A los 12 años hace artritis gotosa aguda con hiperuricemia de 12 a 14 mg/dL, por lo que luego de ser controlado el cuadro agudo recibe Alopurinol 300 a 600 mg por 2 años. Con este tratamiento los niveles de ácido úrico se reducen a 7,5mg/dL. El tratamiento se continúa con mantenimiento de Alopurinol en dosis de 100 mg asociado a dieta pobre en purinas, consiguiéndose niveles normales de uricemia (3-6 mg/dL). En el examen se halla a un paciente joven de baja estatura, aproximadamente 1,50 m, en silla de ruedas con evidente retardo mental (oligofrenia), ausencia de piezas dentarias, muestra heridas contusas en región nasal, mentón y muñecas, mutilaciones del segundo dedo de ambas manos y xifosis lumbar. D I

Los exámenes de laboratorio: BH normal. QS: glucosa 85mg/dL, urea 32 mg/dL, creatinina 1,0 mg/dL, ácido úrico sérico 7,5 mg/dL. EGO: cristales de urato amorfos. EEG: desorganización difusa. Ecografía renal: microlitiasis en ambos riñones. Radiografía de manos: derecha: 5.a metacarpofalangica disminuida en su longitud, con alteraciones de la morfología en su tercio distal, ausencia de la falange distal y proximal del segundo dedo, el primer dedo la falange distal presenta irregularidades con afinamiento y acortamiento; izquierda: ausencia de la falange distal y acortamiento de la proximal del primer dedo, ausencia de la falange distal del segundo dedo, afinamiento de la falange distal del tercer dedo. Al paciente se le controló la hiperuricemia y gota con Alopurinol y dieta llegando a tener valores normales hasta el momento actual, el cuadro neurológico persiste. El Síndrome de Lesch-Nyhan es una enfermedad hereditaria del metabolismo purinico ligado al sexo (cromosoma X). Existe deficiencia casi total de la enzima HGPRT. Revista Peruana de Reumatología : Volumen 1 Nº 3, Año 1995.

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CASO CLÍNICO 10 DETERMINACIÓN DE PATERNIDAD POR ADN. Paciente masculino de 35 años que acude al consultorio de Genética en compañía de sus tres hijos: una niña de 12 años y dos niños, uno de 9 y otro de 7 años. El paciente refiere que debido a su trabajo, él siempre ha viajado mucho, y que después de una llamada telefónica anónima, en la que le informaron de una posible infidelidad por parte de su esposa, el duda que los niños realmente sean sus hijos. Se procede a la toma de una muestra de sangre periférica, pero en el caso de los dos niños se les toma una muestra de células de la mucosa oral, con ayuda de un cepillo estéril. En el caso de las muestras de sangre, se procede a la purificación de los glóbulos blancos y en estas células, como en el caso de las células de la mucosa oral, se purifica el ADN. Se realiza la amplificación de 32 regiones cromosómicas conocidas como “minisatélite”, mediante PCR. Entonces se analiza la secuencia de bases del ADN amplificado, mediante un secuenciador automático, obteniéndose los siguientes resultados (se muestran solamente las variantes de los dos alelos de una de las secuencias analizadas e informativas para la resolución del caso). Secuencia/ Localización Cromosómica

HIJA HIJO 1 HIJO 2 SUPUESTO PADRE

D8S1179 / 8 10 13

12 13

15 13

inconsistente 10 12

Para el caso de esta secuencia polimórfica (minisatélite) tanto la hija como el hijo 1 heredaron alguna de las variantes de estos alelos del supuesto padre (la hija heredó la variante 10 mientras que el hijo 1 heredó la variante 12). Claramente se ve que la madre de los tres niños aporta la variante 13 (probablemente homocigótica). Sin embargo en el caso del hijo menor (hijo 2), la variante 15 no corresponde a ninguna de las que posee el supuesto padre (10 y 12), por lo que biológicamente no es su hijo. En la siguiente página se muestra el reporte completo que incluye al análisis de las variantes de los 32 alelos (16 genes). Recordar que para cada individuo una variante de un alelo es aportada por la madre, y la otra por el padre. El caso se resolvió mediante el perdón dado que el supuesto padre manifestó una relación afectiva hacia el menor. Coordinación de Bioquímica

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CASO CLÍNICO 11 LEUCEMIA AGUDA MIELOBLASTICA Paciente masculino de 24 años, trabajador en una refinería. Acude a la consulta externa por presentar fiebre de 39◦C, petequias, astenia y adinamia. A la exploración presenta ganglios cervicales inflamados, así como los de las axilas. A la palpación del abdomen se detecta hepato-esplenomegalia. Laboratorio: Leucocitosis de 30 x 103/L. Trombocitopenia (83 x 109/L). En la radiografía del tórax se detecta aumento de volumen de los ganglios a nivel del mediastino. El ultrasonido constata la hepato-esplenomegalia. Al aspirado de médula ósea se detecta pancitopenia y abundante presencia de blastos de leucemia (90%). A la punción lumbar se detectan células de leucemia en el líquido cefaloraquídeo. Citogenética: translocación t(8;21)(q22;q22). RT-PCR: Se detecta el rearreglo molecular aml1-eto, producto de la translocación mencionada. Se establece el diagnóstico de Leucemia Aguda Mieloblastica. Medidas Generales: Transfusión de plaquetas, prevención de infecciones mediante tapabocas, lavado de manos y aislamiento del enfermo, Psicoterapia. Tratamiento específico: Quimioterapia, Inducción con Daunorubicina y Citarabina. Consolidación con Citarabina a alta dosis. El paciente sigue vivo y en remisión completa después de 27 meses. La detección de enfermedad mínima residual mediante RT-PCR resultó negativa para el rearreglo molecular aml1-eto, indicando la ausencia de células tumorales. Como consecuencia de la quimioterapia el ácido úrico se ha elevado en el paciente por lo que se le indicó alopurinol. Cariotipo mostrando la translocación t(8;21)

DR ENRIQUE MIRANDA

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