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CPR
Grado en Química
TEMA 6 Validación interna de métodos
Bibliografía: T5_M, T6_M
Método, ajusta tus medidas
( . . )) . (
( )
D.6.01
6.1. Concepto de validación
Requisitos (ej. Cliente)
Uso previsto
Características(Ajuste)
Documentación (PNT, Registro)
• Equipo bajo especificación• Personal competente
* Definición, * Otros elementos, * Otros términos (Tab. 5.1_M)
VALIDACION
D.6.02
Requisitos (ej. Cliente)
Uso previsto
Características(Ajuste)
Documentación (PNT, Registro)
• Equipo bajo especificación• Personal competente
* Definición, * Otros elementos, * Otros términos (Tab. 5.1_M)
VALIDACION
D.6.03
Métodos
Software
VALIDACION
ISO 17025El método completo * Preparación de la muestra* Separar la toma de muestra
Todo el intervalo de matrices *
Todo el intervalo de concentraciones * ej. Precisión, exactitud = f (conc.)
*(alcance de acreditación)
D.6.04
Tareas en validación de métodos:
Especificación de requisitos Cliente, Legislación > propios (internos)
Determinación de las característicasdel método
- Comparación (patrones, MR, métodos, interlaboratorio)- Factores (robustez)- Incertidumbre resultados a !?
Comprobación de la satisfacción de requisitos
-Criterios de validación (… LEC/ENAC: aceptación)
Declaración de validez del método
Registro de resultados Registro de validación
(Tab. 5.3_M)
a Incertidumbre (resultados) = f (resultados de validación)
D.6.05
REQUISITOS (Ensayo químico) CARACTERÍSTICAS
(Método)
Binomio requisito-características del método
Ensayo (análisis)cualitativo o cuantitativo
Analito
Analito total/libre/extraíble
Cantidad de analito
Grado de exactitud y precisión
Interferencias
Resultados comparables:- con otros LEC- con especificacionesexternas
Confirmación de identidad, selectividad/especificidadLímite de detección Límite de cuantificación Recuperación
Exactitud (veracidad)
Robustez
(Cuadro 5.2_M)
Precisión (repetibilidad,precisión intermedia,reproducibilidad)
Intervalo de trabajo y lineal
D.6.06
Otros REQUISITOS
CARACTERÍSTICAS(Método)
Distribución del analito (localizado o disperso)
Naturaleza (química, biológica, física) de la matriz
Muestreo o sub-muestreo (dentro/fuera) del LEC
Tamaño y/o disponibilidad de muestra
Restricciones de personal, tiempo, costes, equipamiento, reactivos y medios
Ej: si está localizadoen la superficie habrá que emplear técnicas de análisis superficial
Pueden condicionarla técnica
De carácter operativo-económico(pueden ser no asumibles por el LEC)
D.6.07
6.2. Validación interna y externa
EXTERNAEstudios colaborativos
> 8 Lab.
INTERNA(in-house)
(Tab. 5.4_M)
+ Método de uso/interés globalizadoEj: Doping (Olimpiadas)+ Reconocimiento por otros LECs
+ Reproducibilidad
(Programa de verificación “pareada” de métodos, AOAC)
2-3 LECs
- Error de LEC compensado un error de método ?
D.6.08
6.3. Proceso de validación interna de métodos
INICIO:Fijar requisitos
(Alcance del método)
Buscar/adaptar métodos
existentes-------------------
Desarrollar nuevo método
Ajuste viable
Relajarrequisitos
Desarrollar método
si
no
si
no
si
no
Asumir tiempo de personal
Subcontratar
no
Ajuste a requisitos(Criterios de validación)
Método normalizadono disponible oinadecuado
(MétodoValidado)
Registro de validación(Declaración de validación del método)
Evaluar características
(PNT Validación)
(Cuadro 6.1_M)D.6.09
Documentos operativos para la validación:
- PNT-Validación o PEV (Planificación de experimentos, criterios)
- Registro (datos, resultados, interpretaciones,declaración de validación)
(Anexo 6.2_M)
(Anexo 6.1_M)
Pag. 356-357 Manual (Hojas 2 y 3 del Registro de validación en
blanco) se emplearán en el examen
Necesario leer autónomamente el T3_M, Anexos 3_M (ej. Anexo 3.1.a_M) y Ejerc.3_M (ver Escenario 6.1)Reproducir hojas 2 y 3 del Registro de validación en word. Realizar/Adaptar los Ejer.6_M (Obligatorio, Tut.)
D.6.10
6.4. Características, requisitos y criterios de validación
Confirmación de Identidad.Selectividad/especificidad.
Intervalos de trabajo y linealLímite de detección.Límite de cuantificaciónExactitudPrecisiónRobustezRecuperación
• Estadísticos (T3_M)
• de aceptación (LEC/ENAC)Ej. estimación de un error (%) y comparación con un límite (prefijado)
D.6.11
Confirmación de identidad (Ensayo químico) :Establecer que la señal es debida al analitoy no a otra especie química.
INTERFERENCIAS(Otra especie/Conc.
=> Error sistemático )
• Efectividad de la etapa de separación
• Selectividad/especificidad del método
Especificidad = 100% selectividad
(Tab. 6.2_M)
Selectividad => Método genera datos-analito (exclusiva) /identificación y/o cuantificación
Impacto: Alcance (matrices)Exactitud
CONFIRMACIÓN DE IDENTIDAD. SELECTIVIDAD/ESPECIFICIDAD D.6.12
(Anexo 6.3_M) Caso 1
M1M2..MR1MR2..
Met1 Met2 Met3 . . . .
XNoxNv
Si Nv=2; test-t (exp. pareado)Si Nv>2; ANOVA test-repetidos
Comparación de métodosD.6.13
M1M2..
Fort Fort. Int1 Fort. Int2 . .
(0) (nc1) ( nc2)(0) (nc1) (nc2)
Nv=2; test-t (exp. pareado)
(Efecto int., nc)
XNox2
Conc.
(Anexo 6.3_M) Caso 2 Fortificar con interferenciasD.6.14
E(%)
(práctico, aceptaciónE-Máximo prefijado)
Habitual en los LEC
Ejemplos de picos HPLC puros e impuros. La señal cromatográfica no indica impureza en los picos.La evaluación espectral (HPLC/DAD) identifica impurezas en el pico izquierdo.
(Anexo 6.3_M) Caso 3D.6.15
(Ejer. 6.1_M), Dat8 (Anexo Dat_M)
Fortificado: Interferencia I Interferencia IIMuestra - 10 25 (mg.l-1)
1 0.071031 0.073223 0.06562 0.069299 0.086122 0.07963 0.071845 0.084155 0.0834 0.071442 0.069624 0.07665 0.064314 0.066751 0.0787
Analito
Analito + interferencia
Caso 2 (Anexo 6.3_M); consistente
Resuelto vía Registro de validación(Anexo 6.2_M; hojas 2 y 3)… usar de modelo para el resto; ver escenario 6.2)
x1x2
x3
D.6.16
Box-and-Whisker Plot
Col_1-Col_2-17 -13 -9 -5 -1 3
(X 0.001)
Box-and-Whisker Plot
Col_1-Col_3-15 -11 -7 -3 1 5 9
(X 0.001)
µdif = 0
Confusión: (Ef. Interferencia oMuestra errónea ?)
Evaluación visual(cualitativa)
D.6.17
Intervalo de trabajoIntervalo de conc. de analito, en la disolución que se mide, donde el método puede aplicarse (con exactitud y precisión aceptable).
No en la muestra original (Alcance) (Límites)
• Inferior: LD o LQ(Superior depende del
instrumento/señal)
• Intervalo lineal (regresiónlineal señal-conc. o curva de calibración)
LinealidadSensibilidad
Puede incluir un intervalo lineal
(Tab. 6.3_M)
Impacto: Alcance (conc., capacidad de dilución del ensayo)Calibración de métodos
INTERVALO DE TRABAJO Y LINEAL D.6.18
(Cuadro 6.3_M)(a) OM= 0.5; RSD=10%
50 100 150
50
100
150
(b) OM= 0.15; RSD=1%
80 100 12070
80
90
100
110
120
130
(c) OM= 0.15; RSD=3%
80 100 12070
80
90
100
110
120
130
(d1) OM= 0.15; RSD=5%
80 100 12070
80
90
100
110
120
130
(d2) OM= 0.15; RSD=5%
80 100 12070
80
90
100
110
120
130
(d3) OM= 0.15; RSD=5%
80 100 12070
80
90
100
110
120
130
Aparente no linealidad
Impacto OM
OM ~aceptable
D.6.19
Gráfico de linealidad (Sensibilidad vs. log Conc.) de un calibrado en cromatografía. OM(x) = 4
x (ng.ml-1) y (UA) log(x) y/x0 8.005 10.00 0.699 2.00010 11.08 1.000 1.10815 15.93 1.176 1.06220 21.15 1.301 1.05730 30.44 1.477 1.01540 40.66 1.602 1.01760 61.42 1.778 1.024100 102.56 2.000 1.026200 198.56 2.301 0.993500 499.90 2.699 1.0001000 1002.12 3.000 1.0022000 2001.58 3.301 1.0015000 5000.73 3.699 1.00010000 9000.41 4.000 0.90020000 17000.00 4.301 0.85050000 42000.00 4.699 0.840
0.800
0.850
0.900
0.950
1.000
1.050
1.100
1.150
1.200
0 1 2 3 4 5log(x)
y/x
Identificación del intervalo lineal (1ª etapa)
Zona [1.05(y/x), 0.95(y/x)]Int. Lin. (y/x)cte ~ 1
(Anexo 6.4_M)
D.6.20
i x (ng/ml) y (UA) log(x) y/x (y/x)/Media *1001 0 3.82 5 6.9 0.70 1.383 1413 10 11.6 1.00 1.165 1194 15 15.4 1.18 1.025 1045 20 17.6 1.30 0.880 906 30 31.1 1.48 1.036 1067 40 36.1 1.60 0.903 928 60 63.4 1.78 1.056 1089 100 104.5 2.00 1.045 106
10 200 197.3 2.30 0.987 10111 500 543.8 2.70 1.088 11112 1000 1013.1 3.00 1.013 10313 2000 2050.2 3.30 1.025 10414 5000 5071.3 3.70 1.014 10315 10000 8754.1 4.00 0.875 8916 20000 13606.2 4.30 0.680 6917 50000 26477.1 4.70 0.530 54
Media 0.982Mediana 1.020Media sin y/x 1.009
< 80%
> 120%
OM(x1)[i=2-17] = 4 ordenes de magnitud
(Ejer. 6.2_M), Dat9 (Anexo Dat_M)
(Anexo 6.4Nota c)
D.6.21
0 2 4 60.5
1
1.5
log(x)y/x0 10 20
-2000
0
2000
4000
i
Resid
ual
0 2 4x 104
0
1
2
3x 104
x
y
0 50 1000
50
100
x
y
zoom
[0.95-1.05]-Mediana(y/x)]
x alto x bajo
D.6.22
Límite de detección mínimo valor detectable de analitoMedidas a un nivel de concentración bajo
• Ligada al concepto de blancoej. criterio “blanco + 3s” otros criterios
• Indicar el criterioempleado para LD
Cuantitativo: LD ( yD )Cualitativo: nivel umbral
(100% positivos)
(Tab. 6.4_M)
, no cuantificable LD
LÍMITE DE DETECCIÓN D.6.23
Tipos de blanco :
- Blanco de reactivos (disolvente): disolución con reactivos en las cantidades empleadas en la curva de calibrado o dilución de la muestra
LD (o LQ) muy optimistassirve para comparación de LD de varios métodos
- Blanco analítico: reactivos en las cantidades empleadas en las muestras durante todo el PEE (‘sufre todo el PEE’)
más adecuado
- Blanco matriz (de muestra): misma composición que la muestra excepto el analitoideal (en ocasiones no disponible) ej: sangre sin droga
- puede aproximarse de una muestra con una muy baja conc. de analitoMuestra negativa: si Conc. < LQMuestra positiva: si Conc. > LQ
D.6.24
LD cuantitativo
- Casos 1 y 2 : Blanco
ybl
nbl =10
µbl ± σ bl
yD LDkD
- Casos 3 : Señal/ruido
- Casos 4 : b0, b1 (curva de calibrado)
Media(ybl) s(ybl)(Señal)
(Señal crítica)
kD
(Anexo 6.5_M)D.6.25
Límite de cuantificación (límite de determinación) la concentración de analito más baja que puede determinarse / repetibilidad y exactitud (fiabilidad) aceptable
- Medidas a conc. bajas- Se establece a nivel cuantitativo, LQ- Puede condicionar el intervalo de trabajo (límite inferior)- Suele indicar RSDmáx. del método
(Tab. 6.5_M)LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN D.6.26
- Caso 2 : RSD(y) vs. x (método EURACHEM)
LQ
- Caso 1 : Blanco (ybl)
- Caso 3 : b1 (curva de calibrado)
D.6.27
Límite de detección: visualmente podemos diferenciar el pico cromatográfico de la señal del fondo.
Límite de cuantificación: visualmente podemos diferenciar el pico cromatográfico y cuantificarlo con una precisión y exactitud aceptable.
Comprobación práctica LD, LQ
D.6.28
(Ejer. 6.3_M), Dat9 (Anexo Dat_M)
i x y1 y2 y3 y4 y5 y6 y7 y8 y9 y10
1 0 3.8 4.2 4.1 3.7 3.9 3.3 3.9 3.4 3.6 3.82 5 6.9 7.0 7.0 6.4 7.9 7.7 6.4 7.7 7.4 6.13 10 11.6 9.4 11.6 10.7 11.5 11.2 10.3 10.8 10.6 11.44 15 15.4 15.3 14.9 14.0 12.6 16.9 15.0 16.6 15.7 14.55 20 17.6 21.7 21.4 19.9 20.4 19.6 20.6 20.3 23.2 21.96 30 31.1 29.8 28.3 32.4 29.7 29.0 31.3 30.2 28.2 31.77 40 36.1 38.1 41.78 60 63.4 62.5 60.99 100 104.5 102.7 103.810 200 197.3 197.1 222.711 500 543.8 467.3 464.912 1000 1013.1 1011.4 1037.313 2000 2050.2 2214.2 1935.414 5000 5071.3 4707.4 4575.815 10000 8754.116 20000 13606.217 50000 26477.1
ybl
(Señal)
D.6.29
EXACTITUD
Exactitud (Error sistemático y aleatorio)Cercanía del resultado al valor verdadero (valor aceptado)
ISO (*No tradicional)
(Tab. 6.6_M)
Error de método (veracidad)+ Error de LEC
Precisión(*2componentes)
Se estiman conjuntamente en validación interna (pueden compensarse)
Poco armonizado aún
D.6.30
10 15 20 25 30 35
10
15
20
25
30
35
µ0
µ1
Tipo de error sistemático
Constante112131
Proporcional112233
Ej: 3 muestras con valores verdaderos (aceptados): µ0 (10, 20, 30 ppm)
µ1(ppm)
Error ≠ f (conc.) (unidades de conc., ej. E = +1 ppm)
Selectividad insuficiente (ef. interferencia)
Blanco (o corrección) inadecuado
Error = f (conc.)(unidades relativas, ej. E= +10%)
Error de calibración(ef. matriz)
Asunción incorrecta de linealidad
Relación E - conc. alcanceD.6.31
Valores de referencia(estimar E, criterio de aceptación)
Nivel de trazablilidadal SI
Método de referenciaMétodo primario
µ0µ2
(Tab. 6.7_M)
MRP
MR
µ0
Método alternativo
Muestras (blancos)fortificados(con patrones)
MRC
Muestras ensayadas en estudios colaborativos
Valores aceptados de ref.
D.6.32
Habitual en los LEC
(Anexo 6.7a_M) Caso 1 (Rango(conc.) estrecho; ej. OM < 0.5)
r1r2....
Met1
xNrx1test-t (Caso µ1 ↔ µ0)
Duda: µ0 vs. µ2 ± s2(BCR)
Blanco reactivosy MR(µ0)
10
µ1± s1
E(%)
nc = 1 (recomendable 3)
(obsoleto;f (precisión))
(¿referencia sin error?)
(clásico, estadístico)
(práctico, aceptaciónE-Máximo prefijado)
D.6.33
Habitual en los LEC
(Anexo 6.7a_M) Caso 2 (Rango(conc.) estrecho; ej. OM < 0.5)
Met1 Met2
XNrx2
nc = 1 (recomendable 3)
test-t (Caso µ1 ↔ µ2)
Blanco reactivosy MR /Muestra
10
r1r2....
µ1± s1 µ2± s2
E(%)
D.6.34
(Anexo 6.7a _M) Caso 3 (Rango(conc.) estrecho; ej. OM < 0.5)
r1r2....
Met1
xNrx1test-t (Caso µ1 ↔ µ0)
Fortif.Blanco / Muestra (µ0)
>6
µ1± s1
nc = 1 (recomendable 3)
E(%)
D.6.35
(Anexo 6.7b_M) Caso 1 (Rango(conc.) amplio; ej. OM > 0.5)
test-t (exp. pareado)
Met1 Met2y x
XNox2
nc ≥ 3 (alcance)
Mnc1
Mnc2
Mnc3..
Regresión (b0, b1)µy± sy µx ± sx
µd [b0, b1] ↔ [0, 1]
µ1± s1 µ2± s2 (como en caso 2; OM<0.5) (a cada nc)
E(%)
D.6.36
(Anexo 6.7b_M) Caso 2 (Rango(conc.) amplio; ej. OM > 0.5)
(µ0) (µ1)x y
X(NoxNr)x2
nc1
nc2
nc3..
Regresión (b0, b1)
Blanco + analito patrón
[b0, b1] ↔ [0, 1]Ecte, Eprop.
Conc.: fortificada determinada (aplicación del método)
nc ≥ 3 (alcance)
(a cada nc)
E(%)
D.6.37
Habitual en los LEC
(Anexo 6.7b_M) Caso 3 (Rango(conc.) amplio; ej. OM > 0.5)
nc ≥ 3x y
XNox2
nc1
nc2
nc3..
Regresión (b1)
analito patrón y adición analito + muestra
b1 ↔ b1AdEprop.
Calib.
xAd yAd
XNox2
Regresión (b1Ad)
Ad. estandard
D.6.38
(Ejer. 6.4_M), Dat3 (Anexo Dat_M)
Nr = 12 (pseudo-réplicas)Nf = 1 (equipo; i-col.)
Eq. 1
Eq. 2
D.6.39
PRECISIÓN
Precisión Resultados independientesProximidad (dispersión) de datos o resultados (mismas condiciones, PNT)
ISO
• Depende de las condiciones: (Repetibilidad, precisiónintermedia y reproducibilidad)
• Error aleatorio (influye en la exactitud)
• Relacionada con la incertidumbre
(Tab. 6.8_M)
D.6.40
Precisión Resultados independientesProximidad (dispersión) de datos o resultados (mismas condiciones, PNT)
ISO
• Depende de las condiciones:
(Tab. 6.8_M)
LECsRepetibilidad Reproducibilidad
Precisión Intermediaindicar Nf (= 1, 2 ó 3; = M, ISO)
OperadorEquipoTiempo
[=][≠]
‘Reproducibilidad’ intra-LEC (si ) ‘Reproducibilidad’ inter-LEC
(sL )(sr )
(sR )
(Valid. ext.)( si-ensayo , se-ensayo )
3 niveles de precisión
D.6.41
Precisión: medida del error aleatorio (dispersión)
% falso positivos % falso negativos
respecto de unvalor umbral
Cuantitativos , s2 , CV o RSD(%) (IUPAC)
Cualitativo
Establecer relación: s-conc. (o RSD-conc.)
Repetibilidad (sr , estimador de σr )
Límite de repetibilidad : r = 1.96 √2 σr = 2.8 σr
Permite al analista decidir si la diferencia entre 2 medidas es significativa
Reproducibilidad (σR o sR )
Límite de reproducibilidad : R = 1.96 √2 σR = 2.8 σR
NOTA: r (o R) pueden emplearse como cláusula de precisión del método
D.6.42
(Anexo 6.8_M) Caso 1 (1 matriz… alcance)
r1r2....
Met1
xNrx1sr = s1
Patrones / MR / Blanco de muestra fortificado (varios nc)
10
µ1± s1
nc = 1 (recomendable más nc… alcance)
Independientes
RSDr , r
D.6.43
Ej. Repetibilidad: LEC analiza Nr = 2 réplicas de No = 7 matrices
s2r = s2
c = Σ (glj . s2j) / Σ (gl)j = 0.0159
sr = 0.126 (repetibilidad)
Met1Tipo de queso s j n jProcesado I 0.01 2Procesado II 0.01 2Monterey 0.12 2Cheddar 0.13 2americano 0.13 2suizo 0.25 2mozzarella 0.01 2
Opciones para estimar s2r :
• Usar MCi-col (ANOVA) los datos xij
• Calcular s2c a partir de (gl)j = n j –1
y s2j
(Anexo 3.4_M)(no podemos calcular s2
c empleando Rj al no conocer los datos xij)
matrices
x11
x12 XNrxNo
(Anexo 6.8_M) Caso 2 (distintas matrices)D.6.44
Ej. Precisión intermedia: (Nf = 1; operador/equipo/tiempo). LEC realiza Nr=2 réplicas diarias durante Ns=7 días (ensayos, ‘runs’).
i \ día(j ) 1 2 3 4 5 6 7réplica 1 31.2 30.9 30.7 31 31 31 31réplica 2 31.7 30.9 30.9 32 32 32 31
e-días
i-día
TABLA ANOVA (1 factor = día)Fuente de variación SS gl MC (varianza) FEntre-columnas (entre-días) 0.9843 6 0.164 3.96Intra-columnas(residual=réplicas) 0.29 7 0.0414Total 1.2743 13s2
i-día= s2r = MCintra = 0.0414 (repetibilidad; equivale a s2
c )s2
e-días = (MCentre – MCintra)/n = (0.164 - 0.0414)/2 = 0.0613 s2
i = s2r + s2
e-días = 0.103 (‘reproducibilidad’ intra-lab.)sr = 0.2 (Repetibilidad) si = 0.32 (Precisión intermedia)
(Anexo 6.8_M) Caso 3 (repetibilidad y precisión intermedia)
XNrxNs
D.6.45
(Ejer. 6.5_M), Dat11 (Anexo Dat_M)
RéplicaMuestras i Dia 1 Dia 2 Dia 3 Dia 4 Dia 5 Dia 6 Dia 7 Dia 8 Dia 9 Dia 10 Media s RSD%Agua potable 1 186 154 196 170 135 196 179 169 160 180 172.50 18.19 10.545
2 179 196 180 179 174 170 169 160 154 135 169.60 15.92 9.38673 1694 1605 1746 196
Agua mar 1 1742 1963 1544 1965 1706 166
Agua residual 1 1542 1963 1704 1395 1966 179
sr (distintas matrices; caso 2 Anexo 6.8)
D.6.46
(Ejer. 6.6_M), Dat11 (Anexo Dat_M)
RéplicaMuestras i Dia 1 Dia 2 Dia 3 Dia 4 Dia 5 Dia 6 Dia 7 Dia 8 Dia 9 Dia 10 Media s RSD%Agua potable 1 186 154 196 170 135 196 179 169 160 180 172.50 18.19 10.545
2 179 196 180 179 174 170 169 160 154 135 169.60 15.92 9.38673 1694 1605 1746 196
Agua mar 1 1742 1963 1544 1965 1706 166
Agua residual 1 1542 1963 1704 1395 1966 179
sr y si (Nf = 1, factor día (e-col); caso 3 Anexo 6.8)
XNrxNs = X2x10
D.6.47
Robustez
- Insensibilidad a pequeñas variaciones (deliberadas) en el método (ambientales, operativas)- Estudio (diseño exp.) de los factores ( a varios nf, alto y bajo ) respecto del valor nominal (rutina)
Interés- Fiabilidad esperable del método en rutina- Factores críticos para control de calidad- Futuras mejoras del método
ROBUSTEZ(Tab. 6.9_M)
D.6.48
(Anexo 6.9_M)
exp1exp2....
Met1
XNexNf
MR / muestra analizada
(Nr = 1)
Factor-1 Factor-2 Factor-3 …
yNex1
Ne
Diseño experimentos:- Factorial completo Ne=(nf)Nf
- Factorial fraccionado Ne=(nf)Nf-1
(<Ne; > confusión de efectos)- Otros
(nf)
(Nf)
D.6.49
nº Exp. Factor 1 Factor 2 Factor 3 Resultado1 22 5.1 1.1 0.172 22 4.9 0.9 0.123 18 5.1 0.9 0.164 18 4.9 1.1 0.11
Códigos Factor 1 Factor 2 Factor 3 y1 1 1 0.171 -1 -1 0.12-1 1 -1 0.16-1 -1 1 0.11
EfectosFactor 1 ((y 1+y 2)-(y 3+y 4))/2 = 0.01Factor 2 ((y 1+y 3)-(y 2+y 4))/2 = 0.05Factor 3 ((y 1+y 4)-(y 2+y 3))/2 = 0.00
(Ejer. 6.7_M), Dat12 (Anexo Dat_M)
T.COL.20ºC
pHF.M5
CaudalF.M.1 ml.min-1
Diseño: 23-1
Valor nominal(rutina)
D.6.50
RecuperaciónCapacidad del método para determinar / extraer la totalidad de la forma particular del analito
Rec = f ( Conc. analito )
RECUPERACIÓN(Tab. 6.10_M)
Valores esperables de RecEj. para conc. 10% -> Rec 98-102 %
Interés
- Deficiencias en etapas del método (ej. extracción)
AOAC
NOTA: Rec = Exactitud
D.6.51
(Anexo 6.10_M)
r1r2....
xNrx1
Blaco muestra o Muestra
Fortificar (µ0)
6
Caso 1 (fortificar)
Met1nc = 1 (recomendable más nc)… alcance
(-) Representatividad analito adicionado-nativo
µ1± s1
Rec = 100 (μ1 / μ0)
D.6.52
(Anexo 6.10_M)
r1r2....
xNrx1
MR(µ0)
Caso 2 (MR)
Met1
(-) Representatividad MR-muestra… (ENAC)
µ1± s1
Rec = 100 (μ1 / μ0)
D.6.53
6.5. Estrategias de validación
Grado de validación (sugerencia; guías… No armonizado)
Tipo de validación Evaluación LEC Referencias
Completa Todas las características (T.6_M) MRCMuestra analizadaFortificación
Ampliación a otras matrices(ENAC. ampliación de alcance)
Método validado (1 matriz):- Estudio preliminar precisióny exactitud(criterios de aceptación)
- Confirmar LQ
Fortificación (2 nc) blanco de muestra / muestra (nueva y validada)
Transferencia de métodos
Método validado (otro LEC):- Precisión (sr, si), LD, LQ
Muestras analizadas por el otro LEC
(Tab. 6.11_M)
NOTA: a criterio de ENAC; contempla la validación parcial en algunos ensayos concretos y solo para LEC experimentados en acreditaciones previas
D.6.54
Selección de características a validar (sugerencia-guías… No armonizado-ENAC?...características críticas) (Tab. 6.12_M)Tipo de método / objetivo del ensayo Características a validar (… depende auditor)
Ensayo cualitativo Confirmación identidad
Comparación con un límite (bajo?) Confirmación identidadLD
Cuantificación de analito(conc. > n. minorit.)
Confirmación identidadExactitud (Rec)Precisión (sr, si)(Linealidad)
Cuantificación de analito(conc. ≤ n. traza)
ÍdemLQ (LD)
+ Robustez
D.6.55
6.6. Casos prácticos: Registros de validación
(a desarrollar por alumnos en Tutorías)
D.6.56
- Reproducir hojas 2 y 3 del Registro de validación en word. Realizar/Entregar los Ejercicios 6_M empleando como modelo el Eje6.1_M (resuelto)
TareaNP grupal (3-4 alumnos):• Entregable/evaluable• Exposición power-point
- Indicar a cual de los casos (A, B) de la Tabla 3.5a_M corresponde cada uno de los Ejercicios 3_M empleando el Anexo 3.1.a_M (y otros Anexos 3_M). NOTA anexos necesarios para caracterizar cada estudio en la hoja de registro (y examen)
Escenario 6.1.
* Relacionado con la TareaNP-3:
D.6.57
- Buscar en internet documentos disponibles que recojan criterios de validación/aceptación de varias entidades de prestigio (ej. Anexos 1.2_M) para una de las características de validación. Hacer una tabla comparativa, incluyendo las que se presentan en el Manual_M
Escenario 6.2.
* Pueden participar varios grupos (cada uno con una característica)
D.6.57